高中生物選修一速簡筆記

1、高中化學選修1速簡筆記適于加強記憶，配套課本使用5.1 DNA粗提取、鑒定11）DNA在0.1mol/LNaCl溶液中溶解度最大，2mol/L溶解度最小。DNA不溶于酒精溶液，某些蛋白質(zhì)能溶，進一步分離。2）DNA在80ºC以上變性，多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受6080ºC。洗滌劑瓦解細胞膜，對DNA無影響；蛋白酶水解蛋白質(zhì)。3）DNA、二苯胺，沸水浴，藍色。21）選?。篋NA含量較高的生物組織。2）動物：加蒸餾水，攪拌，過濾，收集濾液。植物：切碎，加洗滌劑、食鹽，攪拌研磨，過濾，收集濾液。3）純化DNA：控制NaCl濃度：2mol/L，過濾不溶物質(zhì)，0.14mol/L，析出DNA，

2、過濾溶液中雜質(zhì)，2mol/L，溶解DNA。直到絲狀物不再增加為止。濾液中加嫩肉粉，木瓜蛋白酶。濾液6075ºC恒溫水浴箱保溫，嚴格控制溫度范圍。4）析出鑒定：過濾，加與濾液體積相等、冷卻的95%酒精溶液，靜置，白色絲狀物。用玻璃棒沿一個方向攪拌卷起，濾紙吸去水分。2mol/LNaCl溶液溶解，二苯胺試劑，混合均勻，沸水加熱，冷卻，變藍。31）血液，加檸檬酸鈉，防止凝固。2）加洗滌劑時，輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量泡沫。加入酒精、攪拌，以免加劇DNA分子破裂，不能形成絮狀沉淀。3）二苯胺試劑現(xiàn)配現(xiàn)用：溶于冰醋酸，加濃硫酸，棕色瓶保存，臨用前加2%乙醛溶液。4）提取高純度DNA，CTAB

3、、SDS、吐溫。41）蒸餾水使雞血細胞破裂：低滲液體，水分進入細胞脹破，攪拌加速細胞膜、核膜破裂。2）洗滌劑：離子去污劑，溶解細胞膜，有利于DNA釋放。食鹽：有利于DNA溶解。尼龍布過濾。3）研磨目的：破碎細胞壁，使核物質(zhì)容易溶解在NaCl溶液中。不充分：DNA提取量減少，導致看不到鑒定效果。4）濾液中含核蛋白多糖、RNA。5）反復溶解析出DNA：能除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。6）方案原理：一DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同二蛋白酶分解蛋白質(zhì)，三蛋白質(zhì)、DNA變性溫度不同。5.2 多聚酶鏈式反應11）分析細胞內(nèi)參與DNA復制的各種組成成分與反應條件。2）DNA羥基末端3

4、0;端，磷酸基團末端5´端，DNA合成方向：從子鏈5´端向3´端延伸。3）變性：80100ºC雙鏈解體。4）條件：DNA模板、兩種引物、四種脫氧核苷酸、TaqDNA聚合酶、控制溫度反復進行。5）一般經(jīng)歷三十多次循環(huán)，步驟：94ºC變性、55ºC復性、72ºC延伸。6）循環(huán)之前進行一次預變性，增加大分子模板DNA徹底變性的概率。7）兩種引物使DNA聚合酶只能特異地復制處于兩個引物之間的DNA序列，使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴增。8）微量離心管，0.5mL，微量移液器，PCR儀或三個恒溫水浴鍋來回轉(zhuǎn)移。21）使用前高壓滅菌，避免

5、外源DNA因素的污染。2）緩沖液和酶分裝，-20ºC儲存，使用前在冰塊上緩慢融化。3）每吸取一次，移液器槍頭必須更換。蓋嚴離心管后，用手指輕輕彈擊側(cè)壁，使混合均勻。離心機，使反應液集中在離心管底部。4）DNA在260nm紫外線波段有一強烈吸收峰。DNA含量鑒定：50倍稀釋，蒸餾水對照，波長260nm處，紫外分光光度計讀數(shù)調(diào)零，加入比色杯中，測定光吸收值，計算含量：（50：標準厚度1cm比色杯中，OD206為1相當于50g/mL雙鏈DNA）DNA含量（g/mL）=50 × 讀數(shù) × 稀釋倍數(shù)5）PCR突出優(yōu)點：快速、高效、靈活、易于操作。5.3 血紅蛋白的提取和分離

6、11）凝膠色譜法：分離蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量，凝膠，多孔球體，多糖類化合物，葡聚糖、瓊脂糖，較小的易進入通道，路程長，速度慢，較大的在外部移動，短，快。洗脫。2）一定范圍內(nèi)，緩沖溶液，維持PH基本不變，12種緩沖劑溶解于水，調(diào)節(jié)使用比例。體外溶液PH與體內(nèi)基本一致。3）電泳，帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移。生物大分子一定PH下帶上正負電。向著與所帶電荷相反的電極移動。帶電性質(zhì)不同、分子大小、形狀不同，產(chǎn)生不同遷移速度。4）瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳。測定蛋白質(zhì)分子量，SDS-聚丙烯酰胺電泳。遷移率取決于所帶凈電荷的多少以及分子的大小。加入SDS，消除凈電荷對遷移率的影響，使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變

7、性，解聚成單條。測定結(jié)果只是單條肽鏈的分子量。SDS負電荷大大超過原有分子量，電泳遷移率完全取決于分子大小。2蛋白質(zhì)的提取和分離：樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定。1）血液中90%是血紅蛋白，四條肽鏈，兩條-肽鏈、兩條-肽鏈。每條環(huán)繞一個亞鐵血紅素集團，攜帶一分子氧或二氧化碳，含有血紅素呈紅色。2）紅細胞洗滌：去除雜蛋白，有利于分離純化。采集的血樣及時分離紅細胞，低速短時間離心。膠頭吸管吸出上層透明黃色血漿。下層暗紅色紅細胞液體倒入燒杯，五倍體積0.9%生理鹽水，攪拌、離心、重復三次，直至上清液不再呈現(xiàn)黃色，表明已經(jīng)洗滌干凈。3）血紅蛋白釋放：加蒸餾水至原體積，40%甲苯，磁力攪拌器，紅細胞破

8、裂。4）分離血紅蛋白溶液：離心管，2000r/min，4層，從上到下，無色透明甲苯層，白色薄層固體：脂溶性物質(zhì)沉淀層，紅色透明液體：血紅蛋白水溶液，其他雜質(zhì)暗紅色沉淀物。濾紙過濾，除去脂溶性物質(zhì)，分液漏斗，靜置，分出下層紅色透明液體。5）透析：透析袋，20mmol/L磷酸緩沖液，pH為7.0。6）凝膠色譜柱：打孔，刀切出凹穴，移液管上部不得超出橡皮膠凹穴底面，尼龍網(wǎng)，圓片，100目尼龍紗，下端出口部連接尼龍管，螺絲夾控制開關(guān)，收集器。7）裝填：垂直固定，根據(jù)色譜柱內(nèi)體積計算所需的凝膠量。交聯(lián)葡聚糖凝膠，G凝膠交聯(lián)程度、膨脹程度、分離范圍，75凝膠得水值。蒸餾水充分溶脹，凝膠懸浮液。尼龍管打開，

9、一次性緩慢倒入，輕輕敲動，使裝填均勻。不能有氣泡存在，有氣泡須重裝。完成后，立即連接緩沖液洗脫瓶，50cm操作壓，20mmol/L磷酸緩沖液，充分洗滌平衡，使裝填緊密。8）樣品加入洗脫：打開流出口，緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口。吸管，1mL樣品加到頂端，不要破壞凝膠面，打開出口，滲入凝膠床內(nèi)。樣品完全進入，關(guān)閉出口。20mmol/L磷酸緩沖液，適當高度，緩沖液洗脫瓶，打開出口，洗脫。待紅色蛋白質(zhì)接近底端，試管收集流出液，每5mL一管，連續(xù)收集。31）洗滌次數(shù)過少，無法除去血漿蛋白。離心速度過高、時間過長，使白細胞等一同沉淀，達不到分離效果。2）加速凝膠膨脹，加洗脫液濕凝膠，沸水浴加熱

10、，逐漸升溫至接近沸騰，節(jié)省時間，除去微生物，排除膠粒內(nèi)的空氣。3）氣泡會攪亂蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒。4）蛋白質(zhì)分離時，紅色區(qū)帶在洗脫過程均勻一致地移動，說明色譜柱制作成功。1.1 果酒果醋制作11）果酒：酵母菌，異養(yǎng)型，兼性厭氧型，發(fā)酵溫度1825ºC，真菌（真核），出芽生殖。有氧時，有氧呼吸，大量繁殖20ºC，無氧時，酒精發(fā)酵。C6H12O62C2H5OH+2CO22）葡萄酒自然發(fā)酵，附著在葡萄皮上的野生型酵母菌，色素進入發(fā)酵液，呈深紅色。3）缺氧、酸性發(fā)酵液中，酵母菌可繁殖生長，大多數(shù)不適應。4）秋季生長繁殖，冬季休眠，春夏旺盛

11、，土壤，傳播到葡萄上。21）果醋：醋酸菌，異養(yǎng)型，好氧型，3035ºC，原核生物，二分裂生殖。2）對氧氣的含量特別敏感，氧氣、糖源充足，糖分解為醋酸，缺糖源時，乙醇分解為乙醛，變?yōu)榇姿?。C2H5OH+O2CH3COOH+H2O3）挑選葡萄，沖洗，榨汁，酒精發(fā)酵（果酒），醋酸發(fā)酵（果醋）4）帶蓋的瓶子，12h擰松一次，放出CO2，擰緊，產(chǎn)生酒精后，打開，蓋紗布，醋發(fā)酵。5）充氣口：醋酸發(fā)酵，連接充氣泵。排氣口：排出CO2，防止爆裂。長而彎曲的膠管，防止空氣微生物污染。出料口：取樣。制酒時關(guān)閉充氣口，制醋時，輸入氧氣。先通氣后密封，有氧呼吸大量繁殖，無氧呼吸酒精發(fā)酵。31）選擇新鮮的葡萄

12、，沖洗，除去枝梗。2）防止發(fā)酵液污染。榨汁機清洗干凈，晾干。發(fā)酵瓶70%酒精消毒。裝入后封閉充氣口。3）留有1/3的空間，暫時儲存CO2。控制好溫度、發(fā)酵時間。4）重鉻酸鉀檢測酒精，酸性呈灰綠色。5）先沖洗再除去枝梗，避免除去枝梗時葡萄破損，被雜菌污染。1.2 腐乳制作11）毛霉：異養(yǎng)型，好氧型，1518 ºC，絲狀真菌（真核），孢子生殖。2）發(fā)達白色菌絲，蛋白酶分解蛋白質(zhì)，脂肪酶分解脂肪為甘油和脂肪酸。21）毛霉生長：含水量70%豆腐，籠屜，空氣中的毛霉孢子。現(xiàn)代嚴格無菌，避免其他雜菌污染，保證產(chǎn)品質(zhì)量。2）加鹽腌制：分層整齊排放瓶中，逐層加鹽，層數(shù)加高增加鹽量，接近瓶口表面鋪厚。

13、加鹽：析出水分，使其變硬，不會過早酥爛；抑制微生物生長，避免變質(zhì)。3）配制鹵湯：酒、香辛料。加酒12%：抑制微生物生長，使具有獨特香味。香辛料：調(diào)制風味，防腐殺菌。4）密封腌制31）控制好材料用量，鹽濃度過低，不足以抑制微生物生長，過高影響口味。2）酒含量過低，不足以抑制，過高成熟時間延長。3）防止雜菌污染，玻璃瓶洗刷干凈，沸水消毒。裝瓶迅速小心，膠條封口，最好將瓶口先通過酒精燈火焰，防止瓶口被污染。41）鹽可防止雜菌污染，避免豆腐腐敗。2）含水量過高豆腐不易成型。3）皮是前期發(fā)酵時表面生長的匍匐菌絲，使腐乳成形，對人體無害。4）越接近瓶口，雜菌污染越有可能，鋪厚可防止雜菌污染。5）品質(zhì)影響因

14、素：菌種、雜菌，溫度，發(fā)酵時間，調(diào)味品。1.3 泡菜制作11）乳酸菌：異養(yǎng)型，厭氧型，原核，二分裂生殖，無氧時分解葡萄糖為乳酸。2）亞硝酸鹽，白色粉末，易溶于水，食物添加劑，0.30.5g中毒，3g死亡。絕大部分隨尿排出，特定條件下，亞硝胺，致癌、致畸、致變異。3）選擇原料，處理，稱取食鹽，配制鹽水，泡菜鹽水，加入調(diào)味料，裝壇，發(fā)酵，成品，測定亞硝酸鹽含量。4）清水、鹽4:1，配制鹽水，煮沸冷卻，新鮮蔬菜混合均勻，裝到半壇，香辛料，鹽水沒過全部菜料，蓋好，壇蓋邊沿水槽注滿水，保證無氧環(huán)境。經(jīng)常向水槽中補充水，發(fā)酵時間由室內(nèi)溫度決定。5）鹽酸酸化，亞硝酸鹽、對氨基苯磺酸，重氮化反應，N-1-萘基

15、乙二胺鹽酸鹽，形成紅色染料，與已知濃度的標準顯色液，目測比較估算含量。21）泡菜壇火候好、無裂紋、無砂眼、壇沿深、蓋子吻合好。檢查，壇口向上壓入水中，有無滲水。2）控制好腌制時間、溫度、食鹽用量，溫度過高、用量過低、時間過短，細菌大量繁殖，亞硝酸鹽增加。10d后，亞硝酸鹽含量開始下降。3測定亞硝酸鹽含量：1）配制溶液：4mg/mL對氨基苯磺酸溶液：對氨基苯磺酸、20%鹽酸。2mg/mL N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽：溶于水，避光保存。5g/mL亞硝酸鹽溶液，水溶解，定容。提取劑：氯化鎘、氯化鋇，溶于蒸餾水，濃鹽酸調(diào)PH為1,。氫氧化鈉乳液，2.5mol/L氫氧化鈉溶液。2）制備標準顯色液：刻度移液

16、管，0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50mL亞硝酸鹽溶液，（1、2、3、4、5、7.5g亞硝酸鹽），50mL比色管，空白對照。2.0mL對氨基苯磺酸溶液，混勻，靜置，1.0mL N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽，蒸餾水，混勻，觀察顏色梯度變化。3）制備樣品處理液：3壇泡菜，標記，泡菜，榨汁機粉碎，過濾，汁液。轉(zhuǎn)移到容量瓶，蒸餾水，提取劑，搖床振蕩，氫氧化鈉溶液，蒸餾水定容，過濾。轉(zhuǎn)移，氫氧化鈉乳液，定容，過濾，溶液變得無色透明。4）比色：吸取濾液，對氨基苯磺酸溶液，N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽，定容，靜置。比較，找出最相近，記錄計算，每2d測一次。41）含有抗生素牛奶不能發(fā)酵成酸奶，

17、殺菌。2）少吃腌制蔬菜，過久變質(zhì)，硝酸鹽被微生物還原成亞硝酸鹽，危害人體。3）泡菜壇內(nèi)一層白膜，產(chǎn)膜酵母繁殖。2.1 微生物實驗室培養(yǎng)11）培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基（瓊脂）：微生物表面生長，形成肉眼可見的菌落。合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基（成分不明），選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。水、碳源、氮源、無機鹽。pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣。單質(zhì)碳不能作為碳源，只有固氮微生物才能利用N2。乳酸桿菌 維生素，霉菌 酸性，細菌 中性或堿性，厭氧微生物 無氧環(huán)境。2）純凈培養(yǎng)物，關(guān)鍵，防止外來雜菌入侵。無菌技術(shù)：空間、衣著、手消毒，器皿、接種用具、培養(yǎng)基滅菌，實驗操作必須在酒精燈火焰附近進行，避免與周圍物品相接觸。3

18、）消毒：較溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物。煮沸消毒法100 ºC56min，巴氏消毒法：不耐高溫液體，7075 ºC煮30min、80 ºC15min。75%酒精消毒雙手，氯氣消毒水源。滅菌：強烈理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物、芽孢、孢子。灼燒滅菌，酒精燈火焰充分燃燒層，迅速徹底。干熱滅菌，干熱滅菌箱，160170 ºC，耐高溫、需保持干燥的物品。高壓蒸汽滅菌，高壓蒸汽滅菌鍋，水加熱煮沸，冷空氣排出，密閉，100kPa，121 ºC。紫外線照射，噴灑消毒液，石炭酸、酶酚皂溶液。21）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：計算：100m

19、L稱量：準確，牛肉膏黏稠，玻璃棒挑取，稱量紙，牛、蛋白胨吸潮，迅速，及時蓋上瓶蓋。溶化：牛肉膏、稱量紙一同放入燒杯，少量水，加熱，分離，玻璃棒取出紙。蛋白胨、氯化鈉，攪拌，溶解，瓊脂，加熱熔化，攪拌，防止瓊脂糊底燒杯破裂，蒸餾水至100mL。滅菌：培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移到錐形瓶，棉絮，牛皮紙，皮筋勒緊，高壓滅菌鍋，培養(yǎng)皿，舊報紙包緊，干熱滅菌箱。倒平板：冷卻到50 ºC左右，酒精燈火焰附近。 培養(yǎng)皿放好，右手錐形瓶，左手拔棉絮。右手錐形瓶，瓶口迅速通過火焰。 左手打開培養(yǎng)皿，稍大于瓶口的縫隙，右手倒入培養(yǎng)基，左手立即蓋上。 平板冷卻凝固，倒過來放置，皿蓋下皿底上。2）純化大腸桿菌：平板劃線法、

20、稀釋涂布平板法。使聚集在一起的微生物分散成單個細菌，在培養(yǎng)基表面形成單個菌落，以便純化菌種。平板劃線法：接種環(huán)灼燒冷卻，火焰旁打開菌液試管棉塞，試管口通過火焰，接種環(huán)沾取一環(huán)，試管口通過火焰蓋上，左手打開培養(yǎng)皿縫隙，右手接種環(huán)迅速伸入，劃三到五條平行線，蓋上，不要劃破培養(yǎng)基，灼燒接種環(huán)冷卻，第一區(qū)域劃線末端往第二劃線，三四五，最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連，平板倒置，培養(yǎng)箱培養(yǎng)。稀釋涂布平板法：系列稀釋：各9mL水，6試管，滅菌，101106編號， 移液管，1mL菌液，注入101，移液管吹吸三次，充分混勻。 從101吸取1mL注入102，重復。移液管滅菌，火焰附近12cm處操作。 涂布平板：涂布器，

21、浸入70%酒精，取少量菌液（不超過0.1mL），滴加培養(yǎng)基上， 沾有少量酒精涂布器，引燃，酒精燃盡后，冷卻，均勻涂布表面，可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿。 取出時讓多余酒精滴盡，再引燃，不要將過熱涂布器放入酒精，以免引燃酒精。接種后、未接種，37ºC恒溫箱。3）菌種保藏：臨時保藏：固體斜面培養(yǎng)基，4ºC冰箱，每36個月，轉(zhuǎn)移到新鮮。保存時間不長，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。長期保存：甘油管藏，3mL甘油瓶，1mL甘油，滅菌，1mL菌液，混勻，-20ºC冷凍箱。31）滅菌冷卻，用手觸摸錐形瓶，感覺溫度下降到剛好不燙手時，開始倒平板。2）瓶口通過火焰，灼燒滅菌，防止瓶口微生物污染培養(yǎng)基。

22、3）平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面濕度也比較高，平板倒置，使培養(yǎng)基表面水分更好地揮發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染。4）培養(yǎng)基濺在皿蓋和皿底之間，空氣中的微生物可能在這里滋生，最好不再使用。5）第一次灼燒接種環(huán)，避免可能存在的微生物污染培養(yǎng)基。每次劃線前灼燒，殺死上次劃線后殘留的菌種，使下次劃線菌種直接來源于上次劃線末端，從而通過劃線次數(shù)增加，每次劃線時菌種數(shù)目減少，以便得到單個細菌菌落。劃線結(jié)束后灼燒，殺死殘留菌種，以免污染周圍環(huán)境、感染操作者。6）灼燒冷卻再劃線，以免溫度太高，殺死菌種。7）從末端開始劃線，線條末端細菌數(shù)目少，能使每次劃線菌種數(shù)目隨著劃線次數(shù)增多而減少

23、，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。8）應從各個細節(jié)保證無菌，所有操作在酒精燈附近進行，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適，吸管頭不要接觸其他任何物體，吸管要放在酒精燈附近。9）營養(yǎng)是指生物攝取、利用營養(yǎng)物質(zhì)的過程。營養(yǎng)物質(zhì)是指維持機體生命活動，保證發(fā)育、生殖所需的外源物質(zhì)。人及動物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。植物的營養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類。微生物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機鹽、碳源、氮源及特殊營養(yǎng)物質(zhì)五類。10）將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12天，無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。2.2 土壤細菌分離與計數(shù)11）尋找目的菌株時，必須根據(jù)它對生

24、存環(huán)境的要求，到相應的環(huán)境中尋找。微生物篩選，人為提供有利于目的菌株生長的條件，同時抑制或阻止其他微生物生長。選擇培養(yǎng)基。碳源：葡萄糖、尿素，氮源：尿素，只有能合成脲酶的微生物才能生長。2）統(tǒng)計菌落數(shù)目。稀釋涂布平板法，統(tǒng)計樣品活菌數(shù)目，稀釋度足夠高。一個菌落來源于一個活菌，統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，推測。選擇菌落數(shù)為30300。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌實際數(shù)目低，統(tǒng)計結(jié)果用菌落數(shù)表示。血球計數(shù)板計數(shù)法，顯微鏡直接計數(shù)，不能區(qū)分死活，不適于運動細菌，個體微小看不到。3）設置對照：排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高可信度。21）土壤取樣：7090%細菌，酸堿度接近中性的潮濕土壤，38cm土壤層

25、。鏟去表層土。2）樣品稀釋：稀釋程度直接影響菌落數(shù)目。一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)，保證菌落數(shù)在30300之間，便于計數(shù)。測定細菌數(shù)量，104、105、106，放線菌103、104、105，真菌102、103、104。3）微生物培養(yǎng)觀察：細菌3037ºC12d，放線菌2528ºC57d，霉菌2528ºC34d。每隔24小時統(tǒng)計一次，選取數(shù)目穩(wěn)定時的為結(jié)果，防止因培養(yǎng)時間不足而遺漏菌落數(shù)目。同種微生物一定條件下，穩(wěn)定的菌落特征。形狀、大小、隆起程度、顏色。表格。形態(tài)：標點狀、圓形、絲狀、不規(guī)則狀、假根狀、紡錘狀突起：扁平、隆起、凸透鏡狀、墊狀、臍突狀邊緣：完整、波狀

26、、裂片狀、嚙蝕狀、絲狀、卷曲狀31）無菌操作：鐵鏟、信封使用前滅菌，火焰旁稱取土壤，倒入錐形瓶，塞好。全部操作在火焰旁進行。2）做好標記。標記培養(yǎng)皿，培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度。3）耗時太長，事先制定計劃，提高工作效率。4每克樣品中的菌株數(shù)=（C / V）× MC某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)V涂布平板時所用稀釋液體積mL，M稀釋倍數(shù)2.3分解纖維素微生物分離11）纖維素：棉花中含量最高，復合酶，C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶。前兩種分解纖維素為纖維二糖，第三種分解纖維二糖為葡萄糖。濾紙條，醋酸-醋酸鈉緩沖液，纖維素酶（7080U/mL），振蕩140r/min，濾紙

27、完全分解。2）剛果紅染色法：篩選纖維素分解菌，顏色反應。剛果紅CR，染料，纖維素，紅色復合物，不和纖維二糖、葡萄糖發(fā)生這種反應。形成以纖維素分解菌為中心的透明圈。2土壤取樣，選擇培養(yǎng)，梯度稀釋，涂布鑒別培養(yǎng)基上，挑選產(chǎn)生透明圈菌落，發(fā)酵培養(yǎng)1）土壤取樣：富含纖維素環(huán)境，多年落葉腐殖土，多年積累枯枝敗葉，濾紙埋在土里。2）選擇培養(yǎng)：液體培養(yǎng)基，碳源：纖維素，對照：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。土樣，30mL選擇培養(yǎng)基，錐形瓶，搖床，振蕩，直至培養(yǎng)液變混濁。吸取，轉(zhuǎn)移，新鮮選擇培養(yǎng)基，振蕩變混濁，吸取，稀釋涂布，鑒別培養(yǎng)基。3）剛果紅染色法：長出菌落，1mg/mLCR溶液，倒去CR，1mol/LNaCl溶液

28、，倒掉NaCl。10mg/mLCR溶液，滅菌，培養(yǎng)基200:1CR溶液加入，混勻，倒平板，長出菌落。4）發(fā)酵培養(yǎng)：纖維素酶，液體發(fā)酵、固體發(fā)酵。測定方法：纖維素酶分解濾紙后產(chǎn)生的葡萄糖定量測定。31）富含纖維素環(huán)境，生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，纖維素分解菌含量相對較高，獲得目的微生物幾率較高。2）濾紙埋在土壤中，使纖維素分解菌相對聚集，人工設置生存環(huán)境。深10cm腐殖土壤。3）兩種染色法比較：優(yōu)點：顏色反應基本為纖維素分解菌缺點：操作繁瑣，使菌落之間混雜。優(yōu)點：操作簡單，不存在混雜。缺點：含淀粉物質(zhì)，假陽性反應；有些微生物降解色素，不易區(qū)分。4）選擇培養(yǎng)濃縮所需微生物，選擇培養(yǎng)條件下，能適應這種

29、營養(yǎng)條件的微生物迅速繁殖，不適應的被抑制。3.1 菊花組織培養(yǎng)11）細胞分化：個體發(fā)育，形態(tài)、結(jié)構(gòu)、功能，穩(wěn)定性差異。2）離體植物組織或細胞，分裂，愈傷組織，排列疏松無規(guī)則，高度液泡化，無定形，薄壁細胞。脫分化，再分化。3）植物材料的選擇直接關(guān)系到實驗的成敗。年齡、保存時間的長短。菊花：未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝。4）MS培養(yǎng)基，液體，大量元素、微量元素、有機物（甘氨酸、維生素）、蔗糖、植物激素。生長素、細胞分裂素，啟動細胞分裂、脫分化、再分化關(guān)鍵性激素。加強趨勢。用量比例影響植物細胞的發(fā)育方向：生>細：根分化，生<細：芽分化，生=細：愈傷組織。pH：5.8左右，溫度1822&

30、#186;C，每日日光燈照射12h。21）制備MS培養(yǎng)基：4ºC保存，培養(yǎng)基母液。配制母液：大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存。 激素、維生素、用量較小的有機物1mg/mL。根據(jù)濃縮倍數(shù)計算用量。配制培養(yǎng)基：1L培養(yǎng)基，瓊脂，加800mL蒸餾水，加熱熔化，蔗糖，母液依次加入，蒸餾水定容，調(diào)節(jié)pH，分裝，錐形瓶，50mL或100mL。菊花莖段培養(yǎng)比較容易，不必添加植物激素。滅菌：培養(yǎng)基、器械，高壓蒸汽滅菌。2）外植體消毒：生長旺盛的嫩枝，流水沖洗，少許洗衣粉，軟刷輕輕刷洗，沖洗，無菌吸水紙吸干表面，70%酒精，搖動23次，立即取出，無菌水清洗，吸干，放入0.1%氯化汞溶

31、液中，取出，清洗3次，漂凈消毒液?？紤]消毒效果、植物耐受能力。3）接種：70%酒精，擦拭工作臺，點燃酒精燈，酒精燈旁進行，火焰灼燒滅菌。錐形瓶左側(cè)，經(jīng)消毒的菊花莖段，無菌培養(yǎng)皿，切成小段，左手錐形瓶，右手拉開繩子，右手手心攥封口膜，避免封口膜接觸瓶口一面被污染。左手瓶，瓶口旋轉(zhuǎn)通過火焰，右手鑷子，夾取莖段，插入培養(yǎng)基。注意方向，不要倒插。每瓶68塊，重新扎好。4）培養(yǎng)：無菌箱，定期消毒，1822 ºC，日光燈照射12h。5）移栽：生根，打開封口膜，培養(yǎng)間，流水清洗根部，消過毒蛭石或珍珠巖，長壯，土壤。6）栽培：記錄生長情況。31）MS培養(yǎng)基中，大量元素、微量元素提供所需無機鹽，蔗糖提

32、供碳源，維持細胞滲透壓，有機物滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基以大量無機營養(yǎng)為主。2）進行無性繁殖的植物，容易進行組織培養(yǎng)。3.2 月季花藥培養(yǎng)11）被子植物，雄蕊，花絲、花藥。花藥囊狀結(jié)構(gòu)，花粉，花粉母細胞減數(shù)分裂，單倍體的生殖細胞?；ǚ郯l(fā)育，小孢子四分體時期、單核期、雙核期。1個小孢子母細胞，減數(shù)分裂，小孢子四分體時期，4個單倍體細胞連在一起，單核期，彼此分離，4個單細胞核花粉粒，濃厚原生質(zhì)，核位于細胞中央（單核居中期），長大，核由中央移向一側(cè)（單核靠邊期），分裂，1個生殖細胞核、1個花粉管細胞核，形成兩個細胞，1個生

33、殖細胞、1個營養(yǎng)細胞，生殖細胞再分裂一次，2個精子。2）成熟花粉粒兩類：二核花粉粒：花粉管細胞核、生殖細胞核，精子在花粉管中形成。三核花粉粒，成熟前生殖細胞分裂兩個精子，兩個精子核、一個花粉管核（營養(yǎng)核）。同一生殖細胞分裂形成的2個精子基因組成完全相同。3）綠色開花植物，雙受精（母本體細胞）珠被種皮，子房果實，子房壁果皮4）產(chǎn)生花粉植株兩種途徑：胚狀體階段發(fā)育；誘導培養(yǎng)基形成愈傷組織，誘導分化。沒有絕對的界限，取決于激素的種類及其濃度配比。細胞胚（胚狀體），體細胞轉(zhuǎn)變，形態(tài)上與合子非常相似，發(fā)育過程與合子胚類似?；ǚ叟?，單倍體性細胞產(chǎn)生，也可發(fā)育，單倍體植株。5）主要影響因素：材料的選擇、培養(yǎng)

34、基的組成。同一種，親本植株的生理狀況?；ㄆ谠缙诘幕ㄋ幐菀?。月季初花期：五月初到五月中旬。選擇合適的花粉發(fā)育時期，某一時期對離體刺激敏感。單核靠邊期，成功率最高。單核期之前質(zhì)地幼嫩，極易破碎，之后花瓣松動，消毒困難。選擇完全未開放的花蕾。親本的生長條件、材料的低溫預處理，接種密度。21）材料選?。虹R檢：確定是否處于合適的發(fā)育期。醋酸洋紅法，焙花青-鉻礬法（花粉細胞核不易著色植物）藍黑色。醋酸洋紅法：花藥，載玻片，一滴1%醋酸洋紅，搗碎花藥，蓋玻片，顯微鏡檢查。醋酸洋紅：45%醋酸，煮沸，洋紅，加熱回流，冷卻至50ºC，過濾。焙花青-鉻礬法：花藥，卡諾氏固定液，固定，取出，載玻片，焙花

35、青-鉻礬溶液，顯微鏡。卡諾氏固定液：無水酒精、冰醋酸，3:1，混勻。焙花青-鉻礬：鉻鉀礬，蒸餾水，焙花青，混勻，加熱至沸騰，冷卻，過濾，蒸餾水定容。2）材料消毒：花蕾，70%酒精浸泡，取出，無菌水清洗，無菌吸水紙，0.1%氯化汞溶液，無菌水沖洗。3）接種培養(yǎng)：無菌條件下，除去萼片、花瓣，花藥接種，培養(yǎng)基。剝離花藥時，盡量不損傷花藥，否則接種后容易從受傷部分產(chǎn)生愈傷組織。徹底去除花絲，與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。每瓶710個，25 ºC，不需要光照，幼小植株才需要光照?；ㄋ庨_裂，愈傷組織或胚狀體。愈傷組織及時轉(zhuǎn)移，分化培養(yǎng)基，再生植株。胚狀體，盡快將幼小植株分開，分別

36、移植，培養(yǎng)基?；ǚ叟囵B(yǎng)，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，染色體組數(shù)目常會發(fā)生變化，鑒定篩選。4.1 果膠酶果汁生產(chǎn)11）果膠：植物細胞壁和胞間層的組成成分，半乳糖醛酸聚合，高分子化合物。不溶于水，影響出汁率，使果汁渾濁。2）果膠酶：瓦解植物細胞壁和胞間層，分解果膠為可溶性的半乳糖醛酸，澄清，總稱。3）酶的活性：酶催化一定化學反應的能力，反應速度。單位時間內(nèi)、單位體積中反應物的減少量或產(chǎn)物的增加量。溫度、pH、酶的抑制劑。4）控制好酶的用量，使果膠酶得到充分的利用，節(jié)約成本。蘋果泥。21）一恒定溫度設置pH梯度，一恒定pH設置溫度梯度。30、35、40、45、50、55、60、65、70 &#

37、186;C，5、6、7、8、9。2）攪拌制蘋果泥，分裝蘋果泥、果膠酶、恒溫水浴保溫，設置梯度，加果膠酶，過濾果汁體積溫度或pH3）碘液檢測，是否變藍，酶是否具有活性。蘋果汁體積、果汁澄清程度。4）果膠酶的最適用量：酶用量增加，過濾到得果汁體積增加，則酶用量不足；當酶用量增加到某個值時，再增加，體積不再改變，則酶用量足夠。31）先將蘋果切成小塊，放入榨汁機，加適量水，攪拌，橙子，不必去掉橙皮。2）不同pH，體積分數(shù)0.1%NaOH溶液和鹽酸調(diào)節(jié)。3）用果膠酶處理果泥，玻璃棒不時攪拌反應混合物，使果膠酶能充分地催化反應。4）分裝恒溫處理，保證底物和酶混合時的溫度是相同的，避免果泥和酶混合影響混合物

38、的溫度，進而影響酶的活性。5）大規(guī)模生產(chǎn)果汁：水果，榨汁，瞬間高溫滅菌90 ºC，冷卻，酶處理45 ºC13h，離心處理，過濾，濃縮，瞬間高溫滅菌，包裝，制品。4.2 加酶洗衣粉洗滌效果11）加酶洗衣粉：酶制劑：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶。（復合酶）應用最廣泛、效果最明顯：堿性蛋白酶、堿性脂肪酶。堿性蛋白酶，大分子蛋白質(zhì)（血漬、奶漬）水解為可溶性氨基酸、小分子肽。 2）酶活性影響因素：溫度、酸堿度、表面活性劑。3）普通洗衣粉中含磷，微生物、藻類大量繁殖，水體污染，加酶洗衣粉，降低表面活性劑、三聚磷酸的用量?；蚬こ?，耐酸、耐堿、忍受表面活性劑、較高溫度，特殊水溶性物質(zhì)

39、包裹，隔離層。21）有效控制變量：大燒杯、固定水量，固定大小的新布，玻璃棒攪拌洗滌，洗衣粉用量，天平稱量，污漬污染程度保持一致，滴加污染物量控制。2）探究過程中，考慮理論層面、日常生活中的具體情況。30、40、50 ºC。3）不同類型加酶洗衣粉的洗滌效果。污染物蛋白酶洗衣粉復合酶洗衣粉普通洗衣粉油漬××汗?jié)n××血漬×4.3 酵母細胞固定化11）葡萄糖異構(gòu)酶：高果糖漿42%生產(chǎn)，葡萄糖轉(zhuǎn)化為果糖。穩(wěn)定性好，持續(xù)發(fā)揮作用，酶溶解于葡萄糖溶液，無法回收。2）固定化酶技術(shù)：固定，顆粒狀載體，反應柱，柱子底端，篩板。酶顆粒無法通過篩板，反應溶液

40、自由出入。葡萄糖溶液上端注入，下端流出。反應柱連續(xù)使用半年，降低生產(chǎn)成本，提高果糖的產(chǎn)量和質(zhì)量。3）固定化酶、固定化細胞技術(shù)：包埋法（細胞）、化學結(jié)合法、物理吸附法（酶）。細胞個體大，酶個體小，個大的細胞難以被吸附或結(jié)合，個小的酶容易從包埋材料中漏出。固定的是一種酶，物理吸附法最容易，對細胞活性影響最小。發(fā)酵過程變成連續(xù)酶反應：包埋法。反應物大分子物質(zhì)，化學結(jié)合法。4）包埋法固定細胞，均勻包埋，不溶于水的多孔性載體。海藻酸鈉，包埋酵母細胞。21）酵母細胞活化：缺水時休眠，重新恢復正常的生活狀態(tài)。稱量，干酵母，蒸餾水，玻璃棒攪拌，混合均勻，成糊狀，放置。2）配制CaCl2溶液：0.05mol/L

41、，無水CaCl2，蒸餾水，充分溶解。3）配制海藻酸鈉溶液：海藻酸鈉，水，酒精燈加熱，邊攪拌，調(diào)成糊狀，直至完全溶化，蒸餾水定容。加熱時用小火，或間斷加熱。4）結(jié)合：海藻酸鈉溶液，冷卻至室溫，已活化酵母細胞，攪拌，混合均勻，注射器。5）固定化酵母細胞：固定速度緩慢滴加到CaCl2溶液，液滴在溶液中形成凝膠珠，浸泡。6）發(fā)酵：凝膠珠，蒸餾水沖洗，10%葡萄糖溶液，錐形瓶，25 ºC，無菌。7）海藻酸鈉溶解速度較慢，加熱促進溶解，小火間斷加熱：加熱，取下冷卻：高溫會殺死酵母細胞，攪拌，加熱。加熱過快，海藻酸鈉會發(fā)生焦糊。8）檢驗凝膠珠質(zhì)量：用力擠壓不容易破裂，用力摔打容易彈起，質(zhì)量合格。9

42、）凝膠珠顏色過淺，海藻酸鈉偏低，固定數(shù)目較少；形狀不是圓形或橢圓，偏高。10）發(fā)酵會產(chǎn)生酒精，會看到有氣泡生成，有酒味。6.1 植物芳香油的提取11）天然香料的來源：植物、動物。不同植物的根、莖、葉、花、果實、種子。2）芳香油的提取方法：蒸餾、壓榨、萃取等。芳香油的性質(zhì)：揮發(fā)性強，成分復雜，以萜類化合物及其衍生物為主。21）水蒸氣蒸餾法：水蒸汽可將揮發(fā)性較強的芳香油攜帶出來形成油水混合物，冷卻后水油分層。水中蒸餾：沸水中加熱蒸餾。水上蒸餾：隔放在沸水上加熱蒸餾。水汽蒸餾：利用外來高溫水蒸氣加熱蒸餾。適用于提取玫瑰油、薄荷油等揮發(fā)性強的芳香油不足：有些原料不適宜于水中蒸餾，如柑橘、檸檬等易焦糊，

43、有效成分容易水解。2）壓榨法：通過機械壓縮力將液相物從液固兩相混合物中分離出來。適用于柑橘、檸檬等易焦糊原料的提取3）萃取法：芳香油易溶于有機溶劑，溶劑揮發(fā)后得到芳香油。如石油醚、酒精、乙醚等。原料浸泡在溶劑中得到浸泡液有機溶劑揮發(fā)芳香油。適用范圍廣，要求原料的顆粒要盡可能細小，能充分浸泡在有機溶液中不足：有機溶劑中的雜質(zhì)影響芳香油的品質(zhì)所有儀器必須事先干燥，保證無水。左邊的部分通過加熱進行蒸餾，中部將蒸餾物冷凝，右邊的部分用來接收。安裝儀器一般都按照自下而上、從左到右的順序。拆卸儀器的順序與安裝時相反。（1）固定熱源酒精燈。（2）固定蒸餾瓶，使其離熱源的距離適當，并且保持蒸餾瓶軸心與鐵架臺的

44、水平面垂直。（3）安裝蒸餾頭，使蒸餾頭的橫截面與鐵架臺平行。（4）連接冷凝管。保證上端出水口向上，下端進水口向下。（5）連接接液管（或稱尾接管）。（6）將接收瓶瓶口對準尾接管的出口。常壓蒸餾一般用錐形瓶而不用燒杯作接受器，接收瓶應在實驗前稱重，并做好記錄。（7）將溫度計固定在蒸餾頭上，使溫度計水銀球的上限與蒸餾頭側(cè)管的下限處在同一水平線上。在蒸餾瓶中加幾粒沸石，防止液體過度沸騰。打開水龍頭，緩緩通入冷水，然后開始加熱。加熱時可以觀察到，蒸餾瓶中的液體逐漸沸騰，蒸氣逐漸上升，溫度計讀數(shù)也略有上升。當蒸氣的頂端達到溫度計水銀球部位時，溫度計讀數(shù)急劇上升。在整個蒸餾過程中，應保證溫度計的水銀球上常有

45、因冷凝作用而形成的液滴?？刂普麴s的時間和速度，通常以每秒12滴為宜。分液漏斗的使用方法如下。（1）首先把活塞擦干，為活塞均勻涂上一層潤滑脂，切勿將潤滑脂涂得太厚或使?jié)櫥M入活塞孔中，以免污染萃取液。（2）塞好活塞后，把活塞旋轉(zhuǎn)幾圈，使?jié)櫥植季鶆颉２⒂盟畽z查分液漏斗的頂塞與活塞處是否滲漏，確認不漏水。（3）將分液漏斗放置在大小合適的、并已固定在鐵架臺上的鐵圈中，關(guān)好活塞。將待分離的液體從上部開口處倒入漏斗中，塞緊頂塞，注意頂塞不能涂潤滑脂。（4）取下分液漏斗，用右手手掌頂住漏斗頂塞并握住漏斗頸，左手握住漏斗活塞處，大拇指壓緊活塞，將分液漏斗略傾斜，前后振蕩（開始振蕩時要慢）。（5）振蕩后，使漏斗口仍保持原傾斜狀態(tài)，左手仍握在漏斗活塞處，下部管口指向無人處，用拇指和食指旋開活塞，使其釋放出漏斗內(nèi)的蒸氣或產(chǎn)生的氣體，以使內(nèi)外壓力平衡，這一步操作也稱做“放氣”。（6）重復上述操作，直至分液漏斗中只放出很少的氣體時為止。再將分液漏斗劇烈振蕩23 min，然后將漏斗放回鐵圈中，待液體靜置分層。蒸餾完畢，應先撤出熱源，然后停止通水，最后拆卸蒸餾裝置，拆卸的順序與安裝時相反。3