認(rèn)識(shí)微生物實(shí)驗(yàn)室

1、實(shí)驗(yàn)：認(rèn)識(shí)微生物實(shí)驗(yàn)室普通微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課的目的v 訓(xùn)練學(xué)生掌握微生物學(xué)最基本的操作技術(shù)，了解微生物學(xué)的基本知識(shí)，加深理解課堂講授的某些微生物理論。同時(shí)通過實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)學(xué)生觀察、思考、提出問題和解決問題的能力，實(shí)事求是、嚴(yán)肅認(rèn)真的科學(xué)態(tài)度以及敢于創(chuàng)新的開拓精神；樹立勤儉節(jié)約、愛護(hù)公物的良好作風(fēng)。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)規(guī)則與安全v為了上好微生物實(shí)驗(yàn)課，并保證安全，特制定如下規(guī)則和安全措施：v1.每次實(shí)驗(yàn)前必須對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行充分預(yù)習(xí)，以了解實(shí)驗(yàn)的目的、原理和方法，做到心中有數(shù)，思路清楚。v2.在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中必須穿上實(shí)驗(yàn)服，留長發(fā)者，必須將長發(fā)挽在背后。實(shí)驗(yàn)臺(tái)上除了記錄本和筆以外，不準(zhǔn)堆放任何個(gè)人物品。v3.認(rèn)

2、真及時(shí)做好實(shí)驗(yàn)記錄，對(duì)于當(dāng)時(shí)不能得到結(jié)果而需要連續(xù)觀察的實(shí)驗(yàn)，則需記下每次觀察的現(xiàn)象和結(jié)果，以便分析。v4.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持整潔，勿高聲談話和隨便走動(dòng)，保持室內(nèi)安靜。v5.實(shí)驗(yàn)時(shí)小心仔細(xì)，全部操作應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行，禁止用嘴吸取菌液或試劑，萬一遇有盛菌試管或瓶不慎打破、皮膚破傷等意外情況發(fā)生時(shí)，應(yīng)立刻報(bào)告指導(dǎo)老師，及時(shí)處理，切勿隱瞞。v6.實(shí)驗(yàn)過程中，切勿使乙醇、乙醚、丙酮等易燃藥品接近火焰。如遇火險(xiǎn)，應(yīng)先關(guān)掉火源，再用濕布或沙土掩蓋滅火。必要時(shí)用滅火器。v7.使用顯微鏡或其他貴重儀器時(shí)，要求細(xì)心操作，特別愛護(hù)。顯微鏡的目鏡在使用前后必須用浸有乙醇的透鏡紙擦凈。對(duì)消耗材料和藥品等要力求節(jié)約，用

3、畢后仍放回原處，嚴(yán)禁將鑰匙交叉使用。v8.每次實(shí)驗(yàn)完畢后，必須把所有儀器抹凈放妥，將實(shí)驗(yàn)室收拾整齊，擦凈桌面，如有菌液污染桌面或其他地方時(shí)，可用3%來蘇爾液或5%石碳酸液覆蓋半小時(shí)后擦去，如系牙胞桿菌，應(yīng)適當(dāng)延長消毒時(shí)間。凡帶菌之工具（如吸管、玻璃刮棒等）在洗滌前須浸泡在3%來蘇爾液中進(jìn)行消毒。v9.每次實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行培養(yǎng)的材料，應(yīng)標(biāo)明自己的組別及處理方法，放于教師指定的地點(diǎn)進(jìn)行培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)室中的菌種和物品等，未經(jīng)教師許可，不得攜出室外。v10.每次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，應(yīng)以實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度填入報(bào)告表格中，力求簡明準(zhǔn)確，認(rèn)真回答思考題，并及時(shí)匯交教師批閱。v11.離開實(shí)驗(yàn)室前將手洗凈，注意關(guān)閉門窗、燈、火、

4、煤氣等。v無菌概念無菌概念 無菌概念實(shí)際上就是有菌概念，也就是在我們頭腦中樹立處處有菌的思想，使目的微生物無（雜）菌污染，也使我們進(jìn)一步體會(huì)到環(huán)境衛(wèi)生的重要性。所謂無菌操作是指在微生物操作過程中，除了使用的容器、用具（試管、三角燒瓶、平皿和吸管等）和培養(yǎng)基必須進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理外，還要通過一定的技術(shù)來保證目的微生物在轉(zhuǎn)移過程中不被環(huán)境中的微生物污染，這些技術(shù)包括用接種環(huán)（針）、吸管、涂棒等工具進(jìn)行接種、稀釋、涂片計(jì)數(shù)和劃線分離等。v無菌技術(shù)v在分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純培養(yǎng)物時(shí)防止其被其他微生物污染，其自身也不污染操作環(huán)境的技術(shù)被稱為無菌技術(shù)，它是保證微生物學(xué)研究正常進(jìn)行的關(guān)鍵。v無菌操作v其要點(diǎn)是在

5、火焰附近進(jìn)行操作，或在無菌操作箱或操作室內(nèi)進(jìn)行操作。v接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌v燒紅的接種環(huán)在空氣中冷卻，同時(shí)打開裝有培養(yǎng)物的試管v用接種環(huán)蘸取一環(huán)培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到一裝有無菌培養(yǎng)基的試管中，并將試管重新蓋好v接種環(huán)在火焰上灼燒，殺滅殘留的培養(yǎng)物無菌操作箱生物實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理方法v大多數(shù)的玻璃器皿、儀器以及實(shí)驗(yàn)服都可以重復(fù)或再使用。廢棄物處理的首要原則是所有感染性材料必須在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)清除污染、高壓滅菌或焚燒。v一、用以處理潛在感染性微生物或動(dòng)物組織的所有的實(shí)驗(yàn)室物品，在被丟棄前應(yīng)考慮的主要問題有： v 1、是否已采取規(guī)定程序?qū)@些物品進(jìn)行了有效的清除污染或消毒？v 2、如果沒有，他們是否以規(guī)定的方式包裹

6、，以便就地焚燒或運(yùn)送到其他有焚燒設(shè)施的地方進(jìn)行處理？ v3、丟棄已清除污染的物品時(shí)，是否會(huì)對(duì)直接參與丟棄的人員，或在設(shè)施外可能接觸到丟棄物的人員造成任何潛在的生物學(xué)或其他方面的危害？v污染性材料和廢棄物的處理和丟棄程序 廢棄物可以分成以下幾類： 1、可重復(fù)或再使用，或按普通“家庭”廢棄物丟棄的非污染（非感染 性）廢棄物 v2、污染（感染性）銳器皮下注射用針頭、手術(shù)刀、刀子及破碎玻璃；這些廢棄物應(yīng)收集在帶蓋的不易刺破的容器內(nèi)，并按感染性物質(zhì)處理 v3、通過高壓滅菌和清洗來清除污染后重復(fù)或再使用的污染材料 v4、高壓滅菌后丟棄的污染材料 v5、直接焚燒的污染材料微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用的儀器設(shè)備v1.酒

7、精燈v2高壓蒸汽滅菌鍋v高壓蒸汽滅菌器是利用飽和壓力蒸汽對(duì)物品進(jìn)行迅速而可靠的消毒滅菌設(shè)備，適用于醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)、科研、農(nóng)業(yè)等單位。對(duì)醫(yī)療器械、敷料、玻璃器皿、溶液培養(yǎng)基等進(jìn)行消毒滅菌，也適用高原地區(qū)作蒸餐設(shè)備和企事業(yè)單位制取高質(zhì)量飲用水，也可作為制取高溫蒸汽源設(shè)備。v3.隔水式恒溫培養(yǎng)箱v隔水式培養(yǎng)箱是具有高精度的恒溫設(shè)備，可用于植物的組織、發(fā)芽、培養(yǎng)育苗、微生物的培養(yǎng)，昆蟲、小動(dòng)物的飼養(yǎng)，水質(zhì)檢測(cè)的BOD測(cè)定，以及其他用途的恒溫試驗(yàn)。是生物遺傳工程、醫(yī)藥、農(nóng)、林、環(huán)境科學(xué)、畜牧、水產(chǎn)等生產(chǎn)、科研、教育部門的理想設(shè)備。v4.電熱鼓風(fēng)干燥箱v電熱鼓風(fēng)干燥箱又名“烘箱”，顧名思義，采用電加熱方式進(jìn)

8、行鼓風(fēng)循環(huán)干燥試驗(yàn)，分為鼓風(fēng)干燥和真空干燥兩種，鼓風(fēng)干燥就是通過循環(huán)風(fēng)機(jī)吹出熱風(fēng)，保證箱內(nèi)溫度平衡，真空干燥是采用真空泵將箱內(nèi)的空氣抽出，讓箱內(nèi)大氣壓低于常壓，使產(chǎn)品在一個(gè)很干凈的狀態(tài)下做試驗(yàn)，是一種常用的儀器設(shè)備，主要用來干燥樣品，也可以提供實(shí)驗(yàn)所需的溫度環(huán)境。v5.超凈工作臺(tái)v超凈工作臺(tái)(clean bench)是為了適應(yīng)現(xiàn)代化工業(yè)、光電產(chǎn)業(yè)、生物制藥以及科研試驗(yàn)等領(lǐng)域?qū)植抗ぷ鲄^(qū)域潔凈度的需求而設(shè)計(jì)的。v6.生物安全柜v生物安全柜是為操作原代培養(yǎng)物、菌毒株以及診斷性標(biāo)本等具有感染性的實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，用來保護(hù)操作者本人、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境以及實(shí)驗(yàn)材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠

9、和濺出物而設(shè)計(jì)的。v超凈工作臺(tái)（clean bench）與生物安全柜（Biosafety Cabinet）不同。超凈工作臺(tái)只能保護(hù)在工作臺(tái)內(nèi)操作的試劑等不受污染，并不保護(hù)工作人員，而生物安全柜是負(fù)壓系統(tǒng)，能有效保護(hù)工作人員。v7.離心機(jī)v離心機(jī)是利用離心力，分離液體與固體顆?；蛞后w與液體的混合物中各組分的機(jī)械。離心機(jī)主要用于將懸浮液中的固體顆粒與液體分開，或?qū)⑷闈嵋褐袃煞N密度不同，又互不相溶的液體分開（例如從牛奶中分離出奶油）；它也可用于排除濕固體中的液體，例如用洗衣機(jī)甩干濕衣服；特殊的超速管式分離機(jī)還可分離不同密度的氣體混合物；利用不同密度或粒度的固體顆粒在液體中沉降速度不同的特點(diǎn)，有的沉降

10、離心機(jī)還可對(duì)固體顆粒按密度或粒度進(jìn)行分級(jí)。常用器皿的包扎方法v1.移液管v用來準(zhǔn)確移取一定體積的溶液的量器。移液管是一種量出式儀器，只用來測(cè)量它所放出溶液的體積。它是一根中間有一膨大部分的細(xì)長玻璃管。其下端為尖嘴狀，上端管頸處刻有一條標(biāo)線，是所移取的準(zhǔn)確體積的標(biāo)志。v2.培養(yǎng)皿v培養(yǎng)皿是一種用于微生物或細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室器皿v常用培養(yǎng)皿皿底直徑90mm,高15mm,皿底皿蓋均由玻璃制成v3.三角瓶v常用來盛無菌水、培養(yǎng)基和振蕩培養(yǎng)微生物等v4.試管v試管，化學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用的儀器，用作于少量試劑的反應(yīng)容器，在常溫或加熱時(shí)（加熱之前應(yīng)該預(yù)熱，不然試管容易爆裂。）使用?？詹Ａ髅蟮陌bv培養(yǎng)皿的包裝v培

11、養(yǎng)皿常用舊報(bào)紙密密包裝，一般以58套培養(yǎng)皿作一包，少于5套工作量太大，多于8套不易操作。包裝好后行干熱或濕熱滅菌。如將培養(yǎng)皿放入金屬（不銹鋼）筒內(nèi)進(jìn)行干熱滅菌，則不必用紙包，金屬筒有一圓筒形的帶蓋外筒，里面放一裝培養(yǎng)皿的帶底框架，此框架可自圓筒內(nèi)提出，以便裝取培養(yǎng)皿。v吸管的包裝v準(zhǔn)備好干燥的吸管，在距其粗頭頂端約約0.5cm處，塞一小段約約1.5cm長的棉花，以免使用時(shí)將雜菌吹入其中，或不慎將微生物吸出管外。棉花要塞得松緊恰當(dāng)，過緊，吹吸液體太費(fèi)力；過松，吹氣時(shí)棉花會(huì)下滑。然后分別將每支吹管尖端斜放在舊報(bào)紙條的近左端，與報(bào)紙約呈45度角，并將左側(cè)多余的一段紙覆折在吸管上，再將整根吸管卷入報(bào)紙

12、，右端多余的報(bào)紙打一小結(jié)。v如此包好的很多吸管可再會(huì)一張大報(bào)紙包好，進(jìn)行干熱滅菌。如果有裝吸管的銅或不銹鋼管，亦可將分別包好的吸管一起裝入筒內(nèi)，進(jìn)行滅菌；若預(yù)計(jì)一筒滅菌的吸管可一次用完，亦可不用報(bào)紙包而直接裝入筒內(nèi)滅菌，但要求吸管尖朝筒底，粗端在筒口，使用時(shí)將筒臥放在桌上，用手持粗端抽出。v試管和三角燒瓶等的包裝v試管管口和三角燒瓶瓶口塞以棉花塞或泡沫塑料塞，然后在棉花塞與管口和瓶口的外面用二層報(bào)紙與細(xì)線包扎好（如果能用鋁箔則更好，可省去用線扎且效果好）。進(jìn)行干熱或濕熱滅菌，試管塞好塞子后也可一起裝在鐵絲簍中，用大張報(bào)紙或鋁箔將一簍試管口做一次包扎，包紙的目的在于保存期避免灰塵侵入。v空的玻璃器皿一般用干熱滅菌，若用濕熱滅菌，則要多用幾層報(bào)紙包扎，外面最好加一層牛皮紙或鋁箔。無菌操作技術(shù)的幾點(diǎn)注意事項(xiàng)v1、開包后的無菌包和開封后的無菌溶液有效期均為24小時(shí)，無菌盤有效期限不超過4小時(shí)。v2、無菌持物鉗取時(shí)不可觸及容器口邊緣及溶液以上的容器內(nèi)壁。使用時(shí)應(yīng)保持鉗端向下，不可倒轉(zhuǎn)向上，用后立即放入容器中。如到遠(yuǎn)處夾取物品時(shí)，無菌持物鉗應(yīng)連同容器一并搬移，就地取出使用。無菌持物鉗只能用于夾取無菌物品，不能用于換藥和消毒皮膚。 無菌持物鉗及其浸泡消毒容器，應(yīng)每周清潔消毒二次，并更換消毒溶液及紗布。門診換藥室或使用較多的部門，應(yīng)每日清潔消毒一次。v3、使用無