離子色譜抑制電導(dǎo)法測定氨基糖苷類藥物中的

1、離子色譜抑制電導(dǎo)法測定氨基糖苷類藥物中的硫酸根和陰離子雜質(zhì)鄭婷 (戴安中國有限公司,北京，100029，zhengting)摘要：本文建立了一種采用離子色譜法，抑制型電導(dǎo)檢測器測定氨基糖苷類藥物中的硫酸根和陰離子雜質(zhì) 的方法。選擇的色譜條件為： IonPac AS18和IonPac AS11-HC陰離子交換柱，氫氧化鉀梯度淋洗，抑制型電導(dǎo)檢測。使用不同柱子兩種方法檢測限分別是（S/N=3）為 3.09.3和50150g/L，線形相關(guān)系數(shù)r2 0.99940.9998和0.99960.9999，RSD均小于3。這兩種方法都可以用于具體樣品的定量分析。 關(guān)鍵詞：離子色譜；硫酸根溴；陰離子雜質(zhì)；AS

2、18色譜柱；AS11-HC 氨基糖苷類藥物在控制需氧菌、革蘭氏陰性菌和一些革蘭氏陽性菌時是一種大量和廣泛使用的抗生素。這類抗生素通常用來治療腹部和尿道的嚴(yán)重感染，也用來治療細(xì)菌感染和心內(nèi)膜炎。常見的氨基糖苷類藥物有慶大霉素、托普霉素、阿米卡星、鏈霉素。約20-30%（w/w）的氨基糖苷類化合物都成硫酸鹽。 本研究使用Ionpac AS18或 Ionpac AS11-HC陰離子交換柱來測定氨基糖苷類藥物中的對離子硫酸根和陰離子雜質(zhì)。AS18色譜柱是由高度交聯(lián)的聚附陰離子交換基團(tuán)的乳膠微粒組成的，這種乳膠表面鍵合了高親水性的季銨活性基團(tuán)。對于分離各種樣品中常見的無機(jī)陰離子和小分子有機(jī)酸AS18的選

3、擇性得到了最大優(yōu)化。AS18對于測定藥品中的主要對陰離子是理想的選擇。AS 11-HC是9微米多孔樹脂微球構(gòu)成的，這種微球表面附聚了鍵合季銨功能基的陰離子交換薄膜。在分析復(fù)雜樣品中的多種有機(jī)酸和無機(jī)陰離子時AS 11-HC的選擇性得到了最大優(yōu)化。AS 11-HC對于測定痕量組分和測定非特征樣品中的有機(jī)酸是理想的選擇。這兩種柱子都采用氫氧化物作為淋洗液，這樣可以由淋洗液發(fā)生裝置通過水的在線電解自動產(chǎn)生淋洗液。本應(yīng)用詳述了電解產(chǎn)生氫氧化鉀淋洗液測定硫酸根對離子和氨基糖苷類藥物中陰離子雜質(zhì)，并考察了該陰離子交換色譜法的線性關(guān)系、檢測限、靈敏度和回收率。含自動淋洗液發(fā)生裝置的離子色譜系統(tǒng)（RFIC）和

4、高選擇性色譜柱滿足了制藥工業(yè)中對離子檢測的需求。該方法準(zhǔn)確，精密，實(shí)用，并可在各個實(shí)驗(yàn)室便捷傳遞。 1 實(shí)驗(yàn)部分 1.1 儀器與試劑 Dionex ICS-3000離子色譜儀，Chromeleon 6.8色譜工作站。乙酸鈉 (Sigma-Aldrich)，氯化鈉（J.T.Baker），硫酸鈉 (Aldrich 29，931-3)，無水磷酸氫二鈉（J.T.Baker;VWR），十水合焦磷酸鈉 (Sigma-Aldrich)，二硫酸阿米卡星 (Sigma-Aldrich A 1774)，3/2硫酸二水合鏈霉素(Sigma-Aldrich D7253)，硫酸卡那霉素和卡那霉素A (Sigma-Ald

5、rich K 4000)， 硫酸卡那霉素B(Sigma-Aldrich B 5264)。水合三硫酸新霉素(Sigma-Aldrich N 5285)，硫酸巴龍霉素(Sigma-Aldrich P 9297)，硫酸巴龍霉素(USPCatalog#1500003 )，五硫酸西索米星(Sigma-Aldrich S7796)，巴龍霉素(硫酸巴龍霉素膠USP,Monarch Pharmaceuticals,Bristol,TN)。 所有用水均為電阻率18 M cm的去離子水。1.2 色譜條件 方法1 色譜柱: Dionex Ionpac As18分離柱和IonPac AG18保護(hù)柱 淋洗液; 22mM

6、, KOH,0-7min 22-40mM, 7-8min 40mM, 8-20min 流速為0.25mL/min，溫度30，進(jìn)樣體積5L，抑制電導(dǎo)ASRS (2mm),循環(huán)模式，電流25mA 方法2：色譜柱: Dionex Ionpac As11HC分離柱和IonPac AG11HC保護(hù)柱 淋洗液; 1mM, KOH, 0-5min 1-5 mM, KOH, 5-9min 5-38 mM, KOH,9-20min 38-60 mM, KOH,20-25min 60mM, KOH,25-30min 流速0.38mL/min，溫度30，進(jìn)樣體積5L，抑制電導(dǎo)ASRS,循環(huán)模式，電流62mA 1.3

7、 樣品前處理 本方法中，約120mg的每種硫酸氨基糖苷化合物固體樣品分別放在的已知重量的1.5mL具蓋聚丙烯小瓶中，未干燥樣品的準(zhǔn)確重量已測知。除去蓋子的聚丙烯小瓶被放在SpeedVac真空干燥箱（7mmHg）中加熱至50保持24小時。小瓶、蓋子和干燥后的固體均被準(zhǔn)確稱重（測知水分含量約為0.7-11.4%）干燥后的樣品被溶解至適量的水中配成100mg/L的濃度。一級樣品稀釋液濃度為1.0mg/L。最終將樣品稀釋至0.05mg/L的濃度，用來進(jìn)樣到Ionpac AS 18色譜柱上測定硫酸根對離子的含量和陰離子雜質(zhì)的含量。 硫酸巴龍霉素膠囊被小心打開并露出其中的固體，膠囊和固體整個放入含有100

8、.00.1g水的120mL高密度聚乙烯（HPDE）瓶中，充分溶解。8份1.0mL的該樣品分別置于1.5mL的離心管中16000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，溶液被收集到20mL閃爍瓶中，根據(jù)標(biāo)簽所示濃度，最終樣品的濃度為2.50mg/mL巴龍霉素游離堿。這個樣品可直接進(jìn)樣到Ionpac AS 11 HC色譜柱上測定樣品中雜質(zhì)的濃度，或稀釋10倍來測定硫酸根的濃度。 2 結(jié)論: 本應(yīng)用研究表明使用Ionpac AS 18或Ionpac AS 11-HC色譜柱均能測定氨基糖苷硫酸鹽中的硫酸根對離子和雜質(zhì)陰離子的含量。Ionpac AS18色譜柱能夠在16分鐘內(nèi)測定常見的無機(jī)陰離子，適合于分析具典型特征藥物的高通量分析。Ionpac AS 11-HC色譜柱能夠分析無典型特征藥物配方中的廣泛種類的無機(jī)和有機(jī)陰離子，使得從分析物中獲得更多的藥品組分信息。RFIC系統(tǒng)簡化了配制淋洗液所需的人工，提升了自動化程度和離子色譜系統(tǒng)的實(shí)用性，提高了分析物和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性。RFIC系統(tǒng)優(yōu)秀的靈敏度使得雜質(zhì)陰離子的測試降