無創(chuàng)產(chǎn)前篩查采血操作規(guī)范

1、附件3胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測樣本采集手冊一、受 檢 者 準(zhǔn) 備1檢測對象：孕周范圍為孕12-24周的孕婦。2采樣體位：坐位取血，且在采血前患者需要有10分鐘時間穩(wěn)定自己的體位。【注意事項(xiàng)】要求受檢孕婦先進(jìn)行B超檢測，確認(rèn)胎兒為單活胎。采血前24小時內(nèi)避免運(yùn)動和飲酒，不宜改變飲食習(xí)慣和睡眠習(xí)慣。二、樣 本 采 集 前 準(zhǔn) 備1、知情同意書簽署：送檢醫(yī)生與受檢者及其家屬作良好溝通，告知該檢測的重要性、臨床意義及潛在的風(fēng)險，并指導(dǎo)受檢者簽署知情同意書。對于孕周大于24周并堅(jiān)持要求進(jìn)行該檢測的受檢者，由送檢醫(yī)生指導(dǎo)其簽署知情同意書補(bǔ)充條款。2、送檢單填寫：要求用鋼筆或簽字筆填

2、寫，并使用正楷字體，字跡清晰，填寫完整。3、送檢單必填信息：送檢單位、送檢醫(yī)生、采血日期、受檢者姓名、年齡、孕周、B超檢查結(jié)果、身份證號碼、聯(lián)系電話。4、信息核對：仔細(xì)核對送檢單和受檢者的基本信息，確保一致；檢查受檢者是否按照醫(yī)囑準(zhǔn)備，并向其解釋操作目的以取得配合。5、樣本標(biāo)識：在采集管、知情同意書、送檢單上貼上樣本唯一條碼， 并注明受檢者姓名、年齡、孕周、檢驗(yàn)項(xiàng)目等信息，確保與送檢單一致?！咀⒁馐马?xiàng)】1粘貼條碼標(biāo)簽時，應(yīng)使條碼與采集管的管長平行，字母朝管口方向，避免以環(huán)繞管壁粘貼的方式使管周被遮擋，而無法清晰看到管內(nèi)樣本情況。（條碼7個，分配：患者一個、采血機(jī)構(gòu)一個、保健所3個、保健院一個、

3、檢測中心一個）2. 樣本采集后使用的條碼必須為抗凍條碼，并且粘貼牢固，確保在運(yùn)輸、檢測、儲存過程中不會脫落或字跡模糊不清。三、樣本采集1、采樣器：醫(yī)用一次性采血針、10 mL EDTA抗凝管、滅菌棉簽、止血帶、消毒液。2、采集操作：全血標(biāo)本的采集使用普通的10mlEDTA采血管：嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范的要求采取10 mL孕婦外周血，采血后請立即緩慢顛倒6次使血液與管內(nèi)成分混勻（如圖1），拖延顛倒混勻時間可能會造成檢測失敗?；靹蚝罅⒓捶胖绷⒂?冰箱內(nèi)，并在6個小時內(nèi)進(jìn)行血漿分離。按照無創(chuàng)產(chǎn)前檢測血漿分離要求操作（見附件），分離后樣本放入-20冰箱儲存。血漿樣本需在0以下冷凍運(yùn)輸，不應(yīng)超過72

4、小時圖1. 顛倒混勻示意圖【注意事項(xiàng)】1.不可使用肝素抗凝的采血管進(jìn)行取樣.。2.顛倒混勻時動作應(yīng)輕柔，防止溶血，影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。3.禁止將普通EDTA抗凝樣本和血漿樣本在室溫狀態(tài)下放置。4.全血離體后必須在6小時進(jìn)行血漿分離，防止母體有核細(xì)胞破裂，增加檢測背景，影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性5.未采血的Streck Cell-Free DNA BCT儲存溫度為18-25，禁止將已采血的Streck Cell-Free DNA BCT 存放于4或以下。四、標(biāo)本遞送1甲方采集血標(biāo)本后，4小時內(nèi)連同送檢單、知情同意書、知情同意書補(bǔ)充條款（如適用），該部分資料醫(yī)院均需留有備，一同送到旗縣區(qū)約定的標(biāo)本收集

5、機(jī)構(gòu) （有能力分離血漿的醫(yī)療機(jī)構(gòu)） 進(jìn)行血漿分離及保存。（血漿分離操作見附件）2血漿樣本應(yīng)保存于標(biāo)準(zhǔn)的 2mL EP 管，并用封口膜密封管口，以防止樣本溢出；3寄送包裝箱應(yīng)為壁厚 6cm 以上的硬質(zhì)泡沫箱，泡沫箱內(nèi)容量視樣本量可適當(dāng)調(diào)整；4血漿樣本寄送采用干冰運(yùn)輸，寄送所用的干冰量為 10 公斤/2-3 天，15 公斤/4-5 天，可根據(jù)運(yùn)輸時間長短適當(dāng)增加用量。保證樣本到達(dá)生產(chǎn)地，干冰有剩余。5將復(fù)核后需寄送的血漿樣本及收集的白細(xì)胞管放入凍存盒內(nèi)，并用保鮮袋將凍存盒封好，所有將紙質(zhì)送檢單、知情同意書裝入自封袋中封好，置于泡沫箱內(nèi)最上層6乙方按規(guī)定的時間到旗縣約定的標(biāo)本收集機(jī)構(gòu)收取標(biāo)本附件血

6、漿 分 離 步 驟一、低溫離心血樣離心（15min）：將采血管按編號順序放入離心桶中，用托盤天平嚴(yán)格配平，將配平好的離心桶放在位置相對的吊籃中，設(shè)置離心機(jī)“xg：1600xg，tem：4time：10 min ，ACC：5。按“star”開始第一次離心，并在血漿制備中“第一次離心”下打“”。在離心10分鐘內(nèi)做其他準(zhǔn)備工作：清潔超凈臺，給垃圾桶套上黃色醫(yī)療垃圾袋、準(zhǔn)備2ml無菌EP管，根據(jù)每份血樣3個2mlEP管準(zhǔn)備，將EP管的開口朝內(nèi)放到雙面板上，同一血樣標(biāo)記相同的標(biāo)號1、1、1、2、2、220、20、20。同樣標(biāo)號的管子并排放置，根據(jù)標(biāo)號順序依次排列。分離血漿：離心完成后從離心機(jī)中取出樣本，

7、此時樣本分為三層，下層為紅細(xì)胞層，中間為白細(xì)胞和血小板，上層為我們所需要的血漿，將采血管按編號從小到大順序放到采血管架的相應(yīng)位置。用移液器將上清液移到與采血管編號對應(yīng)的其中2個EP管中，每管2ml共約4ml。吸取白細(xì)胞層：血漿分離后吸取中間白細(xì)胞1ml到與采血管編號對應(yīng)的另1ml個EP管中(貼上與申請單一致的條形碼)。【注意事項(xiàng)】血樣離心后已經(jīng)分層，從離心機(jī)中取出時要輕拿輕放，不可傾斜采血管，避免破壞分層。吸取血漿時吸頭要垂直伸入采血管，從液面下3-6mm處吸取，接年白細(xì)胞層時要緩慢吸取，為確保不吸到白細(xì)胞層，可留有3mm左右血漿不吸。吸取白細(xì)胞層時，需將吸頭貼近中間層緩慢吸取，避免吸取過多的

8、紅細(xì)胞和血漿。二、高速離心血漿離心（15min）：將EP管中體積接近的血漿放在微量臺式離心機(jī)轉(zhuǎn)子的相應(yīng)位置，蓋上離心機(jī)黃色內(nèi)蓋，并通過向上提內(nèi)蓋確保蓋好，設(shè)置離心機(jī)參數(shù)“xg： 6000xg， time：10 min ，按“star”開始第二次離心，并在血漿制備中“第二次離心”下打“”。在離心的10分鐘內(nèi)做其他準(zhǔn)備工作：根據(jù)每份血樣4個無菌2mlEP管準(zhǔn)備，將EP管的開口朝內(nèi)放到雙面板上，同一血樣標(biāo)記相同的標(biāo)號1、1、2、220、20。同樣標(biāo)號的管子并排放置，根據(jù)標(biāo)號順序從小到大依次排列。提取上清液（30min）：吸取離心所得的上清，即得到較為純凈的血漿，將血漿按每管不少于1ml分裝于對應(yīng)編號

9、的2mlEP管中（EP管上貼上與申請單一致的條形碼）。血漿QC檢測（2min）：審核血漿的體積與溶血情況，血漿體積少于2ml判定為不合格；根據(jù)樣本接收規(guī)程中溶血標(biāo)準(zhǔn)判斷是否溶血，如溶血則為不合格，需要重新采集樣本。不合格樣本需在血漿制備單的備注欄中注明此樣本的不合格信息，并在LIMS系統(tǒng)中填寫不合格及不合格理由，然全報告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，發(fā)送重采血報告。【注意事項(xiàng)】分裝血漿時，需將同一樣本的血漿分裝在具有相同標(biāo)號的EP管內(nèi)，切勿弄混。吸取血漿時，可從沉淀物的對立面緩慢吸取，避免吸頭沾到沉淀或吸到沉淀。三、血漿樣本保存血漿分離后與白細(xì)胞管立即低溫保存，一周之內(nèi)-20 條件下暫存：長期保存需置于-80 冰箱中。血漿不可常溫保存。血漿樣本避免反復(fù)凍融。送檢樣本合格標(biāo)準(zhǔn)1外觀：要求樣本保存管完好，無裂管、開蓋等泄漏或樣本外溢情況。2樣本體積：孕婦外周血5