探究性實驗一微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用ppt課件

1、 探求性實驗一探求性實驗一 微生物的培育與運(yùn)用微生物的培育與運(yùn)用課題課題1、微生物實驗室培育、微生物實驗室培育1培育基概念、培育基的分類、特點和用途2. 培育基的配制原那么和營養(yǎng)構(gòu)成培育基的配制原那么和營養(yǎng)構(gòu)成3配制牛肉膏蛋白胨固體培育基的步驟及本卷須知配制牛肉膏蛋白胨固體培育基的步驟及本卷須知4純化大腸桿菌的操作過程及本卷須知純化大腸桿菌的操作過程及本卷須知5對位訓(xùn)練對位訓(xùn)練課題課題1、微生物實驗室培育、微生物實驗室培育1培育基概念：培育基概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁衍的營養(yǎng)基質(zhì)。劃分規(guī)范培育基種類特點用途物理性質(zhì)化學(xué)成分用 途工業(yè)消費(fèi)察看微生物的運(yùn)動、分類、鑒

2、定微生物分別、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種分類、鑒定工業(yè)消費(fèi)鑒別不同種類的微生物，如可用伊紅美藍(lán)培育基鑒別飲用水或乳制品中能否有大腸桿菌(假設(shè)有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)培育基成清楚確液體培育基半固體培育基半固體培育基天然培育基合成培育基選擇培育基鑒別培育基根據(jù)微生物的代謝特點，在培育基中加某種指示劑或化學(xué)藥品培育基中參與某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需求的的生長培育、分別出特定微生物(如培育酵母菌和霉菌，可在培育基中參與青霉素；培育金黃色葡萄球菌，可在培育基中參與高濃度食鹽)目的要明確：根據(jù)微生物的種類、培育目的選擇不同

3、的原料配制 培育基營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：配制培育基時要留意各營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例、PH 要適宜2.培育基的配制原那么和營養(yǎng)構(gòu)成培育基的配制原那么和營養(yǎng)構(gòu)成(1)培育基的配制原那么培育基的配制原那么(2)培育基的營養(yǎng)構(gòu)成培育基的營養(yǎng)構(gòu)成各種培育基的詳細(xì)配方不同，但普通都含有水、碳源、氮源 和無機(jī)鹽。不同培育基還要滿足不同微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。 3配制牛肉膏蛋白胨固體培育基的步驟及本卷須知配制牛肉膏蛋白胨固體培育基的步驟及本卷須知(1)步驟：(2)本卷須知計算稱量溶化滅菌倒平板倒平板的溫度普通在50左右適宜，溫度過高會燙手，過低培育基又會凝固。平板需倒置，這樣既可使培育基外表的水分更好地

4、揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培育基，呵斥污染。 4純化大腸桿菌的操作過程及本卷須知純化大腸桿菌的操作過程及本卷須知(1)原理：(2)方法：在培育基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個細(xì)胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細(xì)菌菌落。平板劃線法、稀釋涂布平板法平板劃線法中細(xì)胞的分別和稀釋過程發(fā)生在接種環(huán)在固體平板外表上的挪動劃線過程中。在線的開場部分，微生物往往連在一同生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后能夠構(gòu)成純種的單個菌落。(如以下圖)平板劃線法：第一次劃線及每次劃線之前都需求灼燒接種環(huán)滅菌。 灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才干伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。 劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。

5、 劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過大將培育基劃破。留意:稀釋涂布平板法：.系列稀釋操作(圖1)：a將分別盛有9 mL水的6支試管滅菌，并按101106的順序編號。b用移液管汲取1 mL培育的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸3次，使菌液與水充分混勻。 c從101倍稀釋的試管中汲取1 mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，反復(fù)b步混勻操作。以此類推，直到完成最后1支試管的稀釋。.涂布平板操作如圖2所示：稀釋涂布平板操作復(fù)雜，各個細(xì)節(jié)均應(yīng)保證稀釋涂布平板操作復(fù)雜，各個細(xì)節(jié)均應(yīng)保證“無菌。詳細(xì)如下：無菌。詳細(xì)如下：酒精燈與培育皿的間隔要適宜；酒精燈與培育皿的間隔要適宜；吸

6、管頭不要接觸任何其他物體；吸管頭不要接觸任何其他物體；吸管要在酒精燈火焰周圍運(yùn)用。吸管要在酒精燈火焰周圍運(yùn)用。留意：留意：對位訓(xùn)練1有關(guān)稀釋涂布平板法的表達(dá)中，錯誤的選項是()A首先將菌液進(jìn)展一系列的梯度稀釋B然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的外表C適宜條件下培育D結(jié)果都可在培育基外表構(gòu)成單個的菌落2分析下面培育基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂。請完成以下問題。(1)在該培育基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是_和_。(2)想一想這種培育基對微生物能否具有選擇作用？假設(shè)具有，又是如何進(jìn)展選擇的？_。D答案答案(1)葡萄糖尿

7、素葡萄糖尿素(2)有選擇作用。由于此配方中尿素有選擇作用。由于此配方中尿素是獨(dú)一氮源，因此，只需可以利用尿素的微生物才可以生長是獨(dú)一氮源，因此，只需可以利用尿素的微生物才可以生長課題課題2、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計數(shù)、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計數(shù)1挑選菌株的原理挑選菌株的原理2統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法3細(xì)菌分別與計數(shù)的實驗流程細(xì)菌分別與計數(shù)的實驗流程4該實驗中的本卷須知該實驗中的本卷須知5對位訓(xùn)練對位訓(xùn)練課題課題2、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計數(shù)、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計數(shù)1挑選菌株的原理挑選菌株的原理微生物的選擇培育：在選擇培育基的配方中，把尿素作為培育基中的獨(dú)

8、一氮源，原那么上只需可以利用尿素的微生物才可以生長。2統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法原理：方法：缺陷：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。不能區(qū)分死菌與活菌。用計數(shù)板計數(shù)。每克樣品中的菌株數(shù)(CV)M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。(2)間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培育基外表生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。經(jīng)過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。操作：a設(shè)置反復(fù)組，加強(qiáng)實驗的壓服力與準(zhǔn)確性。b為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，普通選

9、擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)展計數(shù)。計算公式：土壤取樣樣品稀釋取樣涂布微生物的培育察看并記錄結(jié)果細(xì)菌計數(shù)稀釋度104 105106123平均值123平均值123平均值菌落數(shù)/平板菌數(shù)/克土壤3細(xì)菌分別與計數(shù)的實驗流程細(xì)菌分別與計數(shù)的實驗流程4該實驗中的本卷須知該實驗中的本卷須知(1)設(shè)立反復(fù)組：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時，要至少設(shè)立反復(fù)組：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時，要至少涂布涂布3個平板作反復(fù)組，加強(qiáng)實驗結(jié)果的壓服力與準(zhǔn)確性。個平板作反復(fù)組，加強(qiáng)實驗結(jié)果的壓服力與準(zhǔn)確性。(2)對照原那么對照原那么判別培育基中能否有雜菌污染，需將未接種的培育基同時進(jìn)判別培育基中能否有雜菌污染，需將

10、未接種的培育基同時進(jìn)展培育。展培育。判別選擇培育基能否具有挑選作用，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培判別選擇培育基能否具有挑選作用，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培育基進(jìn)展接種后培育，察看兩種培育基上菌落數(shù)目，進(jìn)展對比得出育基進(jìn)展接種后培育，察看兩種培育基上菌落數(shù)目，進(jìn)展對比得出結(jié)論。結(jié)論。誤區(qū)警示牛肉膏蛋白胨培育基和選擇培育基應(yīng)各有一個空誤區(qū)警示牛肉膏蛋白胨培育基和選擇培育基應(yīng)各有一個空白對照，即不涂布菌液，目的是驗證培育基中能否含雜菌。白對照，即不涂布菌液，目的是驗證培育基中能否含雜菌。樣品稀釋度將直接影響平板上生長的菌落數(shù)。樣品稀釋度將直接影響平板上生長的菌落數(shù)。3分別土壤中分解尿素的細(xì)菌，對培育基的要求是 (

11、)加尿素不加尿素加瓊脂不加瓊脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸鹽不加硝酸鹽A BC D5對位訓(xùn)練對位訓(xùn)練4在做分別分解尿素的細(xì)菌實驗時，在做分別分解尿素的細(xì)菌實驗時，A同窗從對應(yīng)同窗從對應(yīng)106培育培育基上挑選出大約基上挑選出大約150個菌落，而其他同窗只選擇出大約個菌落，而其他同窗只選擇出大約50個菌落。個菌落。產(chǎn)生產(chǎn)生A同窗結(jié)果的緣由能夠有同窗結(jié)果的緣由能夠有 ()土樣不同培育基污染操作失誤沒有設(shè)置對照土樣不同培育基污染操作失誤沒有設(shè)置對照A BC DCA5用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品的細(xì)菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋倍用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品的細(xì)菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為數(shù)為106的培育基中，得到以下

12、幾種統(tǒng)計結(jié)果，正確的選項是的培育基中，得到以下幾種統(tǒng)計結(jié)果，正確的選項是 ()A涂布了涂布了1個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是230B涂布了涂布了2個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是216和和260，取平均值，取平均值238C涂布了涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是21、212、256，取平均，取平均值值163D涂布了涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是210、241和和248，取平均，取平均值值233D課題課題3、分解纖維素的微生物的分別、分解纖維素的微生物的分別1纖維素酶纖維素酶2纖維素分解菌的挑選原理纖維素分

13、解菌的挑選原理3土壤中纖維素分解菌的挑選流程土壤中纖維素分解菌的挑選流程4對位訓(xùn)練對位訓(xùn)練1纖維素酶纖維素酶纖維素 纖維二糖 葡萄糖C1酶CX酶葡萄糖苷酶2纖維素分解菌的挑選原理纖維素分解菌的挑選原理紅色復(fù)合物 紅色消逝，出現(xiàn)透明圈纖維素分解菌纖維素酶剛果紅纖維素纖維素酶是一種復(fù)合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纖維素的作用，其作用過程如下：土壤取樣選擇培育梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。3土壤中纖維素分解菌的挑選流程土壤中纖維素分解菌的挑選流程提示纖維素分解菌的選擇培育基為液體培育基，因培育基提示纖維素分解菌的選擇培育基為液體培育基，因培

14、育基中無凝固劑，利用液體培育基以添加纖維素分解菌的濃度。中無凝固劑，利用液體培育基以添加纖維素分解菌的濃度。選擇培育基以纖維素做碳源和能源，其它絕大多數(shù)微生物不選擇培育基以纖維素做碳源和能源，其它絕大多數(shù)微生物不能正常生長；鑒別培育基因含瓊脂，故為固體培育基，剛果紅染色能正常生長；鑒別培育基因含瓊脂，故為固體培育基，剛果紅染色法就是運(yùn)用的此培育基。法就是運(yùn)用的此培育基。為確定得到的菌能否是纖維素分解菌，還需進(jìn)展發(fā)酵產(chǎn)纖維為確定得到的菌能否是纖維素分解菌，還需進(jìn)展發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實驗。纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖素酶的實驗。纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測定方法，普通是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生維素酶的測定方法，普通是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)展定量測定。的葡萄糖進(jìn)展定量測定。流程中的流程中的“選擇培育能否需求，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)選擇培育能否需求，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定。量的多少來確定。6關(guān)于纖維素