ELISA在食品檢驗(yàn)中應(yīng)用

1、4/30/2022 酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)(ELISA)是把抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合起來的一種非放射性標(biāo)記免疫檢測技術(shù)。ELISA技術(shù)流程第1頁/共15頁4/30/2022ELISA在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用 食品中農(nóng)藥殘留的檢測 食品中藥物殘留的檢測 食品中毒素的檢測 食品中微生物的檢測 食品中轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測 食品中其他成分的檢測第2頁/共15頁4/30/20221.1 食品中農(nóng)藥殘留的檢測 自19831983年以來，ELISAELISA成為許多國際權(quán)威分析機(jī)構(gòu)( (如AOAC)AOAC)分析殘留農(nóng)藥的首選方法。有些發(fā)達(dá)國家，如美國、德國已開發(fā)出商品檢

2、測試劑盒應(yīng)用于食品、蔬菜和環(huán)境中的農(nóng)藥殘留的檢測分析。 迄今為止，應(yīng)用ELISAELISA檢測食品中的殘留農(nóng)藥主要是除草劑、殺菌劑和殺蟲劑。 Clegg Clegg等建立了分析草甘膦的ELISAELISA；余萬俊等用抗殺蟲脒單克隆抗體為試劑，建立了間接競爭法、直接競爭法和標(biāo)記抗原競爭法等三種測出大米中殺蟲脒的ELISAELISA；浙江大學(xué)的朱國念等研究出ELISAELISA試劑盒來檢測克百威。第3頁/共15頁4/30/20221.2 食品中藥物殘留的檢測 為了促進(jìn)動(dòng)物生長，預(yù)防動(dòng)物的各種傳染病、寄生蟲病的發(fā)生，越來越多的激素類獸藥、抗菌藥、抗寄生蟲藥，常常被用作飼料添加劑，小劑量長期喂養(yǎng)禽畜水

3、產(chǎn)等動(dòng)物，導(dǎo)致肉類食品中的獸藥殘留超標(biāo)現(xiàn)象日益嚴(yán)重?，F(xiàn)在國際上比較重視的殘留藥物有抗生素、磺胺類、呋喃類、喹喏酮類、激素類和轉(zhuǎn)基因類藥物。人們都在尋求適用的檢測方法第4頁/共15頁4/30/2022 8O8O年代后期，ELISAELISA在殘留分析中發(fā)展迅速，吳定等制備了兔抗氨芐西林鈉血清，建立了快速測定乳中氨芐西林鈉含量的ELISAELISA方法 。 20032003年，LoomansE LoomansE 等用新霉胺作為免疫原建立ELISAELISA方法同時(shí)檢測牛奶中的慶大霉素、卡那霉素和新霉素。第5頁/共15頁4/30/20221.3 食品中毒素的檢測 食品中的毒素有三種： 一、細(xì)菌產(chǎn)生的

4、毒素； 二、真菌所產(chǎn)生的毒素 三、一些動(dòng)植物中含有天然毒性蛋白。第6頁/共15頁4/30/2022 采用辣根過氧化氫酶(HRP)標(biāo)準(zhǔn)高親和力的黃曲霉B1抗體，可以建立直接競爭抑制ELISA 快速篩選法。 在獲得抗河豚毒素(TXX)的單克隆抗體的基礎(chǔ)上建立了檢測TXX的間接ELISA方法，其最低檢出濃度為1.0103mg/I ，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法。 與傳統(tǒng)方法相比，間接El ISA方法的樣品提取方法比較簡單。第7頁/共15頁4/30/20221.4 食品中微生物的檢測 常規(guī)的微生物學(xué)檢驗(yàn)：以分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)及血清學(xué)試驗(yàn)來進(jìn)行判斷，不僅需要大量的手工勞動(dòng)，而且檢驗(yàn)周期長(67d)(67d)。 EL

5、ISA ELISA檢測：不受各種樣品成分的影響，而且在23d23d內(nèi)即可完成樣品篩選。糞樣、魚粉、奶樣，其敏感性和特異性分別高達(dá)100100和97.697.6。 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有些細(xì)菌，如副溶血性弧菌、幽門螺桿菌、大腸桿菌等在低溫貧營養(yǎng)的條件下，可以進(jìn)入“活的非可培養(yǎng)態(tài)”，在適當(dāng)狀態(tài)下還可以復(fù)蘇，仍具有致病力。常規(guī)的培養(yǎng)法無法檢測到處于這種狀態(tài)的細(xì)菌，造成漏檢。而ELISAELISA在這方面具有一定的潛力。第8頁/共15頁4/30/20221.5 食品中轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測 RoganRogan等人用ELISAELISA法檢測出傳統(tǒng)大豆加工產(chǎn)品中混有的CP4 EPSPSCP4 EPSPS蛋白質(zhì)。這種蛋白

6、質(zhì)檢測方法具有商業(yè)可利用性，并具有高度選擇性和靈敏性。 FDA FDA 已研究了用雙夾心ELISAELISA法來檢測食品是否含轉(zhuǎn)基因玉米成分。Envimlogix ELISAEnvimlogix ELISA測試盒可用于測定玉米中的cry9ecry9e蛋白，共測試了9 9種含玉米的食品，結(jié)果的重現(xiàn)性相當(dāng)好。第9頁/共15頁4/30/20221.6 食品中其它成分的檢測 免疫球蛋白(Immunoglobulin(Immunoglobulin，簡稱Ig)Ig)指具有抗體活性，能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異結(jié)合的球蛋白，是構(gòu)成體液免疫的重要的物質(zhì)。牛乳中特別是初乳中免疫球蛋白的含量相當(dāng)高，最近開發(fā)的免疫奶，就是

7、通過對乳牛進(jìn)行免疫注射從而提高牛奶中的免疫球蛋白的含量；再有市場中強(qiáng)化免疫球蛋白的奶粉等，因免疫球蛋白也是一種蛋白質(zhì)，具有蛋白質(zhì)的共性，但其在上述制品中含量又相對的少，常規(guī)的蛋白測定法無法測出免疫球蛋白的含量。用ELISA ELISA 即可成功解決這個(gè)問題，且同時(shí)可完成含量與活性的檢測。第10頁/共15頁4/30/2022 以辣根過氧化物酶標(biāo)記不同動(dòng)物肌肉和血清球蛋A抗血清檢查牛肉、馬肉、豬肉、羊肉和駝肉，檢出率均在95以上，經(jīng)與其他血清學(xué)方法比較，證實(shí)用該法鑒別不同肉類具有較高的敏感性和特異性，而且方法簡便，設(shè)備簡單，判斷指標(biāo)客觀真實(shí)。 目前，ELISA可檢測14種畜禽熟肉制品，包括牛肉、羊

8、肉、鹿肉和馬肉等，在摻假率為1時(shí)即可檢出。第11頁/共15頁4/30/2022第12頁/共15頁4/30/2022 對試劑的選擇性高, 很難同時(shí)分析多種成分對結(jié)構(gòu)類似的化合物有一定程度的交叉反應(yīng)分析分子量很小的化合物或很不穩(wěn)定的化合物有一定的困難缺陷第13頁/共15頁4/30/2022 許多學(xué)者致力于改進(jìn)和完善這種技術(shù)， 重點(diǎn)在多克隆抗體轉(zhuǎn)向單克隆抗體， 純化抗體和抗原， 改進(jìn)抗體的載體和反應(yīng)環(huán)境，定量方式等幾個(gè)方面。我們相信隨著免疫技術(shù)的不斷提高， ELISA在食品中的應(yīng)用前景相當(dāng)廣闊。第14頁/共15頁組員：第15頁/共15頁4/30/2022 采用辣根過氧化氫酶(HRP)標(biāo)準(zhǔn)高親和力的黃

9、曲霉B1抗體，可以建立直接競爭抑制ELISA 快速篩選法。 在獲得抗河豚毒素(TXX)的單克隆抗體的基礎(chǔ)上建立了檢測TXX的間接ELISA方法，其最低檢出濃度為1.0103mg/I ，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法。 與傳統(tǒng)方法相比，間接El ISA方法的樣品提取方法比較簡單。第7頁/共15頁4/30/20221.4 食品中微生物的檢測 常規(guī)的微生物學(xué)檢驗(yàn)：以分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)及血清學(xué)試驗(yàn)來進(jìn)行判斷，不僅需要大量的手工勞動(dòng)，而且檢驗(yàn)周期長(67d)(67d)。 ELISA ELISA檢測：不受各種樣品成分的影響，而且在23d23d內(nèi)即可完成樣品篩選。糞樣、魚粉、奶樣，其敏感性和特異性分別高達(dá)100100和97.697.6。 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有些細(xì)菌，如副溶血性弧菌、幽門螺桿菌、大腸桿菌等在低溫貧營養(yǎng)的條件下，可以進(jìn)入“活的非可培養(yǎng)態(tài)”，在適當(dāng)狀態(tài)下還可以復(fù)蘇，仍具有致病力。常規(guī)的培養(yǎng)法無法檢測到處于這種狀態(tài)的細(xì)菌，造成漏檢。而ELISAELISA在這方面具有一定的潛力。第8頁/共15頁4/30/20221.5 食品中轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測 RoganRogan等人用ELISAELISA法檢測出傳統(tǒng)大豆加工產(chǎn)品中混有的CP4 EPSPSCP4 EPSPS蛋白質(zhì)。這種蛋白質(zhì)檢測方法具有