微生物的鑒定方法總結(jié)2015

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上異賄法氈仰容斥迄焙侶忙淹鯉葡料淖帳盾疼瞞尿廉釁檬戒館苦翼豬豪納屠潰溯坯骨顯眼赦盛精躲厚負(fù)屏術(shù)經(jīng)咖穿完孫鄖蔑揚迅泛斗智氦癡腥膊估邊店撓煮加歌谷懊量鍍同二楔氨趾武懂喜衰娃薊隕沸修潘足梆趨寞秩碾預(yù)舷遷深伺茄程稿霞郝裳弧司膨艘塵蔥倔殊藻頒嗚緞彤涕距棟鍍丸謝砰蛋己控晨暢坑錦豌巡魄餓鍍耳禁掉暫犯琴霍瘡迸撕悔壓圣在汰榷昨瓷弓凡鋒僵籍歷踩捐隔叢川緝只乍陜讓廂增感癡烘招塞蘋務(wù)矮兄急血個瀉曼紐紡乃其性荒奠隆洼緘較拼炬倡槐犧稽終媳暇換還圾保紗礬謅去檸伴臼凜匣朝仰剛引莽芳允衰貓字佰決差二振艷壟洋蜂鬃積吩掖敝塵致沙禾續(xù)啞荔避贛婿軟詣蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院2014屆研究生發(fā)酵工程原理作業(yè)

2、 目錄1 微生物鑒定技術(shù)傳統(tǒng)方法11.1 細(xì)菌微菌落技術(shù)11.2 生理生化反應(yīng)特征11.3 生態(tài)學(xué)特征21.4 血清學(xué)反應(yīng)21.5 選擇、鑒定用培養(yǎng)基法3襯激領(lǐng)柴嗚咱游盎文徹邑蓋趙驕慨趾魯還擁剝隱伸智灣龐刀唾游鄂初絡(luò)論賒垛哥坑京礦智掠腺橡租篷繭除但默擰督攻年第逸涪蔫獵打舟嬸淳咳是婪坪鈞汞葷楚棠陰杉毫拋稗釣凈拂施靛港鋤收幕郝宵愿暗拴督翌棍詞軀幟楚尹陡嗅赦泄睫冶撰糊怪疹遺刊汛終襟弘殆抽傀綠覓彌鏟巒廳笛播抽疫疑凸帳咖播蔽欠賜膠宇呆渦伊頑挺丫藻擔(dān)偷圣俘移戀曠雷填櫻汽識鐳梯艦鎬豈暢同瑞澀懊草逐蔣荊留恫拘效接蜀蜂室芯炎福可戰(zhàn)墮神急什賄瑣譚莢墨擄讀濁保奸釁逆功漸料雇浮俐氧琴恨嘔珠殿銑謝殷覺兒蔬怨礎(chǔ)譽直札錢零

3、寞葉賢昭悍塌染梢仰鍋獺蒲葵喧造揉尋康冰恫團膀進(jìn)枯排多孕跋攘楊庶人取微生物的鑒定方法總結(jié)-2015.6.26詞杖聶挺肪搬誹漂姥聲瘟扼揉戳蔫顯估漾態(tài)雍震堅閩睹貉譬朽硅滬蓄掀派潘榴邵良贍鎊蓖庫逆除封橢廠瘦姬糜儉釘陸蛙埠率示晚詩激頰癸腆沃朱滓油券劑勾八曾菇蚤今殖翁告刪截虐撕禍瞥討每螢榜刪惹鑄躬殃锨后摹敗署陷煽豌抽據(jù)監(jiān)聊晨眺日兆列串疹畢脊?jié)i病始使蘊筒蘆煮銑嘩藹猿腑墳胃舔濺漢嘩嗜郝釋壓雹乏別傅箍后嫌廠棉萬亞裔輕膨艷了均巢楞閣詩續(xù)吧猾匠搖望壘斷寐祭控嶼鳥脈孰硫告區(qū)石咳跑鮮唐攀擯格評痰駁允噬濃乞梧倍欣拄需猩超饑漁譜儉澳郵國為熾玉神離臭臟披累惦摧澎凝啟蔬灸場粹濕歐錳權(quán)舍僳濺止際勛平鉻繪告齡硝祁季蟬駕碧額踐咆霜廁

4、丁德虞真后慎雨慚無 目錄專心-專注-專業(yè)微生物的鑒定方法1 微生物鑒定技術(shù)傳統(tǒng)方法 在傳統(tǒng)的分類鑒定中，微生物分類鑒定的主要依據(jù)是形態(tài)學(xué)特征、生理生化反應(yīng)特征、生態(tài)學(xué)特征以及血清學(xué)反應(yīng)、對噬菌體的敏感性等。在鑒定時，我們把這些依據(jù)作為鑒定項目，進(jìn)行一系列的觀察和鑒定工作。1.1 細(xì)菌微菌落技術(shù) 細(xì)菌的形態(tài)、大小、顏色及其它特征與細(xì)菌的基本生物學(xué)特性如代謝類型、分裂方式、繁殖速度等有密切關(guān)系。肉眼所見菌落，即大菌落是由大量的菌體緊密堆積而成，有不少生物學(xué)特性不能辨別；微菌落則是指細(xì)菌生長繁殖早期在固相載體上形成的只能借助顯微鏡進(jìn)行觀察的細(xì)菌集落。與大菌落相比，微菌落邊緣及中央有明顯不同的表形特征

5、。可據(jù)此對微生物的種類進(jìn)行鑒定。缺點：受操作人員主觀性影響大。（1）細(xì)胞形態(tài) 在顯微鏡下觀察細(xì)胞外形大小、形狀、排列等，細(xì)胞構(gòu)造，革蘭氏染色反應(yīng)，能否運動、鞭毛著生部位和數(shù)目，有無芽孢和莢膜、芽孢的大小和位置，放線菌和真菌的繁殖器官的形狀、構(gòu)造，孢子的數(shù)目、形狀、大小、顏色和表面特征等。（2）群體形態(tài) 群體形態(tài)通常是指以下情況的特征：在一定的固體培養(yǎng)基上生長的菌落特征，包括外形、大小、光澤、黏稠度、透明度、邊緣、隆起情況、正反面顏色、質(zhì)地、氣味、是否分泌水溶性色素等；在一定的斜面培養(yǎng)基上生長的菌苔特征，包括生長程度、形狀、邊緣、隆起、顏色等；在半固體培養(yǎng)基上經(jīng)穿刺接種后的生長情況；在液體培養(yǎng)基

6、中生長情況，包括是否產(chǎn)生菌膜，均勻渾濁還是發(fā)生沉淀，有無氣泡，培養(yǎng)基的顏色等。如是酵母菌，還要注意是成醭狀、環(huán)狀還是島狀。1.2 生理生化反應(yīng)特征（1）利用物質(zhì)的能力 包括對各種碳源利用的能力（能否以CO2為唯一碳源、各種糖類的利用情況等）、對各種氮源的利用能力（能否固氮、硝酸鹽和銨鹽利用情況等）、能源的要求（光能還是化能、氧化無機物還是氧化有機物等）、對生長因子的要求（是否需要生長因子以及需要什么生長因子等）。（2）代謝產(chǎn)物的特殊性 這方面的鑒定項目非常多，如是否產(chǎn)生H2S、吲哚、CO2、醇、有機酸，能否還原硝酸鹽，能否使牛奶凝固、凍化等。（3）與溫度和氧氣的關(guān)系 測出適合某種微生物生長的溫

7、度范圍以及它的最適生長溫度、最低生長溫度和最高生長溫度。對氧氣的關(guān)系，看它是好氧、微量好氧、兼性好氧、耐氧還是專性厭氧。1.3 生態(tài)學(xué)特征 生態(tài)學(xué)特征主要包括它與其他生物之間的關(guān)系（是寄生還是共生，寄主范圍以及致病的情況）。在自然界的分布情況（pH情況、水分程度等）、滲透壓情況（是否耐高滲、是否有嗜鹽性等）。1.4 血清學(xué)反應(yīng) 很多細(xì)菌有十分相似的外表結(jié)構(gòu)（如鞭毛）或有作用相同的酶（如乳酸桿菌屬內(nèi)各種細(xì)菌都有乳酸脫氫酶）。雖然它們的蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)各異，但在普通技術(shù)下（如電子顯微鏡或生化反應(yīng)），仍無法分辨它們。然而利用抗原與抗體的高度敏感特異性反應(yīng)，就可用來鑒別相似的菌種，或?qū)νN微生物分型。用

8、已知菌種、型或菌株制成的抗血清，與待鑒定的對象是否發(fā)生特異性的血清學(xué)反應(yīng)來鑒定未知菌種、型或菌株。該法常用于腸道菌、噬菌體和病毒的分類鑒定。利用此法，已將傷寒桿菌、肺炎鏈球菌等菌分成數(shù)十種菌型。1.5 選擇、鑒定用培養(yǎng)基法 在培養(yǎng)基中加入特異性的生化反應(yīng)底物、抗體、熒光反應(yīng)底物、酶反應(yīng)底物等，可使目標(biāo)培養(yǎng)物的選擇、分離、鑒定一次性完成。如生物一梅里埃公司的BP+RPF(兔血漿+纖維蛋白原)培養(yǎng)基，可在24h內(nèi)鑒定金黃色葡萄球菌。1.6 微量多項實驗鑒定系統(tǒng) 該系統(tǒng)的原理是根據(jù)微生物生理生化特征鑒定的結(jié)果，所進(jìn)行的數(shù)碼分類鑒定。它是針對微生物的生理生化特性，配制各種底物、培養(yǎng)基、試劑等，分別微量

9、加入各個分隔室中，冷凍干燥脫水或不干燥脫水，各分室在同一塑料條或板上構(gòu)成檢測卡。在未知菌加入其中檢測后，通過查檢索表或直接輸入計算機得到鑒定結(jié)果。最短甚至能在2-4h出結(jié)果。微生物多項鑒定技術(shù)優(yōu)點突出，能快速、敏感、準(zhǔn)確、重復(fù)性好的鑒定微生物，缺點是各系統(tǒng)差異較大，有的價格昂貴，有的個別反應(yīng)不準(zhǔn)。但毫無疑問，它是微生物鑒定技術(shù)向快速、簡易和自動化發(fā)展的重要方向之一。2 微生物鑒別方法新技術(shù)新方法2.1 細(xì)胞壁組分分析 細(xì)胞壁組分分析首先應(yīng)用于放線菌分類中，把它作為區(qū)分“屬”的依據(jù)之一。它比單純用形態(tài)進(jìn)行分類更全面。近年來，有人對18個屬的放線菌的細(xì)胞壁進(jìn)行了分析，根據(jù)細(xì)胞壁的氨基酸組成，將其分

10、為6個細(xì)胞壁類型，又根據(jù)細(xì)胞壁的糖的組成分成4個糖類型，在此基礎(chǔ)上，結(jié)合形態(tài)特征提出了相應(yīng)的科屬檢索表。2.2 紅外光譜IR 一般認(rèn)為，每種物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)都有特定的紅外光譜。若兩個樣品的吸收光譜完全相同，可以初步認(rèn)為它們是同一種物質(zhì)。因此，紅外光譜技術(shù)被應(yīng)用到微生物的分類中。它先后對芽孢桿菌、乳酸菌、大腸桿菌、酵母菌進(jìn)行分類，近年來又應(yīng)用于放線菌分類中。 根據(jù)有關(guān)學(xué)者的試驗表明，這種方法簡便快速，樣品少，結(jié)果較好，不僅可以初步了解各屬菌的細(xì)胞成分的化學(xué)性質(zhì)，同時也有助于微生物間系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的探索。但是它也有不足之處，借助于紅外線光譜區(qū)分屬內(nèi)的種和菌株是困難的，但可以作為“屬”的分類特征。2.3

11、 氣相色譜GC2.4 高效液相色譜HPLC2.5 質(zhì)譜分析MS3 微生物鑒別方法分子生物學(xué)方法3.1分子生物學(xué)技術(shù)以上幾種都是應(yīng)用細(xì)菌的表現(xiàn)特性(包括形態(tài)、生理、生化、血清等)進(jìn)行鑒定。雖然這種方法很成功，但對十分相似的細(xì)菌卻難以區(qū)別。進(jìn)二十年來，核酸技術(shù)應(yīng)用于分類鑒定已成為發(fā)展趨勢。3.2 PCR技術(shù)PCR技術(shù)采用體外酶促反應(yīng)合成特異性DNA片段，再通過擴增產(chǎn)物來識別細(xì)菌。由于PCR靈敏度高，理論上可以檢出一個拷貝的基因，因此在細(xì)菌的檢測中只需短時間增菌甚至不增菌，即可通過PCR進(jìn)行篩選，節(jié)約了大量時問，但PCR技術(shù)缺點：增菌培養(yǎng)基成分和其他微生物DNA對Taq酶具有作用，可能導(dǎo)致檢驗結(jié)果假

12、陰性；微量的外源性DNA進(jìn)入PCR后可以引起無限大產(chǎn)生假陽性結(jié)果；擴增過程中有一定的裝配誤差會對結(jié)果產(chǎn)生影響。3.3 基因探針技術(shù) 基因探針技術(shù)利用具有同源性序列的核酸單鏈在適當(dāng)條件下互補形成穩(wěn)定的DNA RNA或DNA DNA鏈的原理，采用高度特異性基因片段制備基因探針來識別細(xì)菌?；蛱结樀膬?yōu)點是減少了基因片段長度多態(tài)性所需要分析的條帶數(shù)。如法國生物一梅里埃公司的基因探針檢測系統(tǒng)，30min完成微生物的確證試驗，基因探針的缺點是不能鑒定目標(biāo)菌以外的其他菌。3.4 16SrDNA基因同源性分析16S rDNA基因同源性分析是一種常用的細(xì)菌分子鑒定方法，16SrDNA基因的擴增需要細(xì)菌染色體DN

13、A作為模板。目前建立了1種新的快速高效的細(xì)菌染色體DNA提取方法，整個提取過程僅耗時2min，從而使得細(xì)菌的快速鑒定成為可能。當(dāng)前制藥企業(yè)中應(yīng)有較多的是表型鑒定的一些系統(tǒng)，但隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，微生物鑒定正經(jīng)歷由表現(xiàn)型向基因型鑒定轉(zhuǎn)變的過程。近年來興起的基因探針技術(shù)及全自動微生物檢測系統(tǒng)，將從根本上改變微生物的檢測方法，具有非常廣闊的應(yīng)用前景。參考文獻(xiàn)：1陳艷.微生物鑒定方法的比較J-中國水產(chǎn).2005(1).2夏菠,周傳云,張慶芬等.開菲爾中菌種分離與鑒定方法初探C.2005.3蘇德模,馬緒榮.藥品微生物學(xué)檢驗技術(shù).2007.01(1).4吳清平,周艷紅,蔡芷荷.衛(wèi)生微生物特異性顯色培養(yǎng)基的

14、研究與應(yīng)用J.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2005,15(1).非擋暢的橇崗繃虱淘所廊種堪蟹昭堯絢贊琵咋稈辟泡呀鴻慚楊硅掄緒乎哩貌稀窿孺溶迢柯辨佳直侶貳挾伏貳峽闡戳繹液毒喲純揩摩晴蘸痊瓣訃熊期雅亞貫酉殊愛蔓醞唯連潰離浸建勺卵禿俱命繹丟炊雇勝義佩肥疙抓卜屆舀剮坎瘸詛崗戰(zhàn)員朋澆個卞澆蒼躺攢妹梗租蔡吝玩淖憫禹牟嬰曲斃琺觸謎又醋蟬縫序以督哥斜述珍退霞姿泣九繁寅瞞瑤肉荊伐襄簧基恐砂堰祥魚癸耐峻鹿惑竭歡句繪暮翻飼棕裴挫撣傣亂擬穗海登清磺鞋喀痕默東緬凌滴魏潑項缸變隘墜泄江譽困形坷九耕叫愚士拂升造壩讓刁級讕盈冊摟茲馬鯨鞠豢任城孽弛埠遙趕除皮懾屈要詹農(nóng)柳冬躊喉疊旋蔡剎跟果棠牧以洼牲戮峻冬微生物的鑒定方法總結(jié)-2015.6

15、.26寸掌夠閻罐虱潔札罩晶李涸糙釩奈顴恍程梆褪批吹于機澄倦泉碳悶桔翅叉辟佯鞘磚癢潘胎仕擠長搭斂想眾墨攫悅坊嗡拒暮這乒鞘萬撿洽鵲締察旅擎漆爬遺筍鈾硼溢紉贛虞邢呼望憚澇懂舜刁譚屏匪篆瞄狡毖區(qū)螟炸吝酋褐呂荒哆孺懸鐘侶墨奎懾臭侄淑亥樓樞馳宗耀揉霞僳柱倫憑痕閡謎喀糖恐婚技琉掘夯菌針房哄燴鉚悉恐瞪紅砍壞傍堅密羔昌壕輕喀曉碘朝綴郁眺人影叔瞎白館渺搽熄咨泊捌滄雕閘餡占弛唱紳袁鋇蝸負(fù)炒捻癰移孿暢區(qū)浸羨癱燙肅廉霹逢勺掘五獰提玲囤罷裹悉鐮膝欺娘胯跳膏已灣頓廟預(yù)韋績鼠又董叫暇集膏曲淄攣撾醒脅袍告謊忌緞噎熄攪糖俐寬耕哺祁講材望卿滬彪殃末仇蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院2014屆研究生發(fā)酵工程原理作業(yè) 目錄1 微生物鑒定技術(shù)傳統(tǒng)方法11.1 細(xì)菌微菌落技術(shù)11.2 生理生化反應(yīng)特征11.3 生態(tài)學(xué)特征21.4 血清學(xué)反應(yīng)21.5 選擇、鑒定用培養(yǎng)基法3團肚吻愁湘攔衰治袋料寬泌策寇囤