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1、現(xiàn)代生物科技專題第1講基因工程考綱要求目錄Contents考點(diǎn)一基因工程的操作工具考點(diǎn)二基因工程的基本操作程序課堂練真題明高考規(guī)律課下練模擬試自身能力考點(diǎn)三基因工程的應(yīng)用及蛋白質(zhì)工程基因工程的操作工具限制酶限制酶BamHBclSau3AHind識(shí)別序識(shí)別序列及切列及切割位點(diǎn)割位點(diǎn)圖圖1圖圖2形成單形成單鏈鏈DNA新的新的DNA分子分子形成重組形成重組DNA分子分子黏性末端黏性末端或平末端或平末端形成形成產(chǎn)物產(chǎn)物堿基對(duì)堿基對(duì)間的氫鍵間的氫鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵作用作用部位部位DNA分子分子脫氧核苷酸脫氧核苷酸DNA分分子片段子片段DNA分子分子作用作用底物
2、底物解旋酶解旋酶DNA聚合酶聚合酶DNA連接酶連接酶限制酶限制酶比較比較項(xiàng)目項(xiàng)目基因工程的基本操作程序比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制復(fù)制PCR技術(shù)技術(shù)不不同同點(diǎn)點(diǎn)解旋解旋在在_作用下邊解旋邊作用下邊解旋邊復(fù)制復(fù)制80100 高溫解旋,高溫解旋,雙鏈完全分開雙鏈完全分開酶酶_、DNA聚合酶聚合酶Taq DNA聚合酶聚合酶引物引物RNA一般為一般為DNA溫度溫度體內(nèi)溫和條件體內(nèi)溫和條件_相相同同點(diǎn)點(diǎn)需提供需提供DNA復(fù)制的復(fù)制的_;以四種脫氧核苷酸作原料;以四種脫氧核苷酸作原料;子鏈延伸的方向都是從子鏈延伸的方向都是從5端到端到3端端解析解析返回返回反轉(zhuǎn)反轉(zhuǎn)錄法錄法化學(xué)化學(xué)合成法合成法從部
3、分基因文從部分基因文庫(kù),如庫(kù),如cDNA文庫(kù)中獲取文庫(kù)中獲取從基因組文從基因組文庫(kù)中獲取庫(kù)中獲取過過程程人工合成人工合成從基因文庫(kù)中獲取從基因文庫(kù)中獲取方法方法Ca2處理細(xì)胞處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞重組表達(dá)載重組表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)體與感受態(tài)細(xì)胞混合胞混合感受感受態(tài)細(xì)胞吸收態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子分子將含有目的基將含有目的基因的表達(dá)載體因的表達(dá)載體提純提純?nèi)÷讶÷?受受精卵精卵)顯微注顯微注射射受精卵發(fā)受精卵發(fā)育育獲得具有獲得具有新性狀的動(dòng)物新性狀的動(dòng)物將目的基因插將目的基因插入到入到Ti質(zhì)粒的質(zhì)粒的TDNA上上農(nóng)農(nóng)桿菌桿菌導(dǎo)入植導(dǎo)入植物細(xì)胞物細(xì)胞整合整合到受體細(xì)胞的到受體細(xì)胞的染色體染色體DN
4、A上上表達(dá)表達(dá)轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化過程過程原核細(xì)胞原核細(xì)胞受精卵受精卵體細(xì)胞體細(xì)胞受體細(xì)胞受體細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞法感受態(tài)細(xì)胞法顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法常用方法常用方法微生物細(xì)胞微生物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞植物細(xì)胞植物細(xì)胞生物種類生物種類基因工程的應(yīng)用及蛋白質(zhì)工程蛋白質(zhì)工程是在基因工程基礎(chǔ)上延伸出來的第二代蛋白質(zhì)工程是在基因工程基礎(chǔ)上延伸出來的第二代基因工程基因工程基因工程中所利用的某些酶需要通過蛋白質(zhì)工程進(jìn)基因工程中所利用的某些酶需要通過蛋白質(zhì)工程進(jìn)行修飾、改造行修飾、改造聯(lián)系聯(lián)系只能生產(chǎn)自然界已有的蛋白只能生產(chǎn)自然界已有的蛋白質(zhì)質(zhì)可生產(chǎn)自然界沒有的蛋可生產(chǎn)自然界沒有的蛋白質(zhì)白質(zhì)結(jié)果結(jié)果定向改造生物的遺傳特性,定向改造生物的遺傳特性,以獲得人類所需的生物類型以獲得人類所需的生物類型或生物產(chǎn)品或生物產(chǎn)品定向改造或生產(chǎn)人類所定向改造或生產(chǎn)人類所需的蛋白質(zhì)需的蛋白質(zhì)實(shí)質(zhì)實(shí)質(zhì)獲取目的基因獲取目的基因構(gòu)建基因表構(gòu)建基因表達(dá)載體達(dá)載體將目的基因?qū)胧軐⒛康幕驅(qū)胧荏w細(xì)胞體細(xì)胞目的基因的檢測(cè)與目的基因的檢測(cè)與鑒定鑒定預(yù)期蛋白質(zhì)功能預(yù)期蛋白質(zhì)功能設(shè)計(jì)設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)推推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序
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