半夏塊莖不同粒徑總生物堿含量的研究

1、半夏塊莖不同粒徑總生物堿含量的研究         09-09-08 17:01:00     編輯：studa20                     作者：曾建紅 彭正松 陳旭 王曉華 舒麗清【摘要】  目的測定半夏塊莖不同粒徑總生物堿的含量，為半夏質(zhì)量標準控制提供理論依

2、據(jù)。方法采用氯仿提取，依據(jù)酸性染料比色法的原理，在417 nm波長下測定，并作方差分析。結(jié)果獲得良好的線性關(guān)系(r=0.998 9)和回收率(100.1%)，RSD為2.3%。不同粒徑總生物堿含量的差異顯著（F=79.23，P<0.01）。結(jié)論測定方法簡單快速；不同粒徑總生物堿含量和產(chǎn)量以直徑為2 cm的塊莖最高，在半夏收購過程中應(yīng)將塊莖粒徑控制在2.0 cm左右為宜。 【關(guān)鍵詞】  半夏 塊莖 總生物堿Abstract：ObjectiveTo determine the content of total alkaloids from Pinellia ternate 

3、; tuber with different particle diameters for quality control. MethodsThe alkaloid was extracted by chlorolform from Pinellia ternate and tested at 417nm with the spectroscopy by acid dye. The result was analyzed in One-Way ANOVA. ResultsThe calibration curve of alkaloid was linear(r=0.998 9).The re

4、covery rate was perfect(100.1%).The alkaloid content of different particle diameter had very significant difference(F=79.23，P<0.01).ConclusionThis method is simple and quick. The alkaloid content and output is the highest when the Pinellia ternate tuber is 2cm which is considered as the best purc

5、hase standard.Key words：Pinellia ternate(Thunb.)Breit；  Different particle diameter；  Alkaloids中藥半夏為天南星科多年生草本植物半夏Pinellia ternate (Thunb.) Breit 的干燥塊莖，在我國大部分地區(qū)及朝鮮半島和日本均有分布。半夏入藥首載于神農(nóng)本草經(jīng)，中國藥典2005年版收載為唯一的半夏類藥材植物。半夏塊莖主要含有生物堿、-谷甾醇、多糖、半夏蛋白、氨基酸、揮發(fā)油及無機元素等多種化學(xué)成分1,2，具有燥濕化痰，降逆止嘔，消痞散結(jié)之功效。目前市售鎮(zhèn)咳類中藥復(fù)方制劑

6、中多含有半夏，而生物堿在眾多的化學(xué)成分中具有明顯的生物活性和生理功能，是中藥半夏中主要有效成分之一。國內(nèi)外對半夏生物堿含量的測定已做了大量工作38，但對半夏塊莖不同粒徑生物堿含量的研究尚未見報道，中國藥典2005年版中也未見半夏塊莖的粒徑指標。本研究采用酸性染料比色法測定半夏塊莖不同粒徑生物堿的含量，為半夏質(zhì)量標準控制提供依據(jù)。1  材料與儀器1.1  樣品材料來自西華師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院半夏基地，經(jīng)本教研室鑒定為半夏的干燥塊莖。材料均系同一植株的塊莖和珠芽通過無性繁殖生長，無病蟲害。材料共取5個批次，按塊莖單粒直徑分為5級，分別用，表示。塊莖采收后去皮，洗凈，105烘箱中

7、烘4h后置于60烘箱中烘干至恒重，游標卡尺量取直徑，粉碎過60目篩置干燥器備用。1.2  試劑對照品鹽酸麻黃堿(中國藥品生物制品檢定所，批號714- 9903) ，氨水、二氯甲烷、檸檬酸鈉緩沖液(pH= 6. 0) ，0.1%溴麝香草酚藍溶液等均為市售分析純。1.3  儀器GT3C916紫外可見分光光度計：(澳大利亞GBC科學(xué)儀器有限公司)，旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀(上海申科電子有限公司)。2  方法和結(jié)果2.1  對照品溶液的制備精密稱取105干燥至恒重的鹽酸麻黃堿對照品16. 4 mg，置 250 ml容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻制得含鹽酸麻黃堿濃度

8、為0.065 6 mg/ ml對照品溶液。2.2  樣品供試液的制備精密稱取半夏粉末，加入12%氨水將材料攪拌至濕潤，加入樣品量18倍的氯仿浸泡25 h，置70水浴鍋中回流提取5 h，過濾，殘渣以10 ml氯仿分3次洗滌，合并提取液，移置50 ml容量瓶中，用氯仿稀釋至刻度，搖勻，精確吸取提取液2 ml置旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀濃縮至干，加入pH 6. 0緩沖液5 ml，精密加入氯仿10 ml，加0.1 %溴麝香草酚藍溶液1 ml，充分振蕩，移置60 ml分液漏斗，靜置30 min，分取氯仿層，作為樣品供試液。2. 3  實驗條件的選擇精密稱取樣品，按“2. 2”項方法制備樣品供試液，

9、并將對照品溶液和樣品供試液在380 600 nm波長范圍內(nèi)進行光譜掃描，結(jié)果兩者在417 nm波長處均有最大吸收值，兩者的吸收峰完全相同，吸收光譜一致，故選定417 nm作為測定波長。精密稱取樣品，按“2. 2”項制備樣品供試液和空白對照液，在波長417 nm處進行測定，并在室溫下每隔20 min測定1次，實驗結(jié)果表明供試樣品液在80 min內(nèi)顯色穩(wěn)定，RSD= 0.3%(n= 5)。本實驗只考察了80 min內(nèi)供試液的顯色穩(wěn)定性，因80 min 內(nèi)完全可以完成測定。精密吸取對照品溶液0.1，0. 3，0. 5，0. 7，0. 9 ml，分別加蒸餾水至1. 0 ml，加入5 ml pH6. 0

10、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，精密加入氯10 ml和0. 1 %溴麝香草酚藍溶液1 ml充分振蕩，移置60 ml分液漏斗，靜置30 min，分取氯仿層，制得對照品供試液。另取1 ml水，以同樣方法操作，作空白對照液，在417 nm波長處測定吸光值。    以濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，求得回歸方程為：Y=0. 157  6X+ 0. 024 5,r= 0.998 9(n= 5)，表明鹽酸麻黃堿在0.39 3. 47 g 范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系，符合Beer:定律。     09-09-08 17:01:00 &

11、#160;   編輯：studa202.4  精密度與回收率考察2.5  樣品含量的測定 精密稱取不同粒徑半夏樣品，按“2. 2”項方法制備樣品供試液及空白對照液，在417 nm波長處分別測定其吸收度和計算含量，并用方差分析。結(jié)果見表1和圖1。從表1中可知，不同粒徑總生物堿含量的差異較大，經(jīng)方差分析達到極顯著水平（F=79.23>F0.01，其顯著性概率Sig.=0.000<0.01）。不同粒徑總生物堿含量的高低依次為：塊莖直徑為2，1.5，2.5，3，1 cm。對單?？偵飰A產(chǎn)量進行方差分析表明，單粒平均總生物堿產(chǎn)量達到

12、極顯著水平（F=30.41>F0.01，其顯著性概率Sig.=0.000<0.01）。不同粒徑總生物堿產(chǎn)量的高低依次為：2，2.5，3，1.5，1 cm。從生物堿含量和產(chǎn)量的因素來考慮，塊莖粒徑在2 cm左右時，其生物堿含量和產(chǎn)量最高。表1  半夏塊莖不同粒徑總生物堿含量和產(chǎn)量（略）3  討論本實驗采用溴麝香草酚藍試液為顯色劑測定總生物堿含量，是因為酸性染料在一定pH介質(zhì)中生物堿類與氫離子成鹽，一些酸性染料在此條件下可與上述鹽離子定量結(jié)合成有色絡(luò)合物而被某些有機溶劑定量地提取的原理。該顯色劑靈敏度高，干擾較小。用鹽酸麻黃堿作對照品，計算時無法考慮其它生物堿分子量

13、大小，都是以鹽酸麻黃堿為標準，較重量法得到的數(shù)據(jù)有所差異。中國藥典對半夏塊莖粒徑?jīng)]有具體的要求，在商品半夏收購過程常以直徑為11.5 cm作為商品收購標準。從本實驗來看，來自同一基因型的半夏塊莖，直徑在2.0 cm小塊莖的總生物堿含量最高。究其原因，與半夏塊莖的生理活動和生理年齡有關(guān)，因為在動態(tài)的代謝反應(yīng)過程中，生物堿不是惰性的最終產(chǎn)物，而是相當積極的參加者，在植物早期生長階段，生物堿的代謝作用旺盛。此外，直徑在2.0 cm小塊莖主要是一些以珠芽為種質(zhì)發(fā)育而來的，大多是新生組織，生命力強，出苗后，生理活動勢旺。而大塊莖(直徑大于等2.5 cm)主要是由小塊莖發(fā)育而來的，生理年齡較長，組織已趨于

14、老化，生理活動勢弱9。因而從生物堿含量和產(chǎn)量的因素來考慮，在半夏收購過程中應(yīng)將塊莖粒徑控制在2.0 cm左右為宜?！緟⒖嘉墨I】  1樓之岑,秦 波. 常用中藥材品種整理和質(zhì)量研究M.北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1995:919.2李先端，胡世材，楊邊菊，等. 半夏類藥材氨基酸與無機元素分析J.中國中藥雜志,1990,15(10):37.3Tyson G.The role of craniectomy in treatment of chronic subdural hematomasJ.J Neurosury,1980,52:776.4于超,張 明，王 宇，等. 紫

15、外分光光度法測定不同產(chǎn)地半夏中總生物堿的含量J.時珍國醫(yī)國藥，2002，13(2):73.5余世春,李曉龍，李 俊，等. 鷂落坪半夏與半夏化學(xué)成分比較J.中藥材，1991，14(12)：28.6張廣強,梁生旺，劉 偉，等. 人工栽培與野生半夏化學(xué)成分對比分析J.中藥材，1987,10(4):37.7趙嵐,蘇 新. 半夏培養(yǎng)物與人工栽培半夏生物堿類成分對比分析J.中國中藥雜志，1990,15(3):18.8謝一輝,肖宏浩，曹 凱，等. 比色法測定半夏中總生物含量J.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1993,5(2)：22.9肖小河. 中藥材品質(zhì)變異的生態(tài)生物學(xué)探討J.中草藥，1989,20(8):42.

16、60;    09-09-08 17:01:00     編輯：studa202.4  精密度與回收率考察2.5  樣品含量的測定 精密稱取不同粒徑半夏樣品，按“2. 2”項方法制備樣品供試液及空白對照液，在417 nm波長處分別測定其吸收度和計算含量，并用方差分析。結(jié)果見表1和圖1。從表1中可知，不同粒徑總生物堿含量的差異較大，經(jīng)方差分析達到極顯著水平（F=79.23>F0.01，其顯著性概率Sig.=0.000<0.01）。不同粒徑總生物堿含量的高低依次為：塊莖直徑為2，1.5，

17、2.5，3，1 cm。對單?？偵飰A產(chǎn)量進行方差分析表明，單粒平均總生物堿產(chǎn)量達到極顯著水平（F=30.41>F0.01，其顯著性概率Sig.=0.000<0.01）。不同粒徑總生物堿產(chǎn)量的高低依次為：2，2.5，3，1.5，1 cm。從生物堿含量和產(chǎn)量的因素來考慮，塊莖粒徑在2 cm左右時，其生物堿含量和產(chǎn)量最高。表1  半夏塊莖不同粒徑總生物堿含量和產(chǎn)量（略）3  討論本實驗采用溴麝香草酚藍試液為顯色劑測定總生物堿含量，是因為酸性染料在一定pH介質(zhì)中生物堿類與氫離子成鹽，一些酸性染料在此條件下可與上述鹽離子定量結(jié)合成有色絡(luò)合物而被某些有機溶劑定量地提取的原理

18、。該顯色劑靈敏度高，干擾較小。用鹽酸麻黃堿作對照品，計算時無法考慮其它生物堿分子量大小，都是以鹽酸麻黃堿為標準，較重量法得到的數(shù)據(jù)有所差異。中國藥典對半夏塊莖粒徑?jīng)]有具體的要求，在商品半夏收購過程常以直徑為11.5 cm作為商品收購標準。從本實驗來看，來自同一基因型的半夏塊莖，直徑在2.0 cm小塊莖的總生物堿含量最高。究其原因，與半夏塊莖的生理活動和生理年齡有關(guān)，因為在動態(tài)的代謝反應(yīng)過程中，生物堿不是惰性的最終產(chǎn)物，而是相當積極的參加者，在植物早期生長階段，生物堿的代謝作用旺盛。此外，直徑在2.0 cm小塊莖主要是一些以珠芽為種質(zhì)發(fā)育而來的，大多是新生組織，生命力強，出苗后，生理活動勢旺。而大塊莖(直徑大于等2.5 cm)主要是由小塊莖發(fā)育而來的，生理年齡較長