微生物棉簽擦拭取樣方法驗證方案

1、微生物棉簽擦拭取樣方法驗證方案1 主題內容本方案規(guī)定了微生物棉簽擦拭取樣驗證的目的、原理、標準及內容。2 適用范圍本方案適用微生物棉簽擦拭法取樣。3 責任人質量部現(xiàn)場監(jiān)控員：負責棉簽擦拭取樣方法驗證方案的起草及實施。質量部QC：負責按計劃完成相關檢驗任務，確保檢驗結論正確可靠。質量部QA：負責監(jiān)督驗證實施的全過程。驗證管理員：協(xié)助驗證方案的起草，組織協(xié)調驗證工作，并總結驗證結果，出具驗證報告。質量管理部部長：負責驗證方案及驗證報告的審核。質量授權人：負責驗證方案及驗證報告的批準。組長：質量管理部部長驗證小組成員：QA主管 QC主管 微生物限度檢驗員 現(xiàn)場監(jiān)控員4 內容4.1 概述制藥企業(yè)生產(chǎn)設

2、備、生產(chǎn)場所、用具等需要清潔，清潔后殘留物限度經(jīng)檢驗應符合要求。檢驗殘留物限度的方法有兩種：一是最終淋洗水取樣；二是擦拭取樣。擦拭取樣優(yōu)點是能對最難清潔部位直接取樣，通過考察有代表性的最難清潔部位的殘留物限度評價生產(chǎn)設備的清潔狀況。但取樣方法需驗證其可行性。因此需通過取樣方法驗證確定清潔方法的有效性。能消除藥品交叉污染及微生物污染。 4.2 驗證目的通過對清洗消毒后微生物取樣方法的回收率實驗，評價取樣方法的有效性、代表性和科學性，并為證明清潔方法有效性提供基本依據(jù)。 4.3 驗證原理通過物理的擦拭對那些已經(jīng)干燥的殘留物取樣。通過選擇適當?shù)牟潦萌軇?、擦拭工具和擦拭方法，可將清洗過程中未溶解的，已

3、“干結”在設備表面或溶解度很小的物質擦拭下來。檢驗結果能直接反映出個取樣點的清潔狀況。4.4 清潔方法執(zhí)行XX機清潔SOP、房間清潔SOP。4.5 驗證方法.試驗器具包括不銹鋼載片（規(guī)格50mm×50mm）、培養(yǎng)皿90mm、醫(yī)用棉簽，以上器具均需要經(jīng)過121、30分鐘滅菌后使用。.1.金黃色葡萄球菌菌液的制備接種金黃色葡萄球菌CMCC(B)26 003新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，30-35培養(yǎng)18-24小時。取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋制成每0.1ml含菌數(shù)50-100CFU的工作菌液，并采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基計數(shù)。.2.白色念珠菌菌液的制備接種白色念

4、珠菌CMCC(F)98 001新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，23-28培養(yǎng)24-48小時。取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋制成每0.1ml含菌數(shù)50-100CFU的工作菌液，并采用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基計數(shù)。.3.染菌不銹鋼載片制備·載片脫脂處理：載片放在含肥皂的水中煮沸30分鐘，以純化水洗凈；用純化水煮沸10分鐘；用純化水漂洗至PH中性晾干備用。·菌液滴染將經(jīng)滅菌的不銹鋼載片平鋪于無菌平皿內，滴加金黃色葡萄球菌、白色念珠菌含菌量為50-100CFU的菌液0.1ml，并均勻涂布于整個載體表面。滴染菌液后，載片置潔凈工作臺晾干備用。每種菌平行制備

5、2個染菌不銹鋼載片。.4.擦拭取樣·取無菌醫(yī)用棉簽2支，用0.9%無菌氯化鈉溶液潤濕后，在錐形瓶上擠壓除去多余的溶液。將其中1支棉簽頭按在染菌載片上，用力使其稍彎曲，平穩(wěn)而緩慢地擦拭取樣表面，擦拭路線按下圖所示，擦拭過程應覆蓋整個表面。另取1支棉簽再次對該不銹鋼載片表面擦拭，擦拭路線和上次擦拭路線垂直。擦拭完后，用無菌手術刀把棉簽的頭部（棉花部位）剪斷，投入裝有50ml0.9%無菌氯化鈉溶液的錐形瓶中，密閉。共制備12份檢品。·取適宜稀釋的菌液0.1ml（約50-100CFU）分別注入平皿中，立即傾入冷卻至45左右的培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，測定所涂布的試驗菌數(shù)。

6、.5.檢驗將裝有樣品的錐形瓶反復振搖，使面前上的微生物釋放到溶液中。取樣品溶液50ml薄膜過濾，取出濾膜，菌面朝上，貼于培養(yǎng)基上。金黃色葡萄球菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，白色念珠菌用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基。.6培養(yǎng)及計數(shù)檢驗結束后，將細菌平皿倒置于30-35培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天，霉菌平皿倒置于23-28培養(yǎng)箱培養(yǎng)5天，計數(shù)。4.5.2可接受標準：陰性對照應無菌生長，總回收率不低于70%，RSD20%。 4.6 檢驗結果：見檢驗記錄。4.7 驗證次數(shù)：進行三次驗證。5結論與評價驗證小組根據(jù)驗證情況對驗證結果進行綜合評審，做出驗證結論，由質量受權人作出是否批準的決定及負責發(fā)放驗證證書。對驗證結果評審應包括：驗證試驗

7、是否有遺漏？ 驗證實施過程中對驗證方案有無修改？修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過批準？驗證記錄是否完整？驗證試驗結果是否符合標準要求？是否需要進一步補充試驗？綜合驗證的結果，判定取樣方法的有效性。6再驗證：有以下情況需要進行再驗證。6.1 到了規(guī)定的再驗證周期。6.2 若取樣方法有變化應進行再驗證。6.4 潔凈區(qū)環(huán)境包括溫、濕度有重大變化應進行再驗證。7附表7.1 表一取樣檢驗記錄可接受標準總回收率不低于70%，RSD20%金黃色葡萄球菌檢驗白色念珠菌檢驗陽性菌陰性菌1號樣2號樣3號樣4號樣5號樣RSD/檢驗人陽性菌陰性菌1號樣2號樣3號樣4號樣5號樣RSD/檢驗人第一次第二次第三次總回收率結論 復核人： 日期： 7.2 表二 驗證結論與評價驗證結