江南大學(xué)微生物研究生復(fù)試內(nèi)容

1、好難2005微生物實驗操作復(fù)試1有哪些方法可以提高顯微鏡的分辨率？答：顯微鏡的分辨率（Resolving power）是指顯微鏡將樣品上相互接近的兩點清晰分辨出來的能力。其用鏡頭所能分辨出的兩點間的最小距離表示，距離越小，分辨能力越好?？捎霉奖硎荆何镧R的數(shù)值口徑（Numberical aperture），簡寫為（N.A）：表示從聚光鏡發(fā)出的錐形光柱照射在觀察標本上，能被物鏡所聚集的量?？捎霉奖硎荆簄標本和物鏡之間介質(zhì)的折射率由光源投射到透鏡上的光線和光軸之間的最大夾角可見物鏡的分辨率是由物鏡的NA值與照明光源的波長兩個因素決定。NA值越大，照明光線波長越短，則D值越小，分辨率就越高。要提高

2、分辨率，即減小D值，可采取以下措施:（1） 降低波長值，使用短波長光源。（2）增大介質(zhì)n值以提高NA值（NA=nsinu/2）。（3） 增大孔徑角值以提高NA值。（4） 增加明暗反差。2革蘭氏染色的步驟？哪幾步最為關(guān)鍵？答：（1）1、細菌的活化：將細菌接種營養(yǎng)瓊脂斜面，培養(yǎng)16-24h。2、制片：取菌種培養(yǎng)物常規(guī)涂片、干燥、固定。3、初染：于制片上滴加結(jié)晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余染料。4、媒染：用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋約1min，水洗。5、脫色：用濾紙吸去玻片上的殘水，將玻片傾斜，在白色背景下，直接用95%乙醇從載玻片上端沖洗脫色，直到流下的酒精無明顯紫色時，立即水洗。6、復(fù)染

3、：滴加番紅液，染色2min，水洗7、用濾紙吸干，油鏡鏡檢。（2）脫色是革蘭氏染色中最為關(guān)鍵的步驟，其中乙醇的濃度，用量及涂片厚度都會影響脫色速度，最終影響觀察效果。如果脫色過度，有可能會使革蘭氏陽性菌呈假陰性；如果脫色不夠，有可能使革蘭氏陰性菌呈假陽性3涂片染色前為什么要先進行固定？固定時應(yīng)注意什么問題？答：1）殺死微生物，固定細胞結(jié)構(gòu)。 2）保證菌體能更牢的粘附在載玻片上，防止標本被水沖洗掉。 3）改變?nèi)玖蠈毎耐ㄍ感?，因為死的原生質(zhì)比活的原生質(zhì)易于染色。  注意問題：溫度以載玻片接觸手背，手背不覺得燙為宜，防止出現(xiàn)變形細胞；注意在通過火焰時，涂有細菌的一面向

4、上。4同一酵母菌培養(yǎng)液用血球計數(shù)板和平板菌落計數(shù)法同時計數(shù)，所得結(jié)果是否一樣？為什么？進一步比較兩種計數(shù)法的優(yōu)缺點？答：所得結(jié)果不一樣。血球計數(shù)板記得的菌體數(shù)是活菌體和死菌體的總和，而平板菌落計數(shù)法記得的是活菌體的量。血球計數(shù)板優(yōu)點是直觀、快速，方便，但該法計數(shù)的是樣品中的總菌落數(shù)，無法計數(shù)活菌數(shù)。平板菌落計數(shù)法的優(yōu)點是能粗出樣品中的活菌數(shù)，缺點是手續(xù)較繁，而且測定值常受各種因素的影響。5如何測定水中的大腸菌群數(shù)？測定水中大腸菌群數(shù)有什么實際意義？答：大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。檢測大腸菌群的方法有稀釋培養(yǎng)法和膜濾法兩種，其中稀釋培養(yǎng)法是標準分析

5、方法，包括處發(fā)酵試驗、平板分離和復(fù)發(fā)酵試驗三部分。具體方法為采樣、處發(fā)酵試驗在指示性培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)，革蘭氏染色及鏡檢，復(fù)發(fā)酵試驗，結(jié)果。檢測意義：水中的病原菌多數(shù)來源于病人和病畜的糞便，由于病原菌的數(shù)量少，檢測過程復(fù)雜，因此，直接測它們的存在非常困難。由于大腸桿菌在糞便中數(shù)量大，在體外存活時間與腸道致病菌相近，而且檢測方法比較簡便，因此采用測定大腸菌群或大腸桿菌的數(shù)量來作為水被糞便污染的標志。如果水中大腸菌群菌數(shù)超過一定數(shù)量，則說明此水已被糞便污染，肯能還有病原菌。6高壓蒸汽滅菌的基本原理以及步驟答：高壓蒸汽滅菌是將物品放在密閉的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，在一定壓力下保持15-30分鐘進行滅菌。將待

6、滅菌的物品放在一個密閉的加壓鍋內(nèi)，通過加熱，是滅菌鍋內(nèi)夾套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽，待水蒸氣急劇的將鍋內(nèi)冷空氣從排氣閥中排盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌鍋內(nèi)壓力，從而使沸點增高，獲得高于100°C的溫度，導(dǎo)致菌體蛋白凝固變性而達到滅菌的目的。具體步驟：.加水裝料加蓋排氣升壓保壓降壓無菌檢查7如何制備大腸桿菌感受態(tài)細胞？答：感受態(tài)細胞就是細菌最容易實現(xiàn)轉(zhuǎn)化的狀態(tài)。感受態(tài)細胞可以通過理化因素誘導(dǎo)產(chǎn)生，其中制備大腸桿菌感受態(tài)最常用的方法是CaCl2法。將細胞置于0的CaCl2低滲溶液中，細菌細胞會膨脹成球形，細胞膜的通透性會發(fā)生改變。此外還可以應(yīng)用PEG法和電

7、擊法，其中電擊法可以實現(xiàn)大腸桿菌較高效率的轉(zhuǎn)化。步驟：1、挑取大腸桿菌新鮮菌落于LB液體培養(yǎng)基中，37振蕩培養(yǎng)過夜。 2、取0.2ml培養(yǎng)液于含50mlLB培養(yǎng)液的三角瓶中，37震蕩培養(yǎng)至OD值為0.3-0.4，于冰水中迅速冷卻。 3、菌液置預(yù)冷的離心管中冰浴15min，于4，4000r/min離心5min，棄去上清液，加入預(yù)冷MgCl2-CaCl2溶液20ml，于冰水中放置15min。 4、于4，4000r/min離心5min，棄去上清液，用預(yù)冷CaCl2溶液2ml懸浮菌體。于冰水中放置15min，分裝至離心管中，每管200ul。8簡述移液管和培養(yǎng)皿的包扎注意事項答：1、培養(yǎng)皿：包扎前洗凈烘

8、干，包扎時每10套迭在一起，用牛皮紙包扎后再用繩子捆扎，防止分散開。2、移液管：包扎前洗凈烘干，在孔吸的一端塞入少許脫脂棉，防止菌體誤吸入口中及口中的微生物吸入管而進入培養(yǎng)物造成污染，塞入棉花量要適宜，不宜露在管口外面；包扎時，卷紙成45°卷起，并包扎好，以防散開。9 NTG誘變的機理以及誘變的步驟。簡述每一步操作的理由答：NTG為烷化劑的一種，其存在多個活性烷基，可以烷化磷酸基、嘌呤、嘧啶等而與DNA發(fā)生作用。其中鳥嘌呤N7是最容易起反應(yīng)的位點。烷化后的鳥嘌呤易于離子化，由原來的酮式變?yōu)椴环€(wěn)定的烯醇式，從而與胸腺嘧啶配對而不與胞嘧啶配對，造成GC-AT轉(zhuǎn)換。此外，NTG還可以引起染

9、色體小范圍切除、移碼突變及GC對的缺失等突變。另外據(jù)認為NTG的作用是伴隨著重氮甲烷的生成及在酸性條件下生成亞硝酸，直接作用于細胞內(nèi)的DNA復(fù)制系統(tǒng)，從而誘發(fā)了變異。步驟（以黑曲霉為例）：1、單孢子懸液制備：取斜面，加入6ml，0.1mol/L，pH6.0的磷酸緩沖液，用接種環(huán)刮下孢子，振蕩試管并過濾，制得單孢子懸液，使孢子良好分散，為誘變做準備。2、NTG溶液制備：精確稱取2mgNTG，加入2ml，0.1mol/L，pH6.0的磷酸緩沖液，,與暗處震蕩溶解，防止NTG分解。3、誘變處理：吸取NTG液1ml，加入到1ml孢子懸液中，30震蕩30min，稀釋1000倍停止作用，然后以10-2和1

10、0-4兩個稀釋度分離培養(yǎng)，30，3d后計數(shù)。4、死亡率計算：將未處理的孢子液1ml加入1ml磷酸緩沖液中，同上逐級稀釋分離，30培養(yǎng)3d，根據(jù)前后處理活孢子數(shù)計算死亡率。5：篩選目標菌株。10微生物紫外線誘變后應(yīng)如何培養(yǎng)？為什么？答：UV誘變后應(yīng)在紅光下進行后續(xù)操作，并放置在黑暗條件下培養(yǎng)。原因：微生物經(jīng)UV誘變后，如果立即暴露在可見光下，出現(xiàn)明顯降低死亡率的現(xiàn)象即光復(fù)活作用。微生物經(jīng)紫外照射后，DNA分子中會產(chǎn)生嘧啶二聚體，造成局部DNA分子無法配對，引起微生物死亡或突變。為這種二聚體會在黑暗下被光解酶結(jié)合，這種復(fù)合物在可見光下被激活，使二聚體重新分解成單體，從而降低了微生物的死亡率或突變率

11、。2006微生物實驗操作復(fù)試5如何測量釀酒酵母的大??？答：釀酒酵母個體較小，需要在顯微鏡下借助于特殊的測量工具測微尺來測定其大小。測微尺包括鏡臺測微尺和接目測微尺。鏡臺測微尺是一張中央部分刻有精確等分線的載玻片，專門用于校定接目鏡測微尺每小格的相對長度。接目測微尺是一塊可以放入接目鏡的圓形小玻片，其中央有精確的等分刻度，有等分為50小格和100小格的兩種。由于接目測微尺所測量的是經(jīng)顯微鏡放大后的細胞物象，因此，在不同的顯微鏡或不同的目鏡和物鏡組合放大倍數(shù)不同，接目鏡測微尺每一小格所代表的實際長度也不一樣。所以，在用接目測微尺測量微生物大小之前，必須先用鏡臺測微尺校定接目鏡測微尺，以確定該顯微鏡

12、在特定放大倍數(shù)的目鏡和物鏡下，接目鏡測微尺每一小格所代表的實際長度，然后根據(jù)微生物細胞相當于的接目鏡測微尺格數(shù)，計算出微生物細胞的實際大小。操作步驟1. 裝接目測微尺：取下顯微鏡的目鏡，換上專用目鏡。如果沒有專用的目鏡，則取下顯微鏡的目鏡，旋下透鏡，將接目鏡測微尺刻度朝下放在接目鏡的隔板上，再旋上目鏡透鏡，將裝有測微尺的目鏡裝回鏡筒。2. 接目測微尺的標定：1) 放鏡臺測微尺：將鏡臺測微尺刻度面朝上固定在顯微鏡的載物臺上，注意不可放反。2) 標定：將低倍鏡轉(zhuǎn)入光路，鏡臺測微尺有刻度的部分移至視野中央，調(diào)節(jié)焦距，當清晰地看到鏡臺測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡使接目測微尺與鏡臺測微尺的刻度相平行。利用移

13、動鈕移動鏡臺測微尺，使兩尺在某一區(qū)域內(nèi)兩線完全重合，然后分別數(shù)出兩重合線之間鏡臺測微尺和接目測微尺所占的格數(shù)。（使接目測微尺的一條刻度線與鏡臺測微尺的一條刻度線相重合，再尋另一重合線，分別數(shù)出其間鏡臺測微尺和接目測微尺所占的格數(shù)）3) 用同樣的方法，在高倍鏡下對接目測微尺進行標定。（觀察時光線不宜過強，否則難以找到鏡臺測微尺的刻度，換高倍鏡標定時，務(wù)必十分細心，防止接物鏡壓壞鏡臺測微尺和損壞鏡頭）4) 計算：已知鏡臺測微尺每格長10m，根據(jù)下列公式即可分別計算出在不同放大倍數(shù)下，接目測微尺每格所代表的長度。接目測微尺每格長度（m）=10n/mn：兩重合線間鏡臺測微尺格數(shù)m：兩重合線間接目測微尺

14、格數(shù)3. 微生物細胞大小的測量接目測微尺標定完畢后，取下鏡臺測微尺，換上微生物標本片，將其固定在載物臺上，先用低倍鏡找到標本片圖象，然后根據(jù)不同的微生物對象分別轉(zhuǎn)換到高倍鏡下，用接目測微尺測量微生物細胞的直徑或?qū)捄烷L所占的格數(shù)，再依據(jù)所標定的高倍鏡每一格的實際長度計算細胞的實際大小。通常測定對數(shù)生長期菌體來代表該菌的大小，為了盡量減小實驗誤差，應(yīng)在同一標本片上測量1020個細胞，取其平均值作為該菌的大小。維護：測量完畢，換上原有顯微鏡目鏡（或取出接目測微尺，目鏡放回鏡筒），用擦鏡紙將測微尺擦拭干凈后放回盒內(nèi)保存，并按照顯微鏡的使用和維護方法擦拭物鏡。6有哪些生理生化反應(yīng)能夠用于鑒別大腸桿菌和產(chǎn)

15、氣桿菌？答：有吲哚試驗、檸檬酸試驗、V.P.試驗和甲基紅試驗等。吲哚實驗:有些細菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚。吲哚與對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，就會形成紅色的玫瑰吲哚。大腸桿菌吲哚反應(yīng)陽性，產(chǎn)氣桿菌陰性。甲基紅試驗。某些細菌在糖代謝過程中，將培養(yǎng)基中糖先分解成丙酮酸，丙酮酸再分解成甲酸、乙酸、乳酸等，因而使培養(yǎng)基變酸，用甲基紅指示劑pH4.2（紅色）6.3（黃色），可使培養(yǎng)基由原來的桔黃色變?yōu)榧t色，即甲基紅陽性反應(yīng)。大腸桿菌為陽性反應(yīng)，產(chǎn)氣桿菌為陰性反應(yīng)。V.P.試驗：某些細菌可利用葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進行縮合，脫羧變成乙酰甲基甲醇，此物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙

16、酰。二乙酰與蛋白胨中的精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物，即V.P.反應(yīng)陽性，沒有紅色化合物產(chǎn)生則為陰性。產(chǎn)氣桿菌V.P.反應(yīng)陽性，大腸桿菌V.P.反應(yīng)陰性。檸檬酸鹽試驗：有些細菌能利用檸檬酸鈉作為碳源，例如產(chǎn)氣桿菌；而另一些細菌不能利用檸檬酸鈉，例如大腸桿菌。細菌在分解檸檬酸鹽后，產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基pH升高，在有溴麝香草酚藍指示劑的情況下，培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樯钏{色。溴麝香草酚藍的指示范圍為：p小于6.0時呈黃色，p在6.0-7.6時為綠色，p大于7.6時呈藍色。9簡述移液管使用方法和注意事項1、 使用前：使用移液管，首先要看一下移液管標記、準確度等級、刻度標線位置等。使用移液管前，應(yīng)先用鉻

17、酸洗液或蒸餾水潤洗，以除去管內(nèi)壁的油污。然后用自來水沖洗殘 留的洗液，再用蒸餾水洗凈。洗凈后的移液管內(nèi)壁應(yīng)不掛水珠。移取溶液前，應(yīng)先用濾紙將移液管末端內(nèi)外的水吸干，然后用欲移取的溶液涮洗管壁2至3次，以確 保所移取溶液的濃度不變。 2、 吸液：用右手的拇指和中指捏住移液管的上端，將管的下口插入欲吸取的溶液中，插入不要太淺或太深，一般為1020mm處，太淺會產(chǎn)生吸空，把溶液吸到洗 耳球內(nèi)弄臟溶液，太深又會在管外沾附溶液過多。左手拿洗耳球，先把球中空氣壓出，再將球的尖嘴接在移液管上口，慢慢松開壓扁的洗耳球使溶液吸入管內(nèi)，先吸 入該管容量的1/3左右，用右手的食指按住管口，取出，橫持，并轉(zhuǎn)動管子使溶

18、液接觸到刻度以上部位，以置換內(nèi)壁的水分，然后將溶液從管的下口放出并棄去， 如此用反復(fù)洗3次后，即可吸取溶液至刻度以上，立即用右手的食指按住管口。 3、 調(diào)節(jié)液面：將移液管向上提升離開液面，管的末端仍靠在盛溶液器皿的內(nèi)壁上，管身保持直立，略為放松食指（有時可微微轉(zhuǎn)動吸管）使管內(nèi)溶液慢慢從下口流出， 直至溶液的彎月面底部與標線相切為止，立即用食指壓緊管口。將尖端的液滴靠壁去掉，移出移液管，插入承接溶液的器皿中。 4、 放出溶液：承接溶液的器皿如是錐形瓶，應(yīng)使錐形瓶傾斜30°，移液管直立，管下端緊靠錐形瓶內(nèi)壁，稍松開食指，讓溶液沿瓶壁慢慢流下，全部溶液流完后需等 15s后再拿出移液管，以便

19、使附著在管壁的部分溶液得以流出。如果移液管未標明“吹”字，則殘留在管尖末端內(nèi)的溶液不可吹出，因為移液管所標定的量出容積 中并未包括這部分殘留溶液 。1移液管(吸量管)不應(yīng)在烘箱中烘干。2移液管(吸量管)不能移取太熱或太冷的溶液。3同一實驗中應(yīng)盡可能使用同一支移液管。4移液管在使用完畢后，應(yīng)立即用自來水及蒸餾水沖洗干凈，置于移液管架上。5移液管和容量瓶常配合使用，因此在使用前常作兩者的相對體積校準。6在使用吸量管時，為了減少測量誤差，每次都應(yīng)從最上面刻度（0刻度）處為起始點，往下放出所需體積的溶液，而不是需要多少體積就吸取多少體積。7、檢查移液管的管口和尖嘴有無破損,若有破損則不能使用。8如果移

20、液管上標有“吹”字，則最后殘留在管內(nèi)的液滴必須吹出。9如果移液管是從不能確認潔凈的移液管架上所??；不能確認潔凈的移液管，應(yīng)清洗移液管。10使用完移液管，清洗移液管內(nèi)外壁，再放回潔凈的移液管架。11清洗、移液過程中溶液不要滴到桌面、地面。10如何制作斜面培養(yǎng)基,簡述具體步驟并說明注意事項答：具體步驟：1.玻璃器皿洗滌并包扎滅菌。2.固體培養(yǎng)基的配置：先將配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸，再將稱好的瓊脂（1.5%-2.0%）加入，并使用玻璃棒攪拌，以免糊底燒焦。加熱使瓊脂融化，最后補足因蒸發(fā)而失去的水分。3.分裝培養(yǎng)基：去玻璃漏斗，裝鐵架臺上，漏斗下連橡皮管，再連玻璃管。倒入培養(yǎng)基并使其流入試管內(nèi)，裝入量

21、為管高的1/5。注意不要使培養(yǎng)基沾污管口，造成污染。4.制作棉塞：選用大小、厚薄適中的棉花，塞入試管口，應(yīng)緊貼管壁，不留縫隙，以棉塞2/3在管內(nèi)為宜。塞好棉塞后，將試管捆成一捆，外面包上一層牛皮紙。標記培養(yǎng)基名稱及配置日期。4.培養(yǎng)基滅菌：分裝好的培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌。5.制作斜面：滅菌后的培養(yǎng)基趁熱置于木棒或玻棒上，使成適當斜度，凝固后即成斜面，斜面長度不超試管長度1/2為宜。2007微生物實驗操作復(fù)試1哪些方法可以提高視野中光的強弱？答：顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)中有反光鏡、激光器、光源等。 （1）反光鏡：裝在鏡座上面，可向任意方向轉(zhuǎn)動，它有平、凹兩面，其作用是將光源光線反射到聚光器上，再經(jīng)通光孔

22、照明標本，凹面鏡聚光作用強，適于光線較弱的時候使用，平面鏡聚光作用弱，適于光線較強時使用。 （2）聚光鏡：位于載物臺的下方，由兩個或幾個透鏡組成，其作用是將由光源來的光線聚成一個錐形光柱。通過調(diào)節(jié)聚光鏡調(diào)旋鈕，可以調(diào)節(jié)光的強弱；聚光器還附有虹彩光圈，調(diào)節(jié)錐形光柱的角度和大小，從而控制進入物鏡的光的量，從而調(diào)節(jié)光的強弱。（3）光源：日光和燈光均可作為光源。通過使用不同的光源改變視野中光的強弱。2用美藍染色法對酵母細胞進行死活鑒別時為什么要控制染液的濃度和染色時間？答：美藍是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍色，還原型無色。用美藍對酵母的活細胞進行染色時，由于細胞的新陳代謝作用，細胞內(nèi)具有較強的還原

23、性，能使美藍由藍色的氧化型變成為無色的還原型。因此，具有還原性的酵母活細胞是無色的，而死細胞或代謝作用微弱的老齡細胞則呈藍色或淡藍色，借此即可對酵母菌的死細胞和活細胞進行辨別。加入美藍濃度高了或染色時間太長了，代謝不太活潑的活細胞也會被染色，從而使視察到的死細胞較多，活細胞較少；反之，則代謝微弱的細胞也能還原美藍，不被染色，從而使觀察到的死細胞較少，活細胞較多。2008微生物實驗操作復(fù)試2009微生物實驗操作復(fù)試2高壓蒸汽滅菌為什么比干熱滅菌要求溫度低、時間短？答：濕熱滅菌比敢惹滅菌效果好，主要原因有.在濕熱滅菌中菌體吸收水分，蛋白質(zhì)容易凝固變性，蛋白質(zhì)隨著含水量的增加，所需凝固溫度降低；濕熱

24、滅菌中蒸汽的穿透力比干燥空氣大；蒸汽在被滅菌物體表面凝結(jié)，釋放出大量的汽化潛熱，能迅速提高滅菌物體表面的溫度，從而增加滅菌效力。因此，高壓蒸汽滅菌為什么比干熱滅菌要求溫度低、時間短。3革蘭氏染色液成分以及各種成分的作用答：.革蘭氏染色液成分：結(jié)晶紫染液，碘液，95%乙醇，番紅液作用：結(jié)晶紫染液：使細胞被染成藍紫色。碘液：作為媒染劑，能與結(jié)晶紫結(jié)合形成復(fù)合物，從而增強了染料與細菌的結(jié)合力。95%乙醇：乙醇可以使細胞壁脫水，類脂溶解，從而增加了細胞壁的通透性，結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物容易被洗出。番紅：使細胞被染成紅色。4如何測量大腸桿菌大小？9 為使平板菌落計數(shù)準確，需要掌握哪幾個步驟？1 無菌操作2

25、稀釋良好，不會太濃或太稀。3 平板涂布均勻，菌落生長時間控制好，不會長的太大不便區(qū)分，也不至于太小影響計數(shù)。10配制培養(yǎng)基的基本步驟和注意事項1、玻璃器皿的洗滌并包扎滅菌。2、配制液體培養(yǎng)基：稱量、溶解、定容、調(diào)pH、過濾。3、固體培養(yǎng)基的配制。4培養(yǎng)基的分裝：根據(jù)不同需要，將配好的培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶內(nèi)。5、棉塞的制作和試管、三角瓶的包扎。6、培養(yǎng)基的滅菌。7培養(yǎng)基的滅菌檢查。2010微生物實驗操作復(fù)試顯微鏡的放大倍數(shù)：物像大小對物體大小的比例。顯微鏡的放大倍數(shù)等于目鏡的放大倍數(shù)和物鏡放大倍數(shù)的乘積。放大倍數(shù)指的物體的寬度和長度的放大倍數(shù)，而不是面積和體積的放大倍數(shù)。3鏡頭長度與放大倍數(shù)

26、的關(guān)系：目鏡的長度與放大倍數(shù)成反比，物鏡的長度與放大倍數(shù)成正比。4物像移動與裝片移動的關(guān)系：由于顯微鏡下成的像是倒立的像，所以，物像移動的方向與載玻片移動的方向是相反的。5放大倍數(shù)的變化與視野進而細胞數(shù)量變化的關(guān)系。第一種情況：一行細胞數(shù)量的變化，可根據(jù)放大倍數(shù)與視野成反比的規(guī)律計算。第二種情況：圓形視野范圍內(nèi)細胞數(shù)量的變化，可根據(jù)看到的實物范圍與放大倍數(shù)的平方成反比的規(guī)律計算。對于一株未知菌株進行革蘭氏染色時,怎樣確定你的染色技術(shù)正確,結(jié)果可靠革蘭氏染色的成功和實驗時的環(huán)境條件有很大關(guān)系，同樣的實驗參數(shù)，比如染色時間、水洗時間、復(fù)染時間等在不同的環(huán)境下染色的效果是不同的。那么對未知菌進行染色

27、法鑒定其革蘭氏陰性/陽性時，必須同時在同一個載玻片上做上陽性對照和陰性對照。陽性一般選擇枯草芽孢桿菌，陰性一般選擇大腸桿菌，因為比較常見. 如果實際染色結(jié)果和理論結(jié)果相符則得出的染色結(jié)果就應(yīng)該是比較可靠的了。酵母菌的假菌絲是怎樣形成的?它與真菌絲有何區(qū)別？假菌絲：酵母菌進行出芽生殖時，子母細胞不立即分離而以狹小的面積相連，則稱這種藕節(jié)狀的細胞串為假菌絲。 假菌絲沒有橫隔。各細胞間僅以狹小的面積相連，呈藕節(jié)狀，在分隔處縊縮。假菌絲與真菌絲明顯不同處在于其兩細胞間有一細腰，而不象真正菌絲橫隔處兩細胞寬度一致。 使用油鏡時，應(yīng)該特別注意哪些問題？1、采用油鏡除需要在標本與鏡頭之間滴加香柏油。2、注意

28、油鏡焦距極短，切勿使鏡頭觸及載玻片而受損。3、使用油鏡觀察時，需采用強光觀察。4、鏡檢完畢，需用擦鏡紙擦拭鏡頭香柏油，再蘸取二甲苯清潔鏡頭并擦拭。對同一微生物制片，用油鏡觀察比用低倍鏡觀察有何優(yōu)缺點？對同一微生物制片，油鏡分辨率更高，是目標物觀察的更清楚；但在操作方面，油鏡觀察相對低倍鏡較繁瑣，對較大的微生物菌體，油鏡無法觀察其全貌。為什么革蘭氏染色所用細菌的菌齡一般不能超過24小時一般微生物，應(yīng)選用培養(yǎng)16-24小時為宜，因為若菌齡太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏染色陽性菌轉(zhuǎn)為陰性反應(yīng)，使得顯微鏡下出現(xiàn)假陰性現(xiàn)像。血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應(yīng)如何盡量減少誤差,力求準確?血細胞

29、計數(shù)板計數(shù)的誤差主要有系統(tǒng)誤差和偶然誤差。其中由于操作人員，器材處理、使用不當，稀釋不準確等因素所造成的誤差屬偶然誤差；而由于儀器（計數(shù)板、蓋片、吸管等）不夠準確與精密帶來的誤差稱系統(tǒng)誤差。具體有：1、所用器材均應(yīng)清潔干燥，計數(shù)板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規(guī)格應(yīng)符合要求；2、菌懸液稀釋度不適，菌液混合不均勻，造成計數(shù)困難。3、由于操作不當，計數(shù)室產(chǎn)生氣泡，造成計數(shù)不準。4、操作人員計數(shù)過程中，由于細胞識別不準，計數(shù)方法錯誤等，造成計數(shù)不準。能否用血球計數(shù)板在油鏡下對細菌進行計數(shù)不行。由于血球計數(shù)板較厚，用油鏡觀察時，計數(shù)板下部的細菌不易看清。其次，用油鏡觀察時需要采用強光，強光下有可能看不

30、清計數(shù)格的邊界線以及菌體細胞。為什么微生物實驗室所用的移液管口或滴管口的上端均需塞入一小段棉花, 再用報紙包，經(jīng)高壓蒸汽滅菌后才能使用?為什么微生物實驗室所用的三角瓶口或試管口都要塞上棉塞才能使用?棉塞的作用有二：其一是防止雜菌污染，其二是保持瓶內(nèi)氧氣流通。配制培養(yǎng)基時為什么要調(diào)節(jié) pH?從整體來看，各大類微生物都有其生長適宜的pH范圍，如細菌為7.0-8.0，放線菌為7.5-8.5，酵母菌為3.8-6.0，霉菌為4.0-6.0等，因此，依照不同微生物的培養(yǎng)目的，需要對培養(yǎng)基進行pH調(diào)節(jié)。但是培養(yǎng)物的代謝作用又會改變培養(yǎng)基的pH，所以在配置培養(yǎng)基時，不僅培養(yǎng)基的起始pH值應(yīng)符合微生物的要求，而

31、且要考慮采用何種緩沖作用保持其pH值。例如，一般在培養(yǎng)產(chǎn)酸的微生物時可在培養(yǎng)基中加入適量的CaCO3，以中和不斷產(chǎn)生的酸。為什么融化后培養(yǎng)基要冷卻到45左右方可倒平板，過冷或過熱行不行？為什么？1、融化后的培養(yǎng)基溫度較高，不經(jīng)冷卻就倒入冷的平板中，則會產(chǎn)生水汽和水滴附著表面壁上，甚至融液的濺出，影響涂布效果。2、培養(yǎng)基溫度過高，在傾倒培養(yǎng)液時燙手，同樣影響實驗的順利操作。3、溫度過低瓊脂會凝固，倒出來的板子不平，形成果凍樣塊狀，如果形成氣泡不容易排除，形成氣洞。V.P.反應(yīng)中加入NaOH溶液的作用是什么V.P.實驗中，丙酮酸縮合、脫羧生成的3-羥基丁酮，需要在堿性條件下才能被空氣氧化成二乙酰。

32、NaOH為反應(yīng)的順利進行提供堿性環(huán)境。為什么在誘變前要把菌懸液打散使菌種分散，與培養(yǎng)液充分混合，有利于菌種復(fù)蘇生長，進入對數(shù)生長期；另外也使菌液均質(zhì)，有利于紫外光的均勻分布處理。試述紫外線誘變的注意事項1、注意誘變過程中，在紅光下進行照射和后續(xù)操作，并放置在黑暗條件下培養(yǎng)。2、為了使細胞均勻接受照射，培養(yǎng)皿應(yīng)在無蓋條件下直接照射，同時用電磁攪拌棒或者其他方法均勻旋轉(zhuǎn)并攪動懸液3、紫外光對生物細胞有較強的殺傷作用，亦是物理致癌因子之一，使用時應(yīng)注意防護，操作盡量控制在防護罩內(nèi)。簡述誘變后后培養(yǎng)的目的及注意事項后培養(yǎng)是指誘變處理后，立即將處理過的細胞轉(zhuǎn)移到營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，使突變基因穩(wěn)定

33、、純和并表達。1、遺傳物質(zhì)經(jīng)誘變處理后發(fā)生改變，必需經(jīng)過DNA的復(fù)制才能穩(wěn)定成突變基因，而突變基因則要經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的合成才能表達，呈現(xiàn)突變型表型。后培養(yǎng)所用培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，有利于突變微生物基因轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成。2、后培養(yǎng)可以消除表型延遲。經(jīng)過后培養(yǎng)及之后的分離篩選，有利于找出突變型個體。注意事項：后培養(yǎng)需要黑暗條件下進行，防止紫外誘變后微生物光復(fù)活。2、后培養(yǎng)的培養(yǎng)基必需營養(yǎng)豐富，需含有足量的氨基酸和嘌呤嘧啶堿基等。加入溶液后為什么不能劇烈震蕩加入溶液和溶液后，應(yīng)緩慢上下顛倒離心管數(shù)次，切忌在旋渦振蕩器上劇烈振蕩，否則，染色體DNA會斷裂成小片段，不形成沉淀，而溶解在溶液中，與質(zhì)粒DNA混

34、合在一起，不利于質(zhì)粒DNA提純。因此，操作時一定要緩慢柔和，采用上下顛倒的方法，既要使試劑與染色體DNA充分作用，又不破壞染色體的結(jié)構(gòu)。 質(zhì)粒DNA在瓊脂凝膠電泳時,泳動速度的影響因素有哪些1、核酸的性質(zhì)核酸的電荷量，分子大小，分子的空間構(gòu)象等決定了不同的核酸分子具有不同的遷移率。對于線狀雙鏈DNA分子，在凝膠電泳中，分子量的常用對數(shù)與泳動 率成反比關(guān)系，一般雙鏈DNA基本上不存在影響遷移率的復(fù)雜構(gòu)象，但分子的空間構(gòu)象也影響泳動速率，如分子量相同的質(zhì)粒DNA 遷移速率則是：閉環(huán)型>線性>單鏈開環(huán)型。對于單鏈RNA或DNA，其在凝膠電泳中的遷移率受堿基組織和序列的影響，同等大小的核酸

35、可能由于空間構(gòu)象不同而使遷移率不同，故可利用變性凝膠電 泳分離純化單鏈核酸。2、凝膠孔徑的大小：瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠（PAG）是核酸凝膠電泳常使用的支持材料，通過兩種支持介質(zhì)的濃度變化調(diào)整所形成凝膠的分子篩網(wǎng)孔大小，能分離不同分子量的核酸片段，瓊脂糖凝膠的孔徑大，分辨率低，但分離范圍廣，約100bp50kb的DNA；PAG的孔徑小，分離小片段 （5500bp）DNA效果較好，甚至可以分辨相差1bp的DNA片段。凝膠孔徑的大小是影響核酸在凝膠電泳中遷移率的最基本因素，它決定了能被分離的 片段的大小。3、電場強度和電場方向：低電壓時，線狀DNA片段的電泳遷移率與所加的電壓成正比，通常凝膠電泳的電場強度不超過5V/cm凝膠。隨電場強度增加，高分子量的DNA片段的 遷移率將以不同的幅度增加，使凝膠的有效分離范圍縮小。對于大分子量真核基因組DNA片段的電泳常采用0.51.0V/cm電泳過夜，以取得較好的分辨 力和整齊的帶型。如果電場呈周期性變化，各種分子量的DNA片段為適應(yīng)新的電場變化所需的時間將不同，分子量越大，則所需的時間越多。因此可以通過脈沖電 場凝膠電泳分離極大片段的DNA。4、電泳環(huán)境緩沖液的組成和離子強度直接影響遷移率。Tris-Cl緩沖體系