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1、王媛媛yywangdgmai堂提問每人2-3個問題;權(quán)重:30%總結(jié)報告PPT,5人一組,10分鐘;權(quán)重:30%實驗報告權(quán)重:40%要求:標準的論文格式:中、英文標題和摘要;前言;材料與方法;結(jié)果;討論;參考文獻。PPT:照片、視頻展示個性,潮!Day 0: 準備實驗材料Day 1: GFP表達質(zhì)粒的提?。籘op 10感受態(tài)細胞的制備;GFP表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化Top 10。Day 2: GFP表達菌株擴大培養(yǎng);GFP的誘導表達。Day 3: 表達菌株的收集、破碎;硫酸銨沉淀所用濃度的確定;硫酸銨沉淀GFP;疏水層析。Day 4: 離子交換層析;透析;凝膠過濾層析。Day 5
2、: SDS-PAGE;染色;脫色,觀察結(jié)果。記得帶照相機 !鳴謝:生命學院生物科學104班鄒兵 周嘉 趙瑯李運彰 汪源原核:E.coli真核:Yeast Insect mammalsVector: pET series, pGEX series, gateway series,pMAL, pTWIN I, pETDuet, et. al.BL21(DE3), BL21(DE3, pLysS), Origami, Rosetta, Rosetta-gamiTop10, HB101, C41/C43能否用BL21(DE3)表達pGLO?能否用Top10表達pET32a?OD600=0.6-0.8,加入誘導劑;OD600=1.2-1.4,收獲菌體;誘導劑用量 IPTG: 0.2mM; 0.5mM; 1mM誘導溫度 20;25/28 ;37 如何留樣能在一張SDS-PAGE膠圖中(10-12 wells)體現(xiàn)誘導的效果、(NH4)2SO4
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