口腔細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用

1、人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版（本章所附照片除特別標(biāo)注外均來(lái)自首醫(yī)口腔基因治療與牙再生分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室）所附照片除特別標(biāo)注外均來(lái)自首醫(yī)口腔基因治療與牙再生分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室）第六章 口腔細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版提要：提要：本章介紹細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理及基本方法；牙齒相關(guān)細(xì)胞、唾液腺細(xì)胞、口腔黏膜細(xì)胞、頜骨相關(guān)硬組織細(xì)胞、口腔腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)及特點(diǎn)；組織工程的基本原理、口腔組織特有的干細(xì)胞、再生醫(yī)學(xué)技術(shù)在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用；基因芯片、蛋白芯片、組織芯片，蛋白質(zhì)組學(xué)、生物信息學(xué)、模式生物學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)等。重點(diǎn)掌握細(xì)胞培養(yǎng)基本原理及方法，口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)，了解口腔干細(xì)胞培

2、養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用及口腔生物學(xué)其他研究方法。人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版一、細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念n細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞培養(yǎng)： 模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，在適當(dāng)?shù)臈l件下，使活體組織細(xì)胞在體外環(huán)境存活、生長(zhǎng)增殖，并維持其結(jié)構(gòu)功能n原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)： 取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長(zhǎng)的細(xì)胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng)n傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)：n細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長(zhǎng)一定時(shí)間后，被分開(kāi)接種到新的培養(yǎng)器皿中第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版體外細(xì)胞生物學(xué)體外細(xì)胞生物學(xué)v形態(tài)特點(diǎn)

3、形態(tài)特點(diǎn)貼壁型細(xì)胞懸浮型細(xì)胞v生長(zhǎng)增殖過(guò)程生長(zhǎng)增殖過(guò)程培養(yǎng)細(xì)胞生命期培養(yǎng)細(xì)胞一代生存期第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版貼壁型細(xì)胞n必須貼附于支持物表面才能生長(zhǎng)。大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長(zhǎng)，屬于貼壁依賴性細(xì)胞按照培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)，可分為幾大類型按照培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)，可分為幾大類型：n上皮型n成纖維型n游走型n多形型第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版懸浮型細(xì)胞n于懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng)n不需要貼附于支持物表面n多見(jiàn)于血液淋巴細(xì)胞第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版幾種常見(jiàn)細(xì)胞的形態(tài)幾種常見(jiàn)細(xì)胞的形態(tài)原代培養(yǎng)神經(jīng)元細(xì)胞 （10）原代培養(yǎng)星

4、形細(xì)胞 （10）神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞系 （10）N20Y結(jié)腸癌細(xì)胞系（10）Caco-2第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版培養(yǎng)細(xì)胞生命期n所謂培養(yǎng)細(xì)胞生命期，指細(xì)胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長(zhǎng)的時(shí)間 細(xì)胞全部生存過(guò)程大致分為以下三個(gè)階段細(xì)胞全部生存過(guò)程大致分為以下三個(gè)階段：n原代培養(yǎng)期n傳代期 n衰退期第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版n原代培養(yǎng)期：原代培養(yǎng)期：也稱初代培養(yǎng)，即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代階段，一般持續(xù)14周 n傳代期：傳代期：初代培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)傳代后便改稱為細(xì)胞系。在全生命期中此期的持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)n衰退期：衰退期：此期細(xì)胞仍然生存，但增殖很慢

5、或不增殖；細(xì)胞形態(tài)輪廓增強(qiáng)，最后衰退凋亡第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版細(xì)胞永生性細(xì)胞永生性n也稱不死性，即細(xì)胞獲持久性增殖能力，成為無(wú)限細(xì)胞系n無(wú)限細(xì)胞系的形成主要發(fā)生在第二期末，或第三期初階段n細(xì)胞獲不死性后，核型大多變成異倍體?？赡軔盒宰僴細(xì)胞永生性和惡性性非同一性狀第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版培養(yǎng)細(xì)胞一代生存期所謂細(xì)胞所謂細(xì)胞“一代一代”，系僅指從細(xì)胞接種到分離再，系僅指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)時(shí)的一段時(shí)間，細(xì)胞傳代后，一般要經(jīng)過(guò)以培養(yǎng)時(shí)的一段時(shí)間，細(xì)胞傳代后，一般要經(jīng)過(guò)以下三個(gè)階

6、段下三個(gè)階段:n 潛伏期（游離期，貼壁期）n 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期n 停滯期（平臺(tái)期）第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版培養(yǎng)細(xì)胞一代生存期第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中的重要現(xiàn)象n接觸抑制：接觸抑制：由于細(xì)胞的相互接觸而抑制細(xì)胞運(yùn)動(dòng)n密度抑制：密度抑制：細(xì)胞因營(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響而停止生長(zhǎng)第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版培養(yǎng)細(xì)胞的體外生長(zhǎng)環(huán)境n無(wú)污染環(huán)境n基質(zhì)n氣體環(huán)境和氫離子濃度n液相環(huán)境n溫度n滲透壓第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版 無(wú)污染環(huán)境：無(wú)污染環(huán)境：n高壓蒸汽消毒器n電熱干燥箱n

7、濾器n超凈工作臺(tái)n紫外燈 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版基質(zhì)：基質(zhì)：n玻璃基質(zhì)n塑料n飼養(yǎng)細(xì)胞，又稱滋養(yǎng)細(xì)胞n生物性基質(zhì)處理培養(yǎng)表面n金屬 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版氣體環(huán)境和氫離子濃度氣體環(huán)境和氫離子濃度 ：n5%二氧化碳 n95%空氣 npH為7.27.4 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版液相環(huán)境：液相環(huán)境：n水：新鮮配置的三蒸水或去離子水n平衡鹽液 ：Hanks液、PBS、Earle液等n天然培養(yǎng)基 n合成培養(yǎng)基 n無(wú)血清培養(yǎng)基 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版n溫度維持溫度維持 ：（

8、：（36.50.5） n滲透壓滲透壓 ：290320 mOsm/kg 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)儀器超凈工作臺(tái)細(xì)胞培養(yǎng)箱倒置相差顯微鏡第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版二、細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法二、細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版無(wú)菌操作中的注意事項(xiàng)n對(duì)實(shí)驗(yàn)中可能用到的器具及培養(yǎng)用液進(jìn)行嚴(yán)格消毒滅菌 n培養(yǎng)室的消毒 ：培養(yǎng)室和超凈臺(tái)要用紫外燈和酒精嚴(yán)格消毒n進(jìn)入無(wú)菌室前要按照外科手術(shù)無(wú)菌要求進(jìn)行洗手與著裝 n培養(yǎng)過(guò)程中要注意無(wú)菌操作 ：時(shí)刻銘記無(wú)菌物品與有菌物品要分開(kāi)處理第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本

9、原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版ABA 超凈工作臺(tái)中的實(shí)驗(yàn)用品要擺放整齊B 實(shí)驗(yàn)前75%酒精噴洗雙手無(wú)菌操作技術(shù)第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版C D 開(kāi)啟封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰就近的地方，并輕輕灼燒CD第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版EFE F移液操作第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版基本培養(yǎng)操作技術(shù)n培養(yǎng)細(xì)胞的取材與分離 n體外培養(yǎng)細(xì)胞的純化 n細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版培養(yǎng)細(xì)胞的取材與分離培養(yǎng)細(xì)胞的取材與分離n 取材部位準(zhǔn)確n 嚴(yán)格無(wú)菌操作n 盡快培養(yǎng)n 減小損傷n 制

10、備標(biāo)本第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版體外細(xì)胞的純化體外細(xì)胞的純化n人工純化：酶消化法、機(jī)械刮除法、反復(fù)貼壁法、克隆法、培養(yǎng)基限定法、流式細(xì)胞儀分離法 等n自然純化 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版細(xì)胞凍存要點(diǎn)：細(xì)胞凍存要點(diǎn)：n冷凍過(guò)程要緩慢n凍存細(xì)胞必須處在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞復(fù)蘇要點(diǎn)：細(xì)胞復(fù)蘇要點(diǎn)：n快速解凍n解凍后的細(xì)胞應(yīng)離心去除冷凍保護(hù)劑后再接種到培養(yǎng)基中第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版細(xì)胞培養(yǎng)的污染、檢測(cè)與控制 n微生物污染：微生物污染：細(xì)菌，真菌，支原體等污染n化學(xué)污染：化學(xué)污染：指影響細(xì)胞生存的非細(xì)胞所需物質(zhì)混入培

11、養(yǎng)物中 ，應(yīng)在操作中防止 n細(xì)胞交叉污染：細(xì)胞交叉污染：指目的細(xì)胞中混入其他種細(xì)胞 ，預(yù)防方法主要是嚴(yán)格按照規(guī)定操作，做好標(biāo)記，避免發(fā)生混亂 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版微生物污染：微生物污染：n污染的途徑：空氣 、器材 、操作 、試劑 、組織標(biāo)本 n微生物污染的檢測(cè) n微生物污染的控制：抗生素除菌法；加溫處理 第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版FL cell polluted by Staphylococcus FL cell polluted by G+ Bacteria 首都醫(yī)科大學(xué) 細(xì)胞生物學(xué)系 張海燕提供第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民

12、衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版FL cell polluted by escherichia coli FL cell polluted by mold fungus 首都醫(yī)科大學(xué) 細(xì)胞生物學(xué)系 張海燕提供第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版細(xì)胞培養(yǎng)常用方法：細(xì)胞培養(yǎng)常用方法：n組織塊培養(yǎng)法n酶消化法第一節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版一、牙齒相關(guān)細(xì)胞第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版牙周膜細(xì)胞n培養(yǎng)方法：組織塊法；酶消化法n細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)n免疫組織化學(xué)染色n

13、體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖特點(diǎn)n功能特點(diǎn)n牙周膜細(xì)胞增殖分化的影響因素第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版 細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn) 原代 人牙周膜成纖維細(xì)胞（10） 第3代人牙周膜成纖維細(xì)胞（10）第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版 免疫組織化學(xué)染色免疫組織化學(xué)染色波形絲蛋白染色陽(yáng)性（10）角蛋白染色陰性（10） 第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版體外培養(yǎng)細(xì)胞特點(diǎn)：體外培養(yǎng)細(xì)胞特點(diǎn)：n成功率高于牙髓細(xì)胞，達(dá)40%80%n可在體外長(zhǎng)時(shí)間存活達(dá)412個(gè)月n可持續(xù)傳40代以上第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培

14、養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版功能特點(diǎn)功能特點(diǎn)n分泌功能n礦化功能n收縮功能n再生功能n根面吸附等第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版牙周膜細(xì)胞增殖分化的影響因素牙周膜細(xì)胞增殖分化的影響因素n生長(zhǎng)因子n胰島素n纖維黏連蛋白n抗壞血酸n羥基磷灰石第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版牙髓細(xì)胞n培養(yǎng)方法：酶消化法；組織塊培養(yǎng)法n細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)：成纖維細(xì)胞型（與牙周膜細(xì)胞類似）n免疫組織化學(xué)染色：波形絲蛋白（+）；角蛋白（-）n體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖特點(diǎn)n功能特點(diǎn)第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版

15、生長(zhǎng)增殖特點(diǎn)生長(zhǎng)增殖特點(diǎn)n生長(zhǎng)增殖較快n可傳代至第1520代n長(zhǎng)時(shí)間體外培養(yǎng)可呈復(fù)層生長(zhǎng)第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版功能特點(diǎn)功能特點(diǎn)n堿性磷酸酶活性n礦化現(xiàn)象n對(duì)鈣調(diào)節(jié)因子的反應(yīng)n對(duì)細(xì)胞因子的反應(yīng)n對(duì)氫氧化鈣、羥基磷灰石蓋髓劑的反應(yīng)第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版二、唾液腺細(xì)胞二、唾液腺細(xì)胞第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版唾液腺細(xì)胞n形態(tài)特點(diǎn)n免疫組織化學(xué)特點(diǎn)n功能特點(diǎn)n唾液腺細(xì)胞的增殖與分化n調(diào)節(jié)唾液腺細(xì)胞增殖、分化和功能的因素第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口

16、腔生物學(xué)第四版細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)n腺泡上皮細(xì)胞：體外培養(yǎng)的腺泡細(xì)胞多呈“鋪路石”樣排列n導(dǎo)管上皮細(xì)胞：導(dǎo)管上皮細(xì)胞呈多邊形n肌上皮細(xì)胞： 肌上皮細(xì)胞呈梭形或星形第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版導(dǎo)管上皮細(xì)胞導(dǎo)管上皮細(xì)胞（HSG HSG 細(xì)胞系）細(xì)胞系）HSG細(xì)胞系（4）HSG細(xì)胞系（10）第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版A 小型豬腮腺上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)（10）B 小型豬腮腺上皮細(xì)胞alpha淀粉酶免疫組化染色（10）腺泡細(xì)胞上皮細(xì)胞腺泡細(xì)胞上皮細(xì)胞第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版免疫組

17、織化學(xué)染色免疫組織化學(xué)染色n腺泡上皮細(xì)胞：角蛋白、淀粉酶、對(duì)氨基水楊酸、 導(dǎo)管上皮膜、前角蛋白、單克隆角蛋白、分泌成分陽(yáng)性反應(yīng)n導(dǎo)管上皮細(xì)胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗體染色陽(yáng)性反應(yīng)n肌上皮細(xì)胞：肌動(dòng)蛋白、S-100蛋白、肌凝蛋白抗體染色陽(yáng)性反應(yīng)第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版功能特點(diǎn)：分泌功能特點(diǎn)：分泌n腺泡細(xì)胞：淀粉酶、PRP、唾液過(guò)氧化物酶、特異蛋白等n腺泡上皮細(xì)胞：頂端分泌、基底及側(cè)膜分泌n導(dǎo)管細(xì)胞：膠原n肌上皮細(xì)胞：膠原第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版唾液腺細(xì)胞的增殖分化唾液腺細(xì)胞的增殖分化n基底潛能干細(xì)胞理

18、論n單細(xì)胞全能干細(xì)胞理論n雙細(xì)胞亞全能干細(xì)胞理論第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版調(diào)節(jié)唾液腺細(xì)胞增殖、分化和功能的因素調(diào)節(jié)唾液腺細(xì)胞增殖、分化和功能的因素n細(xì)胞因子n激素n細(xì)胞外基質(zhì) n鈣離子第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版三、口腔黏膜細(xì)胞三、口腔黏膜細(xì)胞第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版口腔黏膜細(xì)胞口腔黏膜細(xì)胞n培養(yǎng)方法：組織塊法和酶消化法n形態(tài)特點(diǎn)：卵圓形、多邊形，呈“鋪路石”樣單層排列n免疫組織化學(xué)染色：波形絲蛋白陰性，角蛋白陽(yáng)性n功能：分泌大量的膠原蛋白與非膠原蛋白第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中

19、相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版 兔口腔黏膜上皮細(xì)胞兔口腔黏膜上皮細(xì)胞A AB BA 無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下（10）B 滋養(yǎng)細(xì)胞層培養(yǎng)條件下（4）第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版四、頜骨相關(guān)的硬組織細(xì)胞四、頜骨相關(guān)的硬組織細(xì)胞第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版破骨細(xì)胞破骨細(xì)胞n形態(tài)學(xué)特點(diǎn)：體積大，多核n組織化學(xué)染色：破骨細(xì)胞單克隆抗體呈陽(yáng)性反應(yīng)，與降鈣素反應(yīng)呈藍(lán)紫色，與抗酒石酸磷酸酶反應(yīng)呈棕褐色n功能：骨吸收功能n影響破骨細(xì)胞功能的因素： 促進(jìn)破骨細(xì)胞功能：破骨細(xì)胞激活因子、甲狀旁腺素等 抑制破故細(xì)胞功能：

20、-干擾素、降鈣素等第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版成骨細(xì)胞成骨細(xì)胞n形態(tài)學(xué)特點(diǎn)：不同培養(yǎng)方法所獲得的成骨細(xì)胞形態(tài)各有差異n免疫組織化學(xué)染色特點(diǎn)：BGP、型膠原、堿性磷酸酶活性n功能：成骨作用 調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞骨吸收作用第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版軟骨細(xì)胞軟骨細(xì)胞n形態(tài)學(xué)特點(diǎn)：多角形，可形成甲苯胺藍(lán)染色陽(yáng)性的物質(zhì)n免疫組織化學(xué)染色特點(diǎn)：GAG、型和型膠原n功能：形成軟骨或骨n影響軟骨細(xì)胞功能、分化的因素：激素、細(xì)胞因子、機(jī)械張力和壓力、體外培養(yǎng)環(huán)境第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版五、口腔腫

21、瘤細(xì)胞五、口腔腫瘤細(xì)胞第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版口腔鱗癌細(xì)胞口腔鱗癌細(xì)胞n細(xì)胞系來(lái)源：舌鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本原代及傳代培養(yǎng)n生物學(xué)特性： 多角形上皮樣細(xì)胞 核/漿比例高，多核仁 高貼壁率，克隆形成率和軟瓊脂集落形成率第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版唾液唾液腺腫瘤細(xì)胞腺腫瘤細(xì)胞人黏液表皮樣癌人黏液表皮樣癌MEC-1細(xì)胞系細(xì)胞系：n低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株Mc1、Mc2n高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株Mc3、M3SP4腺樣囊腺癌腺樣囊腺癌ACC-2、ACC-3細(xì)胞系細(xì)胞系第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版成釉細(xì)胞瘤細(xì)胞成釉

22、細(xì)胞瘤細(xì)胞n細(xì)胞系來(lái)源：腫瘤組織原代及傳代培養(yǎng)n生物學(xué)特性：生長(zhǎng)增殖緩慢，二倍體細(xì)胞型n應(yīng)用：目前已獲得永生細(xì)胞系A(chǔ)M-1及 hTERT(+)-AM細(xì)胞系第二節(jié) 口腔醫(yī)學(xué)中相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)及其特點(diǎn)人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版n組織工程的基本原理組織工程的基本原理n口腔組織特有的干細(xì)胞口腔組織特有的干細(xì)胞n再生醫(yī)學(xué)技術(shù)在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用再生醫(yī)學(xué)技術(shù)在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版組織工程的基本原理n種子細(xì)胞體外擴(kuò)增，與生物材料按一定的比例混合，將細(xì)胞-材料復(fù)合物植入機(jī)體的組織或

23、器官的病損部位，以達(dá)到修復(fù)創(chuàng)傷和重建功能的目的n目前組織工程常用的支架材料是合成的可生物降解的高分子聚合物是聚乳酸（PLA）、聚乙醇酸（PGA）、聚乳酸和聚乙醇酸復(fù)合物（PLGA）等第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版口腔組織特有的干細(xì)胞n牙髓干細(xì)胞n牙周膜干細(xì)胞n脫落乳牙牙髓干細(xì)胞n根尖牙乳頭干細(xì)胞n唾液腺干細(xì)胞 第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版牙髓干細(xì)胞牙髓干細(xì)胞n比BMSCS具有更強(qiáng)的增殖率、克隆形成率和倍增率n可被誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞、神經(jīng)樣細(xì)胞nStroo-1和CD146等干細(xì)胞表面標(biāo)記陽(yáng)性n體內(nèi)誘導(dǎo)可形成類似牙本質(zhì)-

24、牙髓復(fù)合體樣的結(jié)構(gòu)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版脫落乳牙牙髓干細(xì)胞脫落乳牙牙髓干細(xì)胞n比BMSSCs具有更強(qiáng)的增殖率、克隆形成率和倍增率nStroo-1和CD146等干細(xì)胞表面標(biāo)記陽(yáng)性n可誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞n體外可形成鈣化結(jié)節(jié)n內(nèi)體可在免疫缺陷小鼠皮下成骨和產(chǎn)生牙本質(zhì)樣物質(zhì)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版牙周膜干細(xì)胞牙周膜干細(xì)胞nStro-1和MUC18及腱特異性標(biāo)記SCX表達(dá)陽(yáng)性n可被誘導(dǎo)分化為牙髓母細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、牙骨質(zhì)細(xì)胞和成骨細(xì)胞n體外可形成礦化結(jié)節(jié)，表達(dá)堿性磷酸酶或骨唾液蛋白

25、n體內(nèi)試驗(yàn)牙周膜干細(xì)胞能產(chǎn)生沿牙周膜結(jié)締組織方向走行的牙骨質(zhì)樣結(jié)構(gòu)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版根尖牙乳頭干細(xì)胞根尖牙乳頭干細(xì)胞n比牙髓干細(xì)胞具有更高的增殖活性nCD24是SCAP較特異的表面標(biāo)志物n在體外SCAP可橫向分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，并能產(chǎn)生比牙髓干細(xì)胞更多的牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合物第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版唾液腺干細(xì)胞唾液腺干細(xì)胞 n組織定位：導(dǎo)管上皮 停留在腺泡、間質(zhì)中的前體細(xì)胞n可誘導(dǎo)分化為表達(dá)肝細(xì)胞和胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞表型n體外培養(yǎng)后植入肝臟，可分泌白蛋白第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用人民衛(wèi)生

26、出版社口腔生物學(xué)第四版再生醫(yī)學(xué)技術(shù)在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用n在頜面重建中的作用： 介導(dǎo)頜面部骨及軟骨缺損修復(fù)n在引導(dǎo)口腔組織再生中的作用：促進(jìn)牙周組織重建n組織工程化黏膜在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 n組織工程用于人造唾液腺n牙再生：組織工程方法-種子細(xì)胞+支架材料 發(fā)育生物學(xué)-模擬牙齒發(fā)育的過(guò)程第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)在口腔再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版口腔生物學(xué)其他研究方法n基因芯片、蛋白芯片 和組織芯片n蛋白質(zhì)組學(xué)n生物信息學(xué)n模式生物學(xué)n系統(tǒng)生物學(xué)第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版基因芯片技術(shù)n基因芯片技術(shù)，

27、又稱DNA微陣列技術(shù)，是將cDNA文庫(kù)中已知和未知的全長(zhǎng)序列或寡核苷酸序列固定于玻片上，同時(shí)檢測(cè)比較生物樣品中多個(gè)已知或未知序列的表達(dá)狀況n基因芯片技術(shù)基本原理與經(jīng)典的核酸分子雜交方法是一致的n基因芯片技術(shù)是高效地大規(guī)模獲取相關(guān)生物信息的重要手段第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版基因芯片技術(shù)的基因芯片技術(shù)的主要技術(shù)流程主要技術(shù)流程n芯片的設(shè)計(jì)與制備n靶基因的標(biāo)記n芯片雜交與雜交信號(hào)檢測(cè)第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版基因芯片技術(shù)的應(yīng)用基因芯片技術(shù)的應(yīng)用n基因表達(dá)譜分析n新基因發(fā)現(xiàn)n基因突變及多態(tài)性分析n基因組文庫(kù)作圖n疾病診斷和預(yù)測(cè)n藥物篩

28、選n基因測(cè)序等第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版基因芯片技術(shù)存在的問(wèn)題基因芯片技術(shù)存在的問(wèn)題n設(shè)備昂貴，例如制造儀器，現(xiàn)代化的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)及激光共聚焦顯微鏡等，并且制造光刻掩膜需較高費(fèi)用nDNA芯片上原位合成探針難免有錯(cuò)誤核苷酸摻入及混入雜質(zhì)，使整個(gè)雜交背景增高，降低特異性第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版蛋白芯片技術(shù)n蛋白芯片是以蛋白質(zhì)代替DNA作為檢測(cè)對(duì)象，與在mRNA水平上的檢測(cè)基因表達(dá)的基因芯片不同，它直接在蛋白水平上檢測(cè)表達(dá)模式n在基因表達(dá)研究中比基因芯片有著更加直接的應(yīng)用前景第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版

29、蛋白芯片技術(shù)主要技術(shù)流程Chip membraneHybridizationLabeled protein sampleAdd StreptavidinStreptavidinFluorescent labelingStreptavidin AbAdd fluorescent labelingStreptavidin AbFluorescent detect第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版蛋白芯片技術(shù)的應(yīng)用蛋白芯片技術(shù)的應(yīng)用n研究疾病的發(fā)病機(jī)制，協(xié)助尋找疾病診斷和治療的靶分子n探討作用物與酶相互作用的機(jī)制的分析n開(kāi)發(fā)新藥以及協(xié)助蛋白質(zhì)組的研究第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研

30、究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版存在的問(wèn)題存在的問(wèn)題n固定于載體上的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)單一，無(wú)法反應(yīng)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的多樣性n固定于載體上的蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性直接影響蛋白芯片的穩(wěn)定性n蛋白芯片造價(jià)比較昂貴n影響結(jié)果特異性的因素較多第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版組織芯片技術(shù)n組織芯片技術(shù)是近年來(lái)基因芯片技術(shù)的發(fā)展和延伸n它可以將大量臨床組織標(biāo)本排列在一張載體進(jìn)行分析研究n可以最大限度地利用組織資源n所需樣品少，是一種高通量、多樣本的分析工具第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版應(yīng)用應(yīng)用n協(xié)助人類基因組學(xué)的研究n疾病相關(guān)基因的驗(yàn)證n新藥物的開(kāi)發(fā)與篩選n治療過(guò)程

31、的追蹤和預(yù)后等方面的研究第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版蛋白質(zhì)組學(xué)n蛋白質(zhì)組學(xué)的研究對(duì)象是特定的時(shí)間和特定的空一個(gè)完整的生物體（或細(xì)胞）所表達(dá)的全體蛋白質(zhì)的特征n包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，翻譯后的修飾，蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用等n在蛋白質(zhì)水平上獲得對(duì)于有關(guān)生物體生理、病理等過(guò)程的全面認(rèn)識(shí)第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版蛋白質(zhì)組學(xué)的研究?jī)?nèi)容蛋白質(zhì)組學(xué)的研究?jī)?nèi)容n蛋白質(zhì)鑒定n翻譯后修飾n蛋白質(zhì)功能確定n服務(wù)于人類的健康第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出版社口腔生物學(xué)第四版Intact cell of tissueCell lysisProte

32、in LC2D gelsMixture of proteinsCollect fractionIndividual proteinTrypsin digestionProtein LC profileProtein LC profileMass spectrumMixture of proteinElectrospray of MALDIQuantitative ComparisonsProtein IdentificationMass spectrumProtein LC profile2D gelimageTrypsin digestionExtract spotTrypsin digestionElectrospray of MALDI蛋白質(zhì)組學(xué)研究?jī)?nèi)容及方法第四節(jié) 口腔生物學(xué)其他研究方法人民衛(wèi)生出