江蘇分子生物學(xué)02087自考筆記整理

1、分子生物學(xué)02087一、名詞解釋。1、基因診斷：應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)，檢測(cè)人體某些基因結(jié)構(gòu)或表達(dá)的變化，或檢測(cè)病原體基因組在人體內(nèi)的存在，從而達(dá)到診斷或監(jiān)控療效的目的。2、基因治療：通過特定的分子生物學(xué)技術(shù)，關(guān)閉或降低異常表達(dá)的基因；或?qū)⒄５耐庠椿驅(qū)塍w內(nèi)特定的靶細(xì)胞以彌補(bǔ)缺陷基因；或?qū)⒛撤N特定基因?qū)塍w細(xì)胞表達(dá)一產(chǎn)生特定的蛋白質(zhì)因子，實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的治療作用3、藥物基因組學(xué)：研究遺傳變異對(duì)藥物效能和毒性的影響，開辟藥物研發(fā)的領(lǐng)域、促進(jìn)合理用藥的發(fā)展、加強(qiáng)臨床前及臨床藥理的研究并對(duì)藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)產(chǎn)生重要影響。4、重疊基因：是指兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因共有一段DNA序列，或是指一段DNA序列成為兩個(gè)或兩個(gè)

2、以上基因的組成部分。5、斷裂基因：真核生物的基因是不連續(xù)的，其編碼區(qū)（外顯子）,被一些非編碼區(qū)（內(nèi)含子）所隔斷。6、假基因：與有功能的基因在核苷酸順序的組成上非常相似，卻不具有正常功能的基因。7、癌基因:人類或其他動(dòng)物細(xì)胞（以及致癌病毒）固有的一類基因，又稱轉(zhuǎn)化基因。是具有潛在的促發(fā)腫瘤發(fā)生活性的基因8、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)：在體外由引物介導(dǎo)的、酶促快速合成擴(kuò)增特定基因或DNA片段的一種方法。9、操縱子：是原核生物DNA上的一段區(qū)域。是由若干功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因和控制這些基因表達(dá)的元件組成的一個(gè)完整、連續(xù)的功能單位10、RNA編輯：在初級(jí)轉(zhuǎn)錄物上插入、剔除或置換一些核苷酸殘基而改變遺傳信息的

3、基因調(diào)控方式，是轉(zhuǎn)錄后發(fā)生的另一個(gè)重要事件 11、RNA剪接：一個(gè)基因的外顯子和內(nèi)含子共同轉(zhuǎn)錄在一條轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中，將內(nèi)含子去除而把外顯子連接起來形成成熟RNA分子的過程12、啟動(dòng)子：RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合并起始轉(zhuǎn)錄的一段高度保守性DNA序列13、轉(zhuǎn)座子：是基因組中一段可移動(dòng)的DNA序列，可以通過切割、重新整合等一系列過程從基因組的一個(gè)位置“跳躍”到另一個(gè)位置。 14、突變：DNA堿基序列發(fā)生可遺傳的改變。15、半保留復(fù)制：DNA復(fù)制過程中，兩條鏈分別做模板各自合成一條新的DNA鏈，子代DNA分子中一條鏈來自親代DNA，另一條鏈?zhǔn)切潞铣傻摹?6、半不連續(xù)復(fù)制：DNA復(fù)制過程中，先導(dǎo)鏈合成是連續(xù)的；

4、后隨鏈合成是先形成小片段(岡崎片段 )，再連接而成大片段。17、移碼突變：指DNA片段中某一位點(diǎn)插入或丟失一個(gè)或幾個(gè)（非3或3的倍數(shù)）堿基對(duì)時(shí)，造成插入或丟失位點(diǎn)以后的一系列編碼順序發(fā)生錯(cuò)位的一種突變。引起該位點(diǎn)以后的遺傳信息出現(xiàn)異常。 18、同義突變：突變沒有引起編碼氨基酸變化，不影響蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)19、錯(cuò)義突變：堿基序列的改變引起表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)氨基酸序列的改變20、無義突變：指某個(gè)堿基的改變使編碼某種氨基酸的密碼子變?yōu)榻K止密碼子，使肽鏈過早終止，蛋白產(chǎn)物一般沒有活性21、增強(qiáng)子：使和它相連鎖的基因轉(zhuǎn)錄頻率明顯增加的DNA序列22、終止子：DNA分子中終止轉(zhuǎn)錄的核苷酸序列23、轉(zhuǎn)化：將質(zhì)粒或

5、其它外源DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞的過程24、轉(zhuǎn)染：由噬菌體或病毒介導(dǎo)外源DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞的過程25、感受態(tài)：細(xì)胞在一定生理狀態(tài)時(shí)可攝取外源性遺傳物質(zhì)，并使受體細(xì)胞產(chǎn)生新的遺傳性狀26、基因組：一個(gè)細(xì)胞或者生物體所攜帶的全部遺傳信息。27、復(fù)等位基因：在種群中，同源染色體的相同位點(diǎn)上，可以存在兩個(gè)以上的等位基因。28、質(zhì)粒：是一類存在于細(xì)菌和真菌細(xì)胞中獨(dú)立于核區(qū)DNA而自主復(fù)制的共價(jià)、閉合、環(huán)狀雙鏈DNA分子。29、RNA干擾：是指在進(jìn)化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發(fā)的、同源mRNA高效特異性降解的現(xiàn)象。30、DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)：指4種脫氧核苷

6、酸的鏈接及排列順序，表示了該DNA分子的化學(xué)構(gòu)成。31、轉(zhuǎn)導(dǎo)：由噬菌體將一個(gè)細(xì)胞的基因傳遞給另一細(xì)胞的過程。32、密碼子：在一個(gè)MRNA上的三個(gè)核苷酸按一定順序排列的mRNA。33、反式作用因子：是一類通過與順式作用元件和RNA聚合酶的相互作用調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的活性的細(xì)胞核內(nèi)蛋白因子。34、遺傳密碼的簡(jiǎn)并性：同一種氨基酸具有兩個(gè)或更多個(gè)密碼子的現(xiàn)象。35、核內(nèi)不均一RNA（hnRNA）：真核生物mRNA的原始轉(zhuǎn)錄物是分子量極大的前體，在核內(nèi)加工過程中形成分子大小不等的中間產(chǎn)物，被稱為hnRNA。36、開放閱讀框（ORF）：是mRNA分子上從起始密碼子開始到終止密碼子結(jié)束這一段連續(xù)的核苷酸序列，即mRN

7、A分子上的編碼區(qū)，是一個(gè)特定蛋白質(zhì)多肽鏈的編碼序列。37、DNA的變性：維持雙螺旋穩(wěn)定性的氫鍵和疏水鍵的斷裂，DNA分子由穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu)松解為無規(guī)則線性結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象。38、端粒：由端粒DNA與端粒結(jié)合蛋白形成的、染色體端部的特化部分。39、著絲粒：兩條染色單體相連處染色較淺向內(nèi)凹陷的縊痕。40、順式作用元件：與相關(guān)基因處于同一DNA分子上，能起調(diào)控作用的DNA序列。二、簡(jiǎn)答題1、簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)控制的要點(diǎn)。引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。催化典型的PCR反應(yīng)約需酶量2.5U濃度過高可引起非特異性擴(kuò)增，濃度過低則合成產(chǎn)物量減少。dNTP的質(zhì)量與濃

8、度和PCR擴(kuò)增效率有密切關(guān)系。模板核酸的量與純化程度，是PCR成敗與否的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。Mg2+對(duì)PCR擴(kuò)增的特異性和產(chǎn)量有顯著的影響。2、試述生物體內(nèi)RNA的種類和功能。RNA種類功 能mRNA轉(zhuǎn)錄自編碼蛋白質(zhì)基因的RNA，攜帶翻譯信息。hnRNAmRNA剪接前體tRNA在翻譯過程中的轉(zhuǎn)接分子。在反轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制的過程中可作為DNA復(fù)制的引物rRNA是核糖體的主要結(jié)構(gòu)組成部分，蛋白質(zhì)合成過程所必需iRNA(起始RNA）在DNA合成中作為后滯鏈合成引物的短RNA片段snRNA(核內(nèi)小RNA)參與內(nèi)含子的剪切及其他加工過程scRNA(胞質(zhì)內(nèi)小RNA)是信號(hào)肽識(shí)別顆粒的組成部分端粒酶RNA作為形成端粒

9、重復(fù)序列的模板的核RNA，是端粒的組成部分gRNA(指導(dǎo)RNA)作為RNA編輯過程的模板反義RNA反義RNA與mRNA互補(bǔ)，可與其形成雙螺旋結(jié)構(gòu)阻斷蛋白質(zhì)的合成核酶自我催化功能4、三型限制性核酸內(nèi)切酶的作用特點(diǎn)。第一型限制酶：同時(shí)具有修飾及認(rèn)知切割的作用；另有認(rèn)知DNA上特定堿基序列的能力，通常其切割位距離認(rèn)知位可達(dá)數(shù)千個(gè)堿基之遠(yuǎn)。例如：EcoB、EcoK。第二型限制酶：只具有認(rèn)知切割的作用，修飾作用由其他酶進(jìn)行。所認(rèn)知的位置多為短的回文序列，所剪切的堿基序列通常即為所認(rèn)知的序列。例如：EcoRI、Hind。第三型限制酶：與第一型限制酶類似，同時(shí)具有修飾及認(rèn)知切割的作用?？烧J(rèn)知短的不對(duì)稱序列，

10、切割位與認(rèn)知序列約距24-26個(gè)堿基對(duì)。例如：Hinf。7、簡(jiǎn)述真核生物RNA聚合酶啟動(dòng)子的種類及其負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄的基因。RNA聚合酶I的啟動(dòng)子 負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄rRNA RNA聚合酶啟動(dòng)子負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄大多數(shù)基因，需要TATA框RNA聚合酶啟動(dòng)子負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄5SrRNAtRNA和某些snRNA8、簡(jiǎn)述活性染色質(zhì)的特點(diǎn)。染色質(zhì)DNA對(duì) DNase更敏感正轉(zhuǎn)錄的DNA甲基化程度降低活潑轉(zhuǎn)錄的染色質(zhì)常常缺乏組蛋白H1，其他核心組蛋白則被乙?；蚺c泛素相結(jié)合而修飾非?；顫姷霓D(zhuǎn)錄區(qū)，如許多真核生物的rRNA基因處，沒有核小體結(jié)構(gòu)9、簡(jiǎn)述生物遺傳的中心法則。DNA是自身復(fù)制的模板DNA通過轉(zhuǎn)錄將遺傳信息傳遞給中間物質(zhì)RNARN

11、A通過翻譯將遺傳信息表達(dá)為蛋白質(zhì)在某些病毒中，RNA可以自我復(fù)制，并且在某些病毒蛋白質(zhì)合成中，RNA可以在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成DNA 10、試述真核生物基因組的特點(diǎn)。真核基因組的復(fù)雜性：基因組大、主要的遺傳物質(zhì)與組蛋白等構(gòu)成染色質(zhì)，被包裹在核膜內(nèi)，核外還有遺傳成分(如線粒體DNA等)。真核生物是一個(gè)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄生成一條mRNA，即mRNA是單順反子，基本上沒有操縱子的結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)基因所占區(qū)域遠(yuǎn)小于非編碼區(qū)。結(jié)構(gòu)基因大多為斷裂基因，即有外顯子和內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄后需經(jīng)剪接去除內(nèi)含子，才能翻譯獲得完整的蛋白質(zhì)?；蚪M中存在大量重復(fù)序列。 11、簡(jiǎn)述轉(zhuǎn)座子的共同特點(diǎn)。都有一個(gè)保守結(jié)構(gòu)，有一個(gè)或多個(gè)ORF，兩

12、端有末端反向重復(fù)序列轉(zhuǎn)座后靶位點(diǎn)呈現(xiàn)正向重復(fù)編碼與轉(zhuǎn)座有關(guān)的蛋白可以在基因組中移動(dòng)12、試述質(zhì)粒的生物學(xué)特性。（1）質(zhì)粒是獨(dú)立于染色體以外的能自主復(fù)制的裸露的雙鏈環(huán)狀(少數(shù)為線形和RNA） DNA分子。質(zhì)粒的大小差異很大，最小的只有1kb,只能編碼中等大小的2-3種蛋白質(zhì)分子，最大的達(dá)到200kb。（2）質(zhì)粒離開了寄主它本身無法復(fù)制；同時(shí)質(zhì)粒往往有宿主專一性。（3）據(jù)拷貝數(shù)將質(zhì)粒分為兩種復(fù)制型：“嚴(yán)緊型”質(zhì)粒（stigent plasmid）,拷貝數(shù)為1-3；“松弛型”質(zhì)粒（relaxed plasmid）,拷貝數(shù)為10-60。（4）質(zhì)粒具有不親和性，兩種親緣關(guān)系密切的不同質(zhì)粒不能在同一宿主細(xì)

13、胞中穩(wěn)定共存。（5）轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒含有tra基因；能通過結(jié)合作用從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)胞。非轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒，不含tra基因；可以為轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒所帶動(dòng)轉(zhuǎn)移。（6）質(zhì)粒的存在形式有超螺旋、開環(huán)雙螺旋和線狀雙螺旋三種.13、簡(jiǎn)述基因突變的概念、類型、原因?；蚪MDNA分子發(fā)生的突然的、可遺傳的變異現(xiàn)象。自發(fā)突變和誘發(fā)突變。堿基置換突變、移碼突變、缺失突變、插入突變DNA復(fù)制錯(cuò)誤、DNA自發(fā)的化學(xué)改變、堿基的互變異構(gòu)體導(dǎo)致錯(cuò)配、氧化作用損傷堿基；射線(紫外線和電離輻射)、化學(xué)誘變劑、堿基修飾、DNA插入劑14、大腸桿菌RNA聚合酶的組成及各部分的功能。大腸桿菌的 RNA 聚合酶由 

14、;2 個(gè)亞基、一個(gè)亞基、一個(gè)亞基和一個(gè)亞基組成的核心酶，加上一個(gè)亞基后則成為聚合酶全酶。亞基肯能與核心酶的組裝及啟動(dòng)子的識(shí)別有關(guān)，并參與 RNA 聚合酶和部分調(diào)節(jié)因子的相互作用； 亞基和亞基組成了聚合酶的催化中心，亞基能與模版 DNA、新生 RNA 鏈及核苷酸底物相結(jié)合。15、簡(jiǎn)述真核生物RNA聚合酶的種類及其轉(zhuǎn)錄的基因種類。RNA聚合酶存在于核仁中，轉(zhuǎn)錄rRNA順序。RNA聚合酶存在于核質(zhì)中，轉(zhuǎn)錄大多數(shù)基因，需要“TATA”框。RNA聚合酶存在于核質(zhì)中，轉(zhuǎn)錄很少幾種基因如tRNA基因如5SrRNA基因。16、原核生物與真核

15、生物轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)差異。原核生物的起始tRNA是fMet-tRNA，真核生物是Met-tRNAMet。原核生物中30S小亞基首先與mRNA模版相結(jié)合，再與fMet-tRNA結(jié)合，最后與50S大亞基結(jié)合。而在真核生物中，40S小亞基首先與Met-tRNAMet相結(jié)合，再與模版mRNA結(jié)合，最后與60S大亞基結(jié)合生成80S.mRNA.Met-tRNAMet起始復(fù)合物。18、簡(jiǎn)述原核生物與真核生物核糖體的異同。所處位置不同：真核細(xì)胞中的核糖體有游離于細(xì)胞質(zhì)中，有的附貼在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，但后者在肽鏈的行成起主要作用，而原核細(xì)胞只有游離的核糖體。真核細(xì)胞中的核糖體與細(xì)胞核中核仁的大小、行成有關(guān)，而原核細(xì)胞

16、無核仁。19、試述原核生物轉(zhuǎn)錄的基本過程。啟動(dòng)：RNA聚合酶正確識(shí)別DNA模板上的啟動(dòng)子并形成由酶、DNA和核苷三磷酸(NTP)構(gòu)成的三元起始復(fù)合物，轉(zhuǎn)錄即自此開始。 延伸：亞基脫離酶分子，留下的核心酶與 DNA的結(jié)合變松，因而較容易繼續(xù)往前移動(dòng)。核心酶無模板專一性，能轉(zhuǎn)錄模板上的任何順序，包括在轉(zhuǎn)錄后加工時(shí)待切除的居間順序。脫離核心酶的亞基還可與另外的核心酶結(jié)合，參與另一轉(zhuǎn)錄過程。終止：轉(zhuǎn)錄的終止包括停止延伸及釋放 RNA聚合酶和合成的 RNA。在原核生物基因或操縱子的末端通常有一段終止序列即終止子； RNA合成就在這里終止。原核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄終止需要一種終止因子的幫助。真核生物 DNA上也可能有

17、轉(zhuǎn)錄終止的信號(hào)。22、遺傳密碼的性質(zhì)。簡(jiǎn)并性：指一個(gè)氨基酸具有2個(gè)或2個(gè)以上的密碼子 擺動(dòng)性：密碼子與反密碼子配對(duì)，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)不遵從堿基配對(duì)規(guī)律的情況，通用性：除個(gè)別細(xì)胞器的特殊密碼子外，蛋白質(zhì)生物合成的整套密碼，從簡(jiǎn)單生物到人類都通用 偏愛性：密碼子使用頻率的差異 連續(xù)性：mRNA的讀碼方向從5'3'，兩個(gè)密碼子之間無任何核苷酸隔開 23、試述原核生物與真核生物mRNA的差別。（1）原核生物mRNA常以多順反子的形式存在。真核生物mRNA一般以單順反子的形式存在。 （2）原核生物mRNA的轉(zhuǎn)錄與翻譯一般是偶聯(lián)的，真核生物轉(zhuǎn)錄的mRNA前

18、體則需經(jīng)轉(zhuǎn)錄后加工，加工為成熟的mRNA與蛋白質(zhì)結(jié)合生成信息體后才開始工作。（3）原核生物mRNA半壽期很短，一般為幾分鐘。真核生物mRNA的半壽期較長(zhǎng)，有的可達(dá)數(shù)日。（4）原核與真核生物mRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)也不同。真核生物mRNA由5端帽子結(jié)構(gòu)、5端不翻譯區(qū)、翻譯區(qū)、3端不翻譯區(qū)和3端聚腺苷酸尾巴組成，原核生物mRNA無5端帽子結(jié)構(gòu)和3端聚腺苷酸尾巴。24、簡(jiǎn)述分子伴侶在蛋白質(zhì)折疊即運(yùn)輸中的作用。蛋白合成開始時(shí)，防止新生肽鏈在未完成折疊之前相互聚合，幫助蛋白質(zhì)獲得最初的正確結(jié)構(gòu) 封閉所暴露出來的疏水區(qū)段，為蛋白質(zhì)折疊創(chuàng)造無干擾的隔離環(huán)境 識(shí)別錯(cuò)誤折疊的變性新蛋白，幫助復(fù)性或

19、使其降解25、試述PCR技術(shù)的應(yīng)用。在食品科學(xué)中主要用于對(duì)食品中微生物含量的檢測(cè)。PCR 技術(shù)可以用于清真食品的鑒定,特異性強(qiáng),靈敏度高，已經(jīng)成為肉質(zhì)品種鑒別最常用的方法。 在臨床醫(yī)學(xué)方面也經(jīng)常使用PCR技術(shù),如對(duì)乙肝病毒、腫瘤、病原體等的檢測(cè)，PCR技術(shù)在腫瘤病毒病因、腫瘤相關(guān)基因、腫瘤相關(guān)抑癌基因等研究方面已取得可喜成果。PCR在法學(xué)中應(yīng)用于親子鑒定,血型鑒別,以及指紋鑒別。運(yùn)用PCR技術(shù)可對(duì)水體進(jìn)行直接檢測(cè),縮短檢測(cè)時(shí)間,擴(kuò)大檢測(cè)范圍,并且具有較高的精確度，同時(shí)也可以反映水環(huán)境中微生物病原體的種類及多樣性。PCR技術(shù)在非生物學(xué)也應(yīng)用廣泛。在對(duì)偽造產(chǎn)品的檢測(cè), 污染源的追蹤調(diào)查等方面, 都

20、可通過PCR來鑒定。26、試述色氨酸操縱子的結(jié)構(gòu)與調(diào)控機(jī)制。結(jié)構(gòu)基因依次排列為trpEDC2BA，其中trpGD 和trpCF基因融合。trpE和trpG編碼鄰氨基苯甲酸合酶，trpD編碼鄰氨基苯甲酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，trpC編碼吲哚甘油磷酸合酶,trpF編碼異構(gòu)酶，trpA和trpB分別編碼色氨酸合酶的和亞基。trpE的上游為調(diào)控區(qū)，由啟動(dòng)子、操縱基因和162bp 的前導(dǎo)序列組成。trp操縱子轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控是通過阻遏蛋白實(shí)現(xiàn)的，產(chǎn)生阻遏蛋白的基因是trpR，該基因距trp operon基因簇很遠(yuǎn)。它結(jié)合于trp 操縱基因特異序列，阻止轉(zhuǎn)錄起始；trp操縱子轉(zhuǎn)錄終止的調(diào)控是通過弱化作用實(shí)現(xiàn)的，終

21、產(chǎn)物Trp對(duì)催化分支途徑幾步反應(yīng)的酶具有反饋抑制作用。27、簡(jiǎn)述基因工程的基本步驟和內(nèi)容。用限制性核酸內(nèi)切酶將外源基因與載體分子切開用DNA連接酶將含有外源基因的DNA片段接到載體分子上，形成重組DNA分子將DNA重組分子導(dǎo)入受體細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化細(xì)胞，以擴(kuò)增DNA重組分子或使其整合到宿主細(xì)胞的基因組中篩選鑒定轉(zhuǎn)化細(xì)胞，獲得使外源基因高效表達(dá)的基因工程菌或細(xì)胞28、試述陽性重組體的鑒定分析方法。生物學(xué)方法：表型篩選、抗藥性、缺陷基因的功能互補(bǔ)表型、噬菌斑的變化、報(bào)告基因  免疫學(xué)方法：放免、化學(xué)方法、顯色反應(yīng) 核酸雜交法：DNA印記分析Southern、RNA印記分析&

22、#160;Northern、菌落原位雜交  PCR技術(shù) 限制性酶切鑒定 測(cè)序29、從結(jié)構(gòu)的觀點(diǎn)簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)加工修飾的三種類型。高級(jí)結(jié)構(gòu)的修飾肽鏈釋放后可自行根據(jù)其一級(jí)結(jié)構(gòu)的特征折疊、盤曲成高級(jí)結(jié)構(gòu)。此外，高級(jí)結(jié)構(gòu)的修飾還包括：折疊、亞基聚合輔基連接。一級(jí)產(chǎn)物的修飾去除N-甲?；騈-蛋氨酸、個(gè)別氨基酸的修飾、水解修飾。蛋白質(zhì)合成的靶向輸送分泌性蛋白的mRNA要有信號(hào)肽，其作用是把合成的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，剪切下信號(hào)肽，然后把合成的蛋白質(zhì)送出胞外。30、基因克隆的基本步驟。機(jī)械切割或核酸限制性內(nèi)切酶消化基因組DNA，獲得包含目的基因在內(nèi)的一群DNA分子。載體

23、的選擇：DNA克隆常用的載體有質(zhì)粒載體，噬菌體載體。體外重組：將目的片斷和載體分子連接，通過T4 DNA連接酶的作用便可形成重組體。重組子的篩選，方法有插入失活法、PCR篩選和限制酶酶切法、核酸分子雜交法、免疫學(xué)篩選法獲得的陽性克隆最后要進(jìn)行測(cè)序分析，以最終確認(rèn)目的基因。31、簡(jiǎn)述大腸桿菌DNA聚合酶一的作用。合成雙鏈cDNA的第二條鏈；缺口平移制作高比活探針；DNA序列分析；填補(bǔ)3末端32、試述大腸桿菌表達(dá)載體應(yīng)具備的必要條件。（1）穩(wěn)定的遺傳復(fù)制、傳代能力，在無選擇壓力下能存在于大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)。（2）具有顯性的轉(zhuǎn)化篩選標(biāo)記。（3）啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄是可以調(diào)控的，抑制時(shí)本底轉(zhuǎn)錄水平較低。（4）啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄的mRNA能夠在適當(dāng)?shù)奈恢媒K止，轉(zhuǎn)錄過程不影響表達(dá)載體的復(fù)制。（5）具備適用于外源基因插入的酶切位點(diǎn)。復(fù)制子、篩選標(biāo)志、啟動(dòng)子、終止子和核糖體結(jié)合位點(diǎn)是構(gòu)成表達(dá)載體的最基本元件。33、試述三種RNA在蛋白質(zhì)生物合成中的作用。rRNA：核糖體RNA，與蛋白質(zhì)共同構(gòu)成核糖體。mRNA：信使RNA，構(gòu)成翻譯的模板，含密碼子。tRNA：運(yùn)輸RNA，與mRNA結(jié)合部位為反密碼子，用于運(yùn)輸氨基酸，并且每一個(gè)tRNA對(duì)應(yīng)一種氨基酸，而每個(gè)氨基酸可能對(duì)應(yīng)不同的tRN