第4章 胚胎培養(yǎng)

1、胚胎培養(yǎng)主講教師 榮海燕主要內(nèi)容含義含義第一節(jié) 胚培養(yǎng)第二節(jié)胚乳培養(yǎng)第二節(jié)胚乳培養(yǎng)第三節(jié)胚珠和子房培養(yǎng)第三節(jié)胚珠和子房培養(yǎng)第四節(jié)第四節(jié) 其它生殖器官培養(yǎng)其它生殖器官培養(yǎng)復(fù)習(xí)思考題復(fù)習(xí)思考題含義含義采用人工的方法將胚從種子、子房或胚珠中采用人工的方法將胚從種子、子房或胚珠中分離出來，再放在無菌的條件下，讓其進(jìn)一分離出來，再放在無菌的條件下，讓其進(jìn)一步生長發(fā)育，以至形成幼苗的過程。步生長發(fā)育，以至形成幼苗的過程。胚電鏡掃描圖片第一節(jié) 胚培養(yǎng)一、培養(yǎng)類型二、培養(yǎng)過程三、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件四、胚培養(yǎng)的應(yīng)用一、培養(yǎng)類型分裂一次分裂一次頂細(xì)胞頂細(xì)胞多次分裂多次分裂球狀胚體球狀胚體分裂分裂分化分化子葉子葉胚芽

2、胚芽胚軸胚軸胚根胚根幾次分裂幾次分裂胚柄胚柄1吸收養(yǎng)料供胚發(fā)育吸收養(yǎng)料供胚發(fā)育 2產(chǎn)生激素促進(jìn)胚發(fā)育產(chǎn)生激素促進(jìn)胚發(fā)育基細(xì)胞基細(xì)胞（近珠孔）（近珠孔）胚胚（2N）（2N）（2N）（2N）（2N）受精卵受精卵薺菜胚的發(fā)育過程薺菜胚的發(fā)育過程一一. .培養(yǎng)類型培養(yǎng)類型1、離體胚培養(yǎng)時(shí)期、離體胚培養(yǎng)時(shí)期 A.異養(yǎng)期異養(yǎng)期 B.自養(yǎng)期自養(yǎng)期 A.異養(yǎng)期，完全依賴于周圍細(xì)胞中的代謝，而異養(yǎng)期，完全依賴于周圍細(xì)胞中的代謝，而且依賴于周圍胚乳消耗的養(yǎng)料。且依賴于周圍胚乳消耗的養(yǎng)料。B.自養(yǎng)期，胚自養(yǎng)期，胚能吸收培養(yǎng)基中的無機(jī)鹽和糖，經(jīng)過自身的代能吸收培養(yǎng)基中的無機(jī)鹽和糖，經(jīng)過自身的代謝作用合成其生長所必需的

3、物質(zhì)。謝作用合成其生長所必需的物質(zhì)。2 2、離體胚培養(yǎng)類型、離體胚培養(yǎng)類型 成熟胚培養(yǎng)成熟胚培養(yǎng) 幼胚培養(yǎng)幼胚培養(yǎng)幼胚培養(yǎng)幼胚培養(yǎng)（子葉（子葉形成之前）形成之前） 成熟胚培養(yǎng)成熟胚培養(yǎng) （子葉形成以后）（子葉形成以后） 據(jù)培養(yǎng)目的不同據(jù)培養(yǎng)目的不同剝?nèi)〉碾x體胚發(fā)育時(shí)剝?nèi)〉碾x體胚發(fā)育時(shí)期的不同期的不同胚培養(yǎng)胚培養(yǎng)成熟胚培養(yǎng)一般較易獲得成功成熟胚培養(yǎng)一般較易獲得成功2 2、離體胚培養(yǎng)類型、離體胚培養(yǎng)類型1.1.幼胚培養(yǎng)過程幼胚培養(yǎng)過程2.2.成熟胚培養(yǎng)過程成熟胚培養(yǎng)過程二二.胚培養(yǎng)過程胚培養(yǎng)過程（1）子房表面消毒后，在無菌條件和高倍解）子房表面消毒后，在無菌條件和高倍解剖鏡下切取完整胚，然后接種。

4、剖鏡下切取完整胚，然后接種。 1.幼胚培養(yǎng)過程幼胚培養(yǎng)過程適宜時(shí)間摘取子房適宜時(shí)間摘取子房70%酒精表面消毒酒精表面消毒30S5%次氯酸鈉液中滅菌次氯酸鈉液中滅菌10分鐘分鐘無菌水沖洗數(shù)次無菌水沖洗數(shù)次無菌條件下取出胚珠無菌條件下取出胚珠接種于固體培養(yǎng)基接種于固體培養(yǎng)基培養(yǎng)培養(yǎng)基本培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基： MSNistch White 剝?nèi)ブ楸蝗〕鲇着邉內(nèi)ブ楸蝗〕鲇着撸?）幼胚培養(yǎng)的發(fā)育途徑）幼胚培養(yǎng)的發(fā)育途徑按正常胚胎發(fā)育途徑形成植株按正常胚胎發(fā)育途徑形成植株胚胚“早熟萌發(fā)早熟萌發(fā)”脫分化形成愈傷組織脫分化形成愈傷組織按正常胚胎發(fā)育途徑形成植株按正常胚胎發(fā)育途徑形成植株成熟胚成熟胚未成熟胚未成熟

5、胚正常發(fā)育形成小苗正常發(fā)育形成小苗維持胚的生長，進(jìn)行正常的胚胎發(fā)維持胚的生長，進(jìn)行正常的胚胎發(fā)育成熟，完成胚胎發(fā)育的全過程。育成熟，完成胚胎發(fā)育的全過程。 胚胚“ “ 早熟萌發(fā)早熟萌發(fā)”離體的幼胚在培養(yǎng)基上不能長出成熟胚的各種離體的幼胚在培養(yǎng)基上不能長出成熟胚的各種結(jié)構(gòu)，越過正常胚胎發(fā)生過程中的若干階段，結(jié)構(gòu)，越過正常胚胎發(fā)生過程中的若干階段，直接長成幼苗。直接長成幼苗。未成熟幼胚未成熟幼胚畸形苗畸形苗分離變異體分離變異體發(fā)育不正常而死（即胚性發(fā)育）發(fā)育不正常而死（即胚性發(fā)育）脫分化形成愈傷組織脫分化形成愈傷組織離體胚離體胚愈傷組織愈傷組織激素濃度高激素濃度高胚狀體或不定芽胚狀體或不定芽分化培

6、養(yǎng)基分化培養(yǎng)基小植株小植株2.2.成熟胚培養(yǎng)過程成熟胚培養(yǎng)過程培養(yǎng)方法：培養(yǎng)方法：A、將受精后成熟或未成熟種子或果實(shí)，、將受精后成熟或未成熟種子或果實(shí)，用用70%75%酒精表面消毒消毒幾分鐘酒精表面消毒消毒幾分鐘B、用、用0.1%升汞溶液或飽和漂白粉溶液升汞溶液或飽和漂白粉溶液消毒消毒10min，無菌水反復(fù)沖洗，無菌水反復(fù)沖洗C、無菌操作臺(tái)上，直接或在解剖鏡下、無菌操作臺(tái)上，直接或在解剖鏡下剝?nèi)∨呓臃N在培養(yǎng)基上剝?nèi)∨呓臃N在培養(yǎng)基上成熟胚是自養(yǎng)的，培養(yǎng)基需要簡(jiǎn)單。成熟胚是自養(yǎng)的，培養(yǎng)基需要簡(jiǎn)單。未成熟的幼胚，當(dāng)它在胚囊里生長時(shí)，不僅未成熟的幼胚，當(dāng)它在胚囊里生長時(shí)，不僅依賴于周圍細(xì)胞中的代謝，而

7、且依賴于周圍依賴于周圍細(xì)胞中的代謝，而且依賴于周圍胚乳消耗的養(yǎng)料。與成熟胚的相對(duì)自養(yǎng)性比胚乳消耗的養(yǎng)料。與成熟胚的相對(duì)自養(yǎng)性比較，幼胚則完全是異養(yǎng)的，在離體情況下，較，幼胚則完全是異養(yǎng)的，在離體情況下，要求更復(fù)雜的培養(yǎng)基。除了一般的無機(jī)鹽成要求更復(fù)雜的培養(yǎng)基。除了一般的無機(jī)鹽成分外，還要加入微量元素和各種生長輔助物分外，還要加入微量元素和各種生長輔助物質(zhì)。胚齡越小，要求的培養(yǎng)基成分就越復(fù)雜。質(zhì)。胚齡越小，要求的培養(yǎng)基成分就越復(fù)雜。三、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件三、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件 胚齡 胚長度（m） 營養(yǎng)需要（培養(yǎng)基營養(yǎng)）早球形胚后球形胚心形胚魚雷胚成熟胚 2060 6180 81450 4517007

8、00（最大極限）小于40m長的胚所需營養(yǎng)尚不清楚大量元素、微量元素、VB1、VB6、煙酸、糖2%、IAA0.1mg/L+KT0.01mg/L大量元素、微量元素、VB1、VB6、煙酸、糖2%Ca（NO3）2480mg/L、KNO363mg/L、KCl 42mg/L、MgSO463mg/L、KH2PO442mg/L、VB1、VB6、煙酸、糖2%Ca（NO3）2480mg/L、KNO363mg/L、KCl 42mg/L、MgSO463mg/L、糖2%薺菜不同發(fā)育時(shí)期胚培養(yǎng)的營養(yǎng)需要薺菜不同發(fā)育時(shí)期胚培養(yǎng)的營養(yǎng)需要1. 1. 培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：White Rangwang MS B5 Nitsch 無機(jī)

9、鹽無機(jī)鹽+糖糖(3-5%)+生長輔助物質(zhì)生長輔助物質(zhì)(維生素、維生素、AA、椰乳等椰乳等)有利，光照不利于胚根生長。有利，光照不利于胚根生長。幼胚需高無機(jī)鹽、高幼胚需高無機(jī)鹽、高AAAA、高蔗糖、高滲透、高蔗糖、高滲透壓。壓。 液體培養(yǎng)基利于幼胚培養(yǎng)，固體培養(yǎng)基利液體培養(yǎng)基利于幼胚培養(yǎng)，固體培養(yǎng)基利于成熟胚培養(yǎng)。于成熟胚培養(yǎng)。2.培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件：A.pH值在值在5.2-6.3，與植物有關(guān)。，與植物有關(guān)。 B.溫度：多數(shù)胚溫度：多數(shù)胚25，有的需變溫或較低較高，有的需變溫或較低較高溫度。溫度。 C.光照：通常弱光培養(yǎng)。光暗交替有利幼胚生光照：通常弱光培養(yǎng)。光暗交替有利幼胚生長長原胚原胚(幼胚幼

10、胚)的培養(yǎng)的條件的培養(yǎng)的條件 無機(jī)氮：無機(jī)氮： 滲透壓：滲透壓： 復(fù)雜的天然提取物：復(fù)雜的天然提取物： 活性炭：活性炭：包括硝酸鹽、亞硝酸鹽或銨鹽；包括硝酸鹽、亞硝酸鹽或銨鹽；蔗糖，蔗糖，8%-10%8%-10%，不同發(fā)育期，滲透壓不一樣，不同發(fā)育期，滲透壓不一樣，初期高（初期高（WHYWHY）。因?yàn)椋?。因?yàn)樽匀粭l件下，原胚被一自然條件下，原胚被一層高滲液體包圍著。層高滲液體包圍著。椰乳椰乳 CM有促進(jìn)幼胚生長和分化的作用有促進(jìn)幼胚生長和分化的作用吸附有毒物質(zhì)吸附有毒物質(zhì)3 . 有利幼胚培養(yǎng)的因素有利幼胚培養(yǎng)的因素胚乳看護(hù)培養(yǎng)，利于原胚的生長有明顯的促進(jìn)胚乳看護(hù)培養(yǎng)，利于原胚的生長有明顯的促進(jìn)

11、作用。作用。胚柄的存在對(duì)于幼胚的存活至關(guān)重要：胚柄的存在對(duì)于幼胚的存活至關(guān)重要：胚柄促進(jìn)生長的活性，心形早期活性最高。而胚柄促進(jìn)生長的活性，心形早期活性最高。而且保留胚柄減少對(duì)胚的直接損失。且保留胚柄減少對(duì)胚的直接損失。應(yīng)用克服遠(yuǎn)緣雜種的不克服遠(yuǎn)緣雜種的不育性。育性。 敗育敗育 胚培養(yǎng)胚培養(yǎng)使胚發(fā)育不全的植物獲得后代。使胚發(fā)育不全的植物獲得后代。 縮短育種年限。縮短育種年限。 研究與胚發(fā)育有關(guān)的內(nèi)外因素。研究與胚發(fā)育有關(guān)的內(nèi)外因素。第二節(jié)胚乳培養(yǎng)第二節(jié)胚乳培養(yǎng)1. 胚乳胚乳X X3 3（2 2極核極核1 1精子）精子）是營養(yǎng)組織，影響胚的發(fā)育。是營養(yǎng)組織，影響胚的發(fā)育。有些植物在胚發(fā)育過程中把

12、胚有些植物在胚發(fā)育過程中把胚乳消耗盡（豆科和葫蘆科）；乳消耗盡（豆科和葫蘆科）；有些植物，胚乳在成熟種子中有些植物，胚乳在成熟種子中存在，貯存大量營養(yǎng)物質(zhì)（禾存在，貯存大量營養(yǎng)物質(zhì)（禾谷類，椰子，咖啡）谷類，椰子，咖啡）v將胚乳從母體上分離出來，放在無菌的人工將胚乳從母體上分離出來，放在無菌的人工環(huán)境條件下，讓其進(jìn)一步生長發(fā)育，以至形環(huán)境條件下，讓其進(jìn)一步生長發(fā)育，以至形成幼苗的過程。成幼苗的過程。含義含義 胚乳培養(yǎng)再生植株證明了全能性理論；胚乳培養(yǎng)再生植株證明了全能性理論；研究胚和胚乳的關(guān)系及胚乳組織的功能；研究胚和胚乳的關(guān)系及胚乳組織的功能；再生植株多為三倍體，產(chǎn)生無籽果實(shí)；再生植株多為三

13、倍體，產(chǎn)生無籽果實(shí)；可以從胚乳愈傷中分離和篩選各種類型的非整倍可以從胚乳愈傷中分離和篩選各種類型的非整倍體植株。體植株。胚乳細(xì)胞是研究淀粉、蛋白質(zhì)和脂類天然產(chǎn)物代胚乳細(xì)胞是研究淀粉、蛋白質(zhì)和脂類天然產(chǎn)物代謝途徑的理想系統(tǒng)。謝途徑的理想系統(tǒng)。胚乳培養(yǎng)的意義胚乳培養(yǎng)的意義胚乳愈傷組織的建立胚乳愈傷組織的建立 絕大多數(shù)經(jīng)歷愈傷組織階段（器官發(fā)生），極絕大多數(shù)經(jīng)歷愈傷組織階段（器官發(fā)生），極少數(shù)直接從胚乳直接分化器官少數(shù)直接從胚乳直接分化器官( (胚狀體胚狀體) )。胚乳發(fā)育時(shí)期胚乳發(fā)育時(shí)期 發(fā)育早期的胚乳，接種不方便，愈傷發(fā)育早期的胚乳，接種不方便，愈傷組織的誘導(dǎo)頻率很低。組織的誘導(dǎo)頻率很低。 處于

14、旺盛生長期的胚乳，離體條件下最處于旺盛生長期的胚乳，離體條件下最易誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織。易誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織。 接近成熟或完全成熟的胚乳，愈傷組織接近成熟或完全成熟的胚乳，愈傷組織誘導(dǎo)頻率很低。誘導(dǎo)頻率很低。胚乳培養(yǎng)的方法胚乳培養(yǎng)的方法 旺盛期胚乳特征旺盛期胚乳特征 胚已分化完成胚已分化完成 胚乳已形成細(xì)胞組織胚乳已形成細(xì)胞組織 充分生長，達(dá)到成熟大小充分生長，達(dá)到成熟大小 外觀為半透明的固體狀外觀為半透明的固體狀 富有彈性富有彈性水稻：授粉后水稻：授粉后4 d 黑麥草：授粉后黑麥草：授粉后8 10 d黃瓜：授粉后黃瓜：授粉后7 16 d 梨：授粉后梨：授粉后20 d大麥：授粉后大麥：授粉后10 2

15、0 d 玉米和小麥：授粉后玉米和小麥：授粉后8 12 d一些草本植物胚乳培養(yǎng)的適宜取材時(shí)期一些草本植物胚乳培養(yǎng)的適宜取材時(shí)期一般情況下：接近成熟或完全成熟的胚乳一般情況下：接近成熟或完全成熟的胚乳callus誘導(dǎo)率很低，誘導(dǎo)率很低，甚至無甚至無callus木本植物，如：桑寄生科、檀香科植物，其成熟胚乳和誘木本植物，如：桑寄生科、檀香科植物，其成熟胚乳和誘導(dǎo)產(chǎn)生導(dǎo)產(chǎn)生callus（一）培養(yǎng)基及植物生長物質(zhì)（一）培養(yǎng)基及植物生長物質(zhì)WTWT、MSMS植物激素植物激素生長素細(xì)胞分裂素合理搭配，效果更好生長素細(xì)胞分裂素合理搭配，效果更好 一般植物一般植物 均適宜均適宜特殊種類激素特殊種類激素 如如:

16、: 大麥大麥2,4-D2,4-D 獼猴桃玉米素獼猴桃玉米素?zé)o特別要求，任何一種生長素均可無特別要求，任何一種生長素均可 如如: :棗棗二二.培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件旺盛期的未成熟胚乳，在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上無需原位胚的旺盛期的未成熟胚乳，在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上無需原位胚的參與，就能形成愈傷組織。參與，就能形成愈傷組織。完全成熟的胚乳，生理活動(dòng)很弱，在誘導(dǎo)脫分化前，完全成熟的胚乳，生理活動(dòng)很弱，在誘導(dǎo)脫分化前，必須借助于原位胚的萌發(fā)，使其活化。必須借助于原位胚的萌發(fā)，使其活化。胚在萌發(fā)時(shí)產(chǎn)生某種物質(zhì)胚在萌發(fā)時(shí)產(chǎn)生某種物質(zhì)“ “ 胚因子胚因子”。外源。外源GA3GA3能能部分取代胚因子。部分取代胚因子。（

17、二）胚在胚乳培養(yǎng)中的作用胚在胚乳培養(yǎng)中的作用（三）（三） 培養(yǎng)方法：培養(yǎng)方法：A、取授粉、取授粉4-8d后的幼果，常規(guī)消毒后的幼果，常規(guī)消毒B、無菌條件下切開果實(shí)，取出種子，分離出胚乳、無菌條件下切開果實(shí)，取出種子，分離出胚乳C、接種在培養(yǎng)基上，在、接種在培養(yǎng)基上，在25-27和黑暗條件或散射和黑暗條件或散射光下培養(yǎng)形成愈傷組織光下培養(yǎng)形成愈傷組織D、轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基上，待愈傷組織長出芽后，切下、轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基上，待愈傷組織長出芽后，切下不定芽不定芽E、插入生根培養(yǎng)基中，光下培養(yǎng)、插入生根培養(yǎng)基中，光下培養(yǎng)10-15d，切口處長，切口處長出白色的不定根出白色的不定根胚乳培養(yǎng)過程胚乳培養(yǎng)過程胚乳胚

18、乳胚狀體發(fā)育成苗胚狀體發(fā)育成苗不定芽苗不定芽苗柚，柑桔和棗柚，柑桔和棗大麥大麥, , 水稻水稻, , 玉米玉米, , 蘋果蘋果, , 馬鈴薯馬鈴薯愈傷組織愈傷組織形態(tài)發(fā)生形態(tài)發(fā)生（四）胚乳培養(yǎng)的應(yīng)用（四）胚乳培養(yǎng)的應(yīng)用 培養(yǎng)胚乳的首要目的是為了直接獲得培養(yǎng)胚乳的首要目的是為了直接獲得三倍體植株。三倍體植株。三倍體三倍體六倍體六倍體生產(chǎn)生產(chǎn)倍性多樣性倍性多樣性篩選非整倍體植株篩選非整倍體植株雜種胚乳雜種胚乳附加系和換代系附加系和換代系遺傳育種遺傳育種 第三節(jié)胚珠和子房培養(yǎng)第三節(jié)胚珠和子房培養(yǎng) 柱頭柱頭花柱花柱子房子房花?；ü；ㄍ谢ㄍ谢ńM成花組成胚囊胚囊卵細(xì)胞卵細(xì)胞株心株心珠珠 孔孔反足細(xì)胞反足細(xì)

19、胞珠珠 被被胚珠胚珠極核極核 株柄株柄未受精胚珠未受精胚珠受精胚珠受精胚珠愈傷組織愈傷組織發(fā)育成種子發(fā)育成種子大孢子或卵分化大孢子或卵分化為單倍體植株為單倍體植株再生植株再生植株一、胚珠培養(yǎng)一、胚珠培養(yǎng)直接成苗直接成苗一、胚珠培養(yǎng)一、胚珠培養(yǎng)適宜時(shí)間摘取子房適宜時(shí)間摘取子房70%酒精表面消毒酒精表面消毒30S5%次氯酸鈉液中滅菌次氯酸鈉液中滅菌10分鐘分鐘無菌水沖洗數(shù)次無菌水沖洗數(shù)次無菌條件下取出胚珠無菌條件下取出胚珠接種于固體培養(yǎng)基接種于固體培養(yǎng)基培養(yǎng)培養(yǎng)基本培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基： MSNistch White不同植物的胚珠形態(tài)結(jié)構(gòu)胚珠培養(yǎng)的方法胚珠培養(yǎng)的方法長度小于長度小于3mm的胚珠，的胚

20、珠，難與直接解剖，可先接難與直接解剖，可先接種于液體培養(yǎng)基中，根種于液體培養(yǎng)基中，根據(jù)培養(yǎng)情況采取相應(yīng)培據(jù)培養(yǎng)情況采取相應(yīng)培養(yǎng)條件。養(yǎng)條件。二、子房培養(yǎng)二、子房培養(yǎng)1.1.摘取時(shí)間摘取時(shí)間：在開花前在開花前1 15 5天摘下未授粉子房；或授粉天摘下未授粉子房；或授粉后摘下子房。后摘下子房。 2.2.滅菌滅菌：禾谷類用：禾谷類用70%70%酒精擦酒精擦洗幼穗；雙子葉植物花蕾用洗幼穗；雙子葉植物花蕾用飽和漂白粉滅菌飽和漂白粉滅菌1515分；子房分；子房用用70%70%酒精浸酒精浸3030秒，秒，0.1%0.1%升汞升汞15152020分。無菌水沖洗，無分。無菌水沖洗，無菌濾紙吸干。菌濾紙吸干。柱頭

21、柱頭花柱花柱子房子房花?；ü；ㄍ谢ㄍ谢ńM成花組成3.3.接種：接種： 無菌條件下剝開幼花，夾出子房并接無菌條件下剝開幼花，夾出子房并接種于培養(yǎng)基（種于培養(yǎng)基（MSMS、N6N6等）。等）。 4.4.培養(yǎng)：培養(yǎng)： T26,RH50-60%T26,RH50-60%，16h16h散射光。散射光。胚珠胚珠花粉花粉試管內(nèi)試管內(nèi)授粉授粉10d后后胚珠胚珠培養(yǎng)培養(yǎng)3周后周后離體受精及植株再生過程離體受精及植株再生過程三、胚珠和子房培養(yǎng)的應(yīng)用三、胚珠和子房培養(yǎng)的應(yīng)用 1 1、胚珠、胚珠受精胚珠培養(yǎng)目的受精胚珠培養(yǎng)目的打破種子的休眠打破種子的休眠 挽救胚的發(fā)育以獲得雜交種挽救胚的發(fā)育以獲得雜交種未受精胚珠培養(yǎng)目

22、的未受精胚珠培養(yǎng)目的獲得單倍體細(xì)胞發(fā)育而來獲得單倍體細(xì)胞發(fā)育而來 的植株的植株 2 2、子房、子房授粉子房培養(yǎng)目的授粉子房培養(yǎng)目的挽救子房內(nèi)雜種胚的發(fā)育挽救子房內(nèi)雜種胚的發(fā)育未授粉子房培養(yǎng)目的未授粉子房培養(yǎng)目的獲得單倍體植株獲得單倍體植株 試管受精解決雜交育種中不試管受精解決雜交育種中不 親和問題。親和問題。第四節(jié)第四節(jié) 其它生殖器官培養(yǎng)其它生殖器官培養(yǎng)一、花器培養(yǎng)一、花器培養(yǎng)1.1.取材及處理取材及處理 以健壯植株未開放花以健壯植株未開放花蕾為外植體，蕾為外植體，75%75%酒精酒精浸浸30S30S，飽和漂白粉浸，飽和漂白粉浸10-1510-15分，無菌水沖洗分，無菌水沖洗數(shù)次。數(shù)次。 2.2.培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：MSMS、B5B5等等3.3.接種：接種： 花蕾培養(yǎng)：花蕾培養(yǎng)：花梗插入培花梗插入培 養(yǎng)基中。養(yǎng)基中。 部分花器培養(yǎng)：部分花器培養(yǎng)：切片接入切片接入 培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基中。4.4.培養(yǎng)：培養(yǎng)： 加入生長素和加入生長素和CTKCTK，誘，誘導(dǎo)形成愈傷組織或胚狀導(dǎo)形成愈傷組織或胚狀體，再分化成植株體，再分化成植株。二、種子培養(yǎng)二、種子培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 1.1.植株分化容易，無菌操作方便，植株分化容易，無菌操作方