微生物應(yīng)用說(shuō)明-孫自鏞

1、CNAS-CL42:醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明孫自鏞華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院CNAS/CL02醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則-20071 范圍2 規(guī)范性引用文件3 術(shù)語(yǔ)和定義4 管理要求5 技術(shù)要求附錄A 與GB/T19001-2000和15481-2000的對(duì)照附錄B 實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)保護(hù)的建議附錄C 實(shí)驗(yàn)室醫(yī)學(xué)倫理學(xué)CNAS/CL02 認(rèn)可準(zhǔn)則內(nèi)容4. 管理要求4.1 組織和管理4.2 質(zhì)量管理體系質(zhì)量手冊(cè)、程序文件、SOP、記錄4.3 文件控制4.4 合同的評(píng)審4.5 委托實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)4.

2、6 外部服務(wù)和供應(yīng)保證質(zhì)量供應(yīng)、可追溯4.7 咨詢(xún)服務(wù)CNAS/CL02 認(rèn)可準(zhǔn)則內(nèi)容4.8 投訴的解決4.9 不符合項(xiàng)的識(shí)別和控制4.10 糾正措施4.11 預(yù)防措施4.12 持續(xù)改進(jìn)4.13 質(zhì)量和技術(shù)記錄便于追溯、持續(xù)改進(jìn)4.14 內(nèi)部審核4.15 管理評(píng)審CNAS/CL02 認(rèn)可準(zhǔn)則內(nèi)容5. 技術(shù)要求5.1 人員5.2 設(shè)施和環(huán)境條件5.3 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備5.4 檢驗(yàn)前程序5.5 檢驗(yàn)程序5.6 檢驗(yàn)程序的質(zhì)量保證 5.7 檢驗(yàn)后程序5.8 結(jié)果報(bào)告CNAS-CL應(yīng)用說(shuō)明nCNAS-CL醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床血液學(xué)臨床血液學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明nCNAS-CL42醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和

3、能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明nCNAS- CL 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在體液學(xué)體液學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明nCNAS- CL 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床生物化學(xué)臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明nCNAS- CL 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床免疫學(xué)臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明nCNAS- CL 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在輸血醫(yī)學(xué)輸血醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明nCNAS- CL 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在病理學(xué)病理學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明nCNAS- CL 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在基因擴(kuò)增基因擴(kuò)增檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用指南nCNAS- CL 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力

4、認(rèn)可準(zhǔn)則在實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)的應(yīng)用說(shuō)明關(guān)于CNAS-CL42 n特點(diǎn) 質(zhì)量保證基本要求，降低CNAS認(rèn)可風(fēng)險(xiǎn) 注重過(guò)程控制結(jié)果的不可評(píng)估性 加強(qiáng)實(shí)用性、可操作性 技術(shù)要求盡可能明確 附錄A-申請(qǐng)認(rèn)可項(xiàng)目要求n參考資料 CAP-MICROBIOLOGY CHECKLIST 國(guó)內(nèi)外行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、指南范圍范圍n規(guī)定了CNAS對(duì)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的認(rèn)可要求n微生物專(zhuān)業(yè)中涉及到的病毒血清學(xué)檢驗(yàn)、基因擴(kuò)增檢驗(yàn)、寄生蟲(chóng)檢查等應(yīng)符合相關(guān)專(zhuān)業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用說(shuō)明的要求4 管理要求管理要求4.1 4.1 組織和管理組織和管理4.1.1實(shí)驗(yàn)室為獨(dú)立法人單位的，應(yīng)有醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證；為非獨(dú)立法人單位的，所屬醫(yī)

5、療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)證書(shū)的診療項(xiàng)目中應(yīng)有醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，自獲準(zhǔn)執(zhí)業(yè)之日起，開(kāi)展醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作至少2年。4.1.5 h) 應(yīng)至少有1名具有副高以上專(zhuān)業(yè)技術(shù)職稱(chēng)，從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作至少5年以上的人員負(fù)責(zé)技術(shù)管理工作。4.2 4.2 質(zhì)量管理體系質(zhì)量管理體系4.3 4.3 文件控制文件控制4.4 4.4 合同的評(píng)審合同的評(píng)審4.5 4.5 委托實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)委托實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)4 管理要求管理要求4.6 外部服務(wù)和供應(yīng)外部服務(wù)和供應(yīng)4.6.2 試劑質(zhì)量驗(yàn)證應(yīng)符合如下要求：試劑質(zhì)量驗(yàn)證應(yīng)符合如下要求：n新批號(hào)及每一貨次的試劑使用前，應(yīng)通過(guò)直接分析參考物質(zhì)、新舊批號(hào)平行實(shí)驗(yàn)或常規(guī)質(zhì)控等方法進(jìn)行驗(yàn)證，并記錄；n新批號(hào)及每一貨次的

6、試劑、紙片，如吲哚試劑，桿菌肽，奧普托辛，X、V、XV 因子紙片等應(yīng)使用陰陽(yáng)性質(zhì)控進(jìn)行驗(yàn)證；n新批號(hào)及每一貨次的藥敏試驗(yàn)紙片使用前使用前應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行驗(yàn)證；n新批號(hào)及每一貨次的染色劑（革蘭染色,特殊染色，熒光染色），應(yīng)用已知陽(yáng)性和陰性（適用時(shí)）的質(zhì)控菌株質(zhì)控菌株進(jìn)行驗(yàn)證；n直接抗原檢測(cè)試劑（無(wú)論是否含內(nèi)質(zhì)控），新批號(hào)及每一貨次應(yīng)用陰性和陽(yáng)性外質(zhì)控外質(zhì)控進(jìn)行驗(yàn)證 ；n培養(yǎng)基外觀宜良好（平滑、水分適宜、無(wú)污染、適當(dāng)?shù)念伾秃穸?，試管培養(yǎng)基濕度適宜），新批號(hào)及每一貨次的商品或自配培養(yǎng)基應(yīng)檢測(cè)相應(yīng)的性能性能，包括無(wú)菌試驗(yàn)、生長(zhǎng)試驗(yàn)或與舊批號(hào)平行試驗(yàn)、生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)（適用時(shí)）、生化反應(yīng)（適用

7、時(shí)）等，應(yīng)以驗(yàn)證。n一次性定量接種環(huán)每批次應(yīng)抽樣驗(yàn)證。MH厚度表面光滑/濕潤(rùn)血平皿顏色厚度培養(yǎng)基外觀質(zhì)量CO2培養(yǎng)環(huán)境4 管理要求管理要求4.7 咨詢(xún)服務(wù)咨詢(xún)服務(wù)4.8 投訴的處理投訴的處理4.9 不符合的識(shí)別和控制不符合的識(shí)別和控制4.10 糾正措施糾正措施4.11 預(yù)防措施預(yù)防措施4.12 持續(xù)改進(jìn)持續(xù)改進(jìn)4.13 質(zhì)量和技術(shù)記錄質(zhì)量和技術(shù)記錄4.13.1 各種培養(yǎng)基（試劑）的制備過(guò)程需有記錄。內(nèi)容至少應(yīng)包括：培養(yǎng)基名稱(chēng)和類(lèi)型；配制日期和配制人員；培養(yǎng)基/溶液的類(lèi)型、體積；分裝的體積；成分、每個(gè)成分物質(zhì)的含量、制造商、批號(hào)；pH（最初和最終）值；無(wú)菌措施，包括實(shí)施的方式、時(shí)間和溫度。 4.

8、14 內(nèi)部審核內(nèi)部審核4.15 管理評(píng)審管理評(píng)審5 技術(shù)要求技術(shù)要求5.1 人員人員5.1.1 有顏色視覺(jué)障礙的人員不應(yīng)從事涉及辨色的微生物學(xué)檢驗(yàn)。5.1.4 實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)人至少應(yīng)具有以下資格資格：中級(jí)技術(shù)職稱(chēng)，醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)背景，或相關(guān)專(zhuān)業(yè)背景經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)培訓(xùn)，3年臨床微生物工作經(jīng)驗(yàn)。 授權(quán)簽字人授權(quán)簽字人應(yīng)至少具有中級(jí)以上專(zhuān)業(yè)技術(shù)職稱(chēng)，從事申請(qǐng)認(rèn)可授權(quán)簽字領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)工作至少3年。 5.1.6 應(yīng)每年對(duì)各級(jí)工作人員制定培訓(xùn)計(jì)劃培訓(xùn)計(jì)劃并進(jìn)行微生物專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)、質(zhì)量保證/質(zhì)量管理培訓(xùn)、客戶(hù)服務(wù)培訓(xùn)、安全培訓(xùn)、繼續(xù)教育培訓(xùn)。5.1.11應(yīng)制定員工能力評(píng)審能力評(píng)審的內(nèi)容和方法，每年評(píng)審員工員

9、工的工作能力；對(duì)新進(jìn)員工新進(jìn)員工在最初2個(gè)月內(nèi)應(yīng)至少進(jìn)行2次能力評(píng)審（間隔為30天），保存評(píng)審記錄。當(dāng)職責(zé)變更或離崗6個(gè)月以上，或政策、程序、技術(shù)有變更，應(yīng)再培訓(xùn)、再評(píng)審。沒(méi)有通過(guò)評(píng)審人員需經(jīng)再培訓(xùn)和再評(píng)審，合格后才可繼續(xù)上崗并記錄。5.1.13應(yīng)提供工作人員對(duì)患者隱私及結(jié)果保密的聲明及簽字 人員人員-能力評(píng)估方法能力評(píng)估方法CLIA88n直接觀察直接觀察常規(guī)試驗(yàn)操作過(guò)程n檢查實(shí)驗(yàn)記錄記錄及結(jié)果報(bào)告n檢查實(shí)驗(yàn)過(guò)程結(jié)果、QC記錄、PT結(jié)果、預(yù)防性保養(yǎng)記錄n直接觀察儀器保養(yǎng)和功能檢測(cè)操作過(guò)程n通過(guò)檢測(cè)檢測(cè)重復(fù)標(biāo)本、盲樣或室間PT標(biāo)本評(píng)估實(shí)驗(yàn)?zāi)芰評(píng)估解決問(wèn)題的能力評(píng)估解決問(wèn)題的能力SE Sharp

10、，BL Elder，CMR 2004，17（3）：681人員人員-能力水平能力水平少有或沒(méi)有經(jīng)驗(yàn)有一些經(jīng)驗(yàn)（還需要實(shí)踐或幫助）勝任，能獨(dú)立操作勝任，能獨(dú)立操作，并能對(duì)其他人進(jìn)行能力評(píng)估SE Sharp，BL Elder，CMR 2004，17（3）：681人員人員-能力評(píng)估內(nèi)容能力評(píng)估內(nèi)容n平皿及肉湯革蘭染色n酶試驗(yàn)n化學(xué)試驗(yàn)n葡萄球菌乳膠凝集試驗(yàn)及鏈球菌鑒定n動(dòng)力n鑒定過(guò)程n敏感性試驗(yàn)過(guò)程n計(jì)算機(jī)錄入及結(jié)果報(bào)告n急診報(bào)告、電話(huà)、記錄n所有實(shí)驗(yàn)記錄n特殊年齡-16歲以下不報(bào)告FQn能按規(guī)程完成鑒定、報(bào)告、藥敏試驗(yàn)n讀平板n解決問(wèn)題能力SE Sharp，BL Elder，CMR 2004，17（

11、3）：6815 技術(shù)要求技術(shù)要求5.2 設(shè)施和環(huán)境條件設(shè)施和環(huán)境條件5.2.1 足夠的辦公、文字處理、培養(yǎng)基制備、實(shí)驗(yàn)工作空間。宜有適當(dāng)?shù)乃亍⑴潘艿?、電源插座、通風(fēng)設(shè)施，通訊設(shè)備5.2.2應(yīng)定期定期根據(jù)工作流程及性質(zhì)實(shí)施安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，根據(jù)生物安全理論和技術(shù)的新進(jìn)展制定、修訂相應(yīng)的生物安全操作和防護(hù)規(guī)程并進(jìn)行培訓(xùn)，以減小職業(yè)暴露的危險(xiǎn)。當(dāng)工作流程及性質(zhì)發(fā)生變動(dòng)時(shí)，應(yīng)及時(shí)實(shí)施再評(píng)估。至少應(yīng)規(guī)定至少應(yīng)規(guī)定如下安全要求：不同控制區(qū)域的防護(hù)措施及合適的警告；已知或有潛在經(jīng)空氣、氣溶膠傳播危險(xiǎn)的標(biāo)本或病原體在生物安全柜內(nèi)操作；標(biāo)本安全運(yùn)送及處理，如工作人員接種疫苗，戴手套和進(jìn)行呼吸道防護(hù)（適用

12、時(shí)），確保容器密封性，嗅平板時(shí)的潛在危害及其防護(hù)等；滲漏標(biāo)本的處理措施；工作環(huán)境及設(shè)備的消毒措施 5.2.4 照明宜充足，避免陽(yáng)光直射及反射，如果可能，可在不同區(qū)域設(shè)置照明控制，以滿(mǎn)足不同實(shí)驗(yàn)的需要。應(yīng)有可靠的電力供應(yīng)和應(yīng)急照明5.2.10 應(yīng)制定生物安全事故和危險(xiǎn)品、危險(xiǎn)設(shè)施等意外事故的預(yù)防措施和應(yīng)急預(yù)案，并對(duì)全體人員進(jìn)行培訓(xùn) 設(shè)施和環(huán)境應(yīng)與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、實(shí)驗(yàn)室服務(wù)相適應(yīng)生物因子的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估n識(shí)別識(shí)別已知感染、潛在感染因子或物質(zhì)的危害特性n識(shí)別識(shí)別可能導(dǎo)致人員暴露于以上感染的活動(dòng)n識(shí)別識(shí)別暴露后導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染的可能性和可能發(fā)生的感染風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估識(shí)別的信息用于制定指南，以指導(dǎo)工作人員選擇適當(dāng)?shù)纳锇?/p>

13、全水平和微生物活動(dòng)、安全設(shè)備、安全防護(hù)，避免LAIs的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估應(yīng)根據(jù)工作內(nèi)容、科學(xué)發(fā)展及時(shí)修訂。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估步驟n第一步：識(shí)別風(fēng)險(xiǎn)因子并進(jìn)行初步風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估n第二步：識(shí)別實(shí)驗(yàn)操作風(fēng)險(xiǎn)（主要包括：風(fēng)險(xiǎn)因子濃度、懸液量、產(chǎn)生氣溶膠和飛沫的儀器及其操作、銳器的使用）n第三步：確定生物安全水平，根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估選擇適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)n第四步：評(píng)估工作人員的安全操作技能和安全設(shè)備的狀態(tài)n第五步：定期進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估評(píng)審相關(guān)文件、資料n病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例，中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院令（第424號(hào)），2004.11.12.發(fā)布并實(shí)施n醫(yī)療廢物專(zhuān)用包裝物、容器標(biāo)準(zhǔn)和警示標(biāo)識(shí)規(guī)定 ，環(huán)發(fā)2003188號(hào)n醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢

14、物管理辦法，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部令第36號(hào)，2003.10.15.起實(shí)施n2006年1月11日衛(wèi)生部發(fā)布“人間傳染的病原微生物名錄”nGB19489：實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求nWHO：實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例第二章第七條根據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對(duì)個(gè)體或者群體的危害程度，將病原微生物分為四類(lèi)： n第一類(lèi)：引起人類(lèi)或者動(dòng)物非常嚴(yán)重疾??；我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅 n第二類(lèi)：引起人類(lèi)或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)物與動(dòng)物間傳播n第三類(lèi)：引起人類(lèi)或者動(dòng)物疾病，一般情況下對(duì)人、動(dòng)物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，LAI后很少引起嚴(yán)重疾病，

15、具備有效治療和預(yù)防措施n第四類(lèi)：通常情況下不引起人類(lèi)或者動(dòng)物疾病第一類(lèi)、第二類(lèi)病原微生物統(tǒng)稱(chēng)為高致病性病原微生物第一類(lèi)、第二類(lèi)病原微生物統(tǒng)稱(chēng)為高致病性病原微生物 WHO與NIH：病原微生物分類(lèi)1WHO與NIH：病原微生物分類(lèi)2二級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室5 技術(shù)要求技術(shù)要求5.3 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)備-15.3.1 設(shè)備配置應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室服務(wù)相適應(yīng)，生物安全柜生物安全柜的類(lèi)型和安裝應(yīng)滿(mǎn)足工作要求；孵育箱孵育箱的數(shù)量和種類(lèi)應(yīng)滿(mǎn)足診斷需要（如特殊溫度范圍和氣體要求）；應(yīng)貯存與診斷相配套的質(zhì)質(zhì)控物控物，以便在染色、試劑、試驗(yàn)、鑒定系統(tǒng)和敏感性試驗(yàn)中使用；無(wú)菌體液的顯微鏡檢查應(yīng)配備細(xì)胞離細(xì)胞離心機(jī)心機(jī)。5.3

16、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)備-25.3.2 設(shè)備校準(zhǔn)、維護(hù)及性能等應(yīng)符合如下要求：n自動(dòng)化鑒定儀、血培養(yǎng)儀的校準(zhǔn)應(yīng)滿(mǎn)足制造商建議；n每每6個(gè)月檢定或校準(zhǔn)個(gè)月檢定或校準(zhǔn)的設(shè)備至少應(yīng)包括濁度儀；n每每12個(gè)月進(jìn)行檢定或校準(zhǔn)個(gè)月進(jìn)行檢定或校準(zhǔn)的設(shè)備至少應(yīng)包括：生物安全柜（高效過(guò)濾器、氣流、負(fù)壓等參數(shù)）；CO2濃度檢測(cè)儀；細(xì)胞離心機(jī)；壓力滅菌器；卡尺；培養(yǎng)箱；溫度計(jì)；移液器、微量滴定管或自動(dòng)分配器。n應(yīng)保存儀器功能監(jiān)測(cè)記錄應(yīng)保存儀器功能監(jiān)測(cè)記錄的設(shè)備至少應(yīng)包括：溫度依賴(lài)設(shè)施（冰箱、孵育箱、水浴箱、加熱塊等每日記錄溫度）；CO2培養(yǎng)箱（每日記錄CO2濃度）；超凈工作臺(tái)（定期做無(wú)菌試驗(yàn)）；壓力滅菌器（至少每個(gè)滅菌

17、包外貼化學(xué)指示膠帶、內(nèi)置化學(xué)指示卡；定期進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)）；n應(yīng)制定預(yù)防性維護(hù)計(jì)劃并記錄應(yīng)制定預(yù)防性維護(hù)計(jì)劃并記錄的設(shè)備至少應(yīng)包括：生物安全柜；CO2培養(yǎng)箱；自動(dòng)化鑒定儀；血培養(yǎng)儀；壓力滅菌器；超凈工作臺(tái)；顯微鏡；離心機(jī)。5.3 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)備-35.3.4所有試劑應(yīng)標(biāo)注或能追溯應(yīng)標(biāo)注或能追溯的信息包括：名稱(chēng)、濃度或滴度，存放條件，失效期。若試劑啟封，改變了有效期和儲(chǔ)存條件，應(yīng)記錄新的有效期。試劑的儲(chǔ)存條件應(yīng)遵循生產(chǎn)商的建議，并在標(biāo)明的有效期內(nèi)使用。 培養(yǎng)基標(biāo)簽培養(yǎng)基標(biāo)簽應(yīng)包含生產(chǎn)日期（批號(hào)）、保質(zhì)期（或失效期），適用時(shí)包括配方、質(zhì)量控制、貯存條件等信息。 藥敏用標(biāo)準(zhǔn)菌株藥敏用標(biāo)準(zhǔn)菌株種類(lèi)和

18、數(shù)量應(yīng)滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)室工作要求，并保存其來(lái)源、傳代等記錄，。5.3.7如果設(shè)備故障影響了方法學(xué)性能，在設(shè)備修復(fù)、校準(zhǔn)后，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)設(shè)備性能進(jìn)行驗(yàn)證，例如檢測(cè)質(zhì)控菌株或已知結(jié)果的標(biāo)本5 技術(shù)要求技術(shù)要求5.4 檢驗(yàn)前程序檢驗(yàn)前程序5.4.1 檢驗(yàn)申請(qǐng)單應(yīng)包括標(biāo)本來(lái)源和臨床診斷，必要時(shí)說(shuō)明感染類(lèi)型和/或目標(biāo)微生物，宜提供抗菌藥物使用信息。5.4.3 除通用要求外，微生物標(biāo)本的采集及運(yùn)送指南，還應(yīng)包括以下內(nèi)容：n不同部位標(biāo)本的采集方法。如：明確說(shuō)明并執(zhí)行血培養(yǎng)血培養(yǎng)標(biāo)本采集的消毒技術(shù)、合適的標(biāo)本量。診斷成人不明原因發(fā)熱、血流細(xì)菌感染時(shí)宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厭氧各一瓶）；n合格的標(biāo)本類(lèi)型、送

19、檢次數(shù)、標(biāo)本量。如：痰標(biāo)本直接顯微鏡檢查找結(jié)核結(jié)核桿菌或結(jié)核桿菌培養(yǎng)，應(yīng)送檢三份痰標(biāo)本。最好至少連續(xù)3日，采集每日清晨第一口痰。 n明確規(guī)定需要盡快運(yùn)送的標(biāo)本。n合適的運(yùn)送培養(yǎng)基；n延遲運(yùn)送時(shí)，標(biāo)本的保存方法；n安全運(yùn)送標(biāo)本的方法（如：密封容器、無(wú)標(biāo)本外漏等）；n標(biāo)本標(biāo)識(shí)。5.4.8 應(yīng)應(yīng)制定標(biāo)本接收標(biāo)準(zhǔn)，如無(wú)肉眼可見(jiàn)的滲漏、合適的標(biāo)本類(lèi)型/量、正確的保存、預(yù)防拭子干燥、適當(dāng)?shù)倪\(yùn)送培養(yǎng)基等。宜宜評(píng)估標(biāo)本的合格性并反饋。不合格的標(biāo)本（如：痰標(biāo)本等）宜宜盡快通知醫(yī)生、護(hù)士或患者（門(mén)診），以便重新采集標(biāo)本采集與運(yùn)送皮膚消毒n皮膚消毒，防止污染 含碘制劑需要足夠消毒時(shí)間（碘酊、洗必太30s，碘伏1.5

20、2m）、次氯化物、葡萄糖洗必太優(yōu)于聚維酮碘n標(biāo)本采集：無(wú)菌操作靜脈采集盡可能不經(jīng)留置導(dǎo)管采集，避免污染，否則別處再采；輕顛倒混勻防凝固；污染率應(yīng)小于3%n標(biāo)本運(yùn)送：立即；接種后瓶（溫度、時(shí)間）？血培養(yǎng)標(biāo)本采集時(shí)間、血量血培養(yǎng)標(biāo)本采集時(shí)間、血量n采集時(shí)間-使用抗菌藥物前；盡可能在寒戰(zhàn)、高熱前或寒戰(zhàn)、高熱時(shí)立即采集。 細(xì)菌進(jìn)入血流約1小時(shí)出現(xiàn)寒戰(zhàn)、高熱 發(fā)熱被抑制后，隨時(shí)間延遲，檢出率下降n采血量-最重要 成人：每次20-30ml，2-3套 n常規(guī)血培養(yǎng)包括需氧/厭氧瓶n血量不足-先需氧瓶，剩余血接種厭氧瓶推薦運(yùn)送培養(yǎng)基 多用途運(yùn)送系統(tǒng)需氧+厭氧 低氧化環(huán)境不會(huì)傷害標(biāo)本 中微生物 拭子深入培養(yǎng)基中

21、保護(hù)苛養(yǎng) 菌及厭氧菌 以塑料密封,不透水、不漏氣，減少污染和維持缺氧環(huán)境棉花纖維+竹/木條 出現(xiàn)抑菌區(qū)原因： 植物分泌的 n脂肪酸 n樹(shù)脂 n福爾馬林血標(biāo)本采集與運(yùn)送采集套數(shù)P-positive; 1-first culture; 2-two cultures; 3-three cultures;MBCS-manual blood culture system; CMBCS:continuous-monitoring blood culture system胸腔穿刺診斷結(jié)核性胸膜炎標(biāo)本數(shù)Blood Culture Contamination Benchmarks(649 institution

22、s; 570,108 blood cultures)nContamination Rate* (percentile)n10th50th90thnHospitalized adults5.42.5.9nHospitalized children7.32.3.7nNeonates6.52.10.0n* percent of cultures contaminatedSource: Schifman RB et al: Q-Probes Study 93-08. College Am Path; 1993. 武漢四家醫(yī)院、HKWCH血培養(yǎng)CNS構(gòu)成比， 1991451641308657593671

23、3731588720042007各醫(yī)院血培養(yǎng)分離總菌株數(shù)分別為各醫(yī)院血培養(yǎng)分離總菌株數(shù)分別為A：263、317、451、 439；B：135、164、214、208；C：25、 40、65、58；D：23、66、64、785 技術(shù)要求技術(shù)要求5.5 檢驗(yàn)程序：檢驗(yàn)程序：5.5.1 細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定程序應(yīng)滿(mǎn)足如下要求：細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定程序應(yīng)滿(mǎn)足如下要求：n所選擇的涂片、染色技術(shù)、培養(yǎng)基應(yīng)能從標(biāo)本中分離、識(shí)別相應(yīng)的病原菌；鑒定方法應(yīng)符合要求（如：通過(guò)血清學(xué)、革蘭染色、菌落形態(tài)、生長(zhǎng)條件、代謝反應(yīng)、生化和酶活性、抗菌藥物耐藥性譜等特性鑒定）；應(yīng)有處理組織標(biāo)本應(yīng)有處理組織標(biāo)本的能力的能力。n應(yīng)明確傷口標(biāo)本

24、培養(yǎng)程序，深部傷口感染應(yīng)至少包括標(biāo)本采集、需氧菌及厭氧菌的培養(yǎng)及鑒定。如果不具備厭氧培養(yǎng)條件，則應(yīng)有程序表明，標(biāo)本置合格的運(yùn)送系統(tǒng)迅速送有條件的實(shí)驗(yàn)室。應(yīng)有適當(dāng)?shù)姆椒z測(cè)苛養(yǎng)菌（如放線菌，快速生長(zhǎng)的分枝桿菌）。n厭氧菌培養(yǎng)時(shí)間與標(biāo)本類(lèi)型、診斷有關(guān)，在第一次培養(yǎng)評(píng)估之前應(yīng)有足夠的培養(yǎng)時(shí)間（至少48小時(shí)）。應(yīng)有合適的應(yīng)有合適的液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基，有合適的鑒定方法（適用時(shí)）。5 技術(shù)要求技術(shù)要求5.5 檢驗(yàn)程序：檢驗(yàn)程序：5.5.1 細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定程序應(yīng)滿(mǎn)細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定程序應(yīng)滿(mǎn)足如下要求足如下要求細(xì)菌抗菌藥物敏感性試驗(yàn)程序應(yīng)滿(mǎn)足如下要求：細(xì)菌抗菌藥物敏感性試驗(yàn)程序應(yīng)滿(mǎn)足如下要求：n應(yīng)制定常規(guī)藥敏試

25、驗(yàn)方法（紙片擴(kuò)散法、瓊脂稀釋法、微量肉湯稀釋法、E 試驗(yàn)或其他）的操作程序（含各類(lèi)病原體和/或標(biāo)本的檢測(cè)藥物、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)果解釋等）；n抗菌藥物敏感性試驗(yàn)方法包括紙片擴(kuò)散法、稀釋法（瓊脂稀釋法、肉湯稀釋法）、濃度梯度擴(kuò)散法（E 試驗(yàn)）或自動(dòng)化儀器檢測(cè)；實(shí)驗(yàn)室應(yīng)提供與服務(wù)相適應(yīng)的抗菌藥物敏感性試驗(yàn)；n抗菌藥物敏感性試驗(yàn)方法及結(jié)果判斷至少應(yīng)遵循上一年的至少應(yīng)遵循上一年的標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)。CLSI近年針對(duì)葡萄球菌藥敏的修訂n 99年苯唑西林紙片檢測(cè)葡萄球菌MRSn 05年頭孢西丁紙片法判斷MRS 修訂金黃色葡萄球菌判斷標(biāo)準(zhǔn)n 2005年CLSI藥敏試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)中增加了耐萬(wàn)古霉素金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法n 20

26、06年CLSI修改了萬(wàn)古霉素藥敏判斷標(biāo)準(zhǔn)n 09年以MIC確定萬(wàn)古霉素敏感性n5 技術(shù)要求技術(shù)要求5.5 檢驗(yàn)程序：檢驗(yàn)程序：5.5.1 細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定程序應(yīng)滿(mǎn)足如下要求細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定程序應(yīng)滿(mǎn)足如下要求n分枝桿菌分枝桿菌標(biāo)本應(yīng)置密閉的防滲漏容器內(nèi)；某些標(biāo)本（如：尿液、腦脊液）抗酸染色應(yīng)濃縮，所有標(biāo)本培養(yǎng)前應(yīng)濃縮。應(yīng)以密閉試管置密封的離心架內(nèi)離心。n真菌培養(yǎng)真菌培養(yǎng)宜使用含和不含抗菌藥物的兩類(lèi)培養(yǎng)基使用含和不含抗菌藥物的兩類(lèi)培養(yǎng)基。如果在室溫下培養(yǎng)，應(yīng)每天監(jiān)測(cè)并記錄室溫（22-26）。經(jīng)空氣傳播有高度感染性的真菌標(biāo)本、含菌絲體的真菌應(yīng)在生物安全柜內(nèi)處理。若采用平皿培養(yǎng)，應(yīng)封蓋。n病毒病毒培養(yǎng)時(shí)，

27、應(yīng)詳細(xì)記錄細(xì)胞類(lèi)型、傳代數(shù)、細(xì)胞來(lái)源、培養(yǎng)基及生長(zhǎng)狀況；應(yīng)檢測(cè)并記錄培養(yǎng)基和稀釋劑的無(wú)菌試驗(yàn)和 pH；應(yīng)監(jiān)測(cè)細(xì)胞病變效應(yīng)，以?xún)?yōu)化培養(yǎng)的最佳時(shí)間。應(yīng)比較未經(jīng)接種或接種無(wú)菌物質(zhì)的單層細(xì)胞與接種臨床標(biāo)本的培養(yǎng)物。對(duì)我國(guó)法定傳染病病原微生物的檢驗(yàn)程序應(yīng)滿(mǎn)足如下要求：對(duì)我國(guó)法定傳染病病原微生物的檢驗(yàn)程序應(yīng)滿(mǎn)足如下要求：檢驗(yàn)程序應(yīng)至少符合中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。 當(dāng)培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)人間傳染的高致病性病原微生物（依據(jù)人間傳染的病原微生物名錄）時(shí)，應(yīng)按相關(guān)法規(guī)要求進(jìn)行處理，或送至相應(yīng)級(jí)別的生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)。5 技術(shù)要求技術(shù)要求5.5 檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序5.5.2 應(yīng)按優(yōu)先順序依次選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株、質(zhì)控菌株或

28、按優(yōu)先順序依次選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株、質(zhì)控菌株或其它已知菌株其它已知菌株對(duì)商業(yè)鑒定系統(tǒng)（包括自動(dòng)、半自動(dòng)、手工）每種板（條/卡/管）的鑒定/藥敏結(jié)果符合性進(jìn)行驗(yàn)證。5.5.3 除通用內(nèi)容外，檢驗(yàn)程序還應(yīng)包括適宜的培養(yǎng)環(huán)境和足夠的培養(yǎng)時(shí)間；初次分離用非選擇性培初次分離用非選擇性培養(yǎng)基的平板直徑不應(yīng)小于養(yǎng)基的平板直徑不應(yīng)小于9cm，應(yīng)只接種一份標(biāo)，應(yīng)只接種一份標(biāo)本本。5 技術(shù)要求技術(shù)要求5.6 檢驗(yàn)程序的質(zhì)量保證檢驗(yàn)程序的質(zhì)量保證5.6.1 內(nèi)部質(zhì)量控制程序應(yīng)包括整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程，如實(shí)驗(yàn)分析前、中、后（報(bào)告）。 質(zhì)控應(yīng)滿(mǎn)足如下要求：質(zhì)控應(yīng)滿(mǎn)足如下要求：n使用中的染色劑（革蘭染色、特殊染色和熒光染色），至少每

29、周（若頻至少每周（若頻率小于每周率小于每周1次，則實(shí)驗(yàn)當(dāng)日）次，則實(shí)驗(yàn)當(dāng)日）用已知陽(yáng)性和陰性（適用時(shí)）的質(zhì)控菌株檢測(cè)染色程序。n凝固酶、過(guò)氧化氫酶、氧化酶、內(nèi)酰胺酶，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日實(shí)驗(yàn)當(dāng)日應(yīng)做陰性和陽(yáng)性質(zhì)控，商業(yè)頭孢菌素試劑的內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)可遵循制造商的建議。診斷性抗血清試劑，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日至少應(yīng)做多價(jià)血清多價(jià)血清陰性和陽(yáng)性質(zhì)控。定性試驗(yàn)試劑每次每次檢測(cè)時(shí)應(yīng)至少包括陽(yáng)性和陰性質(zhì)控菌株或樣本。不含內(nèi)質(zhì)控的直接抗原檢測(cè)試劑，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日應(yīng)檢測(cè)陽(yáng)性和陰性質(zhì)控。 n實(shí)驗(yàn)室采用的藥敏試驗(yàn)方法藥敏試驗(yàn)方法應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)菌株連續(xù)檢測(cè)2030天，每一組藥物/細(xì)菌超出參考范圍（抑菌圈直徑或MIC）的頻率需小于1/20或2/30。此后，

30、應(yīng)每周每周使用標(biāo)準(zhǔn)菌株對(duì)藥敏試驗(yàn)進(jìn)行質(zhì)控。若檢測(cè)頻率小于每周1次，則每個(gè)檢測(cè)日應(yīng)進(jìn)行質(zhì)控。采用自動(dòng)或半自動(dòng)儀器檢測(cè)MIC時(shí)，應(yīng)按照制造商的要求進(jìn)行質(zhì)控。應(yīng)保存抗菌藥物敏感性試驗(yàn)資料，并至少每年至少每年向臨床醫(yī)師報(bào)告。5 技術(shù)要求技術(shù)要求5.6 檢驗(yàn)程序的質(zhì)量保證檢驗(yàn)程序的質(zhì)量保證5.6.1 內(nèi)部質(zhì)量控制程序應(yīng)包括整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程，如實(shí)驗(yàn)分析前、中、后（報(bào)告）。厭氧菌厭氧菌應(yīng)以有效的方法檢測(cè)厭氧培養(yǎng)環(huán)境（如以亞甲蘭試條、厭氧菌或適當(dāng)?shù)某绦驒z測(cè)厭氧系統(tǒng)的厭氧條件）。分枝桿菌分枝桿菌抗酸染色應(yīng)在實(shí)驗(yàn)當(dāng)日實(shí)驗(yàn)當(dāng)日用適當(dāng)?shù)年?yáng)性和陰性質(zhì)控驗(yàn)證；熒光染色應(yīng)每次每次以陰性和陽(yáng)性對(duì)照驗(yàn)證。真菌真菌直接染色（如：

31、抗酸染色，PAS，吉姆薩染色，墨汁染色）檢查患者標(biāo)本時(shí)，應(yīng)實(shí)驗(yàn)當(dāng)日實(shí)驗(yàn)當(dāng)日做陰性和陽(yáng)性質(zhì)控（某些染色如吉姆薩染色，玻片本身作為陰性質(zhì)控。KOH制備的玻片不需要質(zhì)控）。病毒病毒連續(xù)細(xì)胞傳代時(shí)應(yīng)定期監(jiān)測(cè)支原體污染（宜監(jiān)測(cè)陰性未傳代的質(zhì)控株，而不是培養(yǎng)支原體）；應(yīng)監(jiān)測(cè)用于細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)液的動(dòng)物血清的細(xì)胞毒性；應(yīng)具備相應(yīng)的細(xì)胞株用于病毒培養(yǎng)。5 技術(shù)要求技術(shù)要求5.6 檢驗(yàn)程序的質(zhì)量保證檢驗(yàn)程序的質(zhì)量保證5.6.4 應(yīng)按照CNAS-RL02能力驗(yàn)證規(guī)則的要求參加相應(yīng)的能力驗(yàn)證/室間質(zhì)評(píng)。應(yīng)使用相同的檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)質(zhì)控樣本與患者樣本使用相同的檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)質(zhì)控樣本與患者樣本；應(yīng)由從事常規(guī)檢驗(yàn)由從事常規(guī)檢驗(yàn)工作

32、的人員執(zhí)行工作的人員執(zhí)行；應(yīng)有禁止與其他實(shí)驗(yàn)室核對(duì)PT、EQA結(jié)果的規(guī)定；應(yīng)能提供參加PT、EQA活動(dòng)的結(jié)果和證書(shū)。應(yīng)對(duì)“不滿(mǎn)意”和“不合格”的PT、EQA結(jié)果分析和采取糾正措施，并記錄。實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或指定負(fù)責(zé)人應(yīng)監(jiān)控PT/室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)的結(jié)果，并在結(jié)果報(bào)告上簽字。5.6.5對(duì)沒(méi)有開(kāi)展能力驗(yàn)證/室間質(zhì)評(píng)的項(xiàng)目 ，應(yīng)至少每6個(gè)月進(jìn)行一次性能評(píng)估，方法包括：與參考實(shí)驗(yàn)室或其它實(shí)驗(yàn)室分割標(biāo)本檢測(cè)；與本實(shí)驗(yàn)室建立的方法分割標(biāo)本檢測(cè)；分析純物質(zhì)、地方數(shù)據(jù)庫(kù)或臨床證實(shí)資料；或其它適宜的和規(guī)定的方法。實(shí)驗(yàn)室選擇的性能評(píng)估方法的性能評(píng)估方法的標(biāo)本的檢測(cè)內(nèi)容應(yīng)與患者標(biāo)本一致標(biāo)本的檢測(cè)內(nèi)容應(yīng)與患者標(biāo)本一致。5.

33、6.6應(yīng)制定人員比對(duì)的程序，規(guī)定由多個(gè)人員進(jìn)行的手工檢驗(yàn)項(xiàng)目驗(yàn)證的方法和判斷標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)至少每年進(jìn)行工作人員的能力比對(duì)，至少包括至少每年進(jìn)行工作人員的能力比對(duì)，至少包括顯微鏡檢查、培養(yǎng)結(jié)果判讀、抑菌圈測(cè)量、結(jié)果報(bào)告。5 技術(shù)要求技術(shù)要求5.7 檢驗(yàn)后程序檢驗(yàn)后程序5.8 結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告5.8.3 結(jié)果報(bào)告應(yīng)與檢驗(yàn)的內(nèi)容一致結(jié)果報(bào)告應(yīng)與檢驗(yàn)的內(nèi)容一致，如糞便沙門(mén)、志賀菌培養(yǎng)，報(bào)告“未檢出沙門(mén)、志賀菌”。血培養(yǎng)陰性結(jié)果報(bào)告應(yīng)注明培養(yǎng)時(shí)間5.8.7 危急值至少應(yīng)包括血培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果、腦脊液顯微鏡檢危急值至少應(yīng)包括血培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果、腦脊液顯微鏡檢查及培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果、國(guó)家規(guī)定立即上報(bào)的法定傳染病查及培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果

34、、國(guó)家規(guī)定立即上報(bào)的法定傳染病5.8.9 血液、腦脊液標(biāo)本的培養(yǎng)鑒定應(yīng)及時(shí)發(fā)送分級(jí)報(bào)告血液、腦脊液標(biāo)本的培養(yǎng)鑒定應(yīng)及時(shí)發(fā)送分級(jí)報(bào)告，如標(biāo)本直接涂片或濕片直接鏡檢、培養(yǎng)結(jié)果的判讀等陽(yáng)性發(fā)現(xiàn)。其它無(wú)菌部位來(lái)源標(biāo)本宜報(bào)告直接涂片鏡檢的陽(yáng)性結(jié)果5.8.11 應(yīng)在收到樣品在收到樣品24小時(shí)內(nèi)報(bào)告分枝桿菌抗酸或熒光染色小時(shí)內(nèi)報(bào)告分枝桿菌抗酸或熒光染色結(jié)果結(jié)果附錄附錄A：申請(qǐng)認(rèn)可項(xiàng)目要求：申請(qǐng)認(rèn)可項(xiàng)目要求B.1上呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)和鑒定（普通細(xì)菌），應(yīng)與A組鏈球菌（6B070）和流感嗜血桿菌（6BXXX）組合認(rèn)可。B.2下呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)和鑒定（普通細(xì)菌），應(yīng)與肺炎鏈球菌（6B075）、流感嗜血桿菌（6BXXX）組合認(rèn)可。B.3糞便培養(yǎng)和鑒定（普通細(xì)菌），應(yīng)與沙門(mén)菌鑒定（6B085）+血清型分類(lèi)（6B820）；志賀菌鑒定（6BXXX）+血清型分類(lèi)（6B825）；霍亂弧菌鑒定（6BXXX）+血清型分類(lèi)（6B890）組合認(rèn)可。B.4腦脊液培養(yǎng)和鑒定（普通細(xì)菌），應(yīng)與肺炎鏈球菌（6B075）、腦膜炎奈瑟菌（6B080）和流感嗜血桿菌（6BXXX）組合認(rèn)可。B.5普通細(xì)菌藥敏試驗(yàn)自動(dòng)化儀器檢測(cè)法應(yīng)與紙片擴(kuò)散法和/或藥敏試驗(yàn)（最低抑菌濃度）（6C205）組合認(rèn)可；紙片