生物藥物的分離純化

1、第二講第二講 生物藥物的分離純化生物藥物的分離純化主要講授內(nèi)容 1.生物藥物原料的選擇、預(yù)處理與保存方法生物藥物原料的選擇、預(yù)處理與保存方法 2. 生物藥物的提取生物藥物的提取 3. 蛋白質(zhì)類(lèi)藥物的分離純化方法蛋白質(zhì)類(lèi)藥物的分離純化方法 4. 核酸類(lèi)藥物的分離純化方法核酸類(lèi)藥物的分離純化方法 5. 糖類(lèi)藥物的分離純化方法糖類(lèi)藥物的分離純化方法 6. 脂類(lèi)藥物的分離純化方法脂類(lèi)藥物的分離純化方法 7. 氨基酸類(lèi)藥物的分離純化方法氨基酸類(lèi)藥物的分離純化方法1.1 生物藥物原料的選擇生物藥物原料的選擇 生物藥物生產(chǎn)原料的選擇原則主要是：(1) 有效成分含量高，原料新鮮有效成分含量高，原料新鮮；(2)

2、原料來(lái)源原料來(lái)源豐富，易得，原料產(chǎn)地較近豐富，易得，原料產(chǎn)地較近；(3)原料中雜原料中雜質(zhì)含量少質(zhì)含量少；(4)原料成本低等原料成本低等。但是，同時(shí)具備這4種有利因素的原料不多，生產(chǎn)研究者可酌情選擇，但第一條是最重要的。 原料的選擇還要注意如下事項(xiàng)：植物原料原料的選擇還要注意如下事項(xiàng)：植物原料要注意要注意植物生長(zhǎng)的季節(jié)性植物生長(zhǎng)的季節(jié)性，選擇最佳采集，選擇最佳采集時(shí)間；微生物原料要注意時(shí)間；微生物原料要注意微生物生長(zhǎng)的對(duì)微生物生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期長(zhǎng)短數(shù)期長(zhǎng)短；動(dòng)物原料有的要注意動(dòng)物的；動(dòng)物原料有的要注意動(dòng)物的類(lèi)類(lèi)別別、年齡年齡與與性別性別。 也應(yīng)注意原料的也應(yīng)注意原料的采集地采集地和和批次批次。1.2

3、 原料的預(yù)處理與保存原料的預(yù)處理與保存 動(dòng)物原料動(dòng)物原料采集后要立即處理，去除結(jié)締組采集后要立即處理，去除結(jié)締組織、脂肪組織等，并迅速冷凍貯存；織、脂肪組織等，并迅速冷凍貯存；植物植物原料確定后原料確定后，要擇時(shí)采集并就地除去沒(méi)有，要擇時(shí)采集并就地除去沒(méi)有用的部分，將有用部分保鮮處理；用的部分，將有用部分保鮮處理；收集微收集微生物原料生物原料時(shí)時(shí)，要及時(shí)將菌體細(xì)胞與培養(yǎng)液，要及時(shí)將菌體細(xì)胞與培養(yǎng)液分開(kāi)，進(jìn)行保鮮處理。分開(kāi)，進(jìn)行保鮮處理。 原料的保存方法主要有：原料的保存方法主要有：冷凍法冷凍法。該。該方法適用于所有生物原料。常用方法適用于所有生物原料。常用-40速速凍。凍。有機(jī)溶劑脫水法有機(jī)溶

4、劑脫水法。常用的有機(jī)溶。常用的有機(jī)溶劑是丙酮。該法適用于原料少而價(jià)值高、劑是丙酮。該法適用于原料少而價(jià)值高、有機(jī)溶劑對(duì)活性物質(zhì)沒(méi)有破壞作用的原有機(jī)溶劑對(duì)活性物質(zhì)沒(méi)有破壞作用的原料，如腦垂體等。料，如腦垂體等。防腐劑保鮮防腐劑保鮮。常用。常用乙醇、苯酚等。該法適用于液體原料，乙醇、苯酚等。該法適用于液體原料，如發(fā)酵液、提取液等。如發(fā)酵液、提取液等。2. 生物藥物的提取生物藥物的提取 (1) 生物組織與細(xì)胞的破碎生物組織與細(xì)胞的破碎 (2) 生物組織細(xì)胞破碎后立即進(jìn)行提取生物組織細(xì)胞破碎后立即進(jìn)行提取生物組織與細(xì)胞的破碎生物組織與細(xì)胞的破碎 生物藥物大部分存在于生物藥物大部分存在于生物組織或細(xì)胞生

5、物組織或細(xì)胞中，中，要提高提取率，對(duì)生物組織與細(xì)胞的破碎要提高提取率，對(duì)生物組織與細(xì)胞的破碎過(guò)程是非常重要的過(guò)程是非常重要的。 常用的破碎方法有5種： A. 磨切法磨切法，該法屬于機(jī)械破碎方法，使用該法屬于機(jī)械破碎方法，使用的設(shè)備有組織搗碎機(jī)、膠體磨、勻漿器、的設(shè)備有組織搗碎機(jī)、膠體磨、勻漿器、勻質(zhì)機(jī)、球磨機(jī)、乳缽等。勻質(zhì)機(jī)、球磨機(jī)、乳缽等。 B. 壓力法壓力法，這類(lèi)方法有加壓與減壓兩種，這類(lèi)方法有加壓與減壓兩種，常用的常用的法蘭西壓釜法蘭西壓釜使用效果良好。使用效果良好。 C. 反復(fù)凍融法反復(fù)凍融法，該方法設(shè)備簡(jiǎn)便，活性保持好，但用時(shí)較長(zhǎng)。 D.超聲波振蕩破碎法超聲波振蕩破碎法，該方法破碎效

6、果較好，但由于局部發(fā)熱，對(duì)活性有損失。 E. 自溶法或酶解法自溶法或酶解法，用得較少。 生物組織活性物質(zhì)的提取要在細(xì)胞破碎后生物組織活性物質(zhì)的提取要在細(xì)胞破碎后立即進(jìn)行。立即進(jìn)行。 提取過(guò)程中提取過(guò)程中 （1）要根據(jù)活性物質(zhì)的性質(zhì)，選擇提取要根據(jù)活性物質(zhì)的性質(zhì)，選擇提取試劑。試劑。提取試劑主要有：水、緩沖溶液、提取試劑主要有：水、緩沖溶液、鹽溶液、乙醇、其他有機(jī)溶劑鹽溶液、乙醇、其他有機(jī)溶劑(如氯仿、丙如氯仿、丙酮等酮等)。 （2）考慮提取溶劑的用量（料液比）及考慮提取溶劑的用量（料液比）及提取次數(shù)、提取時(shí)間。提取次數(shù)、提取時(shí)間。 （3）注意提取的溫度、注意提取的溫度、pH、變性劑等、變性劑等

7、因素。因素。這樣才可以保證活性物質(zhì)提取充這樣才可以保證活性物質(zhì)提取充分而且不變性。分而且不變性。3. 蛋白質(zhì)類(lèi)藥物的分離純化方法蛋白質(zhì)類(lèi)藥物的分離純化方法 蛋白質(zhì)類(lèi)藥物主要包括蛋白質(zhì)、多肽和酶蛋白質(zhì)類(lèi)藥物主要包括蛋白質(zhì)、多肽和酶類(lèi)等藥物。它們的分離純化方法有：類(lèi)等藥物。它們的分離純化方法有： (1) 沉淀法沉淀法 (2) 按按分子大小分離分子大小分離的方法的方法 (3) 按按分子所帶電荷分子所帶電荷進(jìn)行分離的方法進(jìn)行分離的方法 (4) 親和層析法親和層析法(1) 沉淀法沉淀法 蛋白質(zhì)、酶的初步純化往往用沉淀法。該蛋白質(zhì)、酶的初步純化往往用沉淀法。該法的原理是使蛋白質(zhì)膠體顆粒破壞，從而法的原理是

8、使蛋白質(zhì)膠體顆粒破壞，從而沉淀蛋白質(zhì)。常用的有沉淀蛋白質(zhì)。常用的有鹽析法鹽析法、有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑沉淀法沉淀法、等電點(diǎn)沉淀法等電點(diǎn)沉淀法、與靶物質(zhì)結(jié)合沉與靶物質(zhì)結(jié)合沉淀法淀法(如抗體一抗原如抗體一抗原)等。等。(2) 按分子大小分離的方法按分子大小分離的方法 這類(lèi)方法有這類(lèi)方法有超濾法超濾法和和透析法透析法(即膜分離方法即膜分離方法)、凝膠層析法凝膠層析法、超速離心法超速離心法等。其中膜分離等。其中膜分離法可用于生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級(jí)和法可用于生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級(jí)和脫鹽。脫鹽。 (3) 按分子所帶電荷進(jìn)行分離的方法按分子所帶電荷進(jìn)行分離的方法 氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶均為兩性電解氨基酸

9、、多肽、蛋白質(zhì)、酶均為兩性電解質(zhì)。它們具有等電點(diǎn)，在離開(kāi)等電點(diǎn)的質(zhì)。它們具有等電點(diǎn)，在離開(kāi)等電點(diǎn)的pH時(shí)便會(huì)帶正或負(fù)電荷。例如某蛋白質(zhì)等電時(shí)便會(huì)帶正或負(fù)電荷。例如某蛋白質(zhì)等電點(diǎn)為點(diǎn)為7.0，當(dāng)溶液，當(dāng)溶液pH為為4.0時(shí)，分子則帶有時(shí)，分子則帶有正電荷。由于具有該性質(zhì)，利用帶電性質(zhì)正電荷。由于具有該性質(zhì)，利用帶電性質(zhì)進(jìn)行分離是極其有效的方法。進(jìn)行分離是極其有效的方法。 利用蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)行分離的方法有：利用蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)行分離的方法有： 離子交換柱層析法離子交換柱層析法； 電泳法電泳法； 等電聚焦法等電聚焦法。（4）親和層析法）親和層析法 大部分生物活性物質(zhì)都有其作用的靶物質(zhì)，大部分生物活性物

10、質(zhì)都有其作用的靶物質(zhì)，如如酶與底物酶與底物(或抑制劑或抑制劑)、抗原與抗體抗原與抗體、激素激素與受體與受體等，它們之間有特異的親合作用，等，它們之間有特異的親合作用，利用該性質(zhì)設(shè)計(jì)的特異層析分離技術(shù)稱(chēng)為利用該性質(zhì)設(shè)計(jì)的特異層析分離技術(shù)稱(chēng)為親和層析。親和層析。親和層析分離專(zhuān)一性強(qiáng)親和層析分離專(zhuān)一性強(qiáng)，操作，操作簡(jiǎn)便，是當(dāng)前應(yīng)用很廣泛的分離方法之一。簡(jiǎn)便，是當(dāng)前應(yīng)用很廣泛的分離方法之一。 親和層析法主要包括：親和層析法主要包括：疏水反應(yīng)層析、金疏水反應(yīng)層析、金屬螯合層析、免疫親和層析、共價(jià)親和層屬螯合層析、免疫親和層析、共價(jià)親和層析、固定化染料親和層析、特殊基團(tuán)親和析、固定化染料親和層析、特殊基團(tuán)

11、親和層析等。層析等。親和層析技術(shù)大量應(yīng)用于蛋白質(zhì)親和層析技術(shù)大量應(yīng)用于蛋白質(zhì)分離和純化。分離和純化。4. 核酸類(lèi)藥物的分離純化方法核酸類(lèi)藥物的分離純化方法 核酸類(lèi)藥物生產(chǎn)方法主要有核酸類(lèi)藥物生產(chǎn)方法主要有提取法提取法和和發(fā)酵發(fā)酵法法。 提取法提取法生產(chǎn)生產(chǎn)DNA和和RNA的主要技術(shù)是，先的主要技術(shù)是，先提取核酸和蛋白質(zhì)復(fù)合物，再解離核酸與提取核酸和蛋白質(zhì)復(fù)合物，再解離核酸與蛋白質(zhì)，然后分離蛋白質(zhì)，然后分離RNA與與DNA。 發(fā)酵法發(fā)酵法主要用于生產(chǎn)單核苷酸。主要用于生產(chǎn)單核苷酸。5糖類(lèi)藥物的分離純化方法糖類(lèi)藥物的分離純化方法 由于各種糖類(lèi)藥物的性質(zhì)和原料來(lái)源不同，由于各種糖類(lèi)藥物的性質(zhì)和原料來(lái)

12、源不同，沒(méi)有統(tǒng)一規(guī)范的提取和純化工藝。這里只沒(méi)有統(tǒng)一規(guī)范的提取和純化工藝。這里只介紹介紹多糖多糖和和粘多糖粘多糖的一般分離純化方法。的一般分離純化方法。提取方法提取方法 非降解法非降解法：適用于從含一種粘多糖的動(dòng)物：適用于從含一種粘多糖的動(dòng)物組織中提取粘多糖，提取采用的溶劑是組織中提取粘多糖，提取采用的溶劑是水水或或鹽鹽溶液。溶液。 降解法：降解法：適用于從組織中提取結(jié)合比較牢適用于從組織中提取結(jié)合比較牢固的粘多糖。例如從軟骨中分離提取硫酸固的粘多糖。例如從軟骨中分離提取硫酸軟骨素，就是用堿處理進(jìn)行降解，又如用軟骨素，就是用堿處理進(jìn)行降解，又如用酶處理法可提取與蛋白質(zhì)結(jié)合的多糖。酶處理法可提取

13、與蛋白質(zhì)結(jié)合的多糖。(2) 分離方法分離方法 常用的分離純化多糖的方法是常用的分離純化多糖的方法是乙醇沉淀法乙醇沉淀法和和離子交換層析法離子交換層析法。 乙醇沉淀法乙醇沉淀法是從提取液中沉淀多糖的最簡(jiǎn)易是從提取液中沉淀多糖的最簡(jiǎn)易方法，也適用于方法，也適用于分級(jí)分離分級(jí)分離。用。用45倍體積的倍體積的乙醇可以使任何結(jié)締組織中的粘多糖完全沉乙醇可以使任何結(jié)締組織中的粘多糖完全沉淀。淀。 季銨化合物季銨化合物也可用于沉淀粘多糖也可用于沉淀粘多糖,其原理是其原理是粘多糖的聚陰離子粘多糖的聚陰離子能與某些陽(yáng)離子表面活性能與某些陽(yáng)離子表面活性劑結(jié)合成不溶于水的鹽，如十六烷基三甲基劑結(jié)合成不溶于水的鹽，如

14、十六烷基三甲基銨銨(CTA)等。等。 離子交換層析法：離子交換層析法：粘多糖的聚陰離子能夠粘多糖的聚陰離子能夠很好地被陰離子交換劑吸附和分離，如很好地被陰離子交換劑吸附和分離，如Dowex-I-X2離子交換樹(shù)脂、離子交換樹(shù)脂、DEAE-離子離子交換纖維素交換纖維素*等。洗脫可用等。洗脫可用NaCl溶液進(jìn)行溶液進(jìn)行梯度洗脫。梯度洗脫。 注意從粗多糖中除去蛋白常用的方法有：注意從粗多糖中除去蛋白常用的方法有：Sevag法法、三氯乙酸法三氯乙酸法和和蛋白酶解法蛋白酶解法。 *二乙氨基乙基纖維素二乙氨基乙基纖維素6. 脂類(lèi)藥物的分離純化方法脂類(lèi)藥物的分離純化方法 (1) 提取方法提取方法 脂類(lèi)自然狀態(tài)

15、下是以結(jié)合脂類(lèi)自然狀態(tài)下是以結(jié)合形式存在的。形式存在的。非極性脂是與其他脂質(zhì)分子非極性脂是與其他脂質(zhì)分子或蛋白質(zhì)分子的疏水區(qū)相結(jié)合的或蛋白質(zhì)分子的疏水區(qū)相結(jié)合的。因此，。因此，提取脂質(zhì)藥物就是提取脂質(zhì)藥物就是要選擇適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)破要選擇適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)破壞這種結(jié)合鍵壞這種結(jié)合鍵，將脂質(zhì)溶解出來(lái)。常用的，將脂質(zhì)溶解出來(lái)。常用的溶劑有組合溶劑，醇是其中的主要成分，溶劑有組合溶劑，醇是其中的主要成分，此外還有氯仿、甲醇、水等。此外還有氯仿、甲醇、水等。 (2) 純化方法純化方法 沉淀法：沉淀法：由于不同脂質(zhì)在丙酮中溶解度由于不同脂質(zhì)在丙酮中溶解度不同，故常用它進(jìn)行沉淀。不同，故常用它進(jìn)行沉淀。 吸附層析法

16、：吸附層析法：常用吸附劑有硅膠、氧化常用吸附劑有硅膠、氧化鋁等。它是通過(guò)極性和離子鍵力等把各鋁等。它是通過(guò)極性和離子鍵力等把各種化合物結(jié)合到固體吸附劑上。一般是種化合物結(jié)合到固體吸附劑上。一般是采用極性逐漸增大的洗脫液來(lái)進(jìn)行，非采用極性逐漸增大的洗脫液來(lái)進(jìn)行，非極性組分先流出，極性組分后流出。極性組分先流出，極性組分后流出。 離子交換層析法：離子交換層析法：脂質(zhì)分子的存在有脂質(zhì)分子的存在有非非解離解離和和酸式解離酸式解離兩種狀態(tài)。根據(jù)它們?cè)趦煞N狀態(tài)。根據(jù)它們?cè)谝欢ㄒ欢╬H條件下的解離情況，選擇適當(dāng)?shù)臈l件下的解離情況，選擇適當(dāng)?shù)碾x子交換劑可將它們提純。如離子交換劑可將它們提純。如TEAE-纖纖維

17、素維素*對(duì)分離脂肪酸和膽汁酸等特別有效。對(duì)分離脂肪酸和膽汁酸等特別有效。 三乙氨基乙基纖維素三乙氨基乙基纖維素7. 氨基酸類(lèi)藥物的分離純化方法氨基酸類(lèi)藥物的分離純化方法 氨基酸的生產(chǎn)方法：氨基酸的生產(chǎn)方法： 蛋白質(zhì)水解法蛋白質(zhì)水解法 發(fā)酵法發(fā)酵法 化學(xué)合成與酶促合成法化學(xué)合成與酶促合成法 蛋白質(zhì)水解法蛋白質(zhì)水解法：水解法有：水解法有酸酸水解、水解、堿堿水水解和解和酶酶水解三種。用鹽酸水解為常用方水解三種。用鹽酸水解為常用方法，其優(yōu)點(diǎn)是水解迅速、完全，產(chǎn)物全法，其優(yōu)點(diǎn)是水解迅速、完全，產(chǎn)物全部是部是L-型氨基酸，缺點(diǎn)是色氨酸全部被型氨基酸，缺點(diǎn)是色氨酸全部被破壞，絲氨酸等部分被破壞。堿水解法破壞

18、，絲氨酸等部分被破壞。堿水解法易產(chǎn)生消旋作用，較少應(yīng)用。酶水解法易產(chǎn)生消旋作用，較少應(yīng)用。酶水解法水解不夠完全。水解不夠完全。 發(fā)酵法：發(fā)酵法：發(fā)酵法主要是選育特異產(chǎn)生某發(fā)酵法主要是選育特異產(chǎn)生某種氨基酸的菌株，經(jīng)過(guò)發(fā)酵后，從培養(yǎng)種氨基酸的菌株，經(jīng)過(guò)發(fā)酵后，從培養(yǎng)液中提純氨基酸。液中提純氨基酸。 化學(xué)合成與酶促合成法化學(xué)合成與酶促合成法：化學(xué)合成法化學(xué)合成法一般一般得到的是得到的是D/L-型氨基酸型氨基酸，需要對(duì)需要對(duì)這些異構(gòu)這些異構(gòu)體拆分；體拆分；酶促合成法酶促合成法也是酶工程在醫(yī)藥工也是酶工程在醫(yī)藥工業(yè)上應(yīng)用的一個(gè)內(nèi)容，優(yōu)點(diǎn)是技術(shù)工藝簡(jiǎn)業(yè)上應(yīng)用的一個(gè)內(nèi)容，優(yōu)點(diǎn)是技術(shù)工藝簡(jiǎn)單，轉(zhuǎn)化率高，副產(chǎn)

19、物少和易提純等。單，轉(zhuǎn)化率高，副產(chǎn)物少和易提純等。 氨基酸的分離方法：氨基酸的分離方法： 沉淀法沉淀法 吸附法吸附法 離子交換法離子交換法 沉淀法：沉淀法：根據(jù)形成沉淀的原理不同分為根據(jù)形成沉淀的原理不同分為兩種：一種是依據(jù)不同兩種：一種是依據(jù)不同氨基酸在水中氨基酸在水中或或其他溶劑中的溶解度差異其他溶劑中的溶解度差異進(jìn)行沉淀分離。進(jìn)行沉淀分離。另一是用另一是用特殊試劑沉淀特殊試劑沉淀某種氨基酸，如某種氨基酸，如用用鄰二甲苯鄰二甲苯-4-磺酸與亮氨酸磺酸與亮氨酸形成不溶性形成不溶性鹽沉淀，再用氨水分解，使亮氨酸游離鹽沉淀，再用氨水分解，使亮氨酸游離出來(lái)。出來(lái)。 吸附法：吸附法：這是利用吸附劑根

20、據(jù)氨基酸吸這是利用吸附劑根據(jù)氨基酸吸附力的差異進(jìn)行氨基酸分離的方法。苯附力的差異進(jìn)行氨基酸分離的方法。苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的分離就是利丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的分離就是利用活性炭對(duì)其吸附的原理。用活性炭對(duì)其吸附的原理。 離子交換法：離子交換法：氨基酸是兩性電解質(zhì)，在氨基酸是兩性電解質(zhì)，在一定一定pH條件下，不同氨基酸帶電性質(zhì)及條件下，不同氨基酸帶電性質(zhì)及解離狀態(tài)是不相同的，因此在離子交換解離狀態(tài)是不相同的，因此在離子交換劑上被吸附的強(qiáng)度不同。常用的離子交劑上被吸附的強(qiáng)度不同。常用的離子交換劑為強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，洗脫主換劑為強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，洗脫主要用要用pH梯度洗脫。梯度洗脫。主要是

21、蛋白質(zhì)分離（1）固相化金屬親和層析）固相化金屬親和層析(IMAC) IMAC是近十年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種親和層析是近十年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種親和層析技術(shù)。其原理是利用蛋白質(zhì)分子中的咪唑基技術(shù)。其原理是利用蛋白質(zhì)分子中的咪唑基和巰基與一些金屬元素和巰基與一些金屬元素(Cu2+、Zn2+等等)配位配位結(jié)合，使蛋白質(zhì)得到分離純化。該法比傳統(tǒng)結(jié)合，使蛋白質(zhì)得到分離純化。該法比傳統(tǒng)的的凝膠過(guò)濾一離子交換法凝膠過(guò)濾一離子交換法簡(jiǎn)單簡(jiǎn)單、省時(shí)，適于、省時(shí)，適于實(shí)驗(yàn)室規(guī)模純化。實(shí)驗(yàn)室規(guī)模純化。（2）超擴(kuò)散層析）超擴(kuò)散層析 這種層析所用介質(zhì)是這種層析所用介質(zhì)是Biosepra公司生產(chǎn)的公司生產(chǎn)的Hyper-D。該層析介

22、質(zhì)的顆粒由。該層析介質(zhì)的顆粒由剛性框架剛性框架結(jié)結(jié)構(gòu)中填充構(gòu)中填充官能化的軟凝膠組成官能化的軟凝膠組成。它兼?zhèn)?。它兼?zhèn)淞塑浤z的了軟凝膠的高上樣量高上樣量和普通剛性介質(zhì)的和普通剛性介質(zhì)的高高流速流速。 這種結(jié)構(gòu)可使層析操作在高流速下進(jìn)行而這種結(jié)構(gòu)可使層析操作在高流速下進(jìn)行而保證高上樣量和高分辨率，并且無(wú)反壓產(chǎn)保證高上樣量和高分辨率，并且無(wú)反壓產(chǎn)生生。Hyper-D具有化學(xué)隋性具有化學(xué)隋性?？捎盟釅A進(jìn)可用酸堿進(jìn)行再生和殺菌行再生和殺菌，可用于純化免疫球蛋白、，可用于純化免疫球蛋白、白蛋白、激素、酶、細(xì)胞培養(yǎng)或發(fā)酵產(chǎn)生白蛋白、激素、酶、細(xì)胞培養(yǎng)或發(fā)酵產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。適用于實(shí)驗(yàn)室小試直至工業(yè)化的蛋白質(zhì)

23、。適用于實(shí)驗(yàn)室小試直至工業(yè)化大生產(chǎn)。大生產(chǎn)。(3) 灌注層析灌注層析 1987年由年由Regnier等人發(fā)明的等人發(fā)明的灌注填料技灌注填料技術(shù)術(shù)使快速分離純化生物大分子得以實(shí)現(xiàn)。使快速分離純化生物大分子得以實(shí)現(xiàn)。1989年與之相配套的灌注系統(tǒng)年與之相配套的灌注系統(tǒng)(BioCAD workstation)問(wèn)世，給微生物制藥領(lǐng)域的問(wèn)世，給微生物制藥領(lǐng)域的科學(xué)家提供了強(qiáng)有力的工具，給生物制藥科學(xué)家提供了強(qiáng)有力的工具，給生物制藥業(yè)帶來(lái)了突破性的進(jìn)展。業(yè)帶來(lái)了突破性的進(jìn)展。 它所采用的它所采用的POROUS介質(zhì)以苯乙烯基二乙介質(zhì)以苯乙烯基二乙烯基苯的聚合物構(gòu)成，為雙模式孔結(jié)構(gòu)，烯基苯的聚合物構(gòu)成，為雙模

24、式孔結(jié)構(gòu)，在介質(zhì)上有在介質(zhì)上有80150nm的的擴(kuò)散孔擴(kuò)散孔和和600800nm的的貫穿孔貫穿孔。它允許液體對(duì)流到分離。它允許液體對(duì)流到分離介質(zhì)的內(nèi)表面，從而大大加快了分離速度。介質(zhì)的內(nèi)表面，從而大大加快了分離速度。灌注層析系統(tǒng)可有效、快速地純化各種蛋灌注層析系統(tǒng)可有效、快速地純化各種蛋白質(zhì)、多肽、核酸等生物大分子。白質(zhì)、多肽、核酸等生物大分子。 它比傳統(tǒng)柱快它比傳統(tǒng)柱快l0100倍，分析一個(gè)樣品只倍，分析一個(gè)樣品只需要需要0.53min。日本制藥公司。日本制藥公司Otsuka使使用博大生物技術(shù)公司的用博大生物技術(shù)公司的POROS-50介質(zhì)和介質(zhì)和大生產(chǎn)規(guī)模系統(tǒng)大生產(chǎn)規(guī)模系統(tǒng)(autopilot)生產(chǎn)單克隆抗體，生產(chǎn)單克隆抗體，從從32