臨床微生物質(zhì)量控制概述課件

1、臨床微生物質(zhì)量控制 廣州達(dá)安臨床檢驗(yàn)中心內(nèi)容提要 概述概述 涉及內(nèi)容涉及內(nèi)容室內(nèi)質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控室間質(zhì)評(píng)室間質(zhì)評(píng)質(zhì)量控制概述質(zhì)量控制概述l質(zhì)量控制（Quality control）是臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室為了保證檢驗(yàn)結(jié)果實(shí)事求是地反映客觀存在而建立的操作程序體系l包括室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量控制評(píng)價(jià) 室內(nèi)質(zhì)量控制是質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ) 室間質(zhì)量控制評(píng)價(jià)是由實(shí)驗(yàn)室外部的組織或機(jī) 構(gòu)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的質(zhì)量評(píng)價(jià)微生物室內(nèi)質(zhì)控微生物室內(nèi)質(zhì)控 微生物檢驗(yàn)人員及其培養(yǎng)教育微生物檢驗(yàn)人員及其培養(yǎng)教育 微生物檢驗(yàn)過(guò)程的基本要求微生物檢驗(yàn)過(guò)程的基本要求 儀器設(shè)備的質(zhì)量控制儀器設(shè)備的質(zhì)量控制 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

2、試劑質(zhì)量控制試劑質(zhì)量控制 抗微生物藥物質(zhì)量控制抗微生物藥物質(zhì)量控制 糾控糾控細(xì)菌檢驗(yàn)人員及其培養(yǎng)教育細(xì)菌檢驗(yàn)人員及其培養(yǎng)教育（1）培養(yǎng)臨床細(xì)菌室工作人員樹(shù)立質(zhì)量控制概念）培養(yǎng)臨床細(xì)菌室工作人員樹(shù)立質(zhì)量控制概念 什么是細(xì)菌檢驗(yàn)中的質(zhì)量：結(jié)果真實(shí)顯示標(biāo)本中存在什么是細(xì)菌檢驗(yàn)中的質(zhì)量：結(jié)果真實(shí)顯示標(biāo)本中存在的病原菌及其生化特征和抗藥性的病原菌及其生化特征和抗藥性 什么是細(xì)菌檢驗(yàn)中的質(zhì)量控制：制定細(xì)菌檢驗(yàn)的質(zhì)量什么是細(xì)菌檢驗(yàn)中的質(zhì)量控制：制定細(xì)菌檢驗(yàn)的質(zhì)量水平，并采取監(jiān)測(cè)手段，這一過(guò)程稱為質(zhì)量控制。水平，并采取監(jiān)測(cè)手段，這一過(guò)程稱為質(zhì)量控制。 質(zhì)量保證：為達(dá)到應(yīng)有的質(zhì)量水平而采納的措施質(zhì)量保證：為達(dá)到

3、應(yīng)有的質(zhì)量水平而采納的措施 質(zhì)量評(píng)價(jià)：用一個(gè)客觀的公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)定一個(gè)實(shí)驗(yàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)：用一個(gè)客觀的公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)定一個(gè)實(shí)驗(yàn)室或?qū)嶒?yàn)室中某項(xiàng)試驗(yàn)是否達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)的過(guò)程室或?qū)嶒?yàn)室中某項(xiàng)試驗(yàn)是否達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)的過(guò)程細(xì)菌檢驗(yàn)人員及其培養(yǎng)教育細(xì)菌檢驗(yàn)人員及其培養(yǎng)教育（2）操作手冊(cè)的建立）操作手冊(cè)的建立 規(guī)章制度規(guī)章制度 檢驗(yàn)項(xiàng)目檢驗(yàn)項(xiàng)目 細(xì)菌鑒定的最低要求及藥敏試驗(yàn)細(xì)菌鑒定的最低要求及藥敏試驗(yàn) 培養(yǎng)基及其制備培養(yǎng)基及其制備 試劑、染色劑的制備試劑、染色劑的制備 生物安全防護(hù)生物安全防護(hù) 參考數(shù)據(jù)及書籍參考數(shù)據(jù)及書籍 室內(nèi)及室間質(zhì)量控制室內(nèi)及室間質(zhì)量控制微生物檢驗(yàn)過(guò)程的基本要求 標(biāo)本的采集和運(yùn)送 實(shí)驗(yàn)室收到臨床標(biāo)本后

4、，應(yīng)做好標(biāo)本的驗(yàn)收工作，嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)本的拒收標(biāo)準(zhǔn)（如：直接涂片除血標(biāo)本外的臨床標(biāo)本特別是痰標(biāo)本應(yīng)做直接涂片） 根據(jù)培養(yǎng)目的的不同，合理選擇培養(yǎng)基，及時(shí)接種微生物檢驗(yàn)過(guò)程的基本要求 對(duì)陽(yáng)性培養(yǎng)要分離純化，然后進(jìn)行分群、種屬鑒定和藥敏試驗(yàn) 如實(shí)記錄檢驗(yàn)過(guò)程中所見(jiàn)現(xiàn)象和發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題，以便于系統(tǒng)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得出正確的結(jié)論和發(fā)出可信的報(bào)告 對(duì)于疑難菌株，要查閱文獻(xiàn)，組織會(huì)診，不能輕易作出診斷微生物檢驗(yàn)過(guò)程的基本要求 痰及下呼吸道分泌物 肉眼觀察培養(yǎng)前處理涂片檢查血瓊脂平板巧克力平板伊紅美蘭瓊/中國(guó)藍(lán)或麥康凱必要時(shí)可增加一個(gè)作厭氧培養(yǎng)CO2培養(yǎng)需氧培養(yǎng)35；18-24h觀察菌落和涂片染色鏡檢各種鑒定試驗(yàn)藥敏

5、試驗(yàn)報(bào)告儀器設(shè)備的質(zhì)量控制 隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，臨床微生物檢驗(yàn)已經(jīng)進(jìn)入微量化和自動(dòng)化的時(shí)代,使微生物的培養(yǎng)、鑒定及藥敏結(jié)果更加快速準(zhǔn)確。對(duì)于這些儀器的質(zhì)量控制可根據(jù)廠家推薦的方法做，確保測(cè)試系統(tǒng)的準(zhǔn)確度和精密度 儀器設(shè)備的質(zhì)量控制儀器設(shè)備的質(zhì)量控制臨床微生物室常見(jiàn)儀器設(shè)備質(zhì)量控制臨床微生物室常見(jiàn)儀器設(shè)備質(zhì)量控制儀器設(shè)備名稱儀器設(shè)備名稱允許范圍允許范圍監(jiān)控方法和頻率監(jiān)控方法和頻率光學(xué)顯微鏡每年4次或需要時(shí)做清潔與調(diào)試恒溫培養(yǎng)箱35 1 每天觀察記錄溫度CO2培養(yǎng)箱35 1 ；5% CO2每天觀察記錄溫度和CO2濃度冰箱冷藏室 2-8冷凍室-15- -25每天觀察記錄溫度生物安全柜定期年檢,濾

6、器3個(gè)月校正一次，合格后使用壓力蒸汽滅菌器 每周用嗜熱芽孢桿菌或每次用化學(xué)方法測(cè)試滅菌效果BacT/Alert120全自動(dòng)培養(yǎng)儀定期校準(zhǔn)、年檢 VITEK 2 COMPACT細(xì)菌鑒定儀周質(zhì)控、定期校準(zhǔn)、年檢培養(yǎng)基的質(zhì)量控制(1)一般性狀 液體培養(yǎng)基透明清亮，顏色符合要求 固體培養(yǎng)基表面濕潤(rùn)但無(wú)水汽、平整光滑、厚度均勻，一般厚度為3cm（M-H平板厚度為4cm） 斜面培養(yǎng)基的斜面長(zhǎng)度不得超過(guò)斜面2/3，基底層至少有1cm的直立段 PH值應(yīng)在規(guī)定值0.20.2的范圍內(nèi)的范圍內(nèi)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制(2)無(wú)菌試驗(yàn) 每批培養(yǎng)基在高壓或過(guò)濾除菌后均要進(jìn)行抽樣培養(yǎng)，以證實(shí)無(wú)細(xì)菌污染培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 對(duì)于分裝后進(jìn)

7、行滅菌的培養(yǎng)基，一般隨機(jī)抽取5%10%的量，置35孵箱培養(yǎng)24h，證明無(wú)菌生長(zhǎng)為合格 無(wú)菌手續(xù)分裝的培養(yǎng)基則應(yīng)對(duì)全部培養(yǎng)基置35孵箱培養(yǎng)24h，無(wú)菌生長(zhǎng)為合格 選擇性培養(yǎng)基應(yīng)取部分培養(yǎng)基加入1020倍無(wú)抑制性肉湯培養(yǎng)基稀釋后，置35孵箱培養(yǎng)24h，證明無(wú)菌生長(zhǎng)為合格培養(yǎng)基的質(zhì)量控制(3)生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)生長(zhǎng)抑制試驗(yàn) 非選擇性培養(yǎng)基配好后，要求抽 樣接種標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株，常規(guī)培養(yǎng)后生長(zhǎng)良好 選擇性培養(yǎng)基應(yīng)至少分別選1株可生長(zhǎng)、1株被抑制的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行接種培養(yǎng)，可生長(zhǎng)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好，被抑制菌應(yīng)不能生長(zhǎng)或部分生長(zhǎng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 (4)演變?cè)囼?yàn)演變?cè)囼?yàn) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保存一整套質(zhì)控菌株，用來(lái)觀察培養(yǎng)基各種性能的演變

8、特征(如腸桿菌科、非發(fā)酵菌微量生化鑒定管)。生化反應(yīng)培養(yǎng)基至少應(yīng)分別選陽(yáng)性和陰性反應(yīng)菌株各1株，以證實(shí)應(yīng)有的生化反應(yīng)試劑質(zhì)量控制（1）染色液質(zhì)量控制 染液在使用過(guò)程中，應(yīng)該適時(shí)用質(zhì)控菌株進(jìn)行陰、陽(yáng)性質(zhì)控。微生物室最常見(jiàn)的染色液是革蘭染液和抗酸染液。 自制的染液應(yīng)嚴(yán)格按照SOP規(guī)定配制，要求將整個(gè)配制過(guò)程的操作步驟形成記錄并保存，瓶簽上應(yīng)注明染色液名稱、配制日期、配制人、有效期試劑質(zhì)量控制 商品化的染色液應(yīng)對(duì)廠家、試劑名稱、批號(hào)存放條件加以說(shuō)明并要求廠家提供質(zhì)量保證書 超過(guò)保質(zhì)期的或已經(jīng)混濁、沉淀、變色的染液應(yīng)該及時(shí)處理和廢棄 試劑質(zhì)量控制(2) 試紙和試劑 無(wú)論是外購(gòu)的還是自制的，在使用時(shí)一定

9、要注明開(kāi)啟時(shí)間和失效日期 測(cè)定代謝產(chǎn)物的試紙或試劑，要用已知陽(yáng)性和陰性的質(zhì)控菌株進(jìn)行測(cè)試，并作好測(cè)試記錄，防止細(xì)菌的污染 試劑質(zhì)量控制常用生化試劑的質(zhì)量鑒定試劑名稱試劑名稱陽(yáng)性對(duì)照菌株陽(yáng)性對(duì)照菌株 陰性對(duì)照菌株陰性對(duì)照菌株 質(zhì)控頻率質(zhì)控頻率3%過(guò)氧化氫金黃色葡萄球菌A群鏈球菌每天凝固酶血漿金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌 每天氧化酶銅綠假單胞菌 大腸埃希氏菌 每天桿菌肽A群鏈球菌B群鏈球菌每批；每周optochin紙片肺炎鏈球菌 每批；每周vp試劑產(chǎn)氣腸桿菌大腸埃希菌每批；每周 試劑質(zhì)量控制(3)抗血清的質(zhì)量控制 來(lái)源必須可靠，應(yīng)從有資質(zhì)的單位購(gòu)買 抗血清的使用與保存 抗血清的效價(jià)必須用陽(yáng)性反應(yīng)質(zhì)控

10、菌株進(jìn)行質(zhì)量控制，合格者方可使用抗微生物藥物質(zhì)量控制 藥敏試驗(yàn)質(zhì)量控制的主要目的是監(jiān)測(cè)試驗(yàn)步驟的精密度和準(zhǔn)確度，監(jiān)測(cè)試驗(yàn)所用試劑的質(zhì)量和工作人員對(duì)試驗(yàn)操作和結(jié)果判讀的熟練程度抗微生物藥物質(zhì)量控制 為達(dá)到這些目的，實(shí)驗(yàn)室通常選用遺傳性能穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株，對(duì)藥敏試驗(yàn)過(guò)程中培養(yǎng)基的質(zhì)量、抗微生物藥物及紙片的效價(jià)以及工作人員的試驗(yàn)操作進(jìn)行監(jiān)測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)影響藥敏結(jié)果的因素抗微生物藥物質(zhì)量控制1.藥敏試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株 美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）從美國(guó)菌種收集中心（ATCC）選擇推薦了一些菌株作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)株抗微生物藥物質(zhì)量控制常見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)常見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)菌株的種類和應(yīng)用菌株的種類和應(yīng)用細(xì)菌名稱菌號(hào) 用途金

11、黃色葡萄球菌 ATCC 25923 紙片擴(kuò)散質(zhì)控金黃色葡萄球菌 ATCC 29213 MIC測(cè)定質(zhì)控大腸桿菌ATCC 25922 紙片和MIC綠膿假單胞菌ATCC 27853 紙片和MIC糞腸球菌ATCC 29212 胸腺嘧啶測(cè)定淋病奈瑟菌ATCC 49226 淋球菌藥敏流感嗜血桿菌ATCC 49247 嗜血桿菌藥敏肺炎克雷伯菌ATCC 700603 ESBL陽(yáng)性菌抗微生物藥物質(zhì)量控制 菌株的保存方法冷凍干燥 為防止變異，必須將標(biāo)準(zhǔn)菌株凍干保存冷凍 如無(wú)凍干條件，可于肉湯、脫纖維羊血或脫脂牛奶中加入10%-15%的甘油，或使用含50%小牛血清的肉湯，然后接種標(biāo)準(zhǔn)菌株，存于-20以下環(huán)境中抗微生

12、物藥物質(zhì)量控制冷藏 每月復(fù)蘇1次，種入大豆酪蛋白消化肉湯中（厭氧菌可用GAM肉湯等）作為工作株。工作株宜4-8 保存，并每周轉(zhuǎn)種1次。通常工作株轉(zhuǎn)種45次后即須棄去。在質(zhì)控過(guò)程中，如發(fā)現(xiàn)工作株結(jié)果有疑問(wèn)，應(yīng)予以更換抗微生物藥物質(zhì)量控制 2. 藥敏試驗(yàn)方法學(xué)及影響因素藥敏試驗(yàn)方法學(xué)及影響因素 方法學(xué)簡(jiǎn)介（紙片擴(kuò)散法、肉湯和瓊脂稀釋法、Etest法、儀器法）抗微生物藥物質(zhì)量控制 影響因素影響因素操作步驟的規(guī)范性步驟的規(guī)范性 操作人員的素質(zhì)操作人員的素質(zhì) 質(zhì)控菌株的污染或變異質(zhì)控菌株的污染或變異 0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)管的不均或變質(zhì)麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)管的不均或變質(zhì) 細(xì)菌懸液的濃度細(xì)菌懸液的濃度 試驗(yàn)用的培養(yǎng)基、藥敏紙

13、片及藥敏板條的質(zhì)量問(wèn)題試驗(yàn)用的培養(yǎng)基、藥敏紙片及藥敏板條的質(zhì)量問(wèn)題 錯(cuò)誤的孵育時(shí)間、溫度或孵育氣體錯(cuò)誤的孵育時(shí)間、溫度或孵育氣體 結(jié)果判讀錯(cuò)誤結(jié)果判讀錯(cuò)誤 數(shù)據(jù)錄入時(shí)抄寫錯(cuò)誤數(shù)據(jù)錄入時(shí)抄寫錯(cuò)誤抗微生物藥物質(zhì)量控制3.質(zhì)控方法 建立藥敏質(zhì)控系統(tǒng) 每種藥物/細(xì)菌組合的30個(gè)數(shù)據(jù)中，允許3個(gè)以下數(shù)據(jù)超出規(guī)定范圍 滿足以上數(shù)據(jù)可將質(zhì)控改為每周一次 每周質(zhì)控時(shí)，如果有一個(gè)數(shù)據(jù)超出允許范圍，要查找原因 5日數(shù)據(jù)在控表明找到原因 5次結(jié)果只要有一次失控，應(yīng)恢復(fù)每日質(zhì)控 在恢復(fù)每周質(zhì)控之前，應(yīng)再有30日連續(xù)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)抗微生物藥物質(zhì)量控制3.質(zhì)控方法(續(xù)) 使用新批號(hào)的藥敏紙片、M-H培養(yǎng)基、藥敏板條時(shí)應(yīng)做質(zhì)控試

14、驗(yàn) 參加能力比對(duì)試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)做質(zhì)控 檢測(cè)時(shí)應(yīng)開(kāi)展質(zhì)控 一旦發(fā)現(xiàn)藥敏試驗(yàn)數(shù)據(jù)失控時(shí)，不應(yīng)對(duì)外發(fā)放報(bào)告 糾 控鑒定從以下幾個(gè)方面進(jìn)行（操作程序） 標(biāo)本的采集和運(yùn)送 培養(yǎng)鑒定培養(yǎng)基的選擇 鑒定方法流程（包括涂片染色） 培養(yǎng)條件 儀器法的注意事項(xiàng)糾 控藥物敏感性試驗(yàn)從以下幾個(gè)方面進(jìn)行： 質(zhì)控菌株 培養(yǎng)基的制備（配方、厚度） 抗生素的選擇（效期、劑量） 接種及貼紙片的過(guò)程 培養(yǎng)條件 判讀糾 控儀器 硬件設(shè)備的維護(hù)與檢修 軟件程序的更新升級(jí)微生物室間質(zhì)控 歷史歷史起源于美國(guó)，起源于美國(guó)，1966年開(kāi)始，國(guó)內(nèi)于年開(kāi)始，國(guó)內(nèi)于1985年衛(wèi)生部年衛(wèi)生部臨檢中心正式組織了全國(guó)性的細(xì)菌學(xué)質(zhì)控工作，臨檢中心正式組織了全國(guó)性的細(xì)菌學(xué)質(zhì)控工作，質(zhì)控工作使我國(guó)臨床細(xì)菌室在鑒定和藥敏試驗(yàn)的質(zhì)控工作使我國(guó)臨床細(xì)菌室在鑒定和藥敏試驗(yàn)的正確性和標(biāo)準(zhǔn)化方面有了長(zhǎng)足的進(jìn)步，并且逐漸正確性和標(biāo)準(zhǔn)化方面有了長(zhǎng)足的進(jìn)步，并且逐漸與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌。與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌。微生物室間質(zhì)控 必要性必要性發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)誤差促進(jìn)和提高參控試驗(yàn)室的理論水平發(fā)現(xiàn)