生化實驗二蛋白質(zhì)測定

1、1實驗二實驗二 人血清蛋白質(zhì)含量測定人血清蛋白質(zhì)含量測定2蛋白質(zhì)測定的主要方法蛋白質(zhì)測定的主要方法 根據(jù)蛋白質(zhì)元素組成根據(jù)蛋白質(zhì)元素組成凱氏定氮法；凱氏定氮法； 根據(jù)蛋白質(zhì)組成特點建立的比色法根據(jù)蛋白質(zhì)組成特點建立的比色法雙縮脲法雙縮脲法，lowry改良法，考馬斯亮藍(lán)染色法，改良法，考馬斯亮藍(lán)染色法，BCA法；法； 根據(jù)蛋白質(zhì)的吸收特性建立的紫外分光光度法；根據(jù)蛋白質(zhì)的吸收特性建立的紫外分光光度法；34蛋白質(zhì)的紫外吸收蛋白質(zhì)的紫外吸收蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的芳香族氨基酸。蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的芳香族氨基酸。它們具有吸收紫外光的性質(zhì)。它們具有吸收紫外光的性質(zhì)。其最高吸收峰在其最高吸收峰在2

2、80nm波長處，且在此波長波長處，且在此波長內(nèi)吸收峰的光密度值與其濃度成正比。內(nèi)吸收峰的光密度值與其濃度成正比。5TyrTrp6雙縮脲法測定蛋白質(zhì)雙縮脲法測定蛋白質(zhì) 實驗原理實驗原理雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)180C7雙縮脲在堿性條件下可與銅結(jié)合成紫紅色復(fù)合物雙縮脲在堿性條件下可與銅結(jié)合成紫紅色復(fù)合物 89Cu2+OH-蛋白質(zhì)具有雙縮脲結(jié)構(gòu)，在堿性條件下也能與銅結(jié)合成紫紅蛋白質(zhì)具有雙縮脲結(jié)構(gòu)，在堿性條件下也能與銅結(jié)合成紫紅色復(fù)合物在一定的范圍內(nèi)，顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正色復(fù)合物在一定的范圍內(nèi)，顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比比1-10mg1-10mg，因此通過比色法可以測定蛋白質(zhì)含量。，因此通過比

3、色法可以測定蛋白質(zhì)含量。10標(biāo)準(zhǔn)曲線的作用和繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的作用和繪制根據(jù)Lambert-BeerLambert-Beer定律，定律，A A與與C C成正比成正比配制一系列標(biāo)準(zhǔn)液配制一系列標(biāo)準(zhǔn)液C C1 1、C C2 2、C C3 3，在在 maxmax下，測相應(yīng)的下，測相應(yīng)的A A1 1、A A2 2、A A3 3。AxCx11 判斷測定誤差，確定方法的可靠性。判斷測定誤差，確定方法的可靠性。 大批樣品分析時，可省略多次計算，直接獲得大批樣品分析時，可省略多次計算，直接獲得樣品測定結(jié)果。樣品測定結(jié)果。 繪制曲線注意點：繪制曲線注意點： 1.橫軸與縱軸比例橫軸與縱軸比例 2.各坐標(biāo)點應(yīng)與原點連成

4、一條直線各坐標(biāo)點應(yīng)與原點連成一條直線 3.直線通過盡可能多的點，不在直線上的點均直線通過盡可能多的點，不在直線上的點均勻分布在直線兩邊勻分布在直線兩邊12實驗步驟實驗步驟 1 2 3 4 5 6 7 標(biāo) 準(zhǔn) 管 測定管 空白管試劑蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（ml） 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蛋白質(zhì)測定液（蛋白質(zhì)測定液（ml） 1.0 0.9%NaCL （ml） 0.8 0.6 0.4 0.2 1.0 雙縮尿試劑雙縮尿試劑 （ml） 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 37C水溫育水溫育20分鐘，分鐘，540nm比色，測定吸光值比色，測定吸光值13雙縮脲法測定蛋白質(zhì)濃度 1 2 3 4 5 6 7 A實驗原始數(shù)據(jù)實驗原始數(shù)據(jù)14實驗結(jié)果的計算實驗結(jié)果的計算1.1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測血清樣品的蛋白質(zhì)濃度，并求出人血清樣血清樣品的蛋白質(zhì)濃度，并求出人血清樣品的蛋白質(zhì)濃度。品的蛋白質(zhì)濃度。2.2.從標(biāo)準(zhǔn)管中選擇一管與測定管從標(biāo)準(zhǔn)管中選擇一管與測定管A A