2012年11月6日線性范圍100mM新PBSpH=459

1、Colorimetric detection of cys using gold nanoparitlces aggregation 組會(huì)報(bào)告2012年11月9日 李世滋1手性相關(guān)文獻(xiàn)2近期GNPs檢測(cè)cys的工作進(jìn)展 具有磁核的納米粒子在其表面同時(shí)有手性配體同時(shí)具有磁性和手性識(shí)別的能力，以此，建立一種通用的手性磁性材料。 纖維素-2,3-二（3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯）（CBDMPC），作為HPLC最有效的手性固定相，選擇性固定在包硅磁球表面，形成手性磁微球Fe3O4SiO2CBDMPC(CMM)。之后，成功將CBDMPC固定在包硅微球的表面，用IR和CD譜表征。 最后，將磁性納米材料直接

2、手性分離領(lǐng)域中。分離結(jié)果證明CMM對(duì)不同消旋物聚有手性識(shí)別能力，證明了它作為手性分離的一種有潛力的材料的可行性。此外，外加磁場(chǎng)使得CMM的回收非常方便。優(yōu)勢(shì)優(yōu)勢(shì)三步合成過(guò)程：三步合成過(guò)程： 首先，纖維素之后加入過(guò)量的三苯甲基氯，使僅與6位的初級(jí)羥基反應(yīng)形成三苯甲基醚。24h后，加入過(guò)量的3,5-二甲基苯異氰酸，形成在2-和3-位有羥基的氨基甲酸酯。該反應(yīng)在100繼續(xù)反應(yīng)24h。 中間物，纖維素-2,3-二（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）-6-O-三苯甲基因?yàn)樵诩状贾胁蝗芙舛坞x出來(lái)，在含有少量的鹽酸的過(guò)量甲醇中再分散室溫24h，除去三苯甲基氯，得到終產(chǎn)物CBDMPC。在無(wú)水吡啶中溶脹100，5

3、h，活化羥基。70nm1，6-己二異氰酸為間隔臂：連接羥基和異氰酸氨基甲?；鵆BDMPC 將磁球在含有60mL苯的燒瓶中超聲分散。 為了在磁球表面固化CBDMPC，將合成的CBDMPC溶解于20mL無(wú)水吡啶中，之后機(jī)械攪拌90加入上述MNPs分散液。攪拌1h后，加入100L的1,6-己二異氰酸酯，反應(yīng)在90進(jìn)行12h。得到的溶液室溫條件下冷卻，通過(guò)磁性傾析手性手性磁性納米粒子，用甲醇洗滌三次。最后產(chǎn)物70真空干燥12h。消旋樣品制備：在25mL乙醇中分別，溶解5種不同的消旋物。之后再以上5種消旋溶液中分別加入150mgMNPs。室溫渦旋震蕩5min，加磁場(chǎng)60s內(nèi)得到上清液，用自動(dòng)數(shù)字旋光計(jì)分

4、析，其他消旋樣品同上。 為了研究分離過(guò)程，擇5種消旋的安息香甲酯的一種，分離結(jié)果用HPLC分析。簡(jiǎn)單說(shuō)，通過(guò)在乙醇中稀釋得到濃度為10g/ml的消旋樣品。用HPLC分析，在試管中加入1mL的消旋樣品（10g/ml），隨后加入100mg合成的手性磁性微球?；旌弦涸谑覝貤l件下渦旋震蕩5min。之后在磁場(chǎng)的幫助下，溶液與CMM在60s內(nèi)得到分離，收集上清液進(jìn)行HPLC分析。之后剩余溶液與CMM保持多余15min，上清液用HPLC分析。回收：回收： 用CMM分離5種消旋物后（總用量為750mg），收集所有的CMM在磁場(chǎng)幫助下乙醇洗滌以除去吸附的消旋物。洗脫清液也用HPLC在相同條件下分析。發(fā)現(xiàn)洗脫CM

5、M 5次后，消旋物完全釋放。得到的回收CMM在70真空干燥12h，得到738 mg CMM。表征： 熱重分析評(píng)估了Fe3O4SiO2CBDMP微球的有機(jī)層含量。如fig4，與Fe3O4SiO2相比Fe3O4SiO2CBDMPC微球在230有明顯失重。可以推出Fe3O4SiO2CBDMPC微球在230和500表現(xiàn)高有機(jī)質(zhì)量釋放大約40%。有機(jī)物在500完全分解。磁球磁性用振動(dòng)樣品磁強(qiáng)計(jì)（VSM）研究。結(jié)果fig5，磁飽和值（Ms）的下降是由于TGA中高有機(jī)物含量造成的。 即，厚的非磁性有機(jī)CBDMPC層包覆在硅球表面，導(dǎo)致磁化強(qiáng)度降低。盡管Fe3O 4SiO2CBDMPC的Ms降低，但是在外加磁

6、場(chǎng)下仍有強(qiáng)的磁響應(yīng)，在60s內(nèi)能完全分離。 直接分離5種不同的消旋物研究CMM的手性識(shí)別能力，分離結(jié)果用自動(dòng)數(shù)字旋光計(jì)分析。圖table1.五種消旋物沒(méi)有任何光學(xué)旋轉(zhuǎn)，因?yàn)椋?）（-）異構(gòu)體產(chǎn)生等量相反光學(xué)旋光，導(dǎo)致消旋物的消除效應(yīng)。當(dāng)與CMM作用5min后，所有的5種消旋物表現(xiàn)正光學(xué)旋光。 可能原因是：纖維素衍生物具有三重螺旋的構(gòu)型，因?yàn)槠涓叨纫?guī)律的螺旋結(jié)構(gòu)導(dǎo)致其對(duì)消旋物的手性區(qū)分，還有氨基酸酯殘基被認(rèn)為是最重要的吸附位點(diǎn)。具有極性基團(tuán)的消旋物可能主要通過(guò)氫鍵與氨基甲酸酯殘基相互作用。消旋物和纖維素衍生物間的-相互作用在手性分離中也有重要作用。根據(jù)table1，當(dāng)CMM在乙醇中用于直接手性分

7、離時(shí)，主要通過(guò)其螺旋凹槽，氫鍵或-相互作用。用NVM-GNPs檢測(cè)cys的試驗(yàn)： 之前的工作情況檢測(cè)的cys的濃度范圍210 mg/L這里，UV-vis圖中沒(méi)有給出不加cys的吸收譜 近來(lái)工作進(jìn)展：近來(lái)工作進(jìn)展：由于NVM-GNPs穩(wěn)定性的問(wèn)題，如果GNPs穩(wěn)定性非常好，在PBS中將對(duì)cys檢測(cè)響應(yīng)變差；而如果GNPs自身穩(wěn)定性非常差，則在PBS中GNPs本身的酒紅色就會(huì)因發(fā)生自團(tuán)聚而逐漸變成藍(lán)紫色。 這時(shí)已經(jīng)發(fā)生團(tuán)聚了的GNPs不能用于cys的檢測(cè)根據(jù)上次組會(huì)提出的問(wèn)題，做了cys與GNPs反應(yīng)隨著時(shí)間變化的趨勢(shì)： 檢測(cè)加入0.4 mg/L cys后1h內(nèi)A/A對(duì)時(shí)間的變化情況。由圖可以看出

8、在低濃度的cys檢測(cè)時(shí)，變色反應(yīng)比較緩慢。在加入cys之后，GNPs的溶液稍有顏色變化，從UV-vis譜上可以看出有些變寬，因此說(shuō)明在此條件下，GNPs自身的穩(wěn)定性仍然不太好。y = 0.057x + 0.4764R2 = 0.99220.40.50.60.70.80.911.1051015A650/A525A650/A525線性 (A650/A525)線性范圍： 0.4 10 mg/L 線性范圍： 0.4 10 mg/L 20121016之前合成的NVM-GNPs儲(chǔ)備液稀釋備用 有時(shí)候NVM-GNPs穩(wěn)定性非常好，如下情況：20121018 線性使用同一批的GNPs（比較穩(wěn)定，所以想試試把G

9、NPs的濃度稍微降低些，看看對(duì)于cys的檢測(cè)，）使用的新配置的 50 mM pH=4.30 PBS，在這種情況下這種情況下由于稀釋了納米粒子的濃度，由于稀釋了納米粒子的濃度，NVM-GNPs自身的穩(wěn)定性表現(xiàn)稍差，自身的穩(wěn)定性表現(xiàn)稍差，發(fā)現(xiàn)GNPs自身有團(tuán)聚現(xiàn)象，反應(yīng)放置1.5h立即測(cè)定UV-vis。平行做了兩組實(shí)驗(yàn)。20121019 線性干擾氨基酸試驗(yàn)：20121025 干擾氨基酸由于GNPs自身穩(wěn)定性問(wèn)題，有意注意合成條件。2012年10月31日水浴和室溫條件下在低濃度的cys的檢測(cè)線性都不好，NVM-GNPs穩(wěn)定性較好的，可能需要更改PBS的離子強(qiáng)度和PH。2012年11月1日線性范圍20

10、12年11月5日 改變反應(yīng)體系PBS做線性由于之前使用的都是3mL 反應(yīng)體系：2 mL 50 mM pH=4.45 PBS + 1 mL NVM-GNPs + 30 L各級(jí)濃度的cys，室溫條件下放置2h后測(cè)定UV-vis。但是，由于NVM-GNPs自身穩(wěn)定性不好，或者是在50mM PBS中過(guò)于穩(wěn)定，因而對(duì)于cys的檢測(cè)效果都不好。因此，考慮在使用穩(wěn)定的NVM-GNPs的條件下，改變反應(yīng)體系PBS的pH和濃度，以得到cys的線性范圍。嘗試了穩(wěn)定的NVM-GNPs在100mM PBS中穩(wěn)定性較好。如下圖所示，在室溫條件下與實(shí)驗(yàn)隨行的空白NVM-GNPs在PBS中穩(wěn)定性很好。問(wèn)題是最近做cys檢測(cè)，在長(zhǎng)波長(zhǎng)處本來(lái)應(yīng)該出現(xiàn)第二個(gè)吸收峰，現(xiàn)在變成了GNPs的吸收峰整體向長(zhǎng)波長(zhǎng)方向移動(dòng)，而在做線性的圖的時(shí)候，仍選擇之前的幾處波長(zhǎng)的比值。2012年年11月月6日日 線性范圍線性范圍 100 mM 新新PBS pH=4.59合成的NVM-GNPs條件：16.3 mg NVM + 200L NaOH + 1mL 1% HAuCl4 75油浴2h。合成