分子生物學(xué)復(fù)習(xí)資料終結(jié)版

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上1 緒論1.1 分子生物學(xué)的基本概念分子生物學(xué)-廣義：在分子水平上研究生命現(xiàn)象，或用分子的術(shù)語(yǔ)描述生物現(xiàn)象的學(xué)科。 狹義：核酸與蛋白質(zhì)水平上研究基因的復(fù)制，基因的表達(dá)（包括RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)翻譯），基因表達(dá)的調(diào)控以及基因的突變與交換的分子機(jī)制。序列假說(shuō)：核酸片段的特異性，完全由其堿基序列決定，而且這種序列是一種蛋白質(zhì)氨基酸的密碼中心法則：DNA的遺傳信息經(jīng)RNA一旦進(jìn)入蛋白質(zhì)，也就不可能再行輸出。三大原則：、構(gòu)成生物大分子的單體是相同的； 、生物大分子單體的排列決定了不同生物性狀的差異和個(gè)體特征； 、所有生物遺傳信息表達(dá)的中心法則是相同的分子生物學(xué)是研究細(xì)胞內(nèi)大分子的

2、結(jié)構(gòu)、功能和相互作用特點(diǎn)和規(guī)律，并通過(guò)這些規(guī)律認(rèn)識(shí)生命現(xiàn)象的一門科學(xué)。1.2 分子生物學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史細(xì)胞學(xué)說(shuō)：（1）以下3點(diǎn)是必修一上的內(nèi)容：a細(xì)胞是一個(gè)有機(jī)體，一切動(dòng)植物都由細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，并由細(xì)胞和細(xì)胞產(chǎn)物所組成。b細(xì)胞是一個(gè)相對(duì)獨(dú)立的單位，既有它自己的生命，又對(duì)與其他細(xì)胞共同組成的整體的生命起作用。c新細(xì)胞可以從老細(xì)胞中產(chǎn)生。（2）以下7點(diǎn)是百度到的內(nèi)容：a.細(xì)胞是有機(jī)體，一切動(dòng)植物都是由單細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，并由細(xì)胞和細(xì)胞產(chǎn)物所構(gòu)成；b.所有細(xì)胞在結(jié)構(gòu)和組成上基本相似；c.新細(xì)胞是由已存在的細(xì)胞分裂而來(lái)；d. 生物的疾病是因?yàn)槠浼?xì)胞機(jī)能失常；e. 細(xì)胞是生物體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位；f 生物體是通

3、過(guò)細(xì)胞的活動(dòng)來(lái)反映其功能的；g. 細(xì)胞是一個(gè)相對(duì)獨(dú)立的單位，既有他自己的生命，又對(duì)于其他細(xì)胞共同組成的整體的生命起作用。正向遺傳學(xué)：在不知道基因化學(xué)本質(zhì)的前提下，僅依靠表型突變體在世代間的傳遞規(guī)律來(lái)研究基因的特征和染色體上的位置，描述基因突變和染色體的改變，分析它們對(duì)生物形態(tài)和生理特征所產(chǎn)生的效應(yīng)。反向遺傳學(xué)：通過(guò)轉(zhuǎn)基因辦法來(lái)確定某一基因的功能。George Beadle和Edward Tatum提出“一個(gè)基因一個(gè)酶”假說(shuō)Avery圍繞肺炎鏈球菌的成就第一個(gè)動(dòng)搖了“基因是蛋白質(zhì)”的理念，為“DNA是遺傳物質(zhì)”的理論建立奠定了基礎(chǔ)Chargaff 法則：A+C=T+GNirenberg在一周內(nèi)破

4、解了第一個(gè)遺傳密碼：UUU苯丙氨酸Jacob和Monod發(fā)現(xiàn)乳糖操縱子模型Pardee，Jacob，Monod命名的“Pa-Ja-Mo”實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：基因通過(guò)一種RNA嚴(yán)格地控制著蛋白質(zhì)的合成。這種RNA被命名為“信使RNA”操縱子模型：幾個(gè)結(jié)構(gòu)基因可以同時(shí)被一個(gè)調(diào)節(jié)基因控制，并組合在一起形成“操縱子”的結(jié)構(gòu)，它們從“啟動(dòng)子”的序列開(kāi)始轉(zhuǎn)錄成一條單一的mRNA分子。操縱子模型將基因劃分為調(diào)控基因和結(jié)構(gòu)基因利用限制性內(nèi)切酶EcoR1和連接酶獲得了一個(gè)既含SV40的原癌基因，又含有噬菌體DNA片段的人工重組DNA分子?？茖W(xué)史將這一工作標(biāo)志為“遺傳工程”的開(kāi)始。Mullis多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)

5、。定義PCR是一項(xiàng)“晚熟”的技術(shù)，定義PCR是一項(xiàng)“簡(jiǎn)單”的技術(shù)。從嗜熱水生菌（Taq）中成功提取的耐熱性的DNA聚合酶。1.3 現(xiàn)代分子生物學(xué)的發(fā)展將具有內(nèi)含子與外顯子相間閣排列的基因定義為“間隔基因”和“斷裂基因”。“斷裂基因”被譽(yù)為一次“小革命”。1997-朊蛋白的發(fā)現(xiàn)與遺傳機(jī)制；2001-細(xì)胞周期的調(diào)控；2002-細(xì)胞程序性死亡的機(jī)制的揭示；2005人類幽門螺旋桿菌的發(fā)現(xiàn)與功能證實(shí)；2006-細(xì)胞內(nèi)RNA干涉現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用。分子細(xì)胞生物學(xué)、分子遺傳學(xué)、分子病理學(xué)、分子免疫學(xué)、分子神經(jīng)生物學(xué)等“分子化”的生物學(xué)學(xué)科形成。2 基因概念的演變與發(fā)展2.1早期的“基因”概念1融合遺傳理論：這

6、一理論認(rèn)為，父本精液與母本胚胎中的體液融合后，傳遞給后代并控制子代個(gè)體的性狀表現(xiàn)。21809年jean-baptiste de lamaarck 提出“獲得性遺傳理論”31866年 chaeles robert darwin 提出“泛生論”4weismann.是第一個(gè)通過(guò)切除尾巴實(shí)驗(yàn)的證據(jù)否定了“泛生論”假說(shuō)的科學(xué)家。并于1885年提出了著名的遺傳物質(zhì)的“種質(zhì)論”。 Weismann認(rèn)為多細(xì)胞生物可分為“體質(zhì)”和“種質(zhì)”。2.2經(jīng)典的基因概念1孟德?tīng)柼岢隽诉z傳因子，1909年丹麥遺傳學(xué)家johannsen創(chuàng)造了基因“gene”單詞來(lái)表達(dá)孟德?tīng)柕摹斑z傳因子”2經(jīng)典的基因概念：即基因是孤立的排列在

7、染色體上的實(shí)體（不再是代表某種性狀的抽象符號(hào)A a B b.）是具有特定功能。能獨(dú)立發(fā)生突變和遺傳交換的“三位一體”的、最小的遺傳單位。3基因具有劑量效應(yīng)，位置效應(yīng)。4基因（也即順?lè)醋樱┦侨旧w上的一個(gè)片段，在一個(gè)順?lè)醋觾?nèi)有若干個(gè)交換單位，最小的交換單位被稱為交換子。最小的突變單位被稱為突變子，5在同一基因座位中，同一突變位點(diǎn)向不同方向發(fā)生突變所形成的等位基因稱為全同等位基因，在同一基因座位中，不同突變位點(diǎn)發(fā)生突變所形成的等位基因稱為非全同等位基因，6人類kuru病和牛海綿狀腦炎（瘋牛?。┑膫魅拘圆≡鞍最w粒。阮病毒的繁殖是將自身PrPcs蛋白（Mr2700030000）結(jié)構(gòu)信息通過(guò)與正常膜蛋

8、白PrPc（Mr3300035000）結(jié)合，在分子伴侶的輔助下，傳遞給PrPc并將其轉(zhuǎn)化為PrPcs的過(guò)程。Piusiner不僅因此獲得了1997年的諾貝爾獎(jiǎng)，而且也結(jié)束了蛋白質(zhì)是否是遺傳物質(zhì)的爭(zhēng)論。2.3基因的分子結(jié)構(gòu)1、RNA與DNA在結(jié)構(gòu)上的差異主要表現(xiàn)在：（1）核苷中德核糖為2位非脫氧OH基。（2）堿基中沒(méi)有胸腺嘧啶T只有尿嘧啶U（3）RNA分子多為單鏈分子（4）RNA分子化學(xué)穩(wěn)定性較差，易發(fā)生降解（5）在以DNA分子為主要遺傳物質(zhì)的生物中，DNA分子鏈長(zhǎng)，數(shù)目少，RNA分子鏈短，數(shù)目多，2、DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的模型，揭示了DNA分子是由兩條反向平行的多多聚核苷酸鏈組成，磷酸骨架主鏈位于

9、螺旋的外緣，A/T,G/C以氫鍵方式連接形成的堿基對(duì)堆積在螺旋內(nèi)部，向右盤旋的B-雙螺旋棒狀實(shí)體。其主要結(jié)構(gòu)特征如下： 1脫氧核苷酸之間是通過(guò)3，5-膦酸二酯鍵將脫氧核糖5位和3位連接，形成螺旋體的磷酸骨架。 2多聚核苷酸鏈間形成氫鍵的前提是具有為共價(jià)鍵束縛的氫原子和受體原子，并能滿足堿基之間按氫鍵互補(bǔ)配對(duì)的方式，形成直徑2.0nm的螺旋體。 3.雙螺旋中任一條核苷酸鏈繞縱軸旋轉(zhuǎn)360°所升降的螺距為3.4nm。其中包含有10個(gè)堿基對(duì)，每對(duì)堿基對(duì)之間相距0.34nm,相對(duì)于螺旋縱軸上升或下降了36°。 4.由于從螺旋軸心到兩條磷酸骨架主鏈所劃分的兩個(gè)扇形不等，一個(gè)大于180

10、°，一個(gè)小于180°，形成大溝，小溝。大溝往往是基因表達(dá)調(diào)控的重要位點(diǎn)。3、影響雙螺旋結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的因素 （1）氫鍵；（2）磷酸酯鍵；（3）電荷；（4）堿基堆積力（5）堿基對(duì)之間的擠壓、抵御可以使DNA分子的內(nèi)能增加，破壞穩(wěn)定。4、DNA分子的兩條核苷酸鏈?zhǔn)怯蓧A基對(duì)之間氫鍵連接的，當(dāng)天然DNA的溶液被加熱或受到極端pH溶劑、尿素、酰胺等某些有機(jī)試劑的處理后，堿基對(duì)之間的氫鍵會(huì)發(fā)生斷裂，或氫鍵的形成關(guān)系發(fā)生改變，或堿基間的堆積力受到破壞，兩條核苷酸鏈便逐漸彼此分離，形成無(wú)規(guī)則的線團(tuán)，這一過(guò)程成為變性5、已發(fā)生變性的DNA溶液在逐漸降溫的條件下，兩條核苷酸鏈的配對(duì)堿基間又重新形成氫

11、鍵，恢復(fù)到天然DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，這一過(guò)程稱為復(fù)性6、堿基中的嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)對(duì)260nm的紫外線具有強(qiáng)烈的吸收特征值。7、當(dāng)在進(jìn)行DNA熱變性研究時(shí)，這種隨溫度升高單鏈狀態(tài)的DNA分子不斷增加而表現(xiàn)出A260值遞增的效應(yīng)被定義為堿基的增色效應(yīng)或DNA的減色效應(yīng)。8、.Tm值：通過(guò)對(duì)不同DNA分子變性S曲線的分析，將增色效應(yīng)達(dá)到最大值一半的溫度定義為該DNA分子的變性溫度或Tm值9、影響DNA分子熱變性Tm值的主要因素 （1）DNA分子的堿基組成：G+C含量越高的DNA分子，Tm值也越大；（2）DNA分子的堿基排列；（3）DNA片段的大??；（4）變性劑的影響；（5）鹽濃度：Na+濃度越高，DNA

12、分子的穩(wěn)定性越高，Tm值越大；（6）pH。10、影響DNA分子復(fù)性的因素 （1）Na+濃度；（2） 溫度；（3）長(zhǎng)度；（4）濃度；（5）核苷酸的排列或核苷酸序列的復(fù)雜性2.4核酸分子的空間結(jié)構(gòu)1、DNA分子二級(jí)結(jié)構(gòu)的形態(tài)：線型（L型），環(huán)型（C型），分支型（B型），叉型（Y型），置換型（D型），發(fā)夾型（H型），紐結(jié)型（K型），環(huán)突型（R型）。2、三股螺旋DNA分子的種類：（1）分子內(nèi)的三股螺旋DNA（2）分子間的三股螺旋DNA（3）平行三股螺旋DNA。3、 三股螺旋DNA分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：第三條鏈上的核苷酸與WatsonCrick堿基對(duì)之間的連接氫鍵被稱為Hoogsteen氫鍵4、三股螺旋的生物

13、學(xué)意義：阻止調(diào)節(jié)蛋白的結(jié)合，從而關(guān)閉基因的表達(dá)。是基因表達(dá)調(diào)控的機(jī)制之一也是RNA分子參與表觀遺傳調(diào)節(jié)的機(jī)制之一?？梢宰鳛榉肿拥秾?shí)施DNA的定點(diǎn)切割。5、四股螺旋由4條核苷酸鏈組成。其功能為：起到穩(wěn)定染色體結(jié)構(gòu)，避免線狀染色體DNA在復(fù)制過(guò)程中出現(xiàn)的5端短縮的重要生物學(xué)意義。6、.轉(zhuǎn)座子的遺傳效應(yīng)：（1）誘變效應(yīng) （2）切除效應(yīng) （3）雙轉(zhuǎn)座效應(yīng) （4）位置效應(yīng)（5）轉(zhuǎn)座爆炸7、轉(zhuǎn)座因子的應(yīng)用：利用轉(zhuǎn)座子的插入突變效應(yīng)，研究基因的結(jié)構(gòu)和功能區(qū)；利用轉(zhuǎn)座子分離克隆基因；利用轉(zhuǎn)座子進(jìn)行插入突變位點(diǎn)的擴(kuò)增，利用Tn進(jìn)行基因定位；利用IR作為基因轉(zhuǎn)移載體等。特別是生物學(xué)進(jìn)入后基因組時(shí)代，利用轉(zhuǎn)座子構(gòu)建

14、大型突變體庫(kù)，為反向遺傳學(xué)研究，功能基因的克隆與功能研究提供了重要的技術(shù)平臺(tái)8、假基因：指具有與功能基因相似的序列，但不能翻譯有功能蛋白質(zhì)的無(wú)功能基因。往往存在于真核生物的多基因家族中。9、.假基因的分類：（1）功能基因累積突變型 （2）加工假基因2.4.3 DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)1、溴化乙錠：具有扁平分子結(jié)構(gòu)，分子可以插入到DNA中，在紫外線的激發(fā)下，可以產(chǎn)生紅光，因此拓?fù)洚悩?gòu)酶成為分子生物學(xué)研究中常用的DNA燃料。2、原核生物中的拓?fù)洚悩?gòu)酶主要有兩種，拓?fù)洚悩?gòu)酶是由TopA基因編碼的單聚體蛋白，異構(gòu)酶是由gyrA，graB兩個(gè)基因編碼的，亞基構(gòu)建的異源四聚體蛋白。拓?fù)洚悩?gòu)酶在原核生物中稱為酶，在

15、真核生物中稱為切縫酶，當(dāng)拓?fù)涿笇?duì)單鏈DNA作用一次，使L增加1，W也增加1，即消除一個(gè)DNA負(fù)超螺旋。拓?fù)洚悩?gòu)酶在原核生物中稱為螺旋酶或旋轉(zhuǎn)酶。拓?fù)涿该孔饔靡淮危闺p鏈DNA的L減少2，從而引入兩個(gè)負(fù)超螺旋。2.5基因概念的多樣性2.5.1生物進(jìn)化的C值矛盾1、大C值：分子生物學(xué)將某生物單倍體基因組DNA的核苷酸數(shù)定義為大C值。2、小c值：將受中心法則限定，編碼結(jié)構(gòu)基因DNA的核苷酸數(shù)定義為小c值。3、C值矛盾：生物基因組的大小同生物在進(jìn)化上所處地位的高低沒(méi)有絕對(duì)的相關(guān)性，這種現(xiàn)象稱為C值矛盾。體現(xiàn)為：C值不隨生物的進(jìn)化程度和復(fù)雜性而增加,如肺魚的C值為112.2G，而人的是3.2G，與牛相近

16、。 親緣關(guān)系密切的生物C值相差甚大，如豌豆為14，而蠶豆為2。高等真核生物具有比用于表達(dá)高得多的C值，如人的染色體組DNA含量在理論上包含300萬(wàn)個(gè)基因，但實(shí)際有用途的基因只有4萬(wàn)左右。2.5.3.3重復(fù)序列的種類1、重復(fù)序列的DNA可人為的劃分為中度重復(fù)序列和高度重復(fù)序列。 中度重復(fù)序列：將每一重復(fù)單位的序列長(zhǎng)度為0.1 1kb，每一基因組有1010000拷貝，C0t（1/2）值為0.0010.1的組分劃歸為中度重復(fù)序列。真核生物中的rDNA,tDNA及組蛋白基因均屬于中度重復(fù)基因。Alu序列家族是靈長(zhǎng)類動(dòng)物特有的一種成員眾多，功能還不十分明了的中度重復(fù)序列。 高度重復(fù)序列：將每一重復(fù)單位的

17、序列長(zhǎng)度為2 10bp，每一基因組有105106拷貝，C0t（1/2）值小于0.001的組分劃歸為高度重復(fù)序列。2.5.3.4重復(fù)序列的形成1、重復(fù)序列形成的原因：滾環(huán)擴(kuò)增突變：推測(cè)中度重復(fù)序列rDNA通過(guò)滾環(huán)方式不斷形成串聯(lián)重復(fù)的拷貝，隨后插入到基因組的DNA分子中，并在進(jìn)化中發(fā)生突變，形成重復(fù)家族中的相似成員。反轉(zhuǎn)座插入：類似于Alu家族形成的機(jī)制一樣，轉(zhuǎn)錄的RNA分子經(jīng)反轉(zhuǎn)錄形成cDNA，再以轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座方式插入到基因組內(nèi)，形成序列的重復(fù)。跳躍復(fù)制不對(duì)稱交換2.5.4.1間隔基因的發(fā)現(xiàn)與證實(shí)1、hnRNA：間隔基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA是一條具有外顯子和內(nèi)涵字的前體mRNA，也稱核內(nèi)不均一RN

18、A（hnRNA）。2、R環(huán)：R環(huán)是間隔基因的典型結(jié)構(gòu)特征。即當(dāng)一條RNA分子與其雙鏈DNA分子中的一條互補(bǔ)鏈配對(duì)，同時(shí)將另一條DNA鏈排除而形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)被稱為R環(huán)。2.5.4.2間隔基因存在的普遍性1、斷裂基因的概念：也具有相對(duì)性:內(nèi)含子并非“含而不露”，比如酵母細(xì)胞色素b的基因的內(nèi)含子也編碼一個(gè)成熟酶?！蓖怙@子并非“表里如一”，人類尿激酶原基因外顯子不編碼氨基酸序列。并非真核生物所有的結(jié)構(gòu)基因均為斷裂基因，如Histone基因家族、Interfaron基因和酵母中多數(shù)基因。2.5.4.4間隔基因在進(jìn)化中的意義1、間隔基因在進(jìn)化中的意義？有利于生物遺傳的相對(duì)穩(wěn)定增加變異概率，有利于生物的進(jìn)化

19、擴(kuò)大生物體的遺傳信息儲(chǔ)量利用內(nèi)含子進(jìn)行代謝調(diào)節(jié)（P65 274圖）2.5.5跳躍基因或轉(zhuǎn)座子1、將一個(gè)特定遺傳結(jié)構(gòu)的片段從一個(gè)位點(diǎn)轉(zhuǎn)移到另一個(gè)位點(diǎn)的過(guò)程。所以也將這個(gè)能發(fā)生轉(zhuǎn)座的獨(dú)立遺傳結(jié)構(gòu)單位稱為“跳躍基因”。2、可以轉(zhuǎn)座的遺傳單位稱為“可轉(zhuǎn)座的因子”或“轉(zhuǎn)座子”。轉(zhuǎn)座子是基因組上可以移動(dòng)的一段DNA序列3、一個(gè)轉(zhuǎn)座子從基因組的一個(gè)位置轉(zhuǎn)移到另一個(gè)位置的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)座。4、原核生物的轉(zhuǎn)座子有：插入序列（IS）、轉(zhuǎn)座因子A家族(InA)、復(fù)合型轉(zhuǎn)座子、轉(zhuǎn)座噬菌體，它們多為復(fù)制型轉(zhuǎn)座子。5、真核生物的轉(zhuǎn)座子分為剪貼式轉(zhuǎn)座因子和反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子。3 DNA的復(fù)制3.1 DNA復(fù)制的基本特征3.1.1 D

20、NA的半保留復(fù)制DNA的半保留復(fù)制：DNA復(fù)制過(guò)程中親代DNA的雙鏈分子彼此分離，作為模板，按A T配對(duì)，C G配對(duì)的原則，合成兩條新生子鏈，這種方式為半保留復(fù)制。3.1.2 DNA復(fù)制按53延伸方向1、DNA聚合酶I、DNA聚合酶II、DNA聚合酶III的作用DNA聚合酶：有5 3聚合酶活性、有3 5外切核酸酶活性、有5 3外切核酸酶活性、有內(nèi)切核酸酶活性、有切刻轉(zhuǎn)移活性，是單鏈多肽，可催化單鏈或雙鏈DNA 的延長(zhǎng)。1.能催化單個(gè)脫氧核糖核苷酸連接到DNA鏈的3'端.2.能沿5'端到3'端方向外切DNA，切除修復(fù)作用(切除引物)3.能沿3'端到5'端方

21、向外切DNA，校對(duì)作用(糾錯(cuò),或者說(shuō)DNA損傷的恢復(fù))。DNA聚合酶：有5 3聚合酶活性、有3 5外切核酸酶活性，與低分子鏈的延長(zhǎng)有關(guān)。1.發(fā)揮作用需要鎂離子和銨根離子存在2.同樣能參與DNA聚合酶1參與的反應(yīng),但聚合活性低3.能沿3'端到5'端方向外切DNADNA聚合酶：DNA復(fù)制的主要聚合酶，有5 3聚合酶活性、有3 5外切核酸酶活性、有5 3外切核酸酶活性，在細(xì)胞中存在的數(shù)目不多，是促進(jìn)DNA鏈延長(zhǎng)的主要酶。1.主要負(fù)責(zé)DNA鏈的延伸2.能沿3'端到5'端方向外切DNA2、為什么DNA復(fù)制的方向?yàn)?3？（見(jiàn)作業(yè)本）3.1.4 DNA復(fù)制的起點(diǎn)、方向oriC

22、區(qū)（復(fù)制起點(diǎn)區(qū)）具有富含AT和回文對(duì)稱的序列，這種特殊的結(jié)構(gòu)與復(fù)制起點(diǎn)區(qū)易于解鏈以發(fā)動(dòng)DNA復(fù)制（形成“呼吸現(xiàn)象”）和促進(jìn)聚合酶與DNA結(jié)合的功能是高度統(tǒng)一的。大多數(shù)原核生物DNA復(fù)制是一個(gè)起點(diǎn)，雙方向進(jìn)行的。真核生物DNA復(fù)制也是雙方向進(jìn)行的，但在一條染色體上有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)，即表現(xiàn)為多復(fù)制子。3.1.5 DNA復(fù)制的引物DNA復(fù)制的引物：DNA復(fù)制的起始必須先期合成一段引物分子，研究表明無(wú)論是原核生物還是真核生物，大多數(shù)的引物分子是一段長(zhǎng)度不等的，一般為10個(gè)核苷酸左右的RNA分子。引發(fā)酶，引發(fā)體：在E.coli中合成岡崎片段引物分子的RNA聚合酶由dnaG基因編碼，這種RNA聚合酶也稱為引

23、發(fā)酶。在DNA復(fù)制過(guò)程中，引發(fā)酶往往與其他相關(guān)酶類結(jié)合在一起形成引發(fā)體。引物分子為DNA聚合酶III合成DNA分子提供了啟動(dòng)聚合的3-OH末端。無(wú)論是前導(dǎo)鏈還是后隨鏈的引物均為RNA分子，當(dāng)DNA復(fù)制完成后，必須將RNA引物分子講解。klenow片段：相對(duì)分子質(zhì)量為103×103的DNA聚合酶I經(jīng)枯草桿菌蛋白酶處理后，C端形成相對(duì)分子質(zhì)量為68×103的大片段，N端形成相對(duì)分子質(zhì)量為35×103的小片段，大片段具有從5向3方向的聚合DNA功能和從3向5的外切校正功能，但效率較低，也稱為klenow片段。小片段具有從5向3方向的外切核酸酶功能。3.1.7 DNA復(fù)制

24、的模式3.1.7.1 新起始方式或復(fù)制叉式過(guò)程：（適用原核與真核生物）DNA復(fù)制的新起始方式是環(huán)狀和線狀DNA復(fù)制的主要方式，其主要特點(diǎn)是：每次復(fù)制的起始均從一個(gè)固定復(fù)制起點(diǎn)開(kāi)始，轉(zhuǎn)錄激活作用使雙鏈DNA開(kāi)鏈，啟動(dòng)前導(dǎo)鏈的連續(xù)復(fù)制并在兩個(gè)方向形成復(fù)制叉，后隨鏈按不連續(xù)方式合成岡崎片段。在完成一個(gè)周期的復(fù)制后，下一輪的復(fù)制又會(huì)從起始原點(diǎn)開(kāi)始發(fā)動(dòng)新一輪的復(fù)制。環(huán)狀DNA半保留復(fù)制的方式也稱為型復(fù)制。真核生物線狀DNA含有多個(gè)復(fù)制子（從起點(diǎn)到終點(diǎn)的獨(dú)立的復(fù)制單位）每一個(gè)復(fù)制子的每一輪復(fù)制也均是從一個(gè)起始原點(diǎn)開(kāi)始，兩個(gè)復(fù)制叉分別向兩邊展開(kāi)，所以真核生物的復(fù)制也屬這一類型。3.1.7.2 滾環(huán)方式或共價(jià)

25、延伸方式過(guò)程：（病毒、細(xì)菌因子）1、滾環(huán)復(fù)制的起始點(diǎn)是在RF型DNA分子的正鏈（+）上形成一個(gè) 切口，當(dāng)有3末端外露，5末端游離后以另一個(gè)單環(huán)負(fù)鏈（）為模板開(kāi)始啟動(dòng)新生正鏈的前導(dǎo)鏈合成，游離的5端按岡崎片段方式啟動(dòng)后隨鏈的合成。新生正鏈與親本正鏈總是連接在一起。2、隨著模板鏈的滾動(dòng)，新生正鏈不斷在3末端延伸，因?yàn)橐卜Q這種方式為共價(jià)延伸方式，當(dāng)其完全游離出親兵單環(huán)負(fù)鏈后，它自身又作為模板鏈按不連續(xù)方式合成岡崎片段。實(shí)際上以親本負(fù)鏈為模板滾動(dòng)復(fù)制的新生正鏈在游離出滾環(huán)后，會(huì)立即作為正鏈模板合成新生負(fù)鏈。經(jīng)過(guò)多輪的滾動(dòng)，合成出的雙鏈DNA分子式多個(gè)基因組串聯(lián)在一起形成的多聯(lián)體，后經(jīng)切割才形成單體分子

26、。（圖3-20 P105）由于滾環(huán)復(fù)制的DNA圖形看似“”，所以有時(shí)又稱為型復(fù)制。3、滾環(huán)復(fù)制前導(dǎo)鏈的啟動(dòng)不需要引物，也不需要轉(zhuǎn)錄激活，直接在3OH端切口上啟動(dòng)復(fù)制。整個(gè)復(fù)制過(guò)程中只有一個(gè)復(fù)制叉，也稱為單向復(fù)制。噬菌體和真核生物的rDNA的擴(kuò)增也是采用這種滾環(huán)復(fù)制的方式。3.1.7.3 置換式或D環(huán)方式過(guò)程：（線粒體和葉綠體DNA的復(fù)制方式）共生學(xué)說(shuō)理論認(rèn)為真核生物線粒體源于原核生物，其DNA也是環(huán)形的，但其復(fù)制卻采用“置換式”進(jìn)行。線粒體雙鏈DNA分子中有兩個(gè)復(fù)制起始原點(diǎn)，分別位于兩條極性單鏈上，而且相距較遠(yuǎn)。復(fù)制啟動(dòng)時(shí)，在轉(zhuǎn)錄激活作用下，首先在重鏈（H鏈）的復(fù)制原點(diǎn)處形成復(fù)制泡，從5向3的

27、方向，單方向啟動(dòng)并連續(xù)地復(fù)制前導(dǎo)鏈（新生輕鏈，L鏈），同時(shí)將另一條親代輕鏈排除或置換，形成三鏈泡狀的D環(huán)結(jié)構(gòu)。當(dāng)前導(dǎo)鏈復(fù)制到達(dá)第二個(gè)復(fù)制原點(diǎn)處時(shí)，以親代輕鏈為模板，按相反的方向連續(xù)地復(fù)制后隨鏈（新生重鏈，H鏈）。最后合成出兩個(gè)環(huán)狀DNA分子（圖3-21 P106）。3.1.8 DNA復(fù)制體的結(jié)構(gòu)與復(fù)制的回環(huán)模型復(fù)制體：DNA的復(fù)制是由多種酶類共同參與的一個(gè)復(fù)雜的酶促反應(yīng)過(guò)程，而且包括DNA聚合酶，DNA聚合酶，引物的引發(fā)酶，DNA解旋酶，單鏈結(jié)合蛋白，連接酶等在體內(nèi)的如此眾多的酶分子均集中在復(fù)制叉處組成一個(gè)復(fù)合體協(xié)同互作，共同完成DNA分子的復(fù)制過(guò)程，這種復(fù)合體稱為復(fù)制體。3.1.9 線形DN

28、A復(fù)制避免5端短縮的方式腺病毒-2如何保持末端不短縮？（見(jiàn)作業(yè)本）3.2 真核生物DNA復(fù)制的特點(diǎn)3.2.3 真核生物避免5短縮的機(jī)制3.2.3.1 真核生物染色體末端的特異結(jié)構(gòu)端粒端粒：以線性DNA線性染色體存在的真核基因組DNA末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)叫端粒，它的結(jié)構(gòu)是G4T2，僅存在于真核細(xì)胞染色體的末端。端粒酶：一種反轉(zhuǎn)錄酶，由蛋白質(zhì)和RNA兩部分組成核糖蛋白復(fù)合體，其中RNA是一段模板序列，指導(dǎo)合成端粒DNA的重復(fù)序列片段。3.2.3.2 真核生物的端粒酶與避免5端短縮的機(jī)制真核生物染色體DNA復(fù)制過(guò)程避免5端短縮的機(jī)制（見(jiàn)作業(yè)本）4 RNA的轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄：是DNA遺傳信息的表達(dá)的第一步，

29、它是在RNA聚合酶的作用下，以雙鏈DNA中的一條單鏈作為轉(zhuǎn)錄的模版，按A-U和C-G配對(duì)原則合成RNA的過(guò)程。RNA的轉(zhuǎn)錄包括起始，延伸，終止3個(gè)過(guò)程。轉(zhuǎn)錄單位：從啟動(dòng)子到終止子的序列稱為轉(zhuǎn)錄單位。原核生物中的轉(zhuǎn)錄單位多為多順?lè)醋?，真核生物中的轉(zhuǎn)錄單位為單順?lè)醋?。核?nèi)不均一RNA：間隔基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA是一條具有外顯子和內(nèi)含子的前體mRNA稱為核內(nèi)不均一RNA，前體mRNA必須將內(nèi)含子剪除并將外顯子連接才能成為翻譯模版的成熟mRNA。小分子RNA：存在于真核生物和中，在RNA加工過(guò)程中需要多種蛋白質(zhì)因子和小分子RNA的參與。小分子RNA通常與蛋白質(zhì)組成復(fù)合物, 在細(xì)胞的生命活動(dòng)中起重要的作

30、用, 某些snRNPs和剪接作用密切相關(guān)。4.1轉(zhuǎn)錄的基本概念模板鏈：雙鏈DNA轉(zhuǎn)錄時(shí)，只以其中一條鏈為模板，這條鏈與轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA互補(bǔ)，且其極性方向是35，是不編碼氨基酸的排列順序的鏈。有義鏈也稱編碼鏈：與轉(zhuǎn)錄物非互補(bǔ)的DNA鏈稱為有義鏈，也稱為編碼鏈，有義鏈DNA的極性方向與RNA鏈相同，均為5-3，而且RNA鏈上的核苷酸序列與模板鏈DNA相同。不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄：轉(zhuǎn)錄只以DNA的一條鏈為模版，這意味著轉(zhuǎn)錄是不對(duì)稱的，不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄有兩重含義：一是指雙鏈DNA只有一股單鏈用作模板，二是指同一單鏈上可以交錯(cuò)出現(xiàn)模板鏈和編碼鏈。RNA轉(zhuǎn)錄時(shí)，一個(gè)轉(zhuǎn)錄子內(nèi)是只轉(zhuǎn)錄一條鏈的DNA上的信息，表現(xiàn)為不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄。4

31、.2轉(zhuǎn)錄的起始啟動(dòng)子：是指DNA分子上被RNA聚合酶、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子等識(shí)別并結(jié)合形成起始轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的區(qū)域 ，它還包括一些調(diào)節(jié)蛋白因子的結(jié)合位點(diǎn)。啟動(dòng)子是控制轉(zhuǎn)錄的起始序列，它決定著某一基因轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)、表達(dá)的強(qiáng)度等。與RNA酶親和力高的起始頻率和效率均較高被定義為強(qiáng)啟動(dòng)子。遠(yuǎn)上游序列：主要有增強(qiáng)子、沉默子，這類特殊的順式元件不直接與RNA酶發(fā)生互作，它們通過(guò)與其他蛋白質(zhì)結(jié)合后，激活或阻止RNA酶對(duì)結(jié)構(gòu)基因的啟動(dòng)，它們負(fù)責(zé)對(duì)特殊基因的誘導(dǎo)表達(dá)。原核啟動(dòng)子-10和-35的保守序列：-35區(qū)Sextama盒 -10區(qū)Pribnow盒TTGAC-1520bp- TATAAT-58bp-起始位點(diǎn)真核生物

32、的啟動(dòng)子：三種RNA聚合酶對(duì)應(yīng)三種啟動(dòng)子RNA聚合酶的啟動(dòng)子由核心啟動(dòng)子和在起點(diǎn)5上游100bp左右的控制區(qū)域兩部分組成。負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄rRNA，其rDNA只有一種啟動(dòng)子。RNA聚合酶負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)基因mRNA及部分snRNA啟動(dòng)子基本元件包括：?jiǎn)?dòng)子上游元件：GC島 CAAC/T盒核心啟動(dòng)子：TATA盒（-30）、帽子位點(diǎn)（+1）RNA聚合酶負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄包括tDNA在內(nèi)的多編碼小RNA的基因。啟動(dòng)子分為分為三類，其中型啟動(dòng)子用于scRNA的基因轉(zhuǎn)錄。4.2.3 RNA聚合酶原核生物的RNA聚合酶的組成等詳見(jiàn)作業(yè)本：原核生物RNA轉(zhuǎn)錄的過(guò)程： RNA的轉(zhuǎn)錄合成類似于DNA的復(fù)制，都以DNA為模板；以聚合酶

33、催化核苷酸之間生成磷酸二酯鍵；都從5至3方向延伸成多聚核苷酸；都遵從堿基配對(duì)規(guī)律。但由于復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的目的不同，轉(zhuǎn)錄又具有自己的特點(diǎn)。RNA的轉(zhuǎn)錄過(guò)程大體可分為起始、延長(zhǎng)、終止三個(gè)階段。原核生物的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，除延長(zhǎng)階段與真核生物相似外，起始和終止過(guò)程都與真核生物有較多的不同。（一）原核轉(zhuǎn)錄開(kāi)始：RNA聚合酶全酶借因子作用，識(shí)別結(jié)合于轉(zhuǎn)錄單位啟動(dòng)子，覆蓋75-80bpDNA區(qū)段，包含-35bp的識(shí)別部位，RNA聚合酶與DNA結(jié)合較松弛，聚合酶沿DNA滑動(dòng)，與-10區(qū)結(jié)合更為牢固，在接近轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)時(shí)聚合酶與DNA模板形成穩(wěn)定復(fù)合物。同時(shí)全酶結(jié)合的DNA在小范圍構(gòu)象改變，雙鏈打開(kāi)，暴露模板序列，根據(jù)堿基

34、互補(bǔ)的原則，相應(yīng)的原料NTP按照DNA模板序列而依次進(jìn)入。RNA合成不需引物，在RNA聚合酶的催化下，起始點(diǎn)上相鄰排列的頭兩個(gè)NTP以3，5-磷酸二酯鍵相連，第一個(gè)核苷酸多為鳥嘌呤核苷酸。轉(zhuǎn)錄起始階段生成的5ppp-GpNOH末端，轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)時(shí)在mRNA分子中一直保留至轉(zhuǎn)錄完成。隨著新生RNA鏈延伸到810個(gè)堿基后因子即從起始復(fù)合物上脫落，剩下的核心酶繼續(xù)沿DNA鏈向下游移行，進(jìn)入延長(zhǎng)階段。脫落下的因子可以再次與核心酶結(jié)合而循環(huán)使用。 （二）原核生物的轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)：轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物形成后，s亞基即脫落。由于s亞基的離去，使復(fù)合體中核心酶的構(gòu)象發(fā)生改變，與DNA模板的結(jié)合變得松散，有利于RNA聚合酶沿D

35、NA鏈的3 5方向迅速向前移行，每移行一步都與一分子三磷酸核苷生成一個(gè)新的磷酸二酯鍵，使合成的RNA鏈按照5 3方向不斷延伸。在轉(zhuǎn)錄延伸過(guò)程中，要求DNA雙螺旋小片段解鏈，暴露長(zhǎng)度約為17bp的單鏈模板由RNA聚合酶核心酶、DNA模板和轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA三者結(jié)合成轉(zhuǎn)錄泡，也稱為轉(zhuǎn)錄復(fù)合物。隨RNA聚合酶前移，后面的DNA又回復(fù)雙螺旋結(jié)構(gòu)。原核生物正延伸的mRNA鏈雖未完成轉(zhuǎn)錄，該鏈已經(jīng)結(jié)合上核蛋白體開(kāi)始翻譯蛋白質(zhì)，使轉(zhuǎn)錄和翻譯都以高效率進(jìn)行。（3） 原核生物的轉(zhuǎn)錄終止：原核生物的轉(zhuǎn)錄終止有兩種形式，一種是依賴 (Rho)因子的終止，一種是不依賴因子的終止。原核生物DNA沒(méi)有共有的終止序列，而是轉(zhuǎn)錄

36、產(chǎn)物序列指導(dǎo)終止過(guò)程。轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)存在于RNA產(chǎn)物3端而不是在DNA模板。4.2.4.5增強(qiáng)子的結(jié)構(gòu)與作用機(jī)制 增強(qiáng)子：是真核生物中遠(yuǎn)距離的正調(diào)控位點(diǎn)，增強(qiáng)子通常包含組成型元件和可調(diào)節(jié)元件。增強(qiáng)子可以從非常遠(yuǎn)的距離使它的靶基因轉(zhuǎn)錄活性增加達(dá)1000倍。增強(qiáng)子的作用不依賴方向和位置，它是通過(guò)使內(nèi)部DNA成環(huán)突出而實(shí)現(xiàn)與基本轉(zhuǎn)錄裝置相互作用。增強(qiáng)子可以包含有功能的成簇的結(jié)合位群點(diǎn)，稱為增強(qiáng)子元。增強(qiáng)子具有組織和細(xì)胞的特異性，既表達(dá)需要特異的蛋白因子的作用。增強(qiáng)子由兩個(gè)以上的增強(qiáng)子成分組成。 增強(qiáng)子與啟動(dòng)子的區(qū)別在于：1、增強(qiáng)子可以從非常遠(yuǎn)的距離使它的靶基因轉(zhuǎn)錄活性增加達(dá)1000倍。2、啟動(dòng)子只能在

37、一個(gè)方向?qū)︵徑恢玫南掠位蜻M(jìn)行轉(zhuǎn)錄發(fā)動(dòng)，增強(qiáng)子的作用不依賴方向和位置，它是通過(guò)使內(nèi)部DNA成環(huán)突出而實(shí)現(xiàn)與基本轉(zhuǎn)錄裝置相互作用。3、增強(qiáng)子可以包含有功能的成簇的結(jié)合位群點(diǎn)，稱為增強(qiáng)子元。4、增強(qiáng)子具有組織和細(xì)胞的特異性，既表達(dá)需要特異的蛋白因子的作用。 一個(gè)活性的增強(qiáng)子能與較多數(shù)量的野生型反式因子的功能結(jié)構(gòu)域結(jié)合，這種現(xiàn)象稱為增強(qiáng)子元件冗余。 絕緣子：是一段具有轉(zhuǎn)化染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的區(qū)域，它能阻斷增強(qiáng)子或沉默子對(duì)靶基因/啟動(dòng)子的增強(qiáng)或失活作用效應(yīng)。它有兩種重要功能：1、當(dāng)一個(gè)絕緣子位于增強(qiáng)子與啟動(dòng)子之間時(shí)，可消除增強(qiáng)子對(duì)啟動(dòng)子增強(qiáng)表達(dá)效應(yīng)。2、當(dāng)一個(gè)絕緣子位于沉默子與啟動(dòng)子之間時(shí)，可阻斷沉默子對(duì)下

38、游靶基因的失活效應(yīng)。4.2.4.7 順式元件與反式因子互作通用原則及方式 順式元件：DNA、RNA或者蛋白質(zhì)中的一些特殊的核酸或氨基酸殘基序列，只作用于與其連接在一起的靶，而不作用于不與其相連的靶。 反式因子：起反式作用的調(diào)控元件，通過(guò)直接結(jié)合或間接作用于DNA、RNA等核酸分子，對(duì)基因表達(dá)發(fā)揮不同調(diào)節(jié)作用(激活或抑制)的各類蛋白質(zhì)因子。其本身對(duì)基因表達(dá)沒(méi)有調(diào)控作用，只是阻斷來(lái)自上、下游的調(diào)控效應(yīng)。 反式因子能以以下幾種常見(jiàn)的模體與DNA結(jié)合：1、螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋 2、鋅指 3、堿性域或亮氨酸拉鏈 4、反平行-折疊4.4轉(zhuǎn)錄過(guò)程的終止 終止子：轉(zhuǎn)錄過(guò)程中能夠終止RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄的DNA序列，使

39、RNA合成終止。在大腸桿菌中有依賴于或不依賴于的兩類終止子依賴于因子的終止子和不依賴于因子的終止子如何終止轉(zhuǎn)錄：見(jiàn)作業(yè)本第四章45RNA的加工4.5.1加工的概念RNA加工：真核生物新合成的前體RNA分子所經(jīng)歷的結(jié)構(gòu)和化學(xué)方面的修飾與成熟過(guò)程。這一過(guò)程可以貫穿整個(gè)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。真核生物的前體mRNA所進(jìn)行的加工反應(yīng)，包括5末端的加帽，3末端的多聚腺苷化（加尾），內(nèi)含子的剪接，編輯修飾和內(nèi)部腺嘌呤甲基化。核內(nèi)不均一RNA：真核生物的結(jié)構(gòu)基因多為斷裂基因，其初始的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物即前體RNA是長(zhǎng)短不一，且序列的復(fù)雜程度很高，稱為核內(nèi)不均一RNA。它在核中不是以裸露的核酸形式存在，而是與很多高豐度蛋白締合形成不

40、均一的核糖核酸蛋白體。所有的tRNA都需要經(jīng)過(guò)加工。真核生物除了大亞基5S rRNA外，其他rRNA都需要經(jīng)過(guò)加工。4.5.2加工的目的加工的目的：（1）RNA的加工造就了RNA的多樣性；（2）RNA的加工與RNA的轉(zhuǎn)錄有關(guān)，可以增加RNA的穩(wěn)定性。4.5.3加工的過(guò)程4.5.3.1RNA的5端戴帽5端帽子結(jié)構(gòu)：分為三種類型：Cap-0（m7GppXpYp）；Cap-（m7GpppXmpYp）；Cap-（m7GpppXmpYmp）其分布為：（1）單細(xì)胞真核生物只有 Cap0；（2） Cap1 是其余真核生物的主要帽子形式；（3）Cap2 存在于某些真核生物中。5帽子的功能：見(jiàn)第4章作業(yè)。4.5

41、.3.2RNA3端的多聚腺苷化3多聚腺苷化（poly（A）的意義：（1） 可能與核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)（2） 穩(wěn)定mRNA，與mRNA的壽命有關(guān) （3） 影響翻譯效率a、 缺失可抑制體外翻譯的起始；b、 胚胎發(fā)育中，poly(A) 對(duì)其mRNA的翻譯有影響（非poly(A) 化的為儲(chǔ)藏形式）；c、含有poly(A)的mRNA 失去poly(A)，可減弱mRNA的翻譯。（4）在分子實(shí)驗(yàn)中，可用于從總體RNA中分離純化mRNA，可反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA（5）與轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)既能促進(jìn)轉(zhuǎn)錄終止，也能防止mRNA“早熟”。（6）參與新生的RNA從DNA/RNA/RNA聚合酶三聯(lián)體復(fù)合物中的釋放。（7）參與前體的3末端內(nèi)含

42、子的除去。4.5.3.3RNA的剪接型內(nèi)含子的結(jié)構(gòu)與剪接機(jī)制：見(jiàn)第4章作業(yè)。表格 不同類型內(nèi)含子的分布和剪接形式內(nèi)含子類型內(nèi)含子分布剪接方式核pre-mRNA內(nèi)含子（型內(nèi)含子）真核兩步轉(zhuǎn)酯反應(yīng)，自由羥基的起始供體由內(nèi)部分支位點(diǎn)腺嘌呤提供，形成套索結(jié)構(gòu)的中間體。需要UsnRNA參與裝配剪接體型內(nèi)含子某些酵母線粒體rRNA，某些原核基因組，極少數(shù)單細(xì)胞真核生物核基因組有保守的二級(jí)結(jié)構(gòu)，鳥嘌呤核苷酸輔因子是自由羥基供體，由RNA核酶實(shí)現(xiàn)自我催化剪接型內(nèi)含子核U5snRNA，葉綠體RNA有保守的二級(jí)結(jié)構(gòu)，內(nèi)部腺嘌呤是自由羥基供體，形成套索結(jié)構(gòu)的內(nèi)含子中間體。實(shí)現(xiàn)自我催化剪接細(xì)胞核tRNA內(nèi)含子剪接機(jī)制

43、類似于tRNA成熟過(guò)程，涉及剪切后的連接。沒(méi)有中間體形成，內(nèi)含子以線性片段切除。需要幾種反式作用的加工酶順式剪接：將一個(gè)mRNA前體中的各個(gè)內(nèi)含子切除，并將相互鄰近的各個(gè)外顯子加以連接，形成成熟的mRNA的過(guò)程。在這個(gè)過(guò)程中，各個(gè)外顯子都來(lái)自同一基因。反式剪接：發(fā)生在兩個(gè)RNA分子之間的剪接，將兩條不同的mRNA的外顯子連接在一起，形成成熟的mRNA。被剪接的外顯子來(lái)源于不同的基因，甚至不同的染色體，比如錐蟲mRNA的5端有相同的35nt的序列。選擇性剪接：同一前體mRNA中的外顯子通過(guò)不同組合形成不同的成熟mRNA分子。即從一個(gè)mRNA前體中通過(guò)不同的剪接方式產(chǎn)生不同的mRNA剪接異構(gòu)體的過(guò)

44、程。最終的蛋白產(chǎn)物會(huì)表現(xiàn)出不同的功能和結(jié)構(gòu)特性，呈現(xiàn)不同的表型。4.5.3.5RNA編輯RNA編輯的概念和意義：見(jiàn)第4章作業(yè)。RNA編輯的幾種機(jī)制：（1）堿基替換編輯；（2）堿基插入編輯；（3）以向?qū)NA為模板的插入編輯，即RNA編輯所需要的信息或者來(lái)自向?qū)NA，或者來(lái)自被編輯RNA自身（幫助酶識(shí)別編輯位點(diǎn)）。向?qū)NA：引導(dǎo)RNA編輯的RNA分子,長(zhǎng)度大約是6080個(gè)核苷酸,是由單獨(dú)的基因轉(zhuǎn)錄的,具有3'寡聚U的尾巴,中間有一段與被編輯mRNA精確互補(bǔ)的序列,5'端是一個(gè)錨定序列,它同非編輯的mRNA序列互補(bǔ)。在編輯時(shí),形成一個(gè)編輯體，以向?qū)NA內(nèi)部的序列作為模板進(jìn)行轉(zhuǎn)

45、錄物的校正,同時(shí)產(chǎn)生編輯的mRNA。RNA編輯的類型：（1）堿基的插入與刪除；（2）堿基改變5 蛋白質(zhì)的翻譯5.1蛋白質(zhì)合成的裝備5.1.1mRNA的結(jié)構(gòu)和功能信使RNA具有兩個(gè)必需特征:一段可翻譯的密碼序列（開(kāi)放閱讀框ORF） 一個(gè)核糖體結(jié)合位點(diǎn)（RBS）在原核細(xì)胞中，一個(gè)轉(zhuǎn)錄物包括多個(gè)順?lè)醋?，每個(gè)順?lè)醋涌煞g出一個(gè)獨(dú)立的多肽鏈。每個(gè)順?lè)醋酉喈?dāng)一個(gè)真核mRNA，原核mRNA位點(diǎn)含有保守序列5-AGGAGGU-3-,位于起始密碼子上游310個(gè)核苷酸處。在真核細(xì)胞中一個(gè)轉(zhuǎn)錄物只有一個(gè)順?lè)醋樱ǘ鄠€(gè)編碼區(qū)和非編碼區(qū)。其中將外顯子隔開(kāi)的非編碼區(qū)域稱為內(nèi)含子。經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后加工，成熟mRNA含有可

46、連續(xù)閱讀的編碼區(qū)。5.1.2tRNA的結(jié)構(gòu)與功能除了少數(shù)例外，所有的TRNA分子都有三葉草式的二級(jí)結(jié)構(gòu)。P181圖5-6原核核糖體稱為70S核糖體。小亞基稱為30S核糖體，包含21種不同的蛋白質(zhì)被稱為S1S21和16S rRNA。大亞基稱為50S核糖體，由34種蛋白質(zhì)和23S及5 S rRNA組成。真核核糖體為80S核糖體，其中40S小亞基包含33種蛋白質(zhì)和18S rRNA。60S大亞基包含50種蛋白質(zhì)和3種rRNA（28S，5.8S,5S）.5.1.3rRNA與核糖體的結(jié)構(gòu)與功能核糖體的活性位點(diǎn)及其功能 小亞基與mRNA的結(jié)合位點(diǎn)。可防止mRNA鏈內(nèi)堿基對(duì)的形成。 大亞基與氨基酰TRNA結(jié)合

47、的位點(diǎn)A。A位點(diǎn)內(nèi)mRNA表面只對(duì)特定的aa-tRNA表現(xiàn)出特異性，且A位點(diǎn)結(jié)合aa-tRNA要求在P位點(diǎn)上必須有肽酰tRNA存在。 在肽鏈延長(zhǎng)過(guò)程大亞基與肽鏈結(jié)合的位點(diǎn)P。肽酰tRNA位點(diǎn)，能夠與起始的tRNA相結(jié)合，且P位點(diǎn)會(huì)影響A位點(diǎn)活性。 空載tRNA離開(kāi)核糖體的出口位點(diǎn)E。E位點(diǎn)包括兩個(gè)，E1為脫氨基tRNA離開(kāi)核糖體提供出口，對(duì)蛋白質(zhì)合成的準(zhǔn)確性起重要作用。E2為多肽離開(kāi)核糖體提供出口。 大亞基的肽基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域。提供肽鍵形成的催化活性。 延伸因子-氨基酰-TRNA-GTP復(fù)合體進(jìn)入核糖體位點(diǎn) 肽鍵轉(zhuǎn)位因子結(jié)合位點(diǎn) 核糖體大亞基與5S rRNA結(jié)合位點(diǎn)，與tRNA進(jìn)入有關(guān)。5.2遺

48、傳密碼及其簡(jiǎn)并性5.2.2遺傳密碼的簡(jiǎn)并性 密碼子的簡(jiǎn)并性：生物共有64個(gè)遺傳密碼子，但是編碼氨基酸的只有20種。密碼子數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于氨基酸的種數(shù)，因此許多氨基酸所對(duì)應(yīng)的密碼子不止一個(gè)，這種一種氨基酸由幾個(gè)密碼子所編碼的現(xiàn)象稱為密碼子的簡(jiǎn)并性。 簡(jiǎn)并的概念： 一種AA受兩個(gè)以上codon 編碼的遺傳現(xiàn)象 （課件） 廣義密碼（GGC）：密碼子中第二位核苷酸決定氨基酸性質(zhì)的特點(diǎn)被稱為廣義密碼或密碼中的密碼。5.2.2.1搖擺假說(shuō) 搖擺假說(shuō)：由于同義密碼子的第1、2個(gè)堿基是保守的，第三個(gè)堿基是可變的。因此解讀同義密碼子的tRNA的反密碼子的第1個(gè)堿基必定具有最小的專一性，也就是說(shuō)它與密碼子第3個(gè)堿基之

49、間的配對(duì)原則具有一定范圍的靈活性。由于反密碼子位于tRNA的突變環(huán)上，因此反密碼子三聯(lián)體的排列就會(huì)呈彎曲弧形，不能與密碼子保持完全的平行，加上反密碼子的第1個(gè)核苷酸位于非雙鏈結(jié)構(gòu)的松弛環(huán)內(nèi)，搖擺的自由度較大，從而導(dǎo)致密碼子的第3個(gè)核苷酸和反密碼子的第1個(gè)核苷酸之間可能形成非標(biāo)準(zhǔn)的堿基配對(duì)，反密碼子的這一點(diǎn)也被稱為搖擺位點(diǎn)（一般為第34位堿基）。如果tRNA的搖擺位點(diǎn)是被修飾的堿基，就可能出現(xiàn)更多的選擇配對(duì)關(guān)系，這種假說(shuō)被稱為搖擺假說(shuō)，密碼子的這一性質(zhì)被稱為變偶性或搖擺性。最早由F.Crick在1966年提出，并在以后得到證實(shí)。 搖擺假說(shuō)（Wobble hypothesis） 1966 Cric

50、k 提出 又稱 “變偶假說(shuō)” 內(nèi)容： codon 的前兩位堿基和反密碼子配對(duì)時(shí)遵循 WatsonCrick 原則，而第三位堿基有一定的靈活性 即 codon 的3rd-nt 與 anti-codon 的1st-nt（nt34） mRNA 5CGU.CGC.CGACGGAGAAGG3 擺動(dòng) tRNA GCG GCU UCU 35 5 5 （課件）5.2.2.3同工受體tRNA同工受體tRNA:能解讀同義密碼子的不同tRNA被定義為同工受體tRNA。例如絲氨酸有CGU,CGC,CGA,CGG,AGA,AGG等6個(gè)密碼子，分別由3個(gè)同工受體tRNA識(shí)讀，它們的反密碼子分別為GCG,GCU,UCU每一

51、個(gè)tRNA在搖擺原則的支配下可以識(shí)讀兩個(gè)密碼。5.3蛋白質(zhì)的翻譯蛋白質(zhì)的翻譯可分為起始、延伸和終止3個(gè)階段5.3.1蛋白質(zhì)翻譯的若干基本概念（詳見(jiàn)課本199頁(yè)。部分為百度的定義）多順?lè)醋樱杭磪⑴c一個(gè)代謝途徑的若干結(jié)構(gòu)基因編碼在同一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位內(nèi)，具有多個(gè)開(kāi)放閱讀框，多順?lè)醋邮窃松锊倏v子的主要結(jié)構(gòu)形式。閱讀框：解讀mRNA中遺傳密碼的三聯(lián)體方式。開(kāi)放閱讀框：按一定的閱讀框，從起始密碼到終止密碼可連續(xù)解讀遺傳密碼的區(qū)域。反密碼子：tRNA中反密碼子環(huán)上與mRNA密碼子反向互補(bǔ)的三核苷酸序列。氨酰tRNA合成酶（AARS）：催化氨基酸激活偶聯(lián)反應(yīng)的酶。先將一種氨基酸連接到腺苷一磷酸生成相應(yīng)氨酰腺苷

52、酸，然后共價(jià)連接到tRNA 3端生成氨酰tRNA。一種氨酰tRNA合成酶識(shí)別一種特定的氨基酸。起始氨基酸：蛋白質(zhì)合成開(kāi)始的第一個(gè)氨基酸。核糖體結(jié)合位點(diǎn)：核糖體識(shí)別并結(jié)合信使核糖核酸(mRNA)的位點(diǎn)。原核生物信使核糖核酸起始密碼子的上游含有核糖體識(shí)別和結(jié)合序列；真核生物信使核糖核酸的5帽子結(jié)構(gòu)對(duì)核糖體的識(shí)別起一定作用。SD序列：SD序列（Shine-Dalgarnosequence）：mRNA中用于結(jié)合原核生物核糖體的序列。SD序列在細(xì)菌mRNA起始密碼子AUG上游10個(gè)堿基左右處，有一段富含嘌呤的堿基序列，能與細(xì)菌16SrRNA3端識(shí)別，幫助從起始AUG處開(kāi)始翻譯。5.3.2多肽鏈的合成1、

53、原核生物蛋白質(zhì)翻譯的起始過(guò)程：（P200第9段）Ø IF1刺激IF3與30S亞基結(jié)合， 形成穩(wěn)定的30S小亞基。Ø IF3促進(jìn)mRNA與30S小亞基結(jié)合，使起始密碼子調(diào)整到P位。Ø IF2結(jié)合到起始tRNA。IF2使起始tRNA定位到P位。30S預(yù)起始復(fù)合物30S起始復(fù)合物。Ø IF2 刺激 50S亞基參與形成70S三元起始復(fù)合物。 Ø IF1和IF3釋放。IF2的活性形式是IF2·GTP, 50S亞基作為GTP酶活化蛋白，激發(fā)IF2的GTP酶活性，GTP水解成GDP和Pi， IF2釋放。fMet-tRNAfmet占據(jù)著50S亞基的肽

54、酰位(P)。而A位則空著。2、真核生物蛋白質(zhì)翻譯的起始的特點(diǎn)(1) 起始過(guò)程需要更多的起始因子(eIF)(2) 40S小亞基識(shí)別mRNA的5端的帽子結(jié)構(gòu)(3) 5端的帽子對(duì)準(zhǔn)確起譯和保證翻譯效率起重要作用.(4) 3端的非翻譯區(qū)提高翻譯效率起重要作用.3、Prok.的三種起始因子（initiation factor IF）參與蛋白質(zhì)合成起始的可溶性蛋白因子三種IF分別為： IF1 IF2 IF3 IF1-加強(qiáng)IF2、IF3的酶活I(lǐng)F2-促進(jìn)fmet-tRNAfmet與30S小亞基結(jié)合的作用，并有依賴核糖體50S大亞基的GTP酶活I(lǐng)F3-促使 30S亞基結(jié)合于 mRNA 起始部位，阻止30S亞基

55、與50S亞基的結(jié)合，或者說(shuō)促進(jìn)70S核糖體的解離4、kozak序列真核生物基因中起始密碼子上下游的最佳序列為，-3位為嘌呤堿基；+4位為G，起始密碼子AUG中的A處于+1位。A/GCCAUGG被稱為kozak序列或掃描序列。5、多肽鏈的延伸（見(jiàn)第五章作業(yè)簡(jiǎn)答題第一題）指按照mRNA密碼序列的指導(dǎo)，依次添加氨基酸從N端向C端延伸肽鏈，直到合成終止的過(guò)程。 肽鏈的延伸是在核蛋白體上連續(xù)性循環(huán)式進(jìn)行，又稱為核蛋白體循環(huán)（ribosomal cycle)，每次循環(huán)增加一個(gè)氨基酸，分為以下三步：進(jìn)位（entrance）：指根據(jù)mRNA下一組遺傳密碼指導(dǎo)，使相應(yīng)氨基酰-tRNA進(jìn)入核蛋白體A位。成肽（peptide bond formation）：是由轉(zhuǎn)肽酶（transpeptidase）催化的肽鍵形成過(guò)程。轉(zhuǎn)位（translocation）：延長(zhǎng)因子EF-G有轉(zhuǎn)位酶（translocase ）活性，可結(jié)合并水解1分子GTP，促進(jìn)核蛋白體向mRNA的3側(cè)移動(dòng)。6、RF和RRF1)RF：原核生物和真核生物都有三種終止密碼子：UAG、UAA和UGA，沒(méi)有一個(gè)轉(zhuǎn)移核糖核酸(tRNA)能夠與之相互作用，而是由特殊蛋白質(zhì)因子識(shí)別，促使合成終止，這類蛋白質(zhì)因子被稱為釋放因子。原核生物有RF1、RF2和RF3，而真核生物只有eRF。 RF-1: