乳腺癌HER2FISH檢測(cè)判讀及報(bào)告

1、乳腺癌HER2FISH僉測(cè)-檢測(cè)意義、建議及標(biāo)本準(zhǔn)備HER2與孚L腺癌乳腺癌是女性惡性腫瘤中發(fā)病率最高的一種，正以每年3%4%的速度急劇上升，已成為女性的第一殺手。臨床上大約20-35%的浸潤(rùn)性乳腺癌存在HER2基因的擴(kuò)增及蛋白的高表達(dá)。HER2基因（又名HER2/neu,c-erbB-2）位于17q12,是表皮生長(zhǎng)因子受體（HER）家族成員之一，HER家族在細(xì)胞生理過(guò)程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。HER2編碼相對(duì)分子量185KD的跨膜受體樣蛋白，具有酪氨酸激酶活性。HER2是重要的乳腺癌預(yù)后判斷因子，HER2陽(yáng)性（過(guò)表達(dá)或擴(kuò)增）的乳腺癌，其臨床特點(diǎn)和生物學(xué)行為有特殊表現(xiàn)，治療模式也與其他類型的乳腺

2、癌有很大的區(qū)別。HER2檢測(cè)方法有免疫組化（IHC）和熒光原位雜交（FISH）等。2014年NCCN乳腺癌臨床實(shí)踐指南和乳腺癌HER2檢測(cè)指南2014版均強(qiáng)調(diào)：FISH是檢測(cè)HER2基因狀態(tài)的金標(biāo)準(zhǔn)。一.檢測(cè)意義1 .判斷預(yù)后：HER2陽(yáng)性的乳腺癌浸潤(rùn)性強(qiáng)，無(wú)病生存期短，預(yù)后差。2 .指導(dǎo)治療：HER2基因擴(kuò)增的乳腺癌患者對(duì)內(nèi)分泌治療藥物（如他莫昔芬）產(chǎn)生耐藥。HER2基因擴(kuò)增的乳腺癌患者對(duì)CMF方案不敏感，宜采用大劑量慈環(huán)類藥物和紫杉醇類藥物方案；HER2基因擴(kuò)增的乳腺癌患者明顯受益于Herceptin（赫賽汀，2001年FDA批準(zhǔn)上市）等靶向藥物治療。二.檢測(cè)建議IHC和FISH檢測(cè)HER

3、2的狀態(tài)一致性很高，但也存在著差異，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)如下表1和表2示，對(duì)于IHC2+樣本必須要用FISH進(jìn)一步確認(rèn)結(jié)果；0、1+或3+,根據(jù)條件，可再做FISH驗(yàn)證。Fgwr*1PT&temE,即andGeneAmplilk0llnIHC-FISH陽(yáng)性率（%）陰性陽(yáng)性0892565.91+51421129.12+32741555.93+7466089.9表1:(2004)HER2AmplificationRatiosbyFluorescenceInSituHybridizationandCorrelation表2:2007年衛(wèi)生部科教司牽頭組織全國(guó)73家三級(jí)以上醫(yī)院歷時(shí)2年完成熒光原位雜交技術(shù)（FIS

4、H）withImmunohistochemistryinaCohortof6556Breast用于乳腺癌患者Her-2檢測(cè)的臨床研究”課題，檢測(cè)標(biāo)CancerTissues.ClinicalBreastCancer本達(dá)3368例因此，2014年NCCN乳腺癌臨床實(shí)踐指南和乳腺癌HER2檢測(cè)指南（2014版）均建議先進(jìn)行HER2蛋白的IHC檢測(cè)，IHC2+樣本進(jìn)行ISH（FISH、DISH或CISH）檢測(cè)。，HER2HHER2toning0fvaficfabaidMCMutreltaxiMEftitiISHifum-orcmdtrmwtntfNCeftSH(Ifntwipeclmtii-flva

5、lflbta).HGR2mungbywIKlVMaingfaiprobwffiHfotngvHERJcqpy2nHtSOgM國(guó)ISHHMuttnflubutwilldiMkprabtZe*mb20或眾多信號(hào)連接成簇時(shí)可不計(jì)數(shù)，視為基因擴(kuò)增；8 .若為臨界值，則需要再計(jì)數(shù)20個(gè)細(xì)胞核中的信號(hào)或由另外一個(gè)觀察者重新計(jì)數(shù)，如仍為臨界值，則應(yīng)在FISH檢測(cè)報(bào)告中注明，或換其它方法或其它蠟塊重新檢測(cè)；9 .若HER2基因擴(kuò)增在不同癌細(xì)胞中存在異質(zhì)性時(shí)，應(yīng)在另一癌區(qū)域再計(jì)算2030個(gè)癌細(xì)胞核中的紅、綠信號(hào)值，報(bào)告其最大值，并加以注釋；10 .判讀時(shí)可以將乳腺組織中的正常細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、淋

6、巴細(xì)胞、正常乳腺上皮細(xì)胞）的HER2信號(hào)和CSP17信號(hào)作為內(nèi)對(duì)照。1拙膽核靛分量曼，他自1年在里區(qū)域內(nèi).數(shù)：可卜珊膽枝內(nèi)為兩十根色.兩個(gè)封色(n法也內(nèi)；植的n色信號(hào)和兩個(gè)溫色侍號(hào),一個(gè)佛色信號(hào)擴(kuò)不計(jì)致”間核中看，f比日曲q兩仃的摑弛州口域巡行直通.商粵倍號(hào)座區(qū)域內(nèi).(1%)計(jì)數(shù)為：四中橙色信號(hào)和M個(gè)導(dǎo)也格號(hào)，個(gè)阻色信號(hào)幢費(fèi)開(kāi).二-）計(jì)放為:個(gè)帽色仁丐和兩個(gè)母色匕修”個(gè)蹴型恪號(hào)被裂升.睢的燃號(hào)也被裂開(kāi).H曲為：曲小粒色信號(hào)和小愫色信）計(jì)改為:三個(gè)和色仁號(hào)和一個(gè)釉色心號(hào)”或）計(jì)題為：叫個(gè)IR色行號(hào)和睛個(gè)盤色信號(hào)口一綠色牌斜，CEP17=相色探鼾，LSIHEH-?neii一些常見(jiàn)信號(hào)類型及計(jì)數(shù)方法

7、摘自乳腺癌HER-2基因檢測(cè)試劑盒（FISH法）說(shuō)明書一AbbottMoleularInc.四.結(jié)果判讀在清晰的腫瘤區(qū)域，按以上計(jì)數(shù)要求在至少20個(gè)核內(nèi)計(jì)數(shù)GSPHER2（紅色）和CSP17（綠色）信號(hào)，分別記錄GSPHER2和CSP17的信號(hào)總數(shù)，再計(jì)算平均每個(gè)細(xì)胞HER2拷貝數(shù)、平均每個(gè)細(xì)胞CSP17拷貝數(shù)以及GSPHER2和CSP17比值。A.若HER2/CSP172.0,且平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞4.0,HER2陰性；B.若HER2/CSP172.0,且平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞6.0,但A4.0寸,HER2結(jié)果不確定；C.若HER2/CSP17A2.0或HER2/CSP176.0HER

8、2陽(yáng)性。乳腺癌HER2檢測(cè)指南2014版使用經(jīng)過(guò)酷亞的班搜鐘1EH方法進(jìn)行HERZ檢律檀潤(rùn)瘙）I一一對(duì)照出現(xiàn)假期結(jié)果I.一-平均HERE拷貝數(shù)，幅腮4.0ISH-桂乳腺癌HER2檢測(cè)指南2014版注：a：對(duì)于HER2/CSP17比值）2.0但平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞4.0的病例是否應(yīng)該視為FISH陽(yáng)性目前尚存爭(zhēng)議，建議對(duì)這部分病例在報(bào)告中加以備注，提示目前的爭(zhēng)議，建議臨床醫(yī)師參考免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果并與患者進(jìn)行必要的溝通；b:見(jiàn)于均質(zhì)、連續(xù)的浸潤(rùn)細(xì)胞，且占浸潤(rùn)癌的10%以上五.HER2FISH判讀標(biāo)準(zhǔn)的變化乳腺癌HER2檢測(cè)指南2009版判讀標(biāo)準(zhǔn)：A.若HER2/CSP171.8,HER2陰性

9、；B.若HER2/CSP17A1.8且2.2HER2陽(yáng)性。新舊判讀標(biāo)準(zhǔn)的比較：2014版新標(biāo)準(zhǔn)的截?cái)嘀禐?.0,2009版老標(biāo)準(zhǔn)的截?cái)嘀禐?.8和2.2;2014版新標(biāo)準(zhǔn)不只是HER2/CSP17的比值，需結(jié)合HER2基因的拷貝數(shù)進(jìn)行判讀；2009版則僅根據(jù)HER2/CSP17的比值進(jìn)行判讀，不考慮HER2基因拷貝數(shù)。新舊判讀標(biāo)準(zhǔn)銜接中可能出現(xiàn)的問(wèn)題：2014版新標(biāo)準(zhǔn)出現(xiàn)HER2檢測(cè)結(jié)果不確定的情況會(huì)比2009版標(biāo)準(zhǔn)更少；2014版新標(biāo)準(zhǔn)判讀陰陽(yáng)性結(jié)合了HER2基因的拷貝數(shù)，有些2009版標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果為陰性的標(biāo)本，如果HER2基因拷貝數(shù)6.02014版新標(biāo)準(zhǔn)則判為陽(yáng)性。乳腺癌HER2檢測(cè)指南2

10、009版與乳腺癌HER2檢測(cè)指南2014版乳腺癌HER2FISH僉測(cè)-報(bào)告及結(jié)果解釋一.報(bào)告要求乳腺癌HER2檢測(cè)指南2014版要求檢測(cè)報(bào)告包括如下內(nèi)容：患者信息（包括姓名、性別、年齡、門診/住院號(hào)）、送檢醫(yī)師姓名、送檢日期、標(biāo)本信息（包括病理號(hào)和蠟塊號(hào)卜標(biāo)本部位和類型、探針信息、檢測(cè)方法、是否使用圖像分析、對(duì)照設(shè)置情況、樣本量是否適合評(píng)估、判讀結(jié)果（包括評(píng)估的細(xì)胞數(shù)量、平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞、平均CSP17拷貝數(shù)/細(xì)胞、平均HER2拷貝數(shù)/平土勻CSP17拷貝數(shù)白比值）、檢測(cè)結(jié)論（如陽(yáng)性、不確定、陰性、無(wú)法判讀）。這里強(qiáng)調(diào)兩個(gè)概念：17號(hào)染色體計(jì)數(shù)和HER2異質(zhì)性。1. 17號(hào)染色體數(shù)目：

11、FISH雙探針檢測(cè)系統(tǒng)中加入CSP17探針的目的是為了在檢測(cè)HER2基因的同時(shí)檢測(cè)17號(hào)染色體數(shù)目，從而區(qū)分17號(hào)染色體的非整倍體與HER2基因擴(kuò)增。近年來(lái)的研究顯示17號(hào)染色體多倍體與CSP17多信號(hào)點(diǎn)（著絲粒區(qū)多點(diǎn)）是不同的概念。17號(hào)染色體多倍體較罕見(jiàn)，而部分乳腺癌中17號(hào)染色體上存在HER2基因和著絲粒區(qū)的共同擴(kuò)增。越來(lái)越多的學(xué)者認(rèn)為，與GSPHER2/CSP17比值相比，HER2拷貝數(shù)對(duì)于HER2基因擴(kuò)增的判斷更為重要。因此在HER2FISH檢測(cè)結(jié)果中除報(bào)告GSPHER2/CSP17比值外，還應(yīng)分別報(bào)告HER2拷貝數(shù)和CSP17的數(shù)值。2. HER2基因的異質(zhì)性：浸潤(rùn)性乳腺癌中HER

12、2表達(dá)或擴(kuò)增可存在異質(zhì)性。雖然HER2基因異質(zhì)性的臨床意義目前仍不明確，但它可導(dǎo)致IHC與ISH檢測(cè)、原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶、穿刺標(biāo)本與手術(shù)切除標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果不一致。在ISH計(jì)數(shù)之前，應(yīng)觀察整張切片或使用IHC確定可能存在HER2擴(kuò)增的區(qū)域。需要強(qiáng)調(diào)的是，即使存在異質(zhì)性，但只要擴(kuò)增細(xì)胞連續(xù)、均質(zhì)，且占浸潤(rùn)癌10%以上，就應(yīng)明確報(bào)告為ISH陽(yáng)性。在報(bào)告中可補(bǔ)充報(bào)告不同細(xì)胞群（10%）的計(jì)數(shù)彳1（包括計(jì)數(shù)的細(xì)胞總數(shù)、HER2拷貝數(shù)、CSP1嚶值、GSPHER2/CSP17比值），并報(bào)告擴(kuò)增細(xì)胞群占所有浸潤(rùn)癌細(xì)胞的比例。2 .常見(jiàn)結(jié)果及解釋FISH陰性（HER況擴(kuò)增），17號(hào)二倍體。GSPHER2心SP17

13、（紅色/綠色）2.0。FISH臨界，17號(hào)多倍體（HER2基因伴隨多拷貝）。GSPHER2心SP17（紅色/綠色）2.0，但平均每個(gè)細(xì)胞HER2貝數(shù)為4.9個(gè)，介于4.0-6.0之間。FISH陽(yáng)性，17號(hào)多倍體。GSPHER2心SP17（紅色/綠色）2.0，但平均每個(gè)細(xì)胞HER2貝數(shù)為6.8個(gè)，大于6.0。FISH陽(yáng)性，17號(hào)染色體二倍體。GSPHER2心SP17（紅色/綠色）FISH陽(yáng)性，17號(hào)染色體多倍體。GSPHER2/CSP17（紅色/綠色）FISH陽(yáng)性，17號(hào)染色體單倍體。GSPHER2/CSP17（紅色/綠色）2.0o2.0。2.0,平均每個(gè)細(xì)胞HER2貝數(shù)為2.0個(gè)，平均每個(gè)細(xì)胞

14、CSP1褚貝數(shù)為1.0個(gè)。注：對(duì)于HER2/CSP17比值2.0但平均HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞4.0的病例是否應(yīng)該視為FISH陽(yáng)性目前尚存爭(zhēng)議，建議對(duì)這部分病例在報(bào)告中加以備注，提示目前的爭(zhēng)議，建議臨床醫(yī)師參考免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果并與患者進(jìn)行必要的溝通3 .報(bào)告模板參考1.參考模板一fBH檢扁型果：1.免我金所同婦J總導(dǎo)反便口照顯1HE覆alSFF借況：二轉(zhuǎn)狀升布一點(diǎn)狀分布：刑嗝J.過(guò)JhL出出指工釣：上.HLR-2LSF17比值;話加HHcir曾胃;七M(jìn)HFRIjr聊口可語(yǔ)陰性HER?鑼督F耳H結(jié)髀IfU2.參考模板二玷果判迎：用于千古的臚盟at慢至個(gè)倍導(dǎo)呈點(diǎn)狀升而；HER,信甩70個(gè)CSJ17號(hào)操祁個(gè)即扁值-092信號(hào)早露腓飾和后第魚W后性艙體狀況：口里體一就多信蘆結(jié)果：I.HER-：基因元獷案.亡即“捷斯二型：l.OSd工17年祟隹體為二信，九HER-2判讀計(jì)數(shù)