細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)到ppt課件

1、ph causes non-autonomous overgrowth in mosaic eyes 主要技術(shù)手段：主要技術(shù)手段： MARCM技術(shù)技術(shù) TUNEL法法MARCM技術(shù)技術(shù)假設(shè)想在嵌合體中敲除基因，假設(shè)想在嵌合體中敲除基因，用用FLP/FRT系統(tǒng)系統(tǒng) 假設(shè)想在嵌合體中添加基因表達(dá)，假設(shè)想在嵌合體中添加基因表達(dá)，用用UAS/Gal4系統(tǒng)系統(tǒng)UAS/Gal4系統(tǒng)系統(tǒng)GAL4/UASGAL4/UAS系統(tǒng)是一種轉(zhuǎn)基因體系。系統(tǒng)是一種轉(zhuǎn)基因體系。原理：利用特定的啟動(dòng)子或加強(qiáng)原理：利用特定的啟動(dòng)子或加強(qiáng) 子，以組織特異性的方式激子，以組織特異性的方式激 活酵母轉(zhuǎn)錄激活子活酵母轉(zhuǎn)錄激活子GAL4

2、GAL4的表的表 達(dá)，達(dá)，GAL4GAL4又以同樣的方式引又以同樣的方式引 起起GAL4GAL4反映元件反映元件UASUAS- -靶靶 基因的轉(zhuǎn)錄?；虻霓D(zhuǎn)錄。 GAL4UASUAS/Gal4系統(tǒng)系統(tǒng)FLP/FRT 系統(tǒng)系統(tǒng)果蠅含有四對(duì)染色體，每對(duì)染果蠅含有四對(duì)染色體，每對(duì)染色體中的一條被稱為同源染色色體中的一條被稱為同源染色體，分別來(lái)自于母本和父本。體，分別來(lái)自于母本和父本。在正常的細(xì)胞分裂中，一對(duì)同在正常的細(xì)胞分裂中，一對(duì)同源染色體總是能忠實(shí)地復(fù)制，源染色體總是能忠實(shí)地復(fù)制，然后分配到新分裂的細(xì)胞中然后分配到新分裂的細(xì)胞中 FLP是一個(gè)來(lái)自酵母的染色體重組酶是一個(gè)來(lái)自酵母的染色體重組酶FR

3、T那么是那么是FLP催化的一段催化的一段DNA序列序列同源重組產(chǎn)生會(huì)兩個(gè)子細(xì)胞中，一個(gè)含有雙份正常染色體，令一個(gè)含有雙份突變?nèi)旧w。假設(shè)我們?cè)谡Ｈ旧w上添加標(biāo)示GFP，那么，可以在果蠅組織中察看突變細(xì)胞的表型變化 假設(shè)兩條染色體中的一條是正常的，而另一條基因被突變掉，那么對(duì)于絕大部分沒(méi)有重組的細(xì)胞來(lái)說(shuō)，它們是“雜合體。FLP/FRT 系統(tǒng)系統(tǒng)MARCM 技術(shù)技術(shù)(mosaic analysis with a repressible cell marker )同源同源染色染色體重體重組組非同非同源染源染色體色體組合組合GAL80UAS/GFP/mutation突變細(xì)胞突變細(xì)胞TUNEL法法 D

4、NA片段化與檢測(cè)片段化與檢測(cè)細(xì)胞凋亡中染色體細(xì)胞凋亡中染色體DNADNA的斷裂是個(gè)的斷裂是個(gè)漸進(jìn)的過(guò)程，染色體漸進(jìn)的過(guò)程，染色體DNADNA首先在核首先在核酸內(nèi)切酶作用下，隨機(jī)切斷；酸內(nèi)切酶作用下，隨機(jī)切斷；在核小體單位之間被隨機(jī)切斷。構(gòu)在核小體單位之間被隨機(jī)切斷。構(gòu)成成180-200bp180-200bp核小體式片段；核小體式片段；DNADNA雙鏈斷裂出現(xiàn)缺口即可產(chǎn)生一雙鏈斷裂出現(xiàn)缺口即可產(chǎn)生一系列系列DNADNA的的3 3-OH-OH末端，被染色。末端，被染色。 添加細(xì)胞膜通透性添加細(xì)胞膜通透性 TdT 酶和熒光素標(biāo)志酶和熒光素標(biāo)志 的的dUTP進(jìn)入細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞在在TdT酶的輔助下酶的輔助下dUTP與凋亡細(xì)胞中斷裂與凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的的3-OH末端結(jié)合末端結(jié)合 HRP標(biāo)志的抗熒光標(biāo)志的抗熒光 素抗體特異結(jié)合素抗體特異結(jié)合HRP底物，底物，H2O2發(fā)生氧化、環(huán)化反發(fā)生氧化、環(huán)化反響，構(gòu)成棕