免疫組化抗原修復(fù)簡介ppt課件

1、免疫組化抗原修復(fù)簡介免疫組化抗原修復(fù)簡介l為何要進(jìn)展抗原修復(fù)l抗原修復(fù)的種類l抗原修復(fù)的原理l抗原修復(fù)的操作l抗原操作的運用為何要進(jìn)展抗原修復(fù)為何要進(jìn)展抗原修復(fù)l常規(guī)的石蠟切片的組織要經(jīng)過福爾馬林固定和石蠟包埋，雖然上述過程能良好的保管標(biāo)本在光鏡下的形狀，但是會不同程度地破壞組織的抗原，降低組織的抗原與抗體的免疫反響率。抗原修復(fù)的種類抗原修復(fù)的種類l熱修復(fù)HIERl蛋白酶修復(fù)PIERl雙修復(fù)特殊抗原和雙染l不修復(fù)抗原修復(fù)的原理抗原修復(fù)的原理l抗原修復(fù)目前常用的有熱修復(fù)HIER，蛋白酶修復(fù)PIER和不修復(fù)。不同的修復(fù)的原理不同。l熱修復(fù)的原理l蛋白酶修復(fù)原理熱修復(fù)熱修復(fù)(HIER)的原理的原理l

2、“石說：固定經(jīng)過改動蛋白構(gòu)造降低免疫反響性，AR逆轉(zhuǎn)大部分福爾馬林導(dǎo)致的蛋白修飾，冷卻后，會重建“近天然的構(gòu)造，免疫反響的恢復(fù)是經(jīng)過蛋白表位的復(fù)性。熱修復(fù)的特點熱修復(fù)的特點l易于施行l(wèi)易于規(guī)范化蛋白酶修復(fù)蛋白酶修復(fù)(PIER)原理原理l蛋白酶的消化經(jīng)過破壞福爾馬林呵斥的蛋白交聯(lián)，實現(xiàn)抗原的修復(fù)。l該方法的缺陷是：破壞組織的完好性，會破壞抗原，而且酶的濃度，反響時間，反響溫度呵斥很大的差別，規(guī)范化難度較大?？乖迯?fù)的操作抗原修復(fù)的操作l熱修復(fù)HIERl蛋白酶修復(fù)PIERl雙重修復(fù)熱修復(fù)熱修復(fù)HIERl高壓修復(fù)l煮沸法修復(fù)l微波修復(fù)l水浴加熱高壓修復(fù)高壓修復(fù)l切片先脫蠟水化l將修復(fù)液注入高壓鍋，將

3、液體煮沸l(wèi)放入切片甩開水分l蓋上蓋子，等噴氣，計時1.52分鐘800W1000Wl冷卻，沖洗玻片上的修復(fù)液 1.5-2min 10min高壓鍋直接修復(fù)高壓鍋隔水間接修復(fù)煮沸法修復(fù)煮沸法修復(fù)l將修復(fù)液注入不銹鋼鍋中l(wèi)煮沸后，參與切片甩干水分l用保溫檔，處置20分鐘左右l冷卻，沖洗玻片上的修復(fù)液蛋白酶修復(fù)蛋白酶修復(fù)PIERl切片脫蠟水化l切片上滴加酶，放入孵育盒，處置一定時間l時間到，取出切片，沖洗。雙重修復(fù)雙重修復(fù)l脫蠟水化后，對切片進(jìn)展胰酶消化l然后，對切片進(jìn)展熱修復(fù)抗原操作的運用抗原操作的運用l時間l溫度l冷卻l細(xì)節(jié)MOC31上皮糖蛋白上皮糖蛋白-2，EGP-2) EGFR(CLONE:EGFR.113)HBcAg(兔多抗兔多抗)C/HNO結(jié)論結(jié)論l正確的修復(fù)對抗體的表達(dá)非常重要l抗原修復(fù)是一個個性化