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文檔簡(jiǎn)介
1、 組織學(xué)緒論組織胚胎學(xué)教研室 組織學(xué)研究?jī)?nèi)容和意義 組織學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史和當(dāng)代組織學(xué)(自學(xué)) 組織學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介 組織學(xué)的學(xué)習(xí)方法一、組織學(xué)研究?jī)?nèi)容和意義 (一) 組織學(xué)研究?jī)?nèi)容組織學(xué)(histology):是研究機(jī)體微細(xì)結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的科學(xué)。研究?jī)?nèi)容 組織(tissue) 細(xì)胞(cell) 亞細(xì)胞結(jié)構(gòu) 分子水平。概念組織:由形態(tài)相似,功能相關(guān)的細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)組成。器官:幾種不同的組織相互結(jié)合組成器官,每器官 具有一定的形態(tài)結(jié)構(gòu),并完成一定的生理功能。系統(tǒng):由多個(gè)器官聯(lián)合組成,并完成連續(xù)的生理活動(dòng)。 如消化系統(tǒng)。 基本組織(總論):器官、系統(tǒng)(各論):細(xì) 胞 組織 器官 系統(tǒng) 細(xì)胞外基質(zhì) 上皮組織
2、結(jié)締組織 肌組織 神經(jīng)組織(histology)是醫(yī)學(xué)課程中一門(mén)基礎(chǔ)學(xué)科。組織學(xué)在醫(yī)學(xué)課程中是與基礎(chǔ)和臨床各學(xué)科都有一定聯(lián)系。 尤其與解剖學(xué)、病理學(xué)、生理學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)均有密切的聯(lián)系。 近代生物學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展,各學(xué)科的內(nèi)容互相滲透、互相推動(dòng)、緊密相關(guān)。二、組織學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介(一)一般光學(xué)顯微鏡術(shù) 鏡下結(jié)構(gòu)稱(chēng)光鏡(light microscope LM) 結(jié)構(gòu); 放大倍數(shù)1000倍; 分辨率0.2m; 組織制成薄片,以利光線通過(guò)。1.石蠟切片術(shù)(paraffin sectioning) 制片過(guò)程(1)取材(1.0cm) 固定(甲醛) 酒精脫水(低-高) 透明(二甲苯) 浸蠟包埋 切片(
3、510 um) 展片; (2)脫蠟(二甲苯) 酒精(高-低) 水 蘇木精-伊紅染色 酒精脫水(低-高) 透明(二甲苯) 封片(樹(shù)膠) (3)染色(staining): 是用染料使無(wú)色組織切片著色,增加對(duì) 比度, 便于鏡下觀察。染色方法很多,但沒(méi)有一種 能使細(xì)胞全部結(jié)構(gòu)同時(shí)著色。 常用的染色方法:蘇木精(hematoxylin):細(xì)胞核和胞質(zhì)內(nèi)的嗜 堿性物質(zhì)著藍(lán)紫色 。 伊紅(eosin):細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和間質(zhì)內(nèi)的膠 原纖維等著紅色。 H.E2.特殊染色方法銀染:用硝酸銀將神經(jīng)細(xì)胞染為黑色。醛品紅染色:將彈性纖維染為紫色。甲苯胺藍(lán):將肥大細(xì)胞的分泌顆粒染為紫色?;铙w染色:取動(dòng)物組織材料之前活體注射染
4、料,觀察巨噬細(xì)胞的吞噬情況。1、嗜堿性:細(xì)胞和組織的酸性物質(zhì)或結(jié)構(gòu)與堿性染料 (如蘇木精)親合力強(qiáng),稱(chēng)嗜堿性。 2、嗜酸性:堿性物質(zhì)或結(jié)構(gòu)與酸性染料(如伊紅)親 合力強(qiáng),稱(chēng)嗜酸性。 3、中性:若與兩種染料的親合力均不強(qiáng)的。 4、親銀性:銀染法中有些組織結(jié)構(gòu)可直接使硝酸銀還 原而顯示,稱(chēng)此為親銀性。 5、嗜銀性:有些結(jié)構(gòu)無(wú)直接還原作用,需加入還原劑 方能顯色,稱(chēng)此為嗜銀性。 6、異染性:有些組織成分如結(jié)締組織和軟骨基質(zhì)中的 糖氨多糖,當(dāng)用甲苯胺藍(lán)等堿性染料染色 后呈紫紅色,這種現(xiàn)象稱(chēng)為異染性。名詞:3.其他制片方法 冰凍切片:組織液氮驟冷,恒冷箱切 片機(jī)切片(糖類(lèi)、脂類(lèi)、酶、核酸等)。 涂片:將
5、游離的細(xì)胞直接涂于切片上。 鋪片:將疏松結(jié)締組織或腸系膜等撕 成薄片鋪在載玻片上。 磨片:骨和牙等硬組織可磨為薄片。 分辨率為0.2m,放大倍數(shù)約為1000倍; 分辨率為0.2nm,比光鏡高1000倍,可放大幾萬(wàn)倍到幾十萬(wàn)倍,因此電鏡能觀察到細(xì)胞的更微細(xì)結(jié)構(gòu)。 在光鏡與電鏡下進(jìn)行觀察,常用的長(zhǎng)度計(jì)量單位為毫米(mm)、微米(m)和納米(nm)。 這些單位間的關(guān)系如下:m(微米)10-3mm(毫米);nm(納米)10-3m(微米)(transmission electron microscope TEM)透射電子顯微鏡技術(shù)的組織須用戍二醛或鋨酸固定,樹(shù)脂包埋,超薄切片(厚5080nm),再經(jīng)鉛鹽
6、等重金屬鹽染色后,在透射電子顯微鏡下觀察。 電鏡下所見(jiàn)的結(jié)構(gòu)稱(chēng)(ultrastructure),被金屬所染部位,熒光屏上顯得暗,圖象較黑,稱(chēng)為電子密度高;反之則稱(chēng)為電子密度低。 被檢結(jié)構(gòu)和重金屬鹽相結(jié)合的稱(chēng)正染色;被檢結(jié)構(gòu)本身不與重金屬鹽結(jié)合,而其周?chē)旧现亟饘冫}的稱(chēng)負(fù)染色。一般染色都是正染色。1、透射電鏡 :觀察組織、細(xì)胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)。 分辨率0.2nm。標(biāo)本制備:1、固定 (戊二醛與鋨酸等) 2、包埋(樹(shù)脂) 3、切片(50-80nm) 4、染色(醋酸鈾和檸檬酸鉛等重金屬) 標(biāo)本在熒光屏上呈黑白反差的結(jié)構(gòu)影像。 電子密度高、電子密度低:被重金屬浸染呈黑色的結(jié)構(gòu),稱(chēng)電子密度高;反之,淺染的部
7、分稱(chēng)電子密度(scanning electron microscope) 掃描電子顯微鏡技術(shù)要觀察的組織不需制成切片。 固定后的標(biāo)本,在其表面噴鍍金,在熒光屏上即可顯示細(xì)胞或組織表面的立體結(jié)構(gòu)。 如細(xì)胞表面的突起、微絨毛、纖毛等。2、掃描電鏡 :用于觀察組織表面的立體結(jié)構(gòu)。 分辨率5-7nm 組織化學(xué)術(shù)(histochemistry) 通過(guò)化學(xué)或物理反應(yīng)原理,在切片上加某種試劑,和組織中的待檢物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng),其最終產(chǎn)物或?yàn)橛猩恋砦?,以光鏡觀察;或?yàn)橹亟饘俪恋恚秒婄R觀察。顯示組織切片或細(xì)胞內(nèi)糖類(lèi)、脂類(lèi)、酶、核酸等化學(xué)成分。 PAS反應(yīng):(periodic acid Schiff react
8、ion) 顯示多糖和蛋白多糖的常用方法,又稱(chēng)過(guò)碘酸一雪夫反應(yīng)。過(guò)碘酸先將糖分子的乙二醇基氧化為乙二醛基,后者繼而與Schiff試劑結(jié)合,形成紫紅色反應(yīng)產(chǎn)物。 免疫組織化學(xué)術(shù)(immunohistochemistry) 應(yīng)用抗原與抗體結(jié)合的免疫學(xué)原理,用標(biāo)記的抗體檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的技術(shù)。常用的標(biāo)記物(1)熒光色素 (2)酶 (3)膠體金放射自顯影術(shù):通過(guò) 活細(xì)胞對(duì)放射性物質(zhì)的特異性攝入以顯示該細(xì)胞的功能狀態(tài)、或該物質(zhì)在組織和細(xì)胞內(nèi)的代謝過(guò)程。原位雜交:核酸分子雜交組織化學(xué)術(shù)。 圖象分析技術(shù):應(yīng)用數(shù)學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)原理對(duì)組織切片提供的平面圖像進(jìn)行分析,從而獲得立體的組織和細(xì)胞內(nèi)各種有形成分的數(shù)量、體積、表面積等參數(shù)。體視學(xué):根據(jù)連續(xù)的組織切片,應(yīng)用計(jì)算機(jī)進(jìn)行三維重建,以獲得微細(xì)結(jié)構(gòu)的立體模型。 細(xì)胞培養(yǎng)術(shù) :把 從機(jī)體取得的細(xì)胞模擬體內(nèi)的條件下進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù) 。組織工程:是用細(xì)胞培養(yǎng)術(shù)在體外模 擬構(gòu)建機(jī)體組織或器官的技術(shù)。皮膚、軟骨、骨、肌腱、骨骼肌、血管、角膜等。 三、組織學(xué)的學(xué)習(xí)方法1、平面與立體 的關(guān)系 2、結(jié)構(gòu)與功能的聯(lián)
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