血常規(guī)(血細(xì)胞分析儀、直方圖)

1、 血液檢查血液檢查 海醫(yī)附院檢驗科海醫(yī)附院檢驗科 潘潘 婉婉第四篇第四篇 實驗診斷實驗診斷 血常規(guī)檢查血常規(guī)檢查 即全血細(xì)胞分析，可以對感染、炎癥、手術(shù)后、即全血細(xì)胞分析，可以對感染、炎癥、手術(shù)后、血液系統(tǒng)疾病、肝脾病等進(jìn)行輔助診斷、監(jiān)測血液系統(tǒng)疾病、肝脾病等進(jìn)行輔助診斷、監(jiān)測治療效果等治療效果等。標(biāo)本采集與要求標(biāo)本采集與要求 抗凝劑抗凝劑 ：EDTA-K2 靜脈采血方法靜脈采血方法 ：4小時內(nèi)測定小時內(nèi)測定 毛細(xì)血管采血方法毛細(xì)血管采血方法 ：半小時內(nèi)測定：半小時內(nèi)測定 手指血與靜脈血有差異，條件允許盡可能靜手指血與靜脈血有差異，條件允許盡可能靜脈采血脈采血 盡可能同一體位（血紅蛋白、血細(xì)胞

2、比容、盡可能同一體位（血紅蛋白、血細(xì)胞比容、紅細(xì)胞計數(shù)于站位時增加）、一定時間和近紅細(xì)胞計數(shù)于站位時增加）、一定時間和近似生理條件下采血似生理條件下采血血細(xì)胞分析儀檢測指標(biāo)與臨床應(yīng)用血細(xì)胞分析儀檢測指標(biāo)與臨床應(yīng)用血細(xì)胞分析儀 血細(xì)胞分析儀實質(zhì)上是指血細(xì)胞分析儀實質(zhì)上是指對一定體積內(nèi)血細(xì)胞數(shù)量及異對一定體積內(nèi)血細(xì)胞數(shù)量及異質(zhì)性進(jìn)行分析的儀器，包括血質(zhì)性進(jìn)行分析的儀器，包括血細(xì)胞計數(shù)與分類、血紅蛋白測細(xì)胞計數(shù)與分類、血紅蛋白測定及網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)等眾多分定及網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)等眾多分析項目，是臨床檢驗工作中最析項目，是臨床檢驗工作中最常用的儀器。常用的儀器。 40年代末年代末，美國的庫爾特，美國的庫爾特

3、(W.H.Coulter)發(fā)明了電阻抗法發(fā)明了電阻抗法粒子計數(shù)技術(shù)的設(shè)計專利。粒子計數(shù)技術(shù)的設(shè)計專利。50年代初年代初，第一臺血細(xì)胞分析儀，第一臺血細(xì)胞分析儀(Coulter A型型)應(yīng)用于臨應(yīng)用于臨床檢驗。當(dāng)時這種儀器為一個通道，僅能進(jìn)行紅細(xì)胞、床檢驗。當(dāng)時這種儀器為一個通道，僅能進(jìn)行紅細(xì)胞、白細(xì)胞計數(shù)，故稱為血細(xì)胞計數(shù)儀或血球計數(shù)儀。白細(xì)胞計數(shù)，故稱為血細(xì)胞計數(shù)儀或血球計數(shù)儀。60年代年代，在原基礎(chǔ)上增加一個比色系統(tǒng)，可同時測定白，在原基礎(chǔ)上增加一個比色系統(tǒng)，可同時測定白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白濃度、平均紅細(xì)胞體積細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白濃度、平均紅細(xì)胞體積和血細(xì)胞比容。和血細(xì)胞比容。

4、70年代年代，開發(fā)了血小板計數(shù)，此時可做全血細(xì)胞計數(shù)。，開發(fā)了血小板計數(shù)，此時可做全血細(xì)胞計數(shù)。70年代末年代末80年代中年代中，根據(jù)白細(xì)胞大小不同而產(chǎn)生的阻抗值，根據(jù)白細(xì)胞大小不同而產(chǎn)生的阻抗值或散射量的不同，或散射量的不同，已能對細(xì)胞進(jìn)行分類已能對細(xì)胞進(jìn)行分類(兩分群、三分群兩分群、三分群或五分類或五分類)，且一次可報告，且一次可報告1314個分析參數(shù)及紅細(xì)胞個分析參數(shù)及紅細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)、血小板計數(shù)三個直方圖。計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)、血小板計數(shù)三個直方圖。80年代末年代末，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)，開發(fā)了網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)儀。，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)，開發(fā)了網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)儀。90年代初年代初，網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測技術(shù)

5、應(yīng)用到血細(xì)胞計數(shù)儀上。，網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測技術(shù)應(yīng)用到血細(xì)胞計數(shù)儀上。90年代中期年代中期研制出的多功能、多參數(shù)、多分類全自動血細(xì)研制出的多功能、多參數(shù)、多分類全自動血細(xì)胞分析儀及檢測的全自動化，把臨床血液學(xué)檢驗提高到胞分析儀及檢測的全自動化，把臨床血液學(xué)檢驗提高到了一個全新的水平。了一個全新的水平。按自動化程度可分為按自動化程度可分為半自動血細(xì)胞分析儀和全自動血細(xì)胞分半自動血細(xì)胞分析儀和全自動血細(xì)胞分析儀。析儀。 半自動血細(xì)胞分析儀需在主機外匹配稀釋器，采集的血標(biāo)半自動血細(xì)胞分析儀需在主機外匹配稀釋器，采集的血標(biāo)本經(jīng)稀釋器預(yù)稀釋后再上機檢測。這類儀器工作效率低，吸樣本經(jīng)稀釋器預(yù)稀釋后再上機檢測。這

6、類儀器工作效率低，吸樣準(zhǔn)確性差，多為手工加溶血素、混勻等，其加入量及放置時間、準(zhǔn)確性差，多為手工加溶血素、混勻等，其加入量及放置時間、因人為因素，隨機誤差較大，不利于質(zhì)控，并且易發(fā)生因人為因素，隨機誤差較大，不利于質(zhì)控，并且易發(fā)生“半堵半堵孔孔”或或“堵孔堵孔”現(xiàn)象?，F(xiàn)象。9090年代以來，在發(fā)達(dá)國家已被逐步淘汰，年代以來，在發(fā)達(dá)國家已被逐步淘汰，國內(nèi)用戶也為數(shù)不多，趨于淘汰。國內(nèi)用戶也為數(shù)不多，趨于淘汰。1.血細(xì)胞分析儀分型 全自動血細(xì)胞分析儀全自動血細(xì)胞分析儀運用了較先進(jìn)的計算機技術(shù)和機運用了較先進(jìn)的計算機技術(shù)和機械系統(tǒng)，菜單式操作程序，條碼閱讀，自動吸取樣品，血械系統(tǒng)，菜單式操作程序，條

7、碼閱讀，自動吸取樣品，血液在機器內(nèi)部自動稀釋，效率高，檢測量準(zhǔn)確，有利于質(zhì)液在機器內(nèi)部自動稀釋，效率高，檢測量準(zhǔn)確，有利于質(zhì)控，減少了操作者實驗室感染的幾率。且大部分采用表面控，減少了操作者實驗室感染的幾率。且大部分采用表面活性劑法測血紅蛋白，避免了氰化物對環(huán)境的污染，是全活性劑法測血紅蛋白，避免了氰化物對環(huán)境的污染，是全面取代半自動血細(xì)胞分析儀的必然趨勢。目前還有將全自面取代半自動血細(xì)胞分析儀的必然趨勢。目前還有將全自動血細(xì)胞分析儀與自動涂片染色機、電腦及應(yīng)用軟件組合動血細(xì)胞分析儀與自動涂片染色機、電腦及應(yīng)用軟件組合而成的血液分析工作站，將多臺全自動血細(xì)胞分析儀、全而成的血液分析工作站，將多

8、臺全自動血細(xì)胞分析儀、全自動網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀、自動涂片染色機、機械連接系統(tǒng)、自動網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀、自動涂片染色機、機械連接系統(tǒng)、電腦、高性能應(yīng)用軟件組合為一體的血液分析流水線（如電腦、高性能應(yīng)用軟件組合為一體的血液分析流水線（如HST-330HST-330模塊式全自動血液分析流水線）等。模塊式全自動血液分析流水線）等。按檢測原理按檢測原理電容型電容型：通過改變兩電極之間電容量，獲得脈沖信號進(jìn)行計數(shù)。：通過改變兩電極之間電容量，獲得脈沖信號進(jìn)行計數(shù)。光電型光電型：利用細(xì)胞和稀釋液對光的吸收度不同，使光敏元件在細(xì)胞：利用細(xì)胞和稀釋液對光的吸收度不同，使光敏元件在細(xì)胞通過時產(chǎn)生脈沖信號而計數(shù)。通過時

9、產(chǎn)生脈沖信號而計數(shù)。激光型激光型：細(xì)胞受到激光的照射產(chǎn)生光吸收、光散射、發(fā)射熒光，得：細(xì)胞受到激光的照射產(chǎn)生光吸收、光散射、發(fā)射熒光，得到光學(xué)的、電子的信號進(jìn)行計數(shù)。到光學(xué)的、電子的信號進(jìn)行計數(shù)。電阻抗型電阻抗型：利用血細(xì)胞的電阻大于電解質(zhì)溶液：利用血細(xì)胞的電阻大于電解質(zhì)溶液( (稀釋液稀釋液) )的電阻，細(xì)的電阻，細(xì)胞通過微孔時兩電極之間的阻抗值增大，產(chǎn)生電壓脈沖信號而進(jìn)胞通過微孔時兩電極之間的阻抗值增大，產(chǎn)生電壓脈沖信號而進(jìn)行血細(xì)胞計數(shù)和體積測定。國內(nèi)產(chǎn)品均為電阻抗型。行血細(xì)胞計數(shù)和體積測定。國內(nèi)產(chǎn)品均為電阻抗型。聯(lián)合檢測型聯(lián)合檢測型：采用多種現(xiàn)代高科技技術(shù)，如利用電阻抗、激光、高：采用多

10、種現(xiàn)代高科技技術(shù)，如利用電阻抗、激光、高頻電磁波、流式細(xì)胞術(shù)和化學(xué)染色、特殊溶血劑等多方位聯(lián)合檢頻電磁波、流式細(xì)胞術(shù)和化學(xué)染色、特殊溶血劑等多方位聯(lián)合檢測同一個血細(xì)胞。此類儀器功能多，特異性強、速度快、獲得參測同一個血細(xì)胞。此類儀器功能多，特異性強、速度快、獲得參數(shù)多、對環(huán)境污染小。數(shù)多、對環(huán)境污染小。2.2.電阻抗法血細(xì)胞分析儀電阻抗法血細(xì)胞分析儀 血細(xì)胞與等滲電解質(zhì)溶液相比為相對的不良導(dǎo)體，血細(xì)胞與等滲電解質(zhì)溶液相比為相對的不良導(dǎo)體，其電阻值大于稀釋液的電阻值。當(dāng)血細(xì)胞通過檢測器其電阻值大于稀釋液的電阻值。當(dāng)血細(xì)胞通過檢測器小孔管微孔的孔徑感受區(qū)時，檢測器內(nèi)外電極之間的小孔管微孔的孔徑感受

11、區(qū)時，檢測器內(nèi)外電極之間的恒流源電路上電阻值瞬間增大，造成兩極之間電壓的恒流源電路上電阻值瞬間增大，造成兩極之間電壓的變化，產(chǎn)生一個電壓脈沖信號。每次檢測中產(chǎn)生的脈變化，產(chǎn)生一個電壓脈沖信號。每次檢測中產(chǎn)生的脈沖信號數(shù)，即相當(dāng)于檢測出的細(xì)胞數(shù)。沖信號數(shù)，即相當(dāng)于檢測出的細(xì)胞數(shù)。 操作時，位于小孔兩側(cè)的操作時，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生恒定電流。根據(jù)歐姆電極產(chǎn)生恒定電流。根據(jù)歐姆定律電壓變化與電阻變化成正定律電壓變化與電阻變化成正比，電阻值又同細(xì)胞體積成正比，電阻值又同細(xì)胞體積成正比，比，血細(xì)胞體積越大，電壓越血細(xì)胞體積越大，電壓越高，高，在甄別器上的在甄別器上的脈沖幅度就脈沖幅度就越大越大，各種大

12、小不同細(xì)胞產(chǎn)生，各種大小不同細(xì)胞產(chǎn)生的脈沖信號分別送入儀器內(nèi)電的脈沖信號分別送入儀器內(nèi)電腦的各個通道，經(jīng)運算得出各腦的各個通道，經(jīng)運算得出各種細(xì)胞參數(shù)。目前，多數(shù)儀器種細(xì)胞參數(shù)。目前，多數(shù)儀器在給出細(xì)胞數(shù)據(jù)結(jié)果的同時還在給出細(xì)胞數(shù)據(jù)結(jié)果的同時還提供細(xì)胞群體大小分布情況圖提供細(xì)胞群體大小分布情況圖形，稱之為形，稱之為細(xì)胞體積直方圖細(xì)胞體積直方圖。 血細(xì)胞分析儀在進(jìn)行細(xì)胞分析時，將每個細(xì)胞的脈沖血細(xì)胞分析儀在進(jìn)行細(xì)胞分析時，將每個細(xì)胞的脈沖根據(jù)其體積大小分配并存儲在相應(yīng)的體積通道中，每個通道根據(jù)其體積大小分配并存儲在相應(yīng)的體積通道中，每個通道收集的數(shù)據(jù)被統(tǒng)計出相對數(shù)，表示在收集的數(shù)據(jù)被統(tǒng)計出相對數(shù)

13、，表示在Y Y軸上，體積數(shù)據(jù)以飛軸上，體積數(shù)據(jù)以飛升升(fl)(fl)為單位，表示在為單位，表示在X X軸上?？蓪准?xì)胞體軸上?？蓪准?xì)胞體積從積從3030450fl450fl分為分為256256個通道，每個通道個通道，每個通道1.64fl1.64fl，依據(jù)體積大小分別將其，依據(jù)體積大小分別將其放在不同的通道中，得到白細(xì)胞體積分布直方圖。初步確認(rèn)：放在不同的通道中，得到白細(xì)胞體積分布直方圖。初步確認(rèn)：第一群是小細(xì)胞區(qū)，主要是淋巴細(xì)胞，體積在第一群是小細(xì)胞區(qū)，主要是淋巴細(xì)胞，體積在353590fl90fl之間；之間；第二群是中間細(xì)胞群，主要是單核細(xì)胞，體積在第二群是中間細(xì)胞群，主要是單核細(xì)胞，體

14、積在9090160fl160fl，；第三群為大細(xì)胞區(qū)，主要是中性粒細(xì)胞，它分葉，；第三群為大細(xì)胞區(qū)，主要是中性粒細(xì)胞，它分葉多，顆粒多，體積可大至多，顆粒多，體積可大至160fl160fl以上。以上。中間細(xì)胞中間細(xì)胞 血小板和紅細(xì)胞共用一個小孔管。正常人紅細(xì)胞體積和血小板血小板和紅細(xì)胞共用一個小孔管。正常人紅細(xì)胞體積和血小板體積有明顯的界限。因此血小板計數(shù)準(zhǔn)確容易。當(dāng)血細(xì)胞懸液中含有體積有明顯的界限。因此血小板計數(shù)準(zhǔn)確容易。當(dāng)血細(xì)胞懸液中含有異常血細(xì)胞（如小紅細(xì)胞）時，劃分界限不清。為使血小板計數(shù)有較異常血細(xì)胞（如小紅細(xì)胞）時，劃分界限不清。為使血小板計數(shù)有較高的準(zhǔn)確性，計算機對血小板和紅細(xì)胞

15、分布圖進(jìn)行判斷，將血小板計高的準(zhǔn)確性，計算機對血小板和紅細(xì)胞分布圖進(jìn)行判斷，將血小板計數(shù)的上限閾值判定線放在紅細(xì)胞和血小板分布圖交叉部分的最低處計數(shù)的上限閾值判定線放在紅細(xì)胞和血小板分布圖交叉部分的最低處計數(shù)數(shù) 。 各項紅細(xì)胞指數(shù)的檢測原理各項紅細(xì)胞指數(shù)的檢測原理: :根據(jù)儀器檢測的根據(jù)儀器檢測的RBCRBC、HCTHCT和和HbHb的數(shù)據(jù)，經(jīng)儀器內(nèi)存程序換算出紅細(xì)胞平均體積的數(shù)據(jù)，經(jīng)儀器內(nèi)存程序換算出紅細(xì)胞平均體積(MCV)(MCV)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白的含量、紅細(xì)胞平均血紅蛋白的含量(MCH)(MCH)和紅細(xì)胞平均血和紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度紅蛋白濃度(MCHC)(MCHC)。 紅細(xì)胞體積分

16、布寬度紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)(RDW)由血細(xì)胞分析儀在檢測紅由血細(xì)胞分析儀在檢測紅細(xì)胞數(shù)量的過程中細(xì)胞數(shù)量的過程中 , ,同時測量紅細(xì)胞體積大小的差異獲得，同時測量紅細(xì)胞體積大小的差異獲得，是反映外周血紅細(xì)胞體積異質(zhì)性的參數(shù)。是反映外周血紅細(xì)胞體積異質(zhì)性的參數(shù)。RDWRDW能直接、客能直接、客觀、及時地反映紅細(xì)胞大小不等的程度，對貧血的診斷有觀、及時地反映紅細(xì)胞大小不等的程度，對貧血的診斷有重要意義。重要意義。 血紅蛋白測定原理血紅蛋白測定原理:在稀釋的血液中加入溶在稀釋的血液中加入溶血劑后紅細(xì)胞被溶解，釋放出血紅蛋白血劑后紅細(xì)胞被溶解，釋放出血紅蛋白(Hb)(Hb)，后，后者與溶血劑中有關(guān)成分結(jié)合形成者與溶血劑中有關(guān)成分結(jié)合形成HbHb衍生物，進(jìn)入衍生物，進(jìn)入HbHb測試系統(tǒng)，在特定波長測試系統(tǒng)，在特定波長( (一般在一般在530530550nm)550nm)下下比色，吸光度的變化與液體中比色，吸光度的變化與液體中H H含量成正比，儀器含量成正比，儀器便可顯示其濃度。便可顯示其濃度。3.3.血細(xì)胞直方圖的臨床應(yīng)用血細(xì)胞直方圖的臨床應(yīng)用 直方圖是血細(xì)胞