第四章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)

1、免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)中衛(wèi)市第一人民醫(yī)院中衛(wèi)市第一人民醫(yī)院魏玉紅魏玉紅一、一、免疫學(xué)檢驗(yàn)原理免疫學(xué)檢驗(yàn)原理抗原抗原- -抗體反應(yīng)：指抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)、外發(fā)抗體反應(yīng)：指抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)、外發(fā)生高度生高度特異性結(jié)合特異性結(jié)合反應(yīng)。由于實(shí)驗(yàn)所用的抗體存在反應(yīng)。由于實(shí)驗(yàn)所用的抗體存在于血清中，故又稱血清學(xué)反應(yīng)（于血清中，故又稱血清學(xué)反應(yīng)（serological serological reaction)reaction)應(yīng)用：應(yīng)用：用已知抗原檢測(cè)未知抗體；用已知抗原檢測(cè)未知抗體；用已知抗體檢測(cè)未知抗原：用已知抗體檢測(cè)未知抗原：定性或定量檢測(cè)體內(nèi)各種分子；定性或定量檢測(cè)體內(nèi)各種分子；用已知

2、抗體檢測(cè)半抗原物質(zhì)。用已知抗體檢測(cè)半抗原物質(zhì)。1.1.特異性和交叉反應(yīng)特異性和交叉反應(yīng) 特異性特異性：一種抗原通常僅能與：一種抗原通常僅能與由它刺激所產(chǎn)生的抗體結(jié)合。由它刺激所產(chǎn)生的抗體結(jié)合。分子基礎(chǔ)：分子基礎(chǔ)：抗原表位與抗體分抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補(bǔ)性子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補(bǔ)性。（一）抗原（一）抗原-抗體反應(yīng)的特點(diǎn)抗體反應(yīng)的特點(diǎn)交叉反應(yīng)交叉反應(yīng)（cross reactioncross reaction）性：若兩種抗原）性：若兩種抗原分子有一個(gè)或數(shù)個(gè)相同（或相似）的決定基，分子有一個(gè)或數(shù)個(gè)相同（或相似）的決定基，則針對(duì)一種抗原的抗血清可與另一種抗原發(fā)生則針對(duì)一種抗原的抗血清

3、可與另一種抗原發(fā)生反應(yīng)。反應(yīng)。 結(jié)合價(jià)：結(jié)合價(jià)： 天然抗原分子表面一般含多種抗原決定基，可與天然抗原分子表面一般含多種抗原決定基，可與多個(gè)抗體分子結(jié)合，為多個(gè)抗體分子結(jié)合，為多價(jià)多價(jià)。單體形式的抗體分。單體形式的抗體分子有兩個(gè)子有兩個(gè)FabFab段，能結(jié)合兩個(gè)相同的抗原決定基，段，能結(jié)合兩個(gè)相同的抗原決定基，為為兩價(jià)兩價(jià)。2.2.比例性比例性比例合適：比例合適： 若抗原、抗體的數(shù)量比例合適，抗體分子的兩個(gè)若抗原、抗體的數(shù)量比例合適，抗體分子的兩個(gè)FabFab段段分別與兩個(gè)抗原決定基結(jié)合，相互交叉連接成分別與兩個(gè)抗原決定基結(jié)合，相互交叉連接成網(wǎng)格狀復(fù)合網(wǎng)格狀復(fù)合體體，則反應(yīng)體系中基本不存在游離的

4、抗原或抗體，此時(shí)形，則反應(yīng)體系中基本不存在游離的抗原或抗體，此時(shí)形成肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)物（沉淀物或凝集物）。成肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)物（沉淀物或凝集物）。 因此，確定反應(yīng)體系中抗原、抗體的最適比例十分重要。因此，確定反應(yīng)體系中抗原、抗體的最適比例十分重要。前帶現(xiàn)象（前帶現(xiàn)象（prozone）和后帶現(xiàn)象）和后帶現(xiàn)象(postzone) v Ab過(guò)剩和過(guò)剩和Ag過(guò)剩過(guò)剩前帶現(xiàn)象（前帶現(xiàn)象（prozoneprozone）和后帶現(xiàn)象）和后帶現(xiàn)象(postzone(postzone) )AbAb過(guò)剩和過(guò)剩和AgAg過(guò)剩過(guò)剩網(wǎng)格學(xué)說(shuō)網(wǎng)格學(xué)說(shuō)（lattice theory）抗體過(guò)?？贵w過(guò)?？乖^(guò)剩抗原過(guò)?？贵w抗體比例合

5、適抗體抗體比例合適抗原抗原抗體抗體 抗原抗原- -抗體反應(yīng)為分子表面的非共價(jià)結(jié)合，結(jié)抗體反應(yīng)為分子表面的非共價(jià)結(jié)合，結(jié)合合雖穩(wěn)定但可逆雖穩(wěn)定但可逆。在一定條件下（如低。在一定條件下（如低pHpH、高濃、高濃度鹽、凍融等），抗原度鹽、凍融等），抗原- -抗體復(fù)合物可被解離?？贵w復(fù)合物可被解離。解離后的抗原和抗體仍保持原有理化特性和生物解離后的抗原和抗體仍保持原有理化特性和生物學(xué)活性。學(xué)活性。 根據(jù)此特點(diǎn)，可借助親和層析法純化抗原或抗根據(jù)此特點(diǎn)，可借助親和層析法純化抗原或抗體。體。3.3.可逆性可逆性4.4.階段性階段性特異性結(jié)合階段：特異性結(jié)合階段：可見(jiàn)的反應(yīng)階段：可見(jiàn)的反應(yīng)階段：1.1.電解質(zhì)

6、電解質(zhì) 抗原和抗體有對(duì)應(yīng)的極性基團(tuán)，能相互吸附并抗原和抗體有對(duì)應(yīng)的極性基團(tuán)，能相互吸附并由親水性變?yōu)槭杷?。電解質(zhì)的存在使抗原由親水性變?yōu)槭杷?。電解質(zhì)的存在使抗原- -抗抗體復(fù)合物失去電荷而凝聚，出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)，故體復(fù)合物失去電荷而凝聚，出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)，故免疫學(xué)試驗(yàn)中免疫學(xué)試驗(yàn)中多用生理鹽水稀釋抗原或抗體多用生理鹽水稀釋抗原或抗體。（二）、（二）、抗原抗原- -抗體反應(yīng)的影響因素抗體反應(yīng)的影響因素2.2.酸堿度酸堿度 抗原抗體反應(yīng)的最適抗原抗體反應(yīng)的最適pHpH是是6-86-8。3.3.溫度溫度最適溫度為最適溫度為3737。有些例外，如冷凝集素在。有些例外，如冷凝集素在 44左右與紅細(xì)胞結(jié)合最好

7、，左右與紅細(xì)胞結(jié)合最好，2020以上反而以上反而解離。解離。 4.4.抗原和抗體的性質(zhì)抗原和抗體的性質(zhì) 抗體的特異性和親和力是決定抗原抗體的特異性和親和力是決定抗原- -抗體抗體反應(yīng)的關(guān)鍵因素。反應(yīng)的關(guān)鍵因素。 此外，抗原理化性質(zhì)、抗原決定基多寡和此外，抗原理化性質(zhì)、抗原決定基多寡和種類等均可影響抗原種類等均可影響抗原- -抗體反應(yīng)?？贵w反應(yīng)?？贵w分子上一個(gè)抗抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的抗原決定基之間的抗原決定基之間的結(jié)合能力結(jié)合能力親和力親和力( (affinity) 根據(jù)抗原的性質(zhì)、結(jié)合反應(yīng)的現(xiàn)象、參與反根據(jù)抗原的性質(zhì)、結(jié)合反應(yīng)的現(xiàn)象、參與反應(yīng)的成分等因素分類：應(yīng)的成分

8、等因素分類： 1.凝集反應(yīng)凝集反應(yīng) 2.沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) 3.補(bǔ)體參加的反應(yīng)補(bǔ)體參加的反應(yīng) 4.免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)（三）、免疫學(xué)檢驗(yàn)方法（三）、免疫學(xué)檢驗(yàn)方法 反應(yīng)類型反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)技術(shù)非非標(biāo)標(biāo)記記凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)直接凝集試驗(yàn)、間接凝集試驗(yàn)、間接直接凝集試驗(yàn)、間接凝集試驗(yàn)、間接抑制凝集試驗(yàn)、協(xié)同凝集試驗(yàn)抑制凝集試驗(yàn)、協(xié)同凝集試驗(yàn)沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)液相內(nèi)凝集試驗(yàn)、凝膠內(nèi)凝集試驗(yàn)液相內(nèi)凝集試驗(yàn)、凝膠內(nèi)凝集試驗(yàn)補(bǔ)體參與的反應(yīng)補(bǔ)體參與的反應(yīng)補(bǔ)體溶血試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)補(bǔ)體溶血試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中和反應(yīng)中和反應(yīng)病毒中和試驗(yàn)、毒素中和試驗(yàn)病毒中和試驗(yàn)、毒素中和試驗(yàn)標(biāo)標(biāo)記記標(biāo)記免疫反應(yīng)標(biāo)記免疫反應(yīng)熒

9、光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)發(fā)光免疫技術(shù)發(fā)光免疫技術(shù)金免疫技術(shù)金免疫技術(shù) 顆粒性抗原（細(xì)菌或細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，顆粒性抗原（細(xì)菌或細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集物，稱為凝集在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集物，稱為凝集反應(yīng)反應(yīng)(agglutination)(agglutination) 。用于凝集反應(yīng)中的抗原稱用于凝集反應(yīng)中的抗原稱凝集原凝集原(agglutinogen(agglutinogen) )。用于凝集反應(yīng)中的抗體稱用于凝集反應(yīng)中的抗體稱凝集素（凝集素（agglutinin)agglutinin)。 凝集反應(yīng)（凝集反應(yīng)（

10、Agglutination TestsAgglutination Tests）直接凝集（直接凝集（direct agglutination) ： 細(xì)菌或紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體直接反應(yīng)，可出現(xiàn)細(xì)菌或細(xì)菌或紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體直接反應(yīng)，可出現(xiàn)細(xì)菌或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。2 2間接凝集間接凝集（indirect or passive agglutination) ： 檢測(cè)針檢測(cè)針 對(duì)可溶性對(duì)可溶性AgAg的的AbAb3 3間接凝集抑制試驗(yàn)間接凝集抑制試驗(yàn) (direct agglutination inhibition test)4. 4. 協(xié)同凝集試驗(yàn)協(xié)同凝集試驗(yàn)（co-agglutination

11、 test） 載體為金葡菌，其細(xì)胞壁蛋白載體為金葡菌，其細(xì)胞壁蛋白A A與與IgGIgG 的的FcFc結(jié)合，用結(jié)合，用于細(xì)菌、病毒的快速檢測(cè)。于細(xì)菌、病毒的快速檢測(cè)。妊娠免疫診斷試驗(yàn)妊娠免疫診斷試驗(yàn) v孕婦尿中，絨毛膜促性腺激素（孕婦尿中，絨毛膜促性腺激素（HCGHCG）含量明顯增）含量明顯增高。（高。（HCGHCG是可溶性抗原是可溶性抗原 ）v反之，非孕婦尿中反之，非孕婦尿中HCGHCG含量甚微，不足以消耗掉抗含量甚微，不足以消耗掉抗HCGHCG抗體?？贵w。 HCGHCG檢測(cè)為間接凝集試驗(yàn)的應(yīng)用檢測(cè)為間接凝集試驗(yàn)的應(yīng)用Definition:Definition:可溶性抗原可溶性抗原（血清蛋白

12、、外毒素、（血清蛋白、外毒素、細(xì)菌濾液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下，細(xì)菌濾液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下，形成出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀物的現(xiàn)象稱為沉淀反應(yīng)。形成出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀物的現(xiàn)象稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)（沉淀反應(yīng)（Precipitation Tests）用于沉淀反應(yīng)中的抗原稱用于沉淀反應(yīng)中的抗原稱沉淀原沉淀原(precipitonogen(precipitonogen) )。用于沉淀反應(yīng)中的抗體稱用于沉淀反應(yīng)中的抗體稱沉淀素沉淀素（precipitin) precipitin) 。 v大多沉淀反應(yīng)多用半固體瓊脂凝膠作為介質(zhì)大多沉淀反應(yīng)多用半固體瓊脂凝膠作為介質(zhì)進(jìn)行進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散瓊脂擴(kuò)散或

13、或免疫擴(kuò)散免疫擴(kuò)散，即可溶性抗原與，即可溶性抗原與抗體在凝膠中擴(kuò)散，在比例合適處相遇即形抗體在凝膠中擴(kuò)散，在比例合適處相遇即形成可見(jiàn)的白色沉淀。成可見(jiàn)的白色沉淀。1 1單向免疫擴(kuò)散單向免疫擴(kuò)散(single immunodiffusion(single immunodiffusion) )2 2雙向免疫擴(kuò)散雙向免疫擴(kuò)散(double immunodiffusion(double immunodiffusion) )沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)單向免疫擴(kuò)散單向免疫擴(kuò)散(Single Immunodiffusion(Single Immunodiffusion) )v是將一定量已知抗體混于是將一定量已知抗體混

14、于瓊脂凝膠中制瓊脂板，在瓊脂凝膠中制瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔后將抗原加適當(dāng)位置打孔后將抗原加入孔中擴(kuò)散?？乖跀U(kuò)散入孔中擴(kuò)散?？乖跀U(kuò)散過(guò)程中與凝膠中的抗體相過(guò)程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心遇，形成以抗原孔為中心的的沉淀環(huán)沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗，環(huán)的直徑與抗原含量成正比相關(guān)。本法原含量成正比相關(guān)。本法常用于測(cè)定血清常用于測(cè)定血清IgGIgG、IgMIgM、IgAIgA 和和 C C 3 3等的含量。等的含量。含抗體的凝膠含抗體的凝膠沉淀環(huán)沉淀環(huán)雙向免疫擴(kuò)散雙向免疫擴(kuò)散 （Double ImmunodiffusionDouble Immunodiffusion) )v是將抗原與抗體分別加

15、入是將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中，二者瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向周圍擴(kuò)散并相遇，自由向周圍擴(kuò)散并相遇，在比例合適處形成在比例合適處形成沉淀線沉淀線。如果反應(yīng)體系中含兩種以如果反應(yīng)體系中含兩種以上的抗原抗體系統(tǒng)，則小上的抗原抗體系統(tǒng)，則小孔間可出現(xiàn)兩條以上的沉孔間可出現(xiàn)兩條以上的沉淀線。本法常用于抗原或淀線。本法常用于抗原或抗體的定性抗體的定性 、組成和兩、組成和兩種抗原相關(guān)性分析的檢測(cè)。種抗原相關(guān)性分析的檢測(cè)。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（Complement Fixation test, CFT)Complement Fixation test, CFT)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(co

16、mplement fixation test，CFT ) 將免疫溶血作為指示系統(tǒng)，用以檢測(cè)另一反將免疫溶血作為指示系統(tǒng)，用以檢測(cè)另一反應(yīng)應(yīng) 系統(tǒng)中抗原或抗體的傳統(tǒng)方法。系統(tǒng)中抗原或抗體的傳統(tǒng)方法。試驗(yàn)原理試驗(yàn)原理作用原理：作用原理：利用補(bǔ)體的溶細(xì)胞作用進(jìn)行各種利用補(bǔ)體的溶細(xì)胞作用進(jìn)行各種物理狀態(tài)的抗原抗體測(cè)定物理狀態(tài)的抗原抗體測(cè)定5種成分，種成分，3個(gè)系統(tǒng)個(gè)系統(tǒng) 反應(yīng)系統(tǒng)（溶菌系統(tǒng)）：反應(yīng)系統(tǒng)（溶菌系統(tǒng)）：已知已知抗原抗原（或抗體）（或抗體） 與待測(cè)與待測(cè)抗體抗體（或抗原）（或抗原） 補(bǔ)體補(bǔ)體系統(tǒng)：系統(tǒng)： 指示系統(tǒng)（溶血系統(tǒng)）：指示系統(tǒng)（溶血系統(tǒng)）：SRBC與相應(yīng)與相應(yīng)溶血素溶血素。試驗(yàn)時(shí)常將

17、其預(yù)先結(jié)合，成為致敏綿羊紅細(xì)胞試驗(yàn)時(shí)常將其預(yù)先結(jié)合，成為致敏綿羊紅細(xì)胞（sensitized sheep red blood cell,SRBCS）。溶溶菌菌系系統(tǒng)統(tǒng)反應(yīng)分兩步進(jìn)行反應(yīng)分兩步進(jìn)行 第一步第一步: :反應(yīng)系統(tǒng)與補(bǔ)體的作用反應(yīng)系統(tǒng)與補(bǔ)體的作用 第二步第二步: :指示系統(tǒng)利用剩余補(bǔ)體的反應(yīng)指示系統(tǒng)利用剩余補(bǔ)體的反應(yīng)不溶血為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陽(yáng)性，而溶血為試驗(yàn)陰性不溶血為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陽(yáng)性，而溶血為試驗(yàn)陰性已知抗原加入血清（檢測(cè)抗體）已知抗原加入血清（檢測(cè)抗體）加入標(biāo)準(zhǔn)量補(bǔ)體加入標(biāo)準(zhǔn)量補(bǔ)體加入包被抗體的紅細(xì)胞加入包被抗體的紅細(xì)胞檢測(cè)紅細(xì)胞溶解情況檢測(cè)紅細(xì)胞溶解情況AgPatientsserum

18、 AbNo AbAg 用熒光素、酶、放射性核素或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等用熒光素、酶、放射性核素或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等標(biāo)記抗體或抗原，進(jìn)行抗原標(biāo)記抗體或抗原，進(jìn)行抗原- -抗體反應(yīng)的檢測(cè)，是抗體反應(yīng)的檢測(cè)，是目前應(yīng)用最為廣泛的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)。標(biāo)記物與目前應(yīng)用最為廣泛的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)。標(biāo)記物與抗體或抗原連接后并不改變抗原抗體的免疫特性，抗體或抗原連接后并不改變抗原抗體的免疫特性，具有靈敏度高、快速、可定性、定量、定位等優(yōu)具有靈敏度高、快速、可定性、定量、定位等優(yōu)點(diǎn)。點(diǎn)。免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)（ImmunolabellingImmunolabelling technique technique） 用熒光素與抗體

19、連接成用熒光素與抗體連接成熒光抗體熒光抗體，再與待，再與待檢標(biāo)本中抗原反應(yīng)，置檢標(biāo)本中抗原反應(yīng)，置熒光顯微鏡熒光顯微鏡下觀察，抗下觀察，抗原原- -抗體復(fù)合物散發(fā)熒光，借此對(duì)抗原進(jìn)行定抗體復(fù)合物散發(fā)熒光，借此對(duì)抗原進(jìn)行定性或定位。性或定位。 1免疫熒光法免疫熒光法(immunofluorescence, IF)（1 1）直接熒光法：）直接熒光法：熒光素直接標(biāo)記抗體，對(duì)標(biāo)本熒光素直接標(biāo)記抗體，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。該法優(yōu)點(diǎn)是特異性高，缺點(diǎn)是檢查任進(jìn)行檢測(cè)。該法優(yōu)點(diǎn)是特異性高，缺點(diǎn)是檢查任一抗原均須制備相應(yīng)熒光抗體。一抗原均須制備相應(yīng)熒光抗體。（2 2）間接熒光法：）間接熒光法：用一抗與標(biāo)本中抗原結(jié)合，

20、再用一抗與標(biāo)本中抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測(cè)。該法優(yōu)點(diǎn)是敏感用熒光素標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測(cè)。該法優(yōu)點(diǎn)是敏感度比直接法高，制備一種熒光素標(biāo)記的二抗即可度比直接法高，制備一種熒光素標(biāo)記的二抗即可用于多種抗原的檢測(cè)用于多種抗原的檢測(cè), ,但非特異性反應(yīng)亦增強(qiáng)。但非特異性反應(yīng)亦增強(qiáng)。免疫熒光法分類免疫熒光法分類免疫熒光法圖示免疫熒光法圖示 此法將抗原此法將抗原- -抗體反應(yīng)的特異性與抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用酶催化作用的高效性相結(jié)合，借助酶作用于底物的顯色反應(yīng)的高效性相結(jié)合，借助酶作用于底物的顯色反應(yīng)判定結(jié)果。應(yīng)用酶標(biāo)測(cè)定儀測(cè)定光密度（判定結(jié)果。應(yīng)用酶標(biāo)測(cè)定儀測(cè)定光密度（ODOD）值）值可反映

21、抗原含量，靈敏度達(dá)可反映抗原含量，靈敏度達(dá)ngng/ml/ml甚至甚至pg/mlpg/ml水平。水平。常見(jiàn)的標(biāo)記物為：辣根過(guò)氧化物酶（常見(jiàn)的標(biāo)記物為：辣根過(guò)氧化物酶（HRPHRP）和堿）和堿性磷酸酶（性磷酸酶（APAP） 酶免疫測(cè)定酶免疫測(cè)定(enzyme immunoassay, EIA)常用的方法如下：常用的方法如下：（1 1）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (enzyme linked (enzyme linked immunosorbentimmunosorbent assay assay，ELISA) ELISA) 是酶免疫測(cè)定中應(yīng)用最廣的技術(shù)，用于是酶免疫測(cè)定中應(yīng)用最廣的技術(shù)，

22、用于測(cè)定測(cè)定可溶性抗原或抗體?？扇苄钥乖蚩贵w。優(yōu)點(diǎn)：靈優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性強(qiáng)，可敏度高、操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性強(qiáng)，可自動(dòng)化檢測(cè)，從而被廣泛用于檢測(cè)多種病原自動(dòng)化檢測(cè)，從而被廣泛用于檢測(cè)多種病原體抗原或抗體、血液及其他體液中微量蛋白體抗原或抗體、血液及其他體液中微量蛋白成分、細(xì)胞因子等。成分、細(xì)胞因子等。 分類：（1 1）放射免疫分析法）放射免疫分析法(radioimmunoassay, RIA)(radioimmunoassay, RIA)（2 2）免疫放射分析法（）免疫放射分析法（immunoradiometricimmunoradiometric assay, assay, IRM

23、A IRMA） 3放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù) 乃用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行免疫學(xué)乃用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)。該法兼有放射性核素的高靈敏度和抗原檢測(cè)。該法兼有放射性核素的高靈敏度和抗原- -抗體反應(yīng)的特異性，檢測(cè)靈敏度達(dá)抗體反應(yīng)的特異性，檢測(cè)靈敏度達(dá)pgpg水平。常用水平。常用于標(biāo)記的放射性核素為于標(biāo)記的放射性核素為125125I I和和131131I I，分為液相和固，分為液相和固相兩種方法。相兩種方法。 該法常用于測(cè)定該法常用于測(cè)定微量物質(zhì)微量物質(zhì)，如胰島素、生長(zhǎng)，如胰島素、生長(zhǎng)激素、甲狀腺素、孕酮等激素，嗎啡、地高辛、激素、甲狀腺素、孕酮等激素，嗎啡、地高辛、IgEIgE

24、等。等。 放射免疫分析法放射免疫分析法(radioimmunoassay, RIA) 屬于非競(jìng)爭(zhēng)性放射性配體結(jié)合分析技術(shù)。他與屬于非競(jìng)爭(zhēng)性放射性配體結(jié)合分析技術(shù)。他與RIARIA為代表的競(jìng)爭(zhēng)性放射性配體分析技術(shù)的區(qū)別主為代表的競(jìng)爭(zhēng)性放射性配體分析技術(shù)的區(qū)別主要有兩點(diǎn)：一，放射性核素標(biāo)記的是抗體而不是抗要有兩點(diǎn)：一，放射性核素標(biāo)記的是抗體而不是抗原，其二是采用過(guò)量抗體而不是限量抗體。原，其二是采用過(guò)量抗體而不是限量抗體。RIMARIMA與與RIARIA相比較，提高了檢測(cè)的靈敏度并使檢測(cè)范圍增相比較，提高了檢測(cè)的靈敏度并使檢測(cè)范圍增寬，特異性和精確度進(jìn)一步提高。寬，特異性和精確度進(jìn)一步提高。 免疫

25、放射分析法免疫放射分析法（immunoradiometricimmunoradiometric assay, IRMA assay, IRMA） 免疫放射分析法有以下特點(diǎn)：免疫放射分析法有以下特點(diǎn)：1.1.以標(biāo)記抗體作為示蹤劑以標(biāo)記抗體作為示蹤劑2.2.反應(yīng)動(dòng)力學(xué)：因標(biāo)記抗體是過(guò)量的，且反應(yīng)是非競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)動(dòng)力學(xué)：因標(biāo)記抗體是過(guò)量的，且反應(yīng)是非競(jìng)爭(zhēng)性 的，抗原抗體是全量反應(yīng)，故反應(yīng)速度比的，抗原抗體是全量反應(yīng)，故反應(yīng)速度比RIARIA快?？?。3.3.靈敏度明顯高于放射免疫分析，約為放射免疫分析的靈敏度明顯高于放射免疫分析，約為放射免疫分析的1010100100倍。倍。4.4.標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍寬。

26、標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍寬。5.5.特異性高。特異性高。6.6.穩(wěn)定性好。穩(wěn)定性好。金標(biāo)記免疫技術(shù)金標(biāo)記免疫技術(shù) 膠體金標(biāo)記技術(shù)膠體金標(biāo)記技術(shù) (Immunogold(Immunogold labeling labeling technique) technique) 是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物，應(yīng)是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物，應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。免疫膠乳試驗(yàn)應(yīng)用免疫膠乳試驗(yàn)應(yīng)用膠乳凝集試驗(yàn)?zāi)z乳凝集試驗(yàn)原理：原理： 膠乳凝集試驗(yàn)是一種間接凝集試驗(yàn)，它是以聚膠乳凝集試驗(yàn)是一種間接凝集試驗(yàn)，它是以聚苯乙烯膠乳微粒作為惰性載體。膠乳為人工合成的苯乙烯膠

27、乳微粒作為惰性載體。膠乳為人工合成的載體，因此其性能比生物來(lái)源的紅細(xì)胞穩(wěn)定，均一載體，因此其性能比生物來(lái)源的紅細(xì)胞穩(wěn)定，均一性好。但膠乳與蛋白質(zhì)的結(jié)合能力以及凝集性能不性好。但膠乳與蛋白質(zhì)的結(jié)合能力以及凝集性能不如紅細(xì)胞，因此作為間接凝集試驗(yàn)，膠乳試驗(yàn)的敏如紅細(xì)胞，因此作為間接凝集試驗(yàn)，膠乳試驗(yàn)的敏感度不及血凝試驗(yàn)。感度不及血凝試驗(yàn)。 膠乳凝集試驗(yàn)?zāi)z乳凝集試驗(yàn)方法：v傳統(tǒng)的膠乳凝集試驗(yàn)分試管法與玻片法。v試管法先將受檢標(biāo)本在試管中以緩沖液作倍比稀釋，然后加入致敏的膠乳試劑，反應(yīng)后觀察膠乳凝集結(jié)果。v玻片法操作簡(jiǎn)便，1滴受檢標(biāo)本和1滴致敏的膠乳試劑在玻片上混勻后，連續(xù)搖動(dòng)23min即可觀察結(jié)果。

28、出現(xiàn)大顆粒凝集的為陽(yáng)性反應(yīng)，保持均勻乳液狀為陰性反應(yīng)。 抗鏈球菌溶血素抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）原理：原理： 膠乳凝集試驗(yàn)原理相同，在受檢者膠乳凝集試驗(yàn)原理相同，在受檢者血清中，加入溶血素血清中，加入溶血素“O”,O”,出現(xiàn)凝集顆粒，出現(xiàn)凝集顆粒，即為陽(yáng)性。即為陽(yáng)性。參考值：參考值： ASO250U/LASO250U/L臨床意義：臨床意義：1.ASO1.ASO測(cè)定對(duì)于診斷測(cè)定對(duì)于診斷A A族鏈球菌感染很有價(jià)值，其存在族鏈球菌感染很有價(jià)值，其存在及含量可反映感染的嚴(yán)重程度。及含量可反映感染的嚴(yán)重程度。2.2.風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎、結(jié)節(jié)性紅斑、猩紅熱、風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎、結(jié)節(jié)性紅斑、猩紅

29、熱、急性扁桃體炎等急性扁桃體炎等ASOASO明顯升高。明顯升高。3.3.少數(shù)肝炎、結(jié)締組織病、結(jié)核病及多發(fā)性骨髓瘤病少數(shù)肝炎、結(jié)締組織病、結(jié)核病及多發(fā)性骨髓瘤病人亦可使人亦可使ASOASO增高。增高。 4.4.當(dāng)效價(jià)當(dāng)效價(jià)250U/L250U/L時(shí)，才被認(rèn)為有診斷價(jià)值。時(shí)，才被認(rèn)為有診斷價(jià)值。 抗鏈球菌溶血素抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）類風(fēng)濕因子（類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor,RF） 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）是由自身抗體免是由自身抗體免疫復(fù)合物引起的自身免疫性疾病。疫復(fù)合物引起的自身免疫性疾病。 類風(fēng)濕因子是由于感染因子（細(xì)菌、病類風(fēng)濕因子是由于感染因子（細(xì)菌

30、、病毒等）引起體內(nèi)產(chǎn)生的以變性毒等）引起體內(nèi)產(chǎn)生的以變性IgG為抗原的為抗原的一種抗體，故又稱抗抗體。一種抗體，故又稱抗抗體。 原理：原理： 將變性將變性IgGIgG包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上，這種包被于聚苯乙烯膠乳顆粒上，這種致敏膠乳在與待測(cè)血清中的致敏膠乳在與待測(cè)血清中的RFRF相遇時(shí)，即發(fā)生肉眼相遇時(shí)，即發(fā)生肉眼可見(jiàn)的凝集。可見(jiàn)的凝集。參考值：參考值： 正常人正常人1 1：2020稀釋血清為陰性。稀釋血清為陰性。 類風(fēng)濕因子（類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor,RF） 臨床意義：臨床意義：1.1.約約90%90%類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RARA）患者的）患者的RFRF呈

31、陽(yáng)呈陽(yáng)性。性。 2.2.某些自身免疫病，如冷球蛋白血癥、進(jìn)行性某些自身免疫病，如冷球蛋白血癥、進(jìn)行性全身性硬化癥、干燥綜合征、全身性硬化癥、干燥綜合征、SLESLE等。等。 3.3.一些其他疾病如血管炎、一些其他疾病如血管炎、肝病肝病、慢性感染也、慢性感染也可出現(xiàn)可出現(xiàn)RFRF。 類風(fēng)濕因子（類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor,RF） 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理：原理：v使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。免疫活性。 v使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)

32、抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性?；钚?。v結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)接相關(guān) 。ELISA主要有以下幾種類型：主要有以下幾種類型：1.1.雙抗體夾心法測(cè)抗原（常用）雙抗體夾心法測(cè)抗原（常用）2.2.雙抗原夾心法測(cè)抗體雙抗原夾心法測(cè)抗體3.3.間接法測(cè)抗體（常用）間接法測(cè)抗體（常用）4.4.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原競(jìng)

33、爭(zhēng)法測(cè)抗原5.5.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體6.6.捕獲包被法測(cè)抗體捕獲包被法測(cè)抗體7.7.親和素親和素- -生物素生物素 ELISAELISA法法包被特異性抗體包被特異性抗體加入待測(cè)樣品加入待測(cè)樣品加酶標(biāo)特異性抗體加酶標(biāo)特異性抗體底物顯色底物顯色洗滌孵育洗滌孵育雙抗體夾心法測(cè)抗原v待測(cè)抗原須有兩個(gè)可以與抗體結(jié)合的部位，其一端與包被于固相載體上的抗體結(jié)合，另一端與酶標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合。v此法適用于檢驗(yàn)各種二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。不能用于分子量小于5000的半抗原或小分子單價(jià)抗原的測(cè)定。雙抗原夾心法測(cè)抗體雙抗原夾心法測(cè)抗體v反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類

34、似。v用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。v此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測(cè)定。v乙肝標(biāo)志物中HBsAb的檢測(cè)常采用本法。關(guān)鍵在于根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同制備酶標(biāo)抗原。 間接法測(cè)抗體間接法測(cè)抗體間接法是檢測(cè)抗體最常用的方法。原理：利用酶標(biāo)記的抗體檢測(cè)已與固相結(jié)合的 受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟： （1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相 抗原，洗滌。 （2）加稀釋的受檢樣本，其中的特異抗體與固 相抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物，孵育洗滌。（3）加酶標(biāo)抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶，孵育洗滌。 （4）加底物顯色：顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。

35、 間接法的特點(diǎn)間接法的特點(diǎn)v本法主要用于對(duì)病原體抗體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染本法主要用于對(duì)病原體抗體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染病的診斷。病的診斷。v間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗體檢測(cè)相應(yīng)抗體。一酶標(biāo)抗體檢測(cè)相應(yīng)抗體。v間接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度。特別應(yīng)注間接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度。特別應(yīng)注意除去能與一般健康人血清發(fā)生反應(yīng)的雜質(zhì)。意除去能與一般健康人血清發(fā)生反應(yīng)的雜質(zhì)。若抗原中含有無(wú)關(guān)蛋白，也會(huì)因竟?fàn)幬蕉叭艨乖泻袩o(wú)關(guān)蛋白，也會(huì)因竟?fàn)幬蕉绊懓恍Ч?。響包被效果。?jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原 操作步驟操作步驟 ：（1）將特異抗體與固相載體連接

36、，形成固相抗）將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗 體洗滌。體洗滌。（2）待測(cè)管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的）待測(cè)管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的 混合溶液，使之與固相抗體反應(yīng)，孵育洗混合溶液，使之與固相抗體反應(yīng)，孵育洗 滌。滌。 （3）加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原）加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原 最多，故顏色最深。待測(cè)管顏色越淡，表示標(biāo)最多，故顏色最深。待測(cè)管顏色越淡，表示標(biāo) 本中抗原含量越多。參考管顏色深度與待測(cè)管本中抗原含量越多。參考管顏色深度與待測(cè)管 顏色深度之差，代表受檢標(biāo)本抗原的量。顏色深度之差，代表受檢標(biāo)本抗原的量。競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體v當(dāng)抗原材料中的干擾

37、物質(zhì)不易除去，或不易得當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗體。體。v標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)與固相標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少，因此陽(yáng)性反應(yīng)呈色淺于陰性的酶標(biāo)抗體愈少，因此陽(yáng)性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)。反應(yīng)。 捕獲包被法測(cè)抗體捕獲包被法測(cè)抗體v樣品中針對(duì)某些抗原的特異性樣品中針對(duì)某些抗原的特異性IgM常和特異性常和特異性IgG同時(shí)存在，后者會(huì)干擾同時(shí)存在，后者會(huì)干擾IgM抗體的測(cè)定?？贵w的測(cè)定。因此測(cè)

38、定因此測(cè)定IgM抗本多用捕獲法。抗本多用捕獲法。v先將所有樣品先將所有樣品IgM（包括特異性（包括特異性IgM和非特異和非特異性性IgM）固定在固相上，在去除）固定在固相上，在去除IgG后再測(cè)定后再測(cè)定特異性特異性IgM。 操作步驟： （1）將抗）將抗IgM抗體抗體連接連接在固相載體上，形成固相抗在固相載體上，形成固相抗 IgM，洗滌。，洗滌。 （2）加入稀釋的待測(cè)標(biāo)本：孵育后樣品中的）加入稀釋的待測(cè)標(biāo)本：孵育后樣品中的IgM抗體被、抗體被、 固相抗體捕獲，洗滌。固相抗體捕獲，洗滌。 （3）加入特異性抗原試劑：其僅與固相上的特異性）加入特異性抗原試劑：其僅與固相上的特異性IgM 結(jié)合，洗滌。結(jié)

39、合，洗滌。 （4）加入針對(duì)抗原的酶標(biāo)抗體：使之與結(jié)合在固相上）加入針對(duì)抗原的酶標(biāo)抗體：使之與結(jié)合在固相上 的抗原反應(yīng)結(jié)合，洗滌。的抗原反應(yīng)結(jié)合，洗滌。 （5）加底物顯色：如有顏色顯示，則表示標(biāo)本中存在、）加底物顯色：如有顏色顯示，則表示標(biāo)本中存在、 特異性特異性IgM抗體，是為陽(yáng)性反應(yīng)抗體，是為陽(yáng)性反應(yīng)。 親和素親和素-生物素生物素-ELISA法法v親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。每個(gè)分子由4個(gè)亞基組成，可以和4個(gè)生物素分子親密結(jié)合。v生物素（biotin）又稱維生素H，存在于蛋黃中。可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。v親和素與生物素的結(jié)合，雖不屬免疫反應(yīng)，但特異

40、性強(qiáng)，親和力大，形成一種極為穩(wěn)定的復(fù)合體。v把親和素和生物素與ELISA偶聯(lián)起來(lái)，就可大大提高ELISA的敏感度。 乙型肝炎血清學(xué)檢驗(yàn)臨床意義乙型肝炎血清學(xué)檢驗(yàn)臨床意義 乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（HBVHBV）引起的、以肝臟炎性病變?yōu)橹?，并可引起多引起的、以肝臟炎性病變?yōu)橹?，并可引起多器官損害的一種疾病。乙肝廣泛流行于世界器官損害的一種疾病。乙肝廣泛流行于世界各國(guó)，主要侵犯兒童及青壯年，少數(shù)患者可各國(guó)，主要侵犯兒童及青壯年，少數(shù)患者可轉(zhuǎn)化為肝硬化或肝癌。轉(zhuǎn)化為肝硬化或肝癌。傳播途徑：傳播途徑：血液傳播、性接觸傳播和母嬰傳播血液傳播、性接觸傳播和母嬰傳播vHBV的抗

41、原有的抗原有3種：表面抗原（種：表面抗原（HBsAg）、核心抗）、核心抗原（原（HBcAg）和）和e抗原（抗原（HBeAg）。表面抗原大量）。表面抗原大量存在于感染者血液中，是存在于感染者血液中，是HBV感染以及檢測(cè)的主要感染以及檢測(cè)的主要標(biāo)志。標(biāo)志。v核心抗原是乙肝病毒核心顆粒的唯一結(jié)構(gòu)蛋白。由核心抗原是乙肝病毒核心顆粒的唯一結(jié)構(gòu)蛋白。由于它存在于于它存在于Dane顆粒核心結(jié)構(gòu)表面，被表面抗原顆粒核心結(jié)構(gòu)表面，被表面抗原覆蓋，故不易在血循環(huán)中檢出?？纱碳C(jī)體產(chǎn)生抗覆蓋，故不易在血循環(huán)中檢出?？纱碳C(jī)體產(chǎn)生抗-HBc。ve抗原為可溶性蛋白質(zhì)，在病理上認(rèn)為是抗原為可溶性蛋白質(zhì)，在病理上認(rèn)為是HB

42、V復(fù)制復(fù)制以具有強(qiáng)感染性的一個(gè)指標(biāo)?？挂跃哂袕?qiáng)感染性的一個(gè)指標(biāo)?？?HBe的出現(xiàn)，是預(yù)的出現(xiàn)，是預(yù)后良好的征象。后良好的征象。HBsAg抗抗-HBsHBeAg抗抗HBe抗抗-HBc臨床意義臨床意義過(guò)去和現(xiàn)在均未感染過(guò)去和現(xiàn)在均未感染HBV 曾感染曾感染HBV，急性感染恢復(fù)，急性感染恢復(fù)期期 過(guò)去和現(xiàn)在均已感染過(guò)過(guò)去和現(xiàn)在均已感染過(guò)HBV 預(yù)防注射疫苗預(yù)防注射疫苗 既往感染；急性既往感染；急性HBV感染恢感染恢復(fù)期復(fù)期 既往感染；急性既往感染；急性HBV感染已感染已恢復(fù)恢復(fù) 急性急性HBV感染；慢性感染；慢性HBsAg攜帶者攜帶者 HBsAg抗抗-HBsHBeAg抗抗HBe抗抗-HBc臨床意義臨

43、床意義急性急性HBV感染趨向恢復(fù)；慢性感染趨向恢復(fù)；慢性HBsAg 攜帶者攜帶者，傳染性弱；，傳染性弱；長(zhǎng)期持續(xù)易長(zhǎng)期持續(xù)易癌變癌變 急性或急性或慢性乙肝慢性乙肝，傳染性極強(qiáng)，傳染性極強(qiáng) 急性急性HBV感染早期，感染早期，HBsAg攜帶者攜帶者 急性急性HBV感染早期，傳染性強(qiáng)感染早期，傳染性強(qiáng) 急性感染中期急性感染中期 急性感染趨向恢復(fù)；慢性急性感染趨向恢復(fù)；慢性攜帶攜帶者者 急性感染趨向恢復(fù)急性感染趨向恢復(fù) 急性感染趨向恢復(fù)急性感染趨向恢復(fù) 艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn) 艾滋病是一種危害性極大的傳染病，由艾滋病是一種危害性極大的傳染病，由感染艾滋病病毒（感染艾滋病病毒（HIVHIV病毒

44、）引起。病毒）引起。HIVHIV是一是一種能攻擊人體免疫系統(tǒng)的病毒。它把人體免種能攻擊人體免疫系統(tǒng)的病毒。它把人體免疫系統(tǒng)中最重要的疫系統(tǒng)中最重要的T T淋巴細(xì)胞作為主要攻擊目淋巴細(xì)胞作為主要攻擊目標(biāo)，大量破壞該細(xì)胞，使人體喪失免疫功能，標(biāo)，大量破壞該細(xì)胞，使人體喪失免疫功能， HIVHIV在人體內(nèi)的潛伏期平均為在人體內(nèi)的潛伏期平均為8 89 9年年 。艾滋病從感染到發(fā)病的一般過(guò)程艾滋病從感染到發(fā)病的一般過(guò)程感染分期感染分期臨床分期臨床分期維持時(shí)間維持時(shí)間感染標(biāo)志物感染標(biāo)志物傳染性傳染性原發(fā)感染原發(fā)感染潛伏期潛伏期潛伏期潛伏期2-42-4周周 抗體陰性抗體陰性 (窗口期窗口期)傳染傳染危險(xiǎn)性高

45、危險(xiǎn)性高原發(fā)感染原發(fā)感染癥狀期癥狀期急性急性HIV感染感染1-21-2周周 傳染傳染危險(xiǎn)性高危險(xiǎn)性高慢性感染慢性感染潛伏期潛伏期無(wú)癥狀無(wú)癥狀HIV感染感染2 21515年年( (平均平均 8-10 8-10 年年) )抗體陽(yáng)性抗體陽(yáng)性有傳染性有傳染性臨床臨床發(fā)病期發(fā)病期艾滋病艾滋病0 03 3年年( (平均平均 1-21-2 年年) )抗體陽(yáng)性抗體陽(yáng)性抗原陽(yáng)性抗原陽(yáng)性傳染性強(qiáng)傳染性強(qiáng)檢驗(yàn)標(biāo)志物檢驗(yàn)標(biāo)志物檢驗(yàn)?zāi)康臋z驗(yàn)?zāi)康臋z檢 驗(yàn)驗(yàn) 方方 法法HIV(1+2) HIV(1+2) 抗體抗體篩查試驗(yàn)篩查試驗(yàn)金標(biāo)法、硒標(biāo)法金標(biāo)法、硒標(biāo)法 快速診斷試驗(yàn)快速診斷試驗(yàn)明膠顆粒凝集試驗(yàn)明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)(

46、PA) 微孔板法微孔板法酶聯(lián)免疫試驗(yàn)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISAELISA） 第三代：雙抗原夾心法第三代：雙抗原夾心法 第四代：增加檢測(cè)第四代：增加檢測(cè)P24P24抗原抗原確證試驗(yàn)確證試驗(yàn)免疫印跡法免疫印跡法(WB)(WB) 手工手工/ /儀器儀器HIV抗體篩查試驗(yàn)抗體篩查試驗(yàn)明膠顆粒凝集試驗(yàn)明膠顆粒凝集試驗(yàn)的操作和結(jié)果判斷的操作和結(jié)果判斷5 5 450/630nm450/630nm下測(cè)定下測(cè)定ODOD值值混勻，加蓋，混勻，加蓋，3737溫育溫育 洗板洗板3 3 加入底物加入底物第二次特異性結(jié)合第二次特異性結(jié)合4 4 加入終止液加入終止液1 1 加入樣品加入樣品 洗板洗板2 2 加入酶標(biāo)記物加入酶

47、標(biāo)記物 加蓋，加蓋，3737溫育溫育加蓋，加蓋，3737溫育溫育第一次特異性結(jié)合第一次特異性結(jié)合酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析 ELISAELISA（雙抗原夾心、兩步法）（雙抗原夾心、兩步法）HIV抗體檢測(cè)結(jié)果處理規(guī)范抗體檢測(cè)結(jié)果處理規(guī)范檢測(cè)方法檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)結(jié)果檢驗(yàn)報(bào)告檢驗(yàn)報(bào)告處理處理篩查試驗(yàn)篩查試驗(yàn)陰性陰性HIVHIV抗體陰性抗體陰性陰性告知陰性告知陽(yáng)性陽(yáng)性HIVHIV抗體待復(fù)查抗體待復(fù)查上送確證上送確證確證試驗(yàn)確證試驗(yàn)陰性陰性HIVHIV抗體陰性（抗體陰性（- -）陰性告知陰性告知陽(yáng)性陽(yáng)性HIVHIV抗體陽(yáng)性（抗體陽(yáng)性（+ +）陽(yáng)性告知，個(gè)案調(diào)查陽(yáng)性告知，個(gè)案調(diào)查不確定不確定HIVHIV

48、抗體不確定（抗體不確定（）告知，告知，3 3個(gè)月后復(fù)查共個(gè)月后復(fù)查共2 2次次樣品初篩檢測(cè)初篩檢測(cè)陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)篩查試劑復(fù)查復(fù)查原有試劑加另一種篩選試劑均陽(yáng)性反應(yīng)一陰一陽(yáng)均陰性反應(yīng)送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)報(bào)告陰性HIV抗體確證試驗(yàn)抗體確證試驗(yàn) Western Blot 免疫印跡法免疫印跡法全自動(dòng)免疫印跡儀全自動(dòng)免疫印跡儀腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的臨床應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的臨床應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物的定義腫瘤標(biāo)志物的定義 腫瘤標(biāo)志物腫瘤標(biāo)志物（tumor marker，TM）是是指在腫瘤的發(fā)生和增殖過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞指在腫瘤的發(fā)生和增殖過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞本身所產(chǎn)生的或者是由機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞反應(yīng)本身所產(chǎn)生的或者是由機(jī)體對(duì)腫瘤

49、細(xì)胞反應(yīng)而產(chǎn)生的，反映腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類物質(zhì)，而產(chǎn)生的，反映腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、激素、酶（同工酶）、多胺等。包括蛋白質(zhì)、激素、酶（同工酶）、多胺等?？稍谀[瘤患者血液或體液中檢測(cè)到腫瘤標(biāo)志可在腫瘤患者血液或體液中檢測(cè)到腫瘤標(biāo)志物。物。腫瘤標(biāo)志物的分類腫瘤標(biāo)志物的分類癌胚抗原類標(biāo)志物癌胚抗原類標(biāo)志物 糖類抗原標(biāo)記物糖類抗原標(biāo)記物酶類標(biāo)志物酶類標(biāo)志物激素類標(biāo)志物激素類標(biāo)志物蛋白類標(biāo)志物蛋白類標(biāo)志物胚胎抗原類標(biāo)志物胚胎抗原類標(biāo)志物1 1、甲胎蛋白、甲胎蛋白AFPAFP 胎兒發(fā)育早期，由肝臟和卵黃囊合成的胎兒發(fā)育早期，由肝臟和卵黃囊合成的一種血清糖蛋白，電泳時(shí)位于白蛋白和一種血清糖蛋

50、白，電泳時(shí)位于白蛋白和1 1球球蛋白之間，胎兒出生后不久即逐漸消失。成蛋白之間，胎兒出生后不久即逐漸消失。成人血清中含量甚微。人血清中含量甚微。 臨床意義臨床意義（1）原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者血清中）原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者血清中AFP濃度明顯升高，約濃度明顯升高，約77.1%的患者的患者AFP300ng/mL，但也有，但也有18%的病人的病人AFP并不并不升高。升高。（2）良性肝病，如病毒性肝炎、肝硬化患者）良性肝病，如病毒性肝炎、肝硬化患者AFP濃度有不同濃度有不同程度的升高，但其水平通常低于程度的升高，但其水平通常低于100ng/mL。 其升高原因主要是由于受損傷的肝細(xì)胞再生而形成幼稚其升高原因主要

51、是由于受損傷的肝細(xì)胞再生而形成幼稚化細(xì)胞，幼稚化的肝細(xì)胞具有產(chǎn)生化細(xì)胞，幼稚化的肝細(xì)胞具有產(chǎn)生AFP的能力。但隨著受損的能力。但隨著受損肝細(xì)胞的修復(fù)，肝細(xì)胞的修復(fù)，AFP逐漸恢復(fù)正常。逐漸恢復(fù)正常。（3）生殖腺胚胎性腫瘤患者血清中）生殖腺胚胎性腫瘤患者血清中AFP濃度可見(jiàn)升高。濃度可見(jiàn)升高。（4）婦女妊娠）婦女妊娠3個(gè)月后，血清個(gè)月后，血清AFP濃度開(kāi)始升高，濃度開(kāi)始升高，78個(gè)月時(shí)個(gè)月時(shí)達(dá)到高峰，一般在達(dá)到高峰，一般在400g/L以下，分娩后以下，分娩后3周恢復(fù)正常。若周恢復(fù)正常。若孕婦血清中孕婦血清中AFP異常升高，應(yīng)考慮胎兒神經(jīng)管缺損畸形的可異常升高，應(yīng)考慮胎兒神經(jīng)管缺損畸形的可能性。能

52、性。2 2、癌胚抗原、癌胚抗原CEACEA 是一種可溶性糖蛋白，胚胎期主要存在于胎兒是一種可溶性糖蛋白，胚胎期主要存在于胎兒的胃腸管、胰腺和肝臟。胃腸道惡性腫瘤時(shí)可見(jiàn)血的胃腸管、胰腺和肝臟。胃腸道惡性腫瘤時(shí)可見(jiàn)血清清CEACEA升高，在乳腺癌、肺癌及其他惡性腫瘤中也升高，在乳腺癌、肺癌及其他惡性腫瘤中也可出現(xiàn)表達(dá)，并分泌于體液中。可出現(xiàn)表達(dá)，并分泌于體液中。 （1）血清）血清CEA升高主要見(jiàn)于結(jié)腸癌、直腸癌、胰腺癌、胃癌、升高主要見(jiàn)于結(jié)腸癌、直腸癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌，其他惡性腫瘤也有不同程度的陽(yáng)性率。肝癌、肺癌、乳腺癌，其他惡性腫瘤也有不同程度的陽(yáng)性率。（2）隨著臨床應(yīng)用的發(fā)展

53、，）隨著臨床應(yīng)用的發(fā)展，CEA變得越來(lái)越廣譜。主要用于變得越來(lái)越廣譜。主要用于連續(xù)的隨訪檢測(cè)，可用于惡性腫瘤手術(shù)后的療效觀察及預(yù)后連續(xù)的隨訪檢測(cè)，可用于惡性腫瘤手術(shù)后的療效觀察及預(yù)后判斷，也可用于對(duì)化療病人的療效觀察。判斷，也可用于對(duì)化療病人的療效觀察。（3）某些良性疾病，如直腸息肉、結(jié)腸炎、肝硬化、肝炎和）某些良性疾病，如直腸息肉、結(jié)腸炎、肝硬化、肝炎和肺部疾病也有不同程度的升高，但陽(yáng)性率較低。肺部疾病也有不同程度的升高，但陽(yáng)性率較低。（4）98%的非吸煙者的非吸煙者CEA5ng/mL 臨床意義臨床意義1、糖類抗原糖類抗原12-512-5（CA12-5CA12-5）v是卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的腫

54、瘤標(biāo)志物是卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的腫瘤標(biāo)志物v分子量為分子量為20萬(wàn)的糖蛋白萬(wàn)的糖蛋白v可被單克隆抗體可被單克隆抗體OC125所識(shí)別所識(shí)別v在卵巢腫瘤上皮和在卵巢腫瘤上皮和Mullerian副腎管來(lái)副腎管來(lái) 源的源的病理和正常組織中表達(dá)，其生物學(xué)功能不明。病理和正常組織中表達(dá)，其生物學(xué)功能不明。 （1）卵巢癌病人血清中）卵巢癌病人血清中CA125水平明顯升高。手術(shù)和化療后水平明顯升高。手術(shù)和化療后期水平很快下降。當(dāng)復(fù)發(fā)時(shí)，在臨床確診前幾個(gè)月便可呈現(xiàn)期水平很快下降。當(dāng)復(fù)發(fā)時(shí)，在臨床確診前幾個(gè)月便可呈現(xiàn)CA125增高，尤其卵巢癌轉(zhuǎn)移患者的血清增高，尤其卵巢癌轉(zhuǎn)移患者的血清CA125更明顯高更明顯高于正

55、常參考值。于正常參考值。（2）其他非卵巢惡性腫瘤也有一定陽(yáng)性率，如乳腺癌）其他非卵巢惡性腫瘤也有一定陽(yáng)性率，如乳腺癌40%，胰腺癌胰腺癌50%，胃癌，胃癌47%，肺癌，肺癌41.4%，結(jié)腸直腸癌，結(jié)腸直腸癌34.2%，其他婦科腫瘤其他婦科腫瘤43%。（3）非惡性腫瘤，如子宮內(nèi)膜異位癥、盆腔炎、卵巢囊腫、）非惡性腫瘤，如子宮內(nèi)膜異位癥、盆腔炎、卵巢囊腫、胰腺炎、肝炎、肝硬化等疾病也有不同程度升高，但陽(yáng)性率胰腺炎、肝炎、肝硬化等疾病也有不同程度升高，但陽(yáng)性率較低，診斷時(shí)應(yīng)注意鑒別。較低，診斷時(shí)應(yīng)注意鑒別。（4）在許多良性和惡性胸腹水中發(fā)現(xiàn)有）在許多良性和惡性胸腹水中發(fā)現(xiàn)有CA125升高，羊水中升高

56、，羊水中也能檢出較高濃度的也能檢出較高濃度的CA125。（5）早期妊娠的頭）早期妊娠的頭3個(gè)月內(nèi)，也有個(gè)月內(nèi)，也有CA125升高的可能。升高的可能。 臨床意義臨床意義2 2、 糖類抗原糖類抗原1515-3-3（- - CA15-3CA15-3是乳腺癌的最重要的特異性標(biāo)志是乳腺癌的最重要的特異性標(biāo)志物。物。30%-50%30%-50%的乳腺癌患者的的乳腺癌患者的CA15-3CA15-3明顯升高，明顯升高，是乳腺癌患者診斷和監(jiān)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)、觀察療是乳腺癌患者診斷和監(jiān)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)、觀察療效的最佳指標(biāo)。效的最佳指標(biāo)。（1）乳腺癌患者常有）乳腺癌患者常有CA15-3升高，但在乳腺癌的初升高，但在乳腺癌的初期

57、敏感性較低，約為期敏感性較低，約為60%，轉(zhuǎn)移性乳腺癌陽(yáng)性率可，轉(zhuǎn)移性乳腺癌陽(yáng)性率可達(dá)達(dá)80%。CA15-3可以作為原發(fā)性乳腺癌的輔助診斷可以作為原發(fā)性乳腺癌的輔助診斷指標(biāo)，也可以作為手術(shù)后隨訪，監(jiān)測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)指標(biāo)，也可以作為手術(shù)后隨訪，監(jiān)測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的指標(biāo)。移的指標(biāo)。（2）其他惡性腫瘤，如肺癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺）其他惡性腫瘤，如肺癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、原發(fā)性肝癌等也有不同程癌、卵巢癌、子宮頸癌、原發(fā)性肝癌等也有不同程度的陽(yáng)性率。度的陽(yáng)性率。（3）肝臟、胃腸道、肺、乳腺、卵巢等非惡性腫瘤）肝臟、胃腸道、肺、乳腺、卵巢等非惡性腫瘤疾病，陽(yáng)性率一般低于疾病，陽(yáng)性率一般

58、低于10%。 臨床意義臨床意義3 3、糖類抗原、糖類抗原19-919-9（CA19-9CA19-9） CA19-9是胰腺、胃、膽囊和腸癌的標(biāo)記物。是胰腺、胃、膽囊和腸癌的標(biāo)記物。（1）胰腺癌、膽囊癌、膽管壺腹癌患者血清）胰腺癌、膽囊癌、膽管壺腹癌患者血清CA19-9水平明顯升高，尤其是胰腺癌晚期病人，血清水平明顯升高，尤其是胰腺癌晚期病人，血清CA19-9濃度可達(dá)濃度可達(dá)40萬(wàn)萬(wàn)U/mL，陽(yáng)性率約為，陽(yáng)性率約為74.9%，是重要的輔助診斷指標(biāo)。是重要的輔助診斷指標(biāo)。（2）胃癌陽(yáng)性率約為）胃癌陽(yáng)性率約為50%，結(jié)腸癌陽(yáng)性率約為，結(jié)腸癌陽(yáng)性率約為60%，肝癌陽(yáng)性率約為肝癌陽(yáng)性率約為64.6%。（3

59、）急性胰腺炎、膽囊炎、膽汁淤積性膽管炎、肝）急性胰腺炎、膽囊炎、膽汁淤積性膽管炎、肝硬化、肝炎等疾病，硬化、肝炎等疾病，CA19-9也有不同程度的升高，也有不同程度的升高，應(yīng)注意鑒別。應(yīng)注意鑒別。 臨床意義臨床意義酶類腫瘤標(biāo)志物酶類腫瘤標(biāo)志物前列腺特異性抗原（前列腺特異性抗原（PSAPSA）vPSA是前列腺的特異性標(biāo)記物是前列腺的特異性標(biāo)記物 屬于器官特異性抗原，不具備腫瘤特異性屬于器官特異性抗原，不具備腫瘤特異性v PSA屬于酶類腫瘤標(biāo)記物，具有糜蛋白酶樣和胰蛋屬于酶類腫瘤標(biāo)記物，具有糜蛋白酶樣和胰蛋 酶的活性酶的活性v PSA在正常男性含量小于在正常男性含量小于4 g/L 參考值：參考值：

60、 血清血清t-PSA4.0ug/L （ELISA） f-PSA0.2（1）PSA是前列腺癌標(biāo)志物。隨著年齡的增大，血清是前列腺癌標(biāo)志物。隨著年齡的增大，血清PSA會(huì)會(huì)逐漸增加。逐漸增加。（2）前列腺肥大、前列腺炎、腎脹和泌尿生殖系統(tǒng)的疾病患）前列腺肥大、前列腺炎、腎脹和泌尿生殖系統(tǒng)的疾病患者，也可見(jiàn)者，也可見(jiàn)t-PSA和和f-PSA水平輕度升高，必須結(jié)合其他檢水平輕度升高，必須結(jié)合其他檢查進(jìn)行鑒別。查進(jìn)行鑒別。（3）單獨(dú)使用）單獨(dú)使用t-PSA和和f-PSA升高來(lái)診斷前列腺癌時(shí)很難排除升高來(lái)診斷前列腺癌時(shí)很難排除前列腺肥大對(duì)前列腺癌診斷的影響，特別是當(dāng)前列腺肥大對(duì)前列腺癌診斷的影響，特別是當(dāng)t