胰島素和腎上腺素對(duì)血糖濃度的影響

1、實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一胰島素和腎上腺素胰島素和腎上腺素對(duì)血糖濃度的影響對(duì)血糖濃度的影響 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握胰島素和腎上腺素對(duì)血糖水平的調(diào)節(jié)、掌握胰島素和腎上腺素對(duì)血糖水平的調(diào)節(jié)作用作用2、熟悉分光光度計(jì)的使用。、熟悉分光光度計(jì)的使用。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理v人和動(dòng)物體內(nèi)，血糖濃度受各種激素調(diào)節(jié)而維持恒定。人的正?？杖撕蛣?dòng)物體內(nèi)，血糖濃度受各種激素調(diào)節(jié)而維持恒定。人的正?？崭寡侵蹈寡侵?.9-6.1mmol/L(70-110mg/dL)腎上腺素胰島素葡萄糖的測(cè)定原理v無(wú)蛋白質(zhì)血濾液中的葡萄糖在堿性溶液中與硫酸銅共熱。v藍(lán)色的二價(jià)銅被還原成磚紅色的氧化亞銅沉淀。v氧化亞銅再使磷鉬酸還原成鉬藍(lán)。v

2、與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液比色，即可算出葡萄糖的含量。常見(jiàn)測(cè)糖的方法v吳憲-Folin法v苯酚-硫酸法v3，5-二硝基水楊酸法（DNS）v蒽酮-硫酸法v氣相色譜法(GC)v液相色譜法（HPLC）化學(xué)法物理法三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料v1、 家兔。家兔。v2、分光光度計(jì)。、分光光度計(jì)。v3、試劑、試劑草酸鈉草酸鈉50%葡萄糖葡萄糖腎上腺素腎上腺素胰島素胰島素堿性銅試劑堿性銅試劑磷鉬酸試劑磷鉬酸試劑標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液0.25%的苯甲酸溶液10%Na2WO40.33mol/L H2SO4四、實(shí)驗(yàn)方法四、實(shí)驗(yàn)方法v 1動(dòng)物準(zhǔn)備動(dòng)物準(zhǔn)備：取正常家兔兩只，實(shí)驗(yàn)前預(yù)先：取正常家兔兩只，實(shí)驗(yàn)前預(yù)先饑餓饑餓16 h，

3、稱(chēng)體重，稱(chēng)體重(一般為一般為23 kg)。v 2取血取血：耳緣靜脈取血，先減去毛，用酒精：耳緣靜脈取血，先減去毛，用酒精擦拭兔耳，使其血管充血。再用干棉球擦干，再用擦拭兔耳，使其血管充血。再用干棉球擦干，再用粗針頭刺破靜脈取血粗針頭刺破靜脈取血2-3ml，放入含抗凝劑的酒杯，放入含抗凝劑的酒杯中，混勻。（中，混勻。（抗凝血抗凝血A1,A2）v 3注射激素后取血注射激素后取血： 取餓兔血后，其中一只兔皮下注射胰島素，劑量取餓兔血后，其中一只兔皮下注射胰島素，劑量按按1.5 U/kg體重計(jì)算，并記錄注射時(shí)間。體重計(jì)算，并記錄注射時(shí)間。1h后再取后再取血，（血，（抗凝血抗凝血B1)。取血后立即腹腔或

4、皮下注射。取血后立即腹腔或皮下注射50葡萄糖葡萄糖5ml，以免家兔發(fā)生胰島素性休克而死亡。，以免家兔發(fā)生胰島素性休克而死亡。 另一只兔皮下注射腎上腺素，劑量按另一只兔皮下注射腎上腺素，劑量按0.3 mg/kg體體重計(jì)算。并記錄注射時(shí)間。重計(jì)算。并記錄注射時(shí)間。30分鐘后再取血分鐘后再取血。（抗抗凝血凝血B2)制備無(wú)蛋白血濾液制備無(wú)蛋白血濾液v3.5ml蒸餾水蒸餾水+ 0.1ml 抗凝血抗凝血 +0.2ml 0.33mol/L硫酸硫酸+ 0.2ml 10%鎢酸鈉鎢酸鈉 v 待清澈液出現(xiàn)待清澈液出現(xiàn),將上清液用膠頭滴管轉(zhuǎn)移至干將上清液用膠頭滴管轉(zhuǎn)移至干燥的試管中。即為無(wú)蛋白血濾液燥的試管中。即為無(wú)

5、蛋白血濾液標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管A1A2B1B2空白管空白管標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（mL）1一一一一一無(wú)蛋白質(zhì)血溶液（mL）一1111一蒸餾水（mL）一一一一1堿性銅試劑（mL）111111搖勻，置于沸水浴準(zhǔn)確煮8min，取出時(shí)切勿搖動(dòng)，置于水浴中冷卻磷鉬酸試劑（mL）111111混勻，放置3min蒸餾水（mL）1.51.51.51.51.51.5比色測(cè)定將各管顛倒混勻后，用空白管調(diào)零，在將各管顛倒混勻后，用空白管調(diào)零，在620nm處測(cè)定吸光值。處測(cè)定吸光值。 操作注意操作注意v1、等水沸騰后，才能放入血糖管。加熱要準(zhǔn)、等水沸騰后，才能放入血糖管。加熱要準(zhǔn)確確8分鐘。分鐘。v2、冷卻時(shí)切不可搖動(dòng)血糖管？、冷卻時(shí)

6、切不可搖動(dòng)血糖管？v3、加入磷鉬酸后迅速比色？、加入磷鉬酸后迅速比色？v4、分光光度計(jì)的使用。、分光光度計(jì)的使用。分光光度計(jì)的使用分光光度計(jì)的使用1、接通電源，調(diào)至所需波長(zhǎng)、接通電源，調(diào)至所需波長(zhǎng)620nm處處,預(yù)熱預(yù)熱20min。2、將盛有空白溶液的比色皿放在比色架的第一格，其、將盛有空白溶液的比色皿放在比色架的第一格，其余放測(cè)定溶液。將比色皿蓋蓋上，此時(shí)空白溶液在光余放測(cè)定溶液。將比色皿蓋蓋上，此時(shí)空白溶液在光路上。將光點(diǎn)調(diào)到路上。將光點(diǎn)調(diào)到“T”，調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié) T為為100%。3、將光點(diǎn)調(diào)到、將光點(diǎn)調(diào)到“A”，輕輕拉動(dòng)比色架固定拉桿，使，輕輕拉動(dòng)比色架固定拉桿，使第二個(gè)比色皿溶液處在光路中，此時(shí)讀數(shù)即為該溶液第二個(gè)比色皿溶液處在光路中，此時(shí)讀數(shù)即為該溶液的吸收度。的吸收度。4、依次拉出其他比色皿，分別讀取吸收度。、依次拉出其他比色皿，分別讀取吸收度。5、測(cè)定完畢，先打開(kāi)比色皿蓋，再斷電源。、測(cè)定完畢，先打開(kāi)比色皿蓋，再