生化實(shí)驗(yàn)-血糖的測定

1、血糖：指血液中的單糖：葡萄糖血糖：指血液中的單糖：葡萄糖血糖水平：血漿中葡萄糖濃度血糖水平：血漿中葡萄糖濃度血糖總維持在恒定水平：血糖總維持在恒定水平： 3.96.7mmol/Lv調(diào)節(jié)血糖水平的激素：胰島素、胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素。v血糖水平異常：高血糖及糖尿?。坏脱桥R床：血糖檢測是目前診斷糖代謝異常相關(guān)疾臨床：血糖檢測是目前診斷糖代謝異常相關(guān)疾病的主要依據(jù)。病的主要依據(jù)。科研：在代謝疾病的研究中，常測定血糖。在科研：在代謝疾病的研究中，常測定血糖。在某些藥物的研究中，也涉及血糖的測定。某些藥物的研究中，也涉及血糖的測定。體液糖的測定項(xiàng)目：體液糖的測定項(xiàng)目：血糖濃度測定口服糖耐量試

2、驗(yàn) 糖化血紅蛋白試驗(yàn)糖化血清白蛋白測定胰島素測定C-肽測定等測定測定方法方法無機(jī)化學(xué)法：無機(jī)化學(xué)法： Folin-Wu法法有機(jī)化學(xué)法：鄰甲苯胺法有機(jī)化學(xué)法：鄰甲苯胺法酶法：酶法：葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶- -過氧化物酶法原理過氧化物酶法原理（1）葡萄糖）葡萄糖O2H2O（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚氨基安替吡啉苯酚葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2H2O 紅色醌式物質(zhì)紅色醌式物質(zhì)505nm分光光度計(jì)的原理分光光度計(jì)的原理生物化學(xué)的四大研究技術(shù)生物化學(xué)的四大研究技術(shù)：分光光度計(jì)的工作原理分光光度計(jì)的工作原理朗伯朗伯- -比爾定律比爾定律朗伯定律朗伯定律：A=k1L 比爾定律

3、比爾定律：A=k2C朗伯朗伯-比爾定律比爾定律：如同時(shí)考慮液：如同時(shí)考慮液層厚度和溶液濃度對(duì)吸光度的層厚度和溶液濃度對(duì)吸光度的影響，則吸光度與溶質(zhì)的濃度影響，則吸光度與溶質(zhì)的濃度和溶液的厚度的乘積成正比。和溶液的厚度的乘積成正比。 A=KLC 9、 人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022-5-42022-5-4Wednesday, May 04, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022-5-42022-5-42022-5-45/4/2022 2:27:47 AM11、人總是珍惜為得到。2022-5-42022-5-42022-5-4May-224-May-2212、人亂于心，

4、不寬余請(qǐng)。2022-5-42022-5-42022-5-4Wednesday, May 04, 202213、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。2022-5-42022-5-42022-5-42022-5-45/4/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年5月4日星期三2022-5-42022-5-42022-5-415、一個(gè)人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2022年5月2022-5-42022-5-42022-5-45/4/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022-5-42022-5-4May 4, 202217、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。2022-5-420

5、22-5-42022-5-42022-5-4朗伯-比爾定律應(yīng)用A標(biāo)=KC標(biāo)LA樣=KC樣L 標(biāo)準(zhǔn)品法測定未知樣品含量標(biāo)準(zhǔn)品法測定未知樣品含量C樣=A樣A標(biāo)C標(biāo)1. 接通電源，接通電源，調(diào)整波長調(diào)整波長。2. 比色杯中加入空白及待測樣品，并放入分光光度計(jì)中比色杯中加入空白及待測樣品，并放入分光光度計(jì)中，注意：加入樣品量不超過比色杯體積的，注意：加入樣品量不超過比色杯體積的2/3。3. 調(diào)模式為調(diào)模式為“透射比透射比”，對(duì)空白對(duì)照進(jìn)行調(diào)對(duì)空白對(duì)照進(jìn)行調(diào)“0”（開蓋（開蓋）和調(diào)）和調(diào)“100”（閉蓋）。（閉蓋）。4. 調(diào)模式為調(diào)模式為“吸光度吸光度”，將空白對(duì)照調(diào)將空白對(duì)照調(diào)“0”，測定待測，測定待

6、測樣品的吸光度值。樣品的吸光度值。（1）取取4支試管，按下表加入試劑支試管，按下表加入試劑: :試劑試劑標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管(ml)測定管測定管1(ml)測定管測定管2(ml)空白管空白管(ml)血清樣品血清樣品0.020.02葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.02蒸餾水蒸餾水0.02酶酚混合試劑酶酚混合試劑3.003.003.003.00充分混勻，充分混勻，37 水浴中保溫水浴中保溫20min；冷卻至室溫后冷卻至室溫后，505nm處比色處比色比色方法：以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測定管光密度值。比色方法：以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測定管光密度值。（2）計(jì)算計(jì)算： 依據(jù)依據(jù)朗伯朗伯-比爾定律比爾定律： A=K

7、LC 標(biāo)準(zhǔn)管葡萄糖濃度：標(biāo)準(zhǔn)管葡萄糖濃度：5mmol/L 測定管測定管葡萄糖含量葡萄糖含量（mmol/L）測定管光密度測定管光密度 標(biāo)準(zhǔn)管光密度標(biāo)準(zhǔn)管光密度5正確使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液正確使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液應(yīng)占比色皿的應(yīng)占比色皿的2/3。血糖測定應(yīng)在取血后血糖測定應(yīng)在取血后2小時(shí)內(nèi)完成，放置太久，血小時(shí)內(nèi)完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。糖易分解，故使含量降低。酶酚混合液一般現(xiàn)用現(xiàn)配。酶酚混合液一般現(xiàn)用現(xiàn)配。 補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)測2-3名同學(xué)早餐后和空腹血糖的水平，并比較二者之間的區(qū)別。使用怡成JPS-5型血糖儀。1 1、葡萄糖氧化酶、葡萄糖氧化酶-

8、-過氧化物酶比色法過氧化物酶比色法測定血糖的原理。測定血糖的原理。2 2、分光光度計(jì)的正確使用。、分光光度計(jì)的正確使用。3 3、實(shí)驗(yàn)操作中存在的問題。、實(shí)驗(yàn)操作中存在的問題。葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法過氧化物酶比色法Folin-Wu法法鄰鄰-甲苯胺法甲苯胺法原理原理 葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使 Cu2+還原成還原成Cu+ ，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍(lán)色的鉬藍(lán)。通過，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍(lán)色的鉬藍(lán)。通過比色法測定藍(lán)色化合物，計(jì)算出血糖的含量。比色法測定藍(lán)色化合物，計(jì)算出血糖的含量。評(píng)價(jià)評(píng)價(jià) 穩(wěn)定、準(zhǔn)確、但對(duì)葡萄糖無特異性，受血中非

9、糖穩(wěn)定、準(zhǔn)確、但對(duì)葡萄糖無特異性，受血中非糖還還 原物質(zhì)原物質(zhì)的影響。的影響。空腹正常血糖參考值空腹正常血糖參考值 4.46.7mmol/L或或80-120mg/dL葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法過氧化物酶比色法Folin-Wu法法鄰鄰-甲苯胺法甲苯胺法原理原理 葡萄糖在冰醋酸中加熱脫水后，與鄰葡萄糖在冰醋酸中加熱脫水后，與鄰-甲苯胺縮合產(chǎn)甲苯胺縮合產(chǎn)生藍(lán)綠色的席弗生藍(lán)綠色的席弗(Schiff)堿，顏色的深淺與葡萄糖含量堿，顏色的深淺與葡萄糖含量成正比，可通過比色法測得血糖含量。成正比，可通過比色法測得血糖含量。評(píng)價(jià)評(píng)價(jià) 結(jié)果較可靠、但鄰結(jié)果較可靠、但鄰-甲苯胺須蒸餾后使用，有毒性

10、。甲苯胺須蒸餾后使用，有毒性?？崭拐Ｑ菂⒖贾悼崭拐Ｑ菂⒖贾?3.96.1mmol/L或或70-110mg/dL葡萄糖氧化酶法：葡萄糖氧化酶法：該法特異性高，反應(yīng)條件溫和，能該法特異性高，反應(yīng)條件溫和，能反映血中葡萄糖的真實(shí)含量，且已推廣出試劑盒，反映血中葡萄糖的真實(shí)含量，且已推廣出試劑盒，廣泛應(yīng)用與臨床。廣泛應(yīng)用與臨床。 Folin-Wu法：法：該法對(duì)葡萄糖無特異性，一切還原物質(zhì)該法對(duì)葡萄糖無特異性，一切還原物質(zhì)均可產(chǎn)生同樣的反應(yīng)。雖血液中葡萄糖為主要還原均可產(chǎn)生同樣的反應(yīng)。雖血液中葡萄糖為主要還原物質(zhì)，但仍存在其他非糖還原物質(zhì)，故該法其參考物質(zhì)，但仍存在其他非糖還原物質(zhì)，故該法其參考

11、值較其他方法略高。值較其他方法略高。鄰鄰-甲苯胺法：甲苯胺法：該法涉及強(qiáng)酸、加熱等反應(yīng)條件，不該法涉及強(qiáng)酸、加熱等反應(yīng)條件，不便于大規(guī)模檢測，且使用的試劑具有毒性，臨床和便于大規(guī)模檢測，且使用的試劑具有毒性，臨床和科研上已很少采用。科研上已很少采用。思考題思考題1、為何不同檢測方法所提供的空腹正常血糖、為何不同檢測方法所提供的空腹正常血糖參考值存在差異？參考值存在差異？ 葡萄糖氧化酶法：葡萄糖氧化酶法： 3.96.1mmol/L Folin-Wu法：法： 4.46.7mmol/L 鄰鄰-甲苯胺法：甲苯胺法： 3.96.1mmol/L2、腎上腺素使血糖升高的機(jī)理是什么？能夠、腎上腺素使血糖升高的

12、機(jī)理是什么？能夠升高血糖的激素有哪些？升高血糖的激素有哪些？ 9、 人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。22.5.422.5.4Wednesday, May 04, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。*5/4/2022 2:27:47 AM11、人總是珍惜為得到。22.5.4*May-224-May-2212、人亂于心，不寬余請(qǐng)。*Wednesday, May 04, 202213、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。22.5.422.5.4*May 4, 202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年5月4日星期三*22.5.415、一個(gè)人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2022年5

13、月*22.5.4*May 4, 202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。*5/4/202217、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。*22.5.4謝謝大家謝謝大家9、 人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。22.5.422.5.4Wednesday, May 04, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。*5/4/2022 2:27:47 AM11、人總是珍惜為得到。22.5.4*May-224-May-2212、人亂于心，不寬余請(qǐng)。*Wednesday, May 04, 202213、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。22.5.422.5.4*May 4, 202214、抱最大的希望，作

14、最大的努力。2022年5月4日星期三*22.5.415、一個(gè)人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2022年5月*22.5.4*May 4, 202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。*5/4/202217、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。*22.5.4謝謝大家謝謝大家2021/4/26309、 人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022-5-42022-5-4Wednesday, May 04, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022-5-42022-5-42022-5-45/4/2022 2:27:48 AM11、人總是珍惜為得到。2022-5-42022-5-42022-5-4May-224-May-2212、人亂于心，不寬余請(qǐng)。2022-5-42022-5-42022-5-4Wednesday, May 04, 202213、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。2022-5-42022-5-42022-5-42022-5-4