革蘭染色細(xì)菌

1、 1 1. .細(xì)菌的結(jié)構(gòu)細(xì)菌的結(jié)構(gòu) 2.2.細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu) 3.3.革蘭染色原理革蘭染色原理 1.1.細(xì)菌的結(jié)構(gòu)細(xì)菌的結(jié)構(gòu) 2.2.細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu) 3.3.革蘭染色原理革蘭染色原理細(xì)菌1.概念概念：一種形體微小，結(jié)構(gòu)簡單，有細(xì)胞壁和：一種形體微小，結(jié)構(gòu)簡單，有細(xì)胞壁和原始核質(zhì)，無核膜和核仁（擬核），除核糖體外原始核質(zhì)，無核膜和核仁（擬核），除核糖體外無其他細(xì)胞器的單細(xì)胞微生物，其歸屬于原核生無其他細(xì)胞器的單細(xì)胞微生物，其歸屬于原核生物界。物界。2.大小大?。杭?xì)菌個(gè)體微小，通常以：細(xì)菌個(gè)體微小，通常以微米（微米（m）為為測量單位。測量單位。3.形態(tài)形態(tài)：球菌、

2、桿菌、螺旋菌球菌、桿菌、螺旋菌。細(xì)菌結(jié)構(gòu)1.基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁細(xì)胞壁：賦予細(xì)菌形狀，保護(hù)其在低滲環(huán)境中不被裂解；細(xì)胞膜細(xì)胞膜：機(jī)械界面、選擇性滲透屏障、營養(yǎng)物質(zhì)吸收和代謝廢物排泄、代謝過程場所（呼吸作用 ）、形成中介體等；細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)：細(xì)菌新陳代謝的場所；核質(zhì)（擬核）：核質(zhì)（擬核）：雙股DNA組成的單一環(huán)狀，控制著細(xì)菌的遺傳性狀；核糖體核糖體：蛋白質(zhì)合成場所。2.特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)莢膜莢膜：抗吞噬作用、抵抗溶菌酶及噬菌體的裂解、吸附于某些物質(zhì)表面；菌毛菌毛（細(xì)、短、直）：表面粘附作用、細(xì)菌間遺傳物質(zhì)的傳遞；鞭毛鞭毛（粗、長、彎）：運(yùn)動(dòng)作用。芽孢芽孢：細(xì)菌在不良環(huán)境中的存活形式，形成芽孢后，代

3、謝相對靜止以維持生存，并具有特殊的抵抗力。 1 1. .細(xì)菌的結(jié)構(gòu)細(xì)菌的結(jié)構(gòu) 2.2.細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu) 3.3.革蘭染色原理革蘭染色原理細(xì)胞壁細(xì)胞壁概念：包裹于細(xì)胞膜外側(cè)的一種包裹于細(xì)胞膜外側(cè)的一種堅(jiān)韌而有彈性堅(jiān)韌而有彈性的膜狀結(jié)構(gòu)。的膜狀結(jié)構(gòu)。主要成分：肽聚糖以及壁磷壁酸脂多糖等特殊結(jié)構(gòu)。G G菌肽聚糖結(jié)構(gòu)：菌肽聚糖結(jié)構(gòu)：三維三維（金黃色葡萄球菌為例金黃色葡萄球菌為例） 聚糖骨架：聚糖骨架： N N乙酰葡糖胺（乙酰葡糖胺（G G） N N乙酰胞壁酸（乙酰胞壁酸（M M） 四肽側(cè)鏈：四肽側(cè)鏈：L L丙氨酸，丙氨酸，D D谷氨酸，谷氨酸， L L賴氨酸，賴氨酸，D D丙氨酸丙氨酸

4、 五肽交聯(lián)橋：五肽交聯(lián)橋：甘氨酸組成。革蘭氏陰性菌無甘氨酸組成。革蘭氏陰性菌無 此結(jié)構(gòu)。此結(jié)構(gòu)。G G菌肽聚糖結(jié)構(gòu)抗生素作用靶位點(diǎn)溶菌酶溶菌酶 青霉素青霉素G G- -菌肽聚糖: :二維二維( (以以大腸埃希菌為例大腸埃希菌為例) ) 聚糖骨架聚糖骨架： N N乙酰葡萄糖胺（乙酰葡萄糖胺（G G） N N乙酰胞壁酸（乙酰胞壁酸（M M） 四肽側(cè)鏈：四肽側(cè)鏈：L L丙氨酸，丙氨酸，D D谷氨酸，谷氨酸， 二氨基庚二酸二氨基庚二酸(diaminopimelic acid, (diaminopimelic acid, DAP) DAP) ，D D丙氨酸。丙氨酸。G G- -菌肽聚糖結(jié)構(gòu)G G- -菌

5、細(xì)胞壁特殊結(jié)構(gòu)（1 1）磷壁酸）磷壁酸 是革蘭氏陽性菌特有成分是革蘭氏陽性菌特有成分 壁磷壁酸：與肽聚糖的壁磷壁酸：與肽聚糖的N N乙酰胞壁酸連結(jié)；乙酰胞壁酸連結(jié)； 膜膜磷壁酸：與細(xì)胞膜磷壁酸：與細(xì)胞膜連結(jié)。連結(jié)。（2 2）特殊表面蛋白）特殊表面蛋白 葡萄球菌葡萄球菌A A蛋白（蛋白（SPASPA） 鏈球菌鏈球菌M M蛋白蛋白G-菌細(xì)胞壁特殊成分（1 1）外膜層）外膜層 脂蛋白脂蛋白 脂質(zhì)脂質(zhì) 蛋白蛋白 脂質(zhì)雙層脂質(zhì)雙層 脂多糖（脂多糖（lipopolysaccharide LPS)lipopolysaccharide LPS)：內(nèi)毒素內(nèi)毒素(endotoxin)(endotoxin)的主要成

6、分。的主要成分。（2 2）周漿間隙（胞質(zhì)周圍間隙）周漿間隙（胞質(zhì)周圍間隙） 在在G G菌細(xì)胞膜和外膜的脂質(zhì)雙層之菌細(xì)胞膜和外膜的脂質(zhì)雙層之 間的空隙。含多種酶和蛋白。間的空隙。含多種酶和蛋白。脂多糖（脂多糖（LPS)LPS)： 是是革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜層革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜層特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu), ,是內(nèi)是內(nèi)毒素的主要成分。毒素的主要成分。 脂質(zhì)脂質(zhì)A A：是內(nèi)毒素的毒性集團(tuán)。：是內(nèi)毒素的毒性集團(tuán)。 核心多糖：有屬特異性。核心多糖：有屬特異性。 特異多糖：是特異多糖：是LPSLPS分子最外層部分。菌體分子最外層部分。菌體 抗原（抗原（O O抗原），有種特異性?？乖?，有種特異性。G G菌與菌與G

7、G菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)比較菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)比較 1.1.細(xì)菌的結(jié)構(gòu)細(xì)菌的結(jié)構(gòu) 2.2.細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu) 3.3.革蘭染色原理革蘭染色原理革蘭染色染料組成：堿性染料（結(jié)晶紫）、媒染劑（碘液）、脫色劑（95%乙醇）、復(fù)染劑（復(fù)紅）。 堿性染料：電離后顯色離子帶正電荷，易與帶負(fù)堿性染料：電離后顯色離子帶正電荷，易與帶負(fù)電荷的被染物結(jié)合，細(xì)菌等電點(diǎn)在電荷的被染物結(jié)合，細(xì)菌等電點(diǎn)在PI 25之間，在之間，在堿性、中性、弱酸性環(huán)境中均帶負(fù)電荷，故易與堿性、中性、弱酸性環(huán)境中均帶負(fù)電荷，故易與堿性染料結(jié)合。堿性染料結(jié)合。 媒染劑：增加染料和細(xì)胞之間的親和力或附著力，媒染劑：增加染料和細(xì)胞之間的親和力或附

8、著力，使染料固定在細(xì)胞上。使染料固定在細(xì)胞上。 脫色劑：將被染色細(xì)胞進(jìn)行脫色。脫色劑：將被染色細(xì)胞進(jìn)行脫色。 復(fù)染液：不同于初染液的一種堿性染料，使被脫復(fù)染液：不同于初染液的一種堿性染料，使被脫色細(xì)胞染上不同于初染的顏色，而未被脫色的細(xì)色細(xì)胞染上不同于初染的顏色，而未被脫色的細(xì)胞仍為初染顏色。胞仍為初染顏色。復(fù)染（復(fù)紅稀釋液）復(fù)染（復(fù)紅稀釋液）1min，流水沖洗，流水沖洗脫色（脫色（95乙醇）乙醇）30s ，流水沖洗，流水沖洗媒染（碘液）媒染（碘液）1min，流水沖洗，流水沖洗初染（結(jié)晶紫）初染（結(jié)晶紫） 1min,流水沖洗流水沖洗結(jié)果可將細(xì)菌分成兩大類：結(jié)果可將細(xì)菌分成兩大類：1.1.不被乙

9、醇脫色而保持紫色者為革蘭氏陽性菌（不被乙醇脫色而保持紫色者為革蘭氏陽性菌（G G）2.2.被乙醇脫色后染成紅色者為革蘭氏陰性菌（被乙醇脫色后染成紅色者為革蘭氏陰性菌（G G）。）。革蘭染色步驟革蘭染色步驟革蘭染色原理 通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，因失水反而層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會(huì)出現(xiàn)縫隙，因使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會(huì)出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解