宮頸癌篩查與HPV檢測課件

1、宮頸癌篩查與HPV檢測福州省立醫(yī)院中心(zhngxn)實(shí)驗(yàn)室第一頁，共二十九頁。2宮頸癌篩查與HPV檢測目錄目錄(ml)第二頁，共二十九頁。l世界范圍內(nèi)，宮頸癌是婦女第二大常見惡性腫瘤；在一些發(fā)展中國家，是婦女的頭號世界范圍內(nèi)，宮頸癌是婦女第二大常見惡性腫瘤；在一些發(fā)展中國家，是婦女的頭號(tuho)(tuho)死因；死因；l世界范圍內(nèi)每年約有世界范圍內(nèi)每年約有46.646.6萬宮頸癌新發(fā)病例，亞洲萬宮頸癌新發(fā)病例，亞洲23.523.5萬占一半，中國估計有近萬占一半，中國估計有近1010萬新發(fā)病例，萬新發(fā)病例，約占世界新發(fā)病例總數(shù)的約占世界新發(fā)病例總數(shù)的1/51/5；l中國每年約有中國每年約有

2、3 3萬婦女死于宮頸癌；萬婦女死于宮頸癌；l我國中西部農(nóng)村，由于缺乏資金和醫(yī)療技術(shù)我國中西部農(nóng)村，由于缺乏資金和醫(yī)療技術(shù), ,宮頸癌是婦女主要的衛(wèi)生問題之一；宮頸癌是婦女主要的衛(wèi)生問題之一；l我國城市婦女由于缺乏有組織的篩查計劃和醫(yī)學(xué)知識也面臨宮頸癌嚴(yán)重威脅；我國城市婦女由于缺乏有組織的篩查計劃和醫(yī)學(xué)知識也面臨宮頸癌嚴(yán)重威脅；*喬友林教授，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤(zhngli)研究所流行病學(xué)研究室主任中國的宮頸癌防治事業(yè)(shy)依然任重而道遠(yuǎn)！中國宮頸癌防治的機(jī)遇與挑戰(zhàn)中國宮頸癌防治的機(jī)遇與挑戰(zhàn)第三頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與HPV檢測19951995年：年：uIARCIARC專題討論會：專題討

3、論會：HPVHPV感染是宮頸癌的主要病因。感染是宮頸癌的主要病因。uWHOWHO宣布宣布HPVHPV是引起宮頸癌變的首要是引起宮頸癌變的首要(shuyo)(shuyo)因素因素 18001800s s19601960s- 80s- 80s s 19701970s- 80s- 80s s 19801980s- 90s- 90s s19901990s - s - 與性行為相與性行為相關(guān)關(guān)(xinggun)(xinggun)感染感染(gnrn)(gnrn)因因子子 ( (單純皰疹單純皰疹病毒病毒) ) 提出提出HPVHPV與宮頸與宮頸癌發(fā)病有關(guān)的假癌發(fā)病有關(guān)的假設(shè)設(shè)克隆克隆HPV16HPV16型、型

4、、發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)HPVHPV的致病的致病機(jī)理機(jī)理HPVHPV被確認(rèn)為子宮被確認(rèn)為子宮頸癌主要病因頸癌主要病因楚爾.豪森 2008諾貝爾生理獎獲得者宮頸癌的明確病因?qū)m頸癌的明確病因持續(xù)性的高危型持續(xù)性的高危型HPV感染感染第四頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與HPV檢測確定疾病疾病病理預(yù)防疾病子宮頸癌子宮頸癌(z n jn i)的預(yù)防史的預(yù)防史組織細(xì)胞分子2003年1925年1942年1996年2001年2006年2012年一級預(yù)防二級預(yù)防(yfng)三級預(yù)防宮頸癌陰道鏡PAPLBCTBSHC2careHPVGardasilHPVCervarix疫苗(ymio)第五頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與HPV檢測 2

5、005年世界衛(wèi)生組織(WHO)和世界癌癥機(jī)構(gòu)(IARC)：-目前目前(mqin)(mqin)有足夠的證據(jù)表明，將高危型有足夠的證據(jù)表明，將高危型HPVHPV檢測作為初步篩查可以減少宮頸癌的發(fā)生率檢測作為初步篩查可以減少宮頸癌的發(fā)生率及死亡率。及死亡率。早在早在20052005年就已明確年就已明確(mngqu)(mngqu)HPVHPV檢測用于宮頸癌篩查檢測用于宮頸癌篩查第六頁，共二十九頁。7宮頸癌篩查與HPV檢測目錄目錄(ml)第七頁，共二十九頁。8宮頸癌篩查與HPV檢測國外權(quán)威機(jī)構(gòu)對于國外權(quán)威機(jī)構(gòu)對于HPVHPV檢測檢測(jin c)(jin c)用于宮頸癌篩查的推薦用于宮頸癌篩查的推薦第八

6、頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與HPV檢測美國ASCCP指南更新歷程-HPV檢測(jin c)（雜交捕獲二代技術(shù)）推動ASCCP宮頸癌篩查指南的更新2001 美國ASCCP指南推薦采用采用HPV DNA檢測用于檢測用于ASCUS婦女婦女(fn)的分流管理的分流管理2006 年ASCCP和2009 ACOG指南推薦HPV DNA檢測檢測+液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合篩查篩查（30歲以上(yshng)婦女）2012/2013年ASCCP發(fā)表指南將聯(lián)合篩查間隔延長至5年美國NCI組織的采用雜交捕獲二代雜交捕獲二代技術(shù)技術(shù)進(jìn)行的著名ALTS研究，即ASCUS/LISIL Triage Study研究數(shù)據(jù)發(fā)

7、表來自歐洲7項(xiàng)項(xiàng)研究薈萃分析和長達(dá)6年隨訪數(shù)據(jù)顯示：聯(lián)合篩查（雜交捕獲二代雜交捕獲二代技術(shù)技術(shù)）與單獨(dú)采用細(xì)胞學(xué)篩查的CIN的累積發(fā)病風(fēng)險對比結(jié)果美國Kaiser醫(yī)學(xué)中心采用雜交捕獲二雜交捕獲二代技術(shù)代技術(shù)對近100萬萬婦女長達(dá)9年年的篩查隨訪研究數(shù)據(jù)結(jié)果美國美國ASCCPASCCP指南對于指南對于HPVHPV檢測用于宮頸癌篩查的推薦檢測用于宮頸癌篩查的推薦第九頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與HPV檢測2012年ASCCP、ACS、ASCP共同發(fā)布宮頸癌篩查新指南，將聯(lián)合篩查雙陰性篩查間隔年限，延長至5年ASCCP聯(lián)合全球25家權(quán)威機(jī)構(gòu)，成立6個小組共同回顧分析1995-2011年間1萬多篇文獻(xiàn)，

8、并專門篩選了399篇文獻(xiàn)用來分析評估(pn )分子檢測在篩查中的應(yīng)用。結(jié)論推薦中明確指出：雜交捕雜交捕獲二代技術(shù)（獲二代技術(shù)（HC2 HPV檢測）是目前全球大規(guī)模篩查中應(yīng)用最為廣泛有效的方法，任何HPV檢測方法（包括HPV分型）與雜交捕獲二代技術(shù)雜交捕獲二代技術(shù)相比，其臨床性能目前并不明確，有待進(jìn)一步的研究驗(yàn)證。2012ASCCP supporting informationASCCPASCCP指南對于指南對于HPVHPV檢測檢測(jin c)(jin c)方法的推薦方法的推薦第十頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與HPV檢測 M Origoni, et,al. HPV-DNA testing for

9、 cervical cancer precursors: from evidence to clinical practice . ecancer 2012, 6:258 2012年歐洲年歐洲(u zhu)宮頸癌篩查指南推薦宮頸癌篩查指南推薦 2012年歐洲指南推薦高危型高危型HPVHPV檢測用于宮頸癌初篩檢測用于宮頸癌初篩 雜交捕獲二代(r di)技術(shù) 被歐洲專家和指南認(rèn)可是宮頸癌初篩一線首選第十一頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與HPV檢測歐洲篩查指南：歐洲篩查指南：HPV檢測方法檢測方法(fngf)的評估的評估HPVHPV檢測被歐洲指南作為檢測被歐洲指南作為3030歲以上女性宮頸癌初歲以上女性

10、宮頸癌初篩的首選，并推薦了篩的首選，并推薦了HPVHPV檢測技術(shù)的評估標(biāo)準(zhǔn)檢測技術(shù)的評估標(biāo)準(zhǔn)待驗(yàn)證HPV檢測的臨床靈敏度 CIN2 ，必須達(dá)到雜交捕獲二代技術(shù)（HC2）的90%90%以上以上（30歲以上婦女），宮頸采樣標(biāo)本要與基于人群的研究(ynji)，使用HC2檢測，可以或不聯(lián)合細(xì)胞學(xué)檢測。待驗(yàn)證HPV檢測的臨床特異度 CIN2 ，必須達(dá)到雜交捕獲二代技術(shù)（HC2）的98%98%以上以上（30歲以上婦女）。Guidelines for human papillomavirus DNA test requirements for primary cervical cancer screenin

11、g in women30 years or older” by Meijers et al.,(2009)第十二頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與HPV檢測20152015年歐洲年歐洲EUROGIN宮頸癌篩查指南宮頸癌篩查指南(zhnn)(zhnn)推薦推薦將常見(chn jin)的HPV檢測技術(shù)分為兩類：二代雜交捕獲法HC2及所有PCR方法進(jìn)行人群為基礎(chǔ)的臨床實(shí)驗(yàn)（其中CIN2+60例），重復(fù)率大于87%所有HPV檢測技術(shù)，性能不低于金標(biāo)準(zhǔn)雜交捕獲二代技術(shù)的臨床性能的95%，方可用于宮頸癌的初篩n 20152015年歐洲年歐洲EUROGINEUROGIN大會大會(dhu)(dhu)推薦推薦HPVH

12、PV檢測用于宮頸癌初篩檢測用于宮頸癌初篩n 20152015年歐洲年歐洲EUROGINEUROGIN大會確定了大會確定了HPVHPV檢測檢測的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)來保證初篩的效果來保證初篩的效果第十三頁，共二十九頁。14宮頸癌篩查與HPV檢測WHOWHO指南對于指南對于HPVHPV檢測檢測(jin c)(jin c)用于宮頸癌篩查的推薦用于宮頸癌篩查的推薦第十四頁，共二十九頁。15宮頸癌篩查與HPV檢測WHO guidelines for screening and treatment of precancerous lesions for cervical cancer prevention.

13、 World Health Organization 20132013 2013 年年WHOWHO推薦的三種篩查方法：推薦的三種篩查方法：HPV HPV 檢測檢測(jin c)(jin c)，細(xì)胞學(xué)檢查，細(xì)胞學(xué)檢查，VIAVIA檢查。檢查。l 首推高危型HPV作為宮頸癌初篩首選方法l 推薦高危型HPV 檢測cut-off 值1.0 pg/mll 這是雜交捕獲二代技術(shù)（HC2)所特有的判斷標(biāo)準(zhǔn)WHOWHO指南對于指南對于(duy)(duy)HPVHPV檢測用于宮頸癌篩查的推薦檢測用于宮頸癌篩查的推薦第十五頁，共二十九頁。16宮頸癌篩查與HPV檢測目錄目錄(ml)第十六頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與

14、HPV檢測目前目前(mqin)(mqin)中國中國HPVHPV檢測行業(yè)現(xiàn)狀檢測行業(yè)現(xiàn)狀截至2014年底，共有27個廠家超過60種HPV檢測產(chǎn)品技術(shù)種類繁多進(jìn)口(jn ku)/國產(chǎn)FDA/CE/CFDA雜交捕獲法/膜雜交法/熒光定量PCR法臨床醫(yī)生的困惑那些方法準(zhǔn)確性高？那些方法準(zhǔn)確性高？那些結(jié)果有臨床意義？那些結(jié)果有臨床意義？第十七頁，共二十九頁。18宮頸癌篩查與HPV檢測CvCx Cases/100,000051015202515-1920-2425-2930-3435-3940-4445-4950-5455-5960-6465Age (years)HPV Prevalence (%)024

15、68101214161820HPVCervical CancerSources: NCI SEER Data, 1990-94; Melkert et al., 1993. Int J Canc 53:919.HPVHPV感染感染(gnrn)(gnrn)和宮頸癌的發(fā)生率和宮頸癌的發(fā)生率第十八頁，共二十九頁。19宮頸癌篩查與宮頸癌篩查與HPV檢測檢測感染感染HPVHPV病毒不代表病毒不代表(dibio)(dibio)患宮頸癌患宮頸癌設(shè)定檢測閾值非常重要設(shè)定檢測閾值非常重要還沒有發(fā)生細(xì)胞學(xué)改變的患者，病毒感染量較低就不會進(jìn)展(jnzhn)為CIN病變，病毒感染量較高則有發(fā)生CIN病變的風(fēng)險；已經(jīng)發(fā)

16、生細(xì)胞學(xué)改變的患者，病毒感染量較低則轉(zhuǎn)歸的幾率較高，病毒感染量較高則進(jìn)展的幾率較高；CIN病變進(jìn)展為高級病變無CIN病變CIN轉(zhuǎn)歸第十九頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與HPV檢測WHO guidelines for screening and treatment of precancerous lesions for cervical cancer prevention. World Health Organization 2013WHOWHO宮頸癌篩查指南推薦宮頸癌篩查指南推薦(tujin)(tujin)HPVHPV檢測陽性判斷值檢測陽性判斷值1.0pg/ml1.0pg/ml第二十頁，共二十九頁

17、。宮頸癌篩查與HPV檢測當(dāng)當(dāng)CutoffCutoff值在值在1.0pg/ml1.0pg/ml時，無論是自體采樣還是醫(yī)生直接時，無論是自體采樣還是醫(yī)生直接(zhji)(zhji)采樣，臨床性能都是采樣，臨床性能都是最優(yōu)的最優(yōu)的HC2HC2設(shè)定臨床陽性判斷值即：設(shè)定臨床陽性判斷值即：cut off1.0pg/mlcut off1.0pg/ml，相當(dāng)于病毒載量為，相當(dāng)于病毒載量為50005000拷貝拷貝/ /檢測檢測J. L. BELINSON*, Y. L. QIAO et al Shanxi Province cervical cancer screening study II: Self-sa

18、mpling for high-risk human papillomavirus compared to direct sampling for human papillomavirus and liquid based cervical cytology. Int J Gynecol Cancer 2003, 13, 819826為何為何WHOWHO宮頸癌篩查指南推薦此陽性判斷宮頸癌篩查指南推薦此陽性判斷(pndun)(pndun)標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn) - -準(zhǔn)確性好準(zhǔn)確性好第二十一頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與HPV檢測該臨床陽性判斷值多次重復(fù)試驗(yàn)(shyn)一致性、臨床敏感性最佳100000.111

19、010010000.11101001000 RLU/PC (Observed)Panel A Panel B RLU/PC (Expected)為何為何WHOWHO宮頸癌篩查指南宮頸癌篩查指南(zhnn)(zhnn)推薦此陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)推薦此陽性判斷標(biāo)準(zhǔn) -重復(fù)性好重復(fù)性好第二十二頁，共二十九頁。23宮頸癌篩查與宮頸癌篩查與HPV檢測檢測各各HPV檢測結(jié)果判斷檢測結(jié)果判斷(pndun)閾值閾值HPVHPV檢測檢測檢測技術(shù)檢測技術(shù)分析敏感度分析敏感度Cobas4800Cobas4800實(shí)時定量PCR80-2400拷貝CervistaCervista酶切信號放大625-1250拷貝Abbott Mo

20、lecularAbbott Molecular實(shí)時定量PCR500-5000拷貝HC2HC2或或careHPVcareHPV雜交捕獲5000拷貝亞能亞能PCR+斑點(diǎn)雜交3000拷貝凱普凱普PCR+斑點(diǎn)雜交3000拷貝第二十三頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與宮頸癌篩查與HPV檢測檢測幾種幾種HPVHPV檢測檢測(jin c)(jin c)的探針設(shè)計的探針設(shè)計HC2 HPV檢測檢測“全長雞尾酒全長雞尾酒”探針探針(tn zhn)技術(shù)技術(shù)Cobas HPV& Abbott HPV(12+2 Real-time PCR)“寡核苷酸探針寡核苷酸探針(tn zhn)”技術(shù)技術(shù)8000bp，基于全長，涵

21、蓋HPV DNA所有區(qū)域14種不同型別探針混合 準(zhǔn)確，不漏診約200bp，僅基于L1片斷， 非全長 僅3種探針混合 病毒基因缺失、突變會造成漏診約100-150bp，僅基于L1片斷， 非全長僅1種通用探針 病毒基因缺失、突變會造成漏診其他國產(chǎn)其他國產(chǎn)PCR方法方法 “寡核苷酸探針寡核苷酸探針”技術(shù)技術(shù)HPV病毒基因組為環(huán)狀雙鏈DNA，含有8000個堿基對。第二十四頁，共二十九頁。宮頸癌篩查與HPV檢測“由于L1開放編碼框架在整合過程中發(fā)生(fshng)缺失，使用L1引物會導(dǎo)致23%的假陰性結(jié)果”Capone et al, Clin Cancer Research 2000, 6:4171-4175“使用共同(gngtng)的L1引物，擴(kuò)增后結(jié)果顯示，在56份樣本中有23例的L1片段缺失” Karlsen et al, JCM 1996, 34(9): 2095-2100 (Invasive cervical carcinoma population)“在PCR檢測系統(tǒng)中，應(yīng)該(ynggi)使用多種共同引物和型別特異性引物”Karlsen et al, JCM 1996, 34(9): 2095-2100 (Invasive cervical carcinoma population)惡性進(jìn)展和與宿主細(xì)胞惡性進(jìn)展和與宿主細(xì)胞DNA整合時，可以造成病毒基因整合時，可以造成病毒基因