第六章 化學毒物的一般毒性作用

1、5/5/202215/5/20222內容內容& 1 急性毒性作用急性毒性作用& 2 蓄積毒性蓄積毒性& 3 亞慢性和慢性毒性作用亞慢性和慢性毒性作用 & 4 局部毒性作用局部毒性作用& 5 LD50 計算方法計算方法5/5/202231 急性毒性作用急性毒性作用n一、急性毒性和急性毒性試驗的目的一、急性毒性和急性毒性試驗的目的n二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n三、急性毒性分級三、急性毒性分級5/5/20224一、急性毒性和急性毒性試驗的目的一、急性毒性和急性毒性試驗的目的n急性毒性急性毒性(acute toxicity)(acute toxicity)

2、是指機體是指機體( (人或試驗人或試驗動物動物) )一次接觸或一次接觸或2424小時內多次接觸小時內多次接觸化學物后在化學物后在短期短期( (最長到最長到1414天天) )內所發(fā)生的內所發(fā)生的毒性效應毒性效應，包括，包括一般行為、外觀改變、大體形態(tài)變化以及死亡一般行為、外觀改變、大體形態(tài)變化以及死亡效應。效應。 5/5/20225一、急性毒性和急性毒性試驗的目的一、急性毒性和急性毒性試驗的目的n目的目的測試和求出化學毒物對一種或幾種試驗動物的致死量測試和求出化學毒物對一種或幾種試驗動物的致死量( (以以LDLD5050表示表示) )以及其它的急性毒性參數(shù)，了解急性毒作用以及其它的急性毒性參數(shù)，

3、了解急性毒作用強度。強度。并通過觀察動物中毒表現(xiàn)和死亡的情況，了解急性毒作并通過觀察動物中毒表現(xiàn)和死亡的情況，了解急性毒作用性質、可能的靶器官和致死原因，提供化學毒物的急性用性質、可能的靶器官和致死原因，提供化學毒物的急性中毒資料、初步評價對人體產生損害的危險性。中毒資料、初步評價對人體產生損害的危險性。探求化學毒物急性毒性的劑量探求化學毒物急性毒性的劑量反應關系與中毒特征。反應關系與中毒特征。為亞慢性、慢性毒性作用試驗的染毒劑量設計提供參考為亞慢性、慢性毒性作用試驗的染毒劑量設計提供參考依據(jù)。依據(jù)。研究化學毒物急性中毒的預防和急救治療措施。研究化學毒物急性中毒的預防和急救治療措施。為毒理學機

4、制研究提供線索為毒理學機制研究提供線索 。 5/5/20226一、急性毒性和急性毒性試驗的目的一、急性毒性和急性毒性試驗的目的n急性毒性試驗常用的毒性參數(shù)：急性毒性試驗常用的毒性參數(shù)：LD50/LC50Zac （LD50/Limac） LD84/LD16(或或LC84LC16) 劑量劑量反應曲線斜率反應曲線斜率 5/5/20227二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n( (一一) )試驗動物試驗動物 原則原則 ：n急性毒性試驗要求選擇對化學毒物的代謝急性毒性試驗要求選擇對化學毒物的代謝和毒效應表現(xiàn)與人的反應盡可能一致的試驗和毒效應表現(xiàn)與人的反應盡可能一致的試驗動物。動物。n動物易于獲得動物易于獲得

5、n品系純化品系純化n價格較低和易于飼養(yǎng)等條件。價格較低和易于飼養(yǎng)等條件。 5/5/20228二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n1 1試驗動物的種屬和品系試驗動物的種屬和品系最好用兩種種屬的動物最好用兩種種屬的動物嚙齒類嚙齒類: :小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔非嚙齒類：非嚙齒類：狗或猴狗或猴。急性皮膚毒性試驗可選用成年大鼠、豚鼠或家兔，急性皮膚毒性試驗可選用成年大鼠、豚鼠或家兔，優(yōu)先考慮白色家兔。而急性吸入毒性試驗和經(jīng)口急優(yōu)先考慮白色家兔。而急性吸入毒性試驗和經(jīng)口急性毒性試驗則優(yōu)先考慮大鼠。性毒性試驗則優(yōu)先考慮大鼠。5/5/20229二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n試驗動物的年

6、齡和體重：試驗動物的年齡和體重：急性試驗動物不宜過老或過幼，通常要求選擇剛成年急性試驗動物不宜過老或過幼，通常要求選擇剛成年動物進行試驗，而且須是未曾交配和受孕的動物。例動物進行試驗，而且須是未曾交配和受孕的動物。例如：大鼠如：大鼠180180240g240g、小鼠、小鼠181825g25g、家兔、家兔2 22.5kg2.5kg、豚鼠豚鼠200200250g250g、狗、狗101015kg15kg。同一批試驗動物體重同一批試驗動物體重變異范圍不應超過該批動物平均體重的變異范圍不應超過該批動物平均體重的2020。 5/5/202210二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n3.3.試驗動物的性別：試驗

7、動物的性別：急性毒性試驗的主要內容是求急性毒性試驗的主要內容是求LDLD5050，除特殊要求，除特殊要求外，一般急性毒性試驗對動物性別要求為外，一般急性毒性試驗對動物性別要求為雌雄各雌雄各半半。如果在預試驗時發(fā)現(xiàn)化學毒物。如果在預試驗時發(fā)現(xiàn)化學毒物( (如農藥如農藥) )對雌、對雌、雄動物毒效應的敏感性有明顯差異，則應單獨分雄動物毒效應的敏感性有明顯差異，則應單獨分別求出雌性與雄性動物各自的別求出雌性與雄性動物各自的LDLD5050。如果試驗是。如果試驗是為致畸試驗作準備，也可僅作雌性動物的為致畸試驗作準備，也可僅作雌性動物的LDLD5050測測試。試。 5/5/202211二、急性毒性試驗二

8、、急性毒性試驗n4.動物數(shù)量與隨機分組：動物數(shù)量與隨機分組：大、小鼠等小動物大、小鼠等小動物 每組每組10只只狗等大動物狗等大動物 每組每組6只只分組原則分組原則隨機化原則隨機化原則n5.禁食：禁食：經(jīng)消化道染毒時，要求試驗前對動物禁食經(jīng)消化道染毒時，要求試驗前對動物禁食大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜進食；染毒后禁食隔夜進食；染毒后禁食4h大動物大動物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒染毒后繼續(xù)禁食染毒后繼續(xù)禁食24h，但在禁食時要保障飲水。，但在禁食時要保障飲水。n6.實驗動物的預檢：實驗動物的預檢：選擇健康動物選擇健康動物12周的檢疫期周的檢疫期5/5/202212二、急性毒性試驗二、急性毒性

9、試驗 （二）試驗動物的飼養(yǎng)環(huán)境（二）試驗動物的飼養(yǎng)環(huán)境恒定的溫度：恒定的溫度：223濕度：濕度：3070%照明：晝夜各半照明：晝夜各半飼料合格、飲水合格、墊料合格飼料合格、飲水合格、墊料合格5/5/202213二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗（三）染毒途徑的選擇（三）染毒途徑的選擇: 染毒途徑（染毒途徑（exposure routes）的選擇需考慮：）的選擇需考慮：模擬人在生活和生產環(huán)境中實際接觸受試物的模擬人在生活和生產環(huán)境中實際接觸受試物的途徑和方式途徑和方式；有利于不同化學物之間急性毒性有利于不同化學物之間急性毒性大小的比較大小的比較；受試物的性質和用途；各種受試受試物的性質和用途；各種

10、受試物毒性評價程序的要求等。物毒性評價程序的要求等。 最常用的染毒途徑為最常用的染毒途徑為經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射途徑。注射途徑。 5/5/202214二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n經(jīng)口經(jīng)口( (胃腸道胃腸道) )接觸接觸 n經(jīng)呼吸道接觸經(jīng)呼吸道接觸 n經(jīng)皮膚接觸經(jīng)皮膚接觸 n注射途徑接觸注射途徑接觸5/5/202215二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n經(jīng)口經(jīng)口( (胃腸道胃腸道) )接觸接觸 : 灌胃灌胃: : 空腹空腹 灌胃后灌胃后2-3 h2-3 h復食復食 灌胃的體積不超過體重的灌胃的體積不超過體重的1-21-2： 小鼠為小鼠為 0.2-1.0ml/0.2-

11、1.0ml/只或只或0.1-0.5ml/10g0.1-0.5ml/10g 大鼠為大鼠為5ml/5ml/只只( (通常用通常用0.5-1.0ml/100g0.5-1.0ml/100g） 家兔為家兔為10ml/2kg10ml/2kg體重體重 狗不超過狗不超過50ml/10kg 50ml/10kg 喂飼：喂飼： 吞咽膠囊吞咽膠囊: : 5/5/202216二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗 靜式吸入接觸：靜式染毒靜式吸入接觸：靜式染毒 吸入接觸吸入接觸 動式染毒動式染毒 動式吸入接觸動式吸入接觸 面罩吸入染毒面罩吸入染毒 注入接觸注入接觸經(jīng)經(jīng)呼呼吸吸道道接接觸觸5/5/202217二、急性毒性試驗二、

12、急性毒性試驗n經(jīng)皮膚接觸經(jīng)皮膚接觸 : 研究外源化學物經(jīng)皮膚吸收應當盡量研究外源化學物經(jīng)皮膚吸收應當盡量 選擇皮膚解選擇皮膚解剖、生理與人類較近似的剖、生理與人類較近似的 動物為對象，目前多選用動物為對象，目前多選用家兔和豚鼠家兔和豚鼠 但由于研究化學物經(jīng)皮膚吸收的毒性但由于研究化學物經(jīng)皮膚吸收的毒性 ( (求經(jīng)皮求經(jīng)皮LD LD 50 )50 )所需的實驗動物較多，所需的實驗動物較多， 使用家兔、豚鼠不夠經(jīng)使用家兔、豚鼠不夠經(jīng)濟，也常用大濟，也常用大 鼠代替鼠代替5/5/202218二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗經(jīng)皮膚染毒程序經(jīng)皮膚染毒程序 給予受試物前給予受試物前24 h，確定受試部位，

13、確定受試部位 機械或化學脫毛機械或化學脫毛 面積面積10%15%體表面積體表面積 24H后檢查去毛部位有無異?，F(xiàn)象后檢查去毛部位有無異常現(xiàn)象 單位體重相同容積染毒，接觸時間單位體重相同容積染毒，接觸時間 與人實際接觸該化學物的時間相仿與人實際接觸該化學物的時間相仿5/5/202219二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n注射途徑接觸注射途徑接觸: : 常用實驗動物給予受試物的體積常用實驗動物給予受試物的體積(ml)注射方式注射方式 小鼠小鼠 大鼠大鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 狗狗腹腹 腔腔 0.21.0 13 25 510 515肌肌 肉肉 0.10.2 0.20.5 0.20.5 0.51 25靜靜 脈

14、脈 0.20.5 12 15 310 515皮皮 下下 0.10.5 0.51 0.52 13 3105/5/202220二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（四）染毒劑量與分組（四）染毒劑量與分組: 1 1查閱文獻查閱文獻n了解化學毒物的結構式、分子量、常溫常壓下的狀了解化學毒物的結構式、分子量、常溫常壓下的狀態(tài)、熔點、沸點、密度、閃點、揮發(fā)度、蒸氣壓、水態(tài)、熔點、沸點、密度、閃點、揮發(fā)度、蒸氣壓、水溶性和脂溶性等理化特性，生產批號及純度，雜質成溶性和脂溶性等理化特性，生產批號及純度，雜質成分與含量等。分與含量等。n確定使用哪一種計算方法求確定使用哪一種計算方法求LDLD5050，然后再設計劑

15、量，然后再設計劑量分組。分組。LDLD5050的計算方法常用寇氏法、概率單位法、霍的計算方法常用寇氏法、概率單位法、霍思法等。思法等。n找出與受試化學毒物結構與理化性質近似的化學物找出與受試化學毒物結構與理化性質近似的化學物的毒性資料，并以文獻資料中相同的動物種系和相同的毒性資料，并以文獻資料中相同的動物種系和相同接觸途徑所測得的接觸途徑所測得的LDLD5050(LC(LC5050) )值作為受試化學物的預期值作為受試化學物的預期毒性中值。毒性中值。 5/5/202221二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（四）染毒劑量與分組（四）染毒劑量與分組:2 2預試驗預試驗 n設定以此預期值作為待測化學

16、物的中間劑量組，并設定以此預期值作為待測化學物的中間劑量組，并在該劑量的上下各設計在該劑量的上下各設計l l一一2 2個劑量組作為預試驗劑量。個劑量組作為預試驗劑量。n根據(jù)確定的劑量組進行染毒。根據(jù)確定的劑量組進行染毒。n根據(jù)預試驗的死亡資料確定組距。根據(jù)預試驗的死亡資料確定組距。 可根據(jù)以下公式計算出劑量分組：可根據(jù)以下公式計算出劑量分組： i=(lgLDi=(lgLD9090-lgLD-lgLD1010) )(n-1) (n-1) 或：或：i=(lgLDi=(lgLD100100-lgLD-lgLD0 0) )(n-1)(n-1) 式中式中i i為組距為組距( (相鄰的兩個劑量組對數(shù)劑量之

17、差相鄰的兩個劑量組對數(shù)劑量之差) )； n n為設計的劑量組數(shù)。為設計的劑量組數(shù)。5/5/202222二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（四）染毒劑量與分組（四）染毒劑量與分組:3 3正式試驗正式試驗; ; n一般來說、根據(jù)試驗設計所選用的一般來說、根據(jù)試驗設計所選用的LDLD5050計算方法來確定計算方法來確定組數(shù)。例如幾率單位法、寇氏法一般設組數(shù)。例如幾率單位法、寇氏法一般設6 61010個劑量組；個劑量組；霍恩法固定設霍恩法固定設4 4個劑量組。求得個劑量組。求得i i值后以最低劑量組值后以最低劑量組(LD(LD0 0或或LDLD1010) )的對數(shù)劑量加上一個的對數(shù)劑量加上一個i i值

18、，即是第二個劑量組值，即是第二個劑量組的對數(shù)劑量，依此類推直至最高劑量組，查各自的反對的對數(shù)劑量，依此類推直至最高劑量組，查各自的反對數(shù)即得出各組劑量的真實值。數(shù)即得出各組劑量的真實值。 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 nLgLD0 LgLD0+i LgLD0+2i LgLD0+3i LgLD0+4i 5/5/202223二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（五）試驗周期與毒效應觀察五）試驗周期與毒效應觀察1.中毒癥狀中毒癥狀5/5/202224二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（五）試驗周期與毒效應觀察（五）試驗周期與毒效應觀察: 2.體重體重n在觀察試驗動物中毒癥狀的過程中，

19、應同時觀察體在觀察試驗動物中毒癥狀的過程中，應同時觀察體重的變化。重的變化。體重可以反映動物中毒后的整體變化。體重可以反映動物中毒后的整體變化。體重改變的原因很多，若化學毒物刺激或損傷消化體重改變的原因很多，若化學毒物刺激或損傷消化道可出現(xiàn)試驗動物飲食減少甚至拒食，表現(xiàn)為體重道可出現(xiàn)試驗動物飲食減少甚至拒食，表現(xiàn)為體重減輕。若化學毒物引起腹瀉，將影響食物吸收和利減輕。若化學毒物引起腹瀉，將影響食物吸收和利用，體重也會減輕。如果化學毒物影響水的攝取或用，體重也會減輕。如果化學毒物影響水的攝取或腎功能急性損傷，也可能在體重上反映出來。所以，腎功能急性損傷，也可能在體重上反映出來。所以，對存活動物尤

20、其是對低于對存活動物尤其是對低于LDLD5050劑量組的存活動劑量組的存活動物應在觀察期物應在觀察期1414天內稱量其體重的變化以便了天內稱量其體重的變化以便了解受試物引起毒效應的持續(xù)時間。解受試物引起毒效應的持續(xù)時間。 5/5/202225二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（五）試驗周期與毒效應觀察（五）試驗周期與毒效應觀察:3.3.病理檢查及其他指標病理檢查及其他指標: :n急性毒性試驗中，對死亡的動物均應及時進行大體急性毒性試驗中，對死亡的動物均應及時進行大體解剖和病理組織學檢查，肉眼觀察主要臟器的大體解剖和病理組織學檢查，肉眼觀察主要臟器的大體病理變化，如臟器大小、外觀、色澤的變化，有

21、無病理變化，如臟器大小、外觀、色澤的變化，有無充血、出血、水腫或其它改變，對有改變的臟器進充血、出血、水腫或其它改變，對有改變的臟器進行取材做組織病理學檢查。對存活動物在觀察期結行取材做組織病理學檢查。對存活動物在觀察期結束時進行大體病理檢查必要時做組織病理學檢查。束時進行大體病理檢查必要時做組織病理學檢查。根據(jù)試驗需要可進一步擴大觀察項目如體溫、心根據(jù)試驗需要可進一步擴大觀察項目如體溫、心電圖、腦電圖或進行某些生化指標測定等。電圖、腦電圖或進行某些生化指標測定等。5/5/202226二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n（五）試驗周期與毒效應觀察五）試驗周期與毒效應觀察4.死亡和死亡時間死亡和死

22、亡時間n重點觀察和記錄每只動物死亡的時間，特別是重點觀察和記錄每只動物死亡的時間，特別是最早出現(xiàn)死亡的時間以及各個劑量組動物的死最早出現(xiàn)死亡的時間以及各個劑量組動物的死亡數(shù)。分析中毒死亡時間的規(guī)律具有一定意義，亡數(shù)。分析中毒死亡時間的規(guī)律具有一定意義，可為深人研究化學物的毒作用機制提供參考?？蔀樯钊搜芯炕瘜W物的毒作用機制提供參考。 5/5/202227二、急性毒性試驗二、急性毒性試驗n(六六)經(jīng)典急性毒性試驗的局限性經(jīng)典急性毒性試驗的局限性1.消耗的動物量大消耗的動物量大2.獲得的信息有限獲得的信息有限3.測得的測得的LD50僅僅是一個近似值僅僅是一個近似值4.在安全性評價中僅評價動物死亡和簡

23、單在安全性評價中僅評價動物死亡和簡單的癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學、的癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學、血液學及其它化驗檢查所提供的深入細致血液學及其它化驗檢查所提供的深入細致的毒性信息。的毒性信息。5/5/202228外源化學物急性毒性分級（外源化學物急性毒性分級（WHO）毒性分級毒性分級大鼠一次經(jīng)口大鼠一次經(jīng)口LD50 (mg/kg)6只大鼠吸入只大鼠吸入4小時，死小時，死亡亡24只的濃度只的濃度(ppm)兔經(jīng)皮兔經(jīng)皮LD50(/mg/kg)對人可能致死的估計量對人可能致死的估計量g/kg總量總量(g/60kg)劇毒劇毒11051510005/5/202229我國食品毒理急性毒性分

24、級法我國食品毒理急性毒性分級法(1994)急性毒性分級急性毒性分級大鼠經(jīng)口大鼠經(jīng)口LD50(mg/kg)大致相當于大致相當于70kg人的致死量人的致死量6級級(極毒極毒)1稍嘗稍嘗,150001050克克5/5/202230一、一、基本概念基本概念二二、 蓄積毒性試驗方法及其評價蓄積毒性試驗方法及其評價 2 蓄積毒性蓄積毒性5/5/202231 當機體反復多次接觸化學物，化學物當機體反復多次接觸化學物，化學物進入機體的速度進入機體的速度( (或總量或總量) )超過其消除速度超過其消除速度( (或總量或總量) )時，化學物或其代謝產物就有可時，化學物或其代謝產物就有可能在機體內逐漸增加并貯留，這

25、種現(xiàn)象稱能在機體內逐漸增加并貯留，這種現(xiàn)象稱為化學毒物的為化學毒物的蓄積作用蓄積作用(accumulation)(accumulation)。 一、基本概念一、基本概念5/5/202232 蓄積作用實際上有二個含義：蓄積作用實際上有二個含義：物質蓄積物質蓄積(material accumulation)(material accumulation)當實驗動物反復多次接觸化學物后可以用分析方當實驗動物反復多次接觸化學物后可以用分析方法在體內測出物質的原型或代謝產物時，稱為法在體內測出物質的原型或代謝產物時，稱為 。功能蓄積功能蓄積(functional accumulation)(functio

26、nal accumulation)有些化學物在長期接觸后，機體內雖不能測出其有些化學物在長期接觸后，機體內雖不能測出其原型或代謝產物，卻出現(xiàn)了慢性毒性作用，稱之原型或代謝產物，卻出現(xiàn)了慢性毒性作用，稱之為為 。一、基本概念一、基本概念5/5/202233二、蓄積毒性試驗方法及其評價二、蓄積毒性試驗方法及其評價目的：目的： 1.1.化學毒物的化學毒物的蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質基礎蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質基礎，因此因此研究化學毒物在機體內的蓄積性是評價化學毒物能否引起研究化學毒物在機體內的蓄積性是評價化學毒物能否引起潛在慢性毒性的依據(jù)之一，也是衛(wèi)生標準制訂過程選擇安潛在慢性毒性的依據(jù)之一，

27、也是衛(wèi)生標準制訂過程選擇安全系數(shù)的主要依據(jù)。全系數(shù)的主要依據(jù)。 2. 2.蓄積毒性試驗是研究化學毒物基礎毒性的重要內容之一，蓄積毒性試驗是研究化學毒物基礎毒性的重要內容之一，目的是通過試驗求出蓄積系數(shù)目的是通過試驗求出蓄積系數(shù)K K，了解化學毒物蓄積毒性，了解化學毒物蓄積毒性的強弱，的強弱，并為慢性毒性試驗及其他有關毒性試驗的劑量選并為慢性毒性試驗及其他有關毒性試驗的劑量選擇提供參考。擇提供參考。5/5/202234 蓄積系數(shù)法蓄積系數(shù)法 蓄積系數(shù)蓄積系數(shù)(accumulation coefficient)(accumulation coefficient)是多是多次染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)效應次染

28、毒使半數(shù)動物出現(xiàn)效應( (或死亡或死亡) )的累積的累積劑量劑量EDED5050(n)(n)與一次染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)相與一次染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)相同效應同效應( (或死亡或死亡) )的劑量的劑量EDED5050(1)(1)的比值，即：的比值，即：K KEDED5050(n)/ED(n)/ED5050(1)(1)K KLDLD5050(n)/LD(n)/LD5050(1) (1) 二、蓄積毒性試驗方法及其評價二、蓄積毒性試驗方法及其評價5/5/202235 1 1固定劑量法：固定劑量法： 按照常規(guī)方法先求出按照常規(guī)方法先求出LDLD5050，然后選取相同條，然后選取相同條件的件的4040只只( (

29、或更多或更多) )實驗動物，分為兩組，一為實驗動物，分為兩組，一為染毒組，一為對照組，每組至少染毒組，一為對照組，每組至少2020只，雌雄各只，雌雄各半。試驗組在半。試驗組在1 12020l l50LD50LD5050的范圍內選定的范圍內選定一個劑量，每日以固定劑量、定時和相同途徑一個劑量，每日以固定劑量、定時和相同途徑進行染毒進行染毒, ,試驗期間觀察記錄每組動物死亡數(shù)。試驗期間觀察記錄每組動物死亡數(shù)。當試驗組累積發(fā)生一半動物死亡即可終止試驗。當試驗組累積發(fā)生一半動物死亡即可終止試驗。此時，計算累積總接觸劑量此時，計算累積總接觸劑量LDLD5050(n)(n)，根據(jù)，根據(jù)公式計算公式計算K

30、K值。但若接觸劑量已累積達到值。但若接觸劑量已累積達到5 5個個LDLD5050劑量，也可終止試驗。劑量，也可終止試驗。二、蓄積毒性試驗方法及其評價二、蓄積毒性試驗方法及其評價5/5/202236 2 2劑量遞增法：劑量遞增法： 二、蓄積毒性試驗方法及其評價二、蓄積毒性試驗方法及其評價5/5/202237一一 亞慢性毒性作用：亞慢性毒性作用： 亞慢性毒性的概念亞慢性毒性的概念 亞慢性毒性試驗的目的亞慢性毒性試驗的目的 亞慢性毒性試驗的設計亞慢性毒性試驗的設計 二二 慢性毒性作用：慢性毒性作用： 慢性毒性的概念慢性毒性的概念 慢性毒性試驗的目的慢性毒性試驗的目的 慢性毒性試驗設計慢性毒性試驗設計

31、 3 亞慢性和慢性毒性試驗亞慢性和慢性毒性試驗5/5/202238(一一) 概念：概念： 亞慢性毒性亞慢性毒性(subchronic toxicity)是指人是指人 或實驗動物連續(xù)接觸較長時間、較大劑量或實驗動物連續(xù)接觸較長時間、較大劑量的外源化合物所引起的毒性效應。的外源化合物所引起的毒性效應。慢性毒性慢性毒性(chronic toxicity)是指人或實驗是指人或實驗動物長期動物長期(甚至終生甚至終生)反復接觸低劑量的化反復接觸低劑量的化學毒物所產生的毒性效應。學毒物所產生的毒性效應。一、亞慢性和慢性毒性試驗的概念、目的一、亞慢性和慢性毒性試驗的概念、目的5/5/202239（二）試驗目的

32、：（二）試驗目的： 1. 1.確定受試物亞慢性和慢性毒性的效應譜，對在急性及亞急性毒確定受試物亞慢性和慢性毒性的效應譜，對在急性及亞急性毒 性試驗中發(fā)現(xiàn)的毒作用提供新的信息，并發(fā)現(xiàn)在急性及亞急性毒性試驗中發(fā)現(xiàn)的毒作用提供新的信息，并發(fā)現(xiàn)在急性及亞急性毒性試驗中未發(fā)現(xiàn)的毒作用；性試驗中未發(fā)現(xiàn)的毒作用； 2.2.研究受試物亞慢性和慢性毒作用的靶器官；研究受試物亞慢性和慢性毒作用的靶器官； 3.3.研究受試物亞慢性和慢性毒性劑量研究受試物亞慢性和慢性毒性劑量反應反應( (效應效應) )關系，確定其觀關系，確定其觀察到有害作用的最低劑量察到有害作用的最低劑量(LOAEL)(LOAEL)和未觀察到有害作

33、用的劑量和未觀察到有害作用的劑量（NOAELNOAEL），提出此受試物的安全限量參考值），提出此受試物的安全限量參考值; ; 4. 4.亞慢性毒性試驗為慢性毒性試驗的劑量設計及觀察指標選擇提亞慢性毒性試驗為慢性毒性試驗的劑量設計及觀察指標選擇提 供依據(jù)供依據(jù); ; 5. 5.確定不同動物物種對受試物亞慢性和慢性毒效應的差異，為將確定不同動物物種對受試物亞慢性和慢性毒效應的差異，為將毒性研究結果外推到人提供依據(jù)。毒性研究結果外推到人提供依據(jù)。一、亞慢性和慢性毒性試驗的概念、目的一、亞慢性和慢性毒性試驗的概念、目的5/5/202240 二、亞慢性和慢性毒性試驗設計二、亞慢性和慢性毒性試驗設計 （一

34、）實驗動物選擇（一）實驗動物選擇 亞慢性毒性試驗亞慢性毒性試驗 年齡：年齡：大鼠大鼠80100g 狗狗 812月月 小鼠小鼠1015g數(shù)量：數(shù)量：小動物小動物20 大動物大動物6性別：性別：雌雄各半雌雄各半 慢性毒性試驗慢性毒性試驗年齡：年齡：大鼠大鼠 5070g 狗狗 8月月 小鼠小鼠 初斷乳初斷乳數(shù)量：數(shù)量：小動物小動物40 大動物大動物8性別：性別：雌雄各半雌雄各半5/5/202241（二）實驗動物染毒期限：（二）實驗動物染毒期限：工業(yè)毒理學工業(yè)毒理學 36個月個月食品毒理學食品毒理學 6個月個月1年年環(huán)境毒理學環(huán)境毒理學 6個月個月1年年致癌試驗致癌試驗 接近或等于動物的預期壽命接近或

35、等于動物的預期壽命二、亞慢性和慢性毒性試驗設計二、亞慢性和慢性毒性試驗設計5/5/202242二、亞慢性和慢性毒性試驗設計二、亞慢性和慢性毒性試驗設計（二）實驗動物染毒期限（二）實驗動物染毒期限5/5/202243 經(jīng)消化道經(jīng)消化道經(jīng)呼吸道經(jīng)呼吸道經(jīng)皮膚經(jīng)皮膚 二、亞慢性和慢性毒性試驗設計二、亞慢性和慢性毒性試驗設計（三）實驗動物染毒方式（三）實驗動物染毒方式5/5/202244亞慢性毒性的劑量選亞慢性毒性的劑量選擇擇n陰性對照組陰性對照組n低劑量組低劑量組n中劑量組中劑量組n高劑量組高劑量組 急性毒性的閾劑量急性毒性的閾劑量 1/201/5 LD50n組距：組距：310倍，最倍，最低不小于低

36、不小于2倍倍慢性毒性的劑量選擇慢性毒性的劑量選擇n陰性對照組陰性對照組n低劑量組低劑量組n中劑量組中劑量組n高劑量組高劑量組 亞慢性閾劑量或其亞慢性閾劑量或其1/51/2 1/10 LD50n組距：組距：25倍，最低不小于倍，最低不小于2倍倍二、亞慢性和慢性毒性試驗設計二、亞慢性和慢性毒性試驗設計（四）試驗分組和劑量設計（四）試驗分組和劑量設計5/5/202245（五）觀察指標（五）觀察指標二、亞慢性和慢性毒性試驗設計二、亞慢性和慢性毒性試驗設計5/5/2022461.一般綜合性觀察指標：一般綜合性觀察指標：n外觀體征、行為活動、體重、食物利用率外觀體征、行為活動、體重、食物利用率2. 一般化

37、驗指標：一般化驗指標：3. 系統(tǒng)尸解和病理學檢查：系統(tǒng)尸解和病理學檢查：n（1）臟器濕重、臟器系數(shù)（臟器濕重、臟器系數(shù)（臟臟/ /體比值體比值 ）（如肝如肝/ /體比，即體比，即( (全肝濕重全肝濕重/ /體重體重) ) 100100 ）n（2）病理學檢查病理學檢查4.特異性指標：特異性指標：二、亞慢性和慢性毒性試驗設計二、亞慢性和慢性毒性試驗設計（五）觀察指標（五）觀察指標5/5/202247二、亞慢性和慢性毒性試驗設計二、亞慢性和慢性毒性試驗設計5/5/2022484 局部毒性作用局部毒性作用觀察項目觀察項目評分評分 紅斑與焦茄形成紅斑與焦茄形成 無紅斑無紅斑0 很輕微紅斑很輕微紅斑1 易于察覺的紅斑易于察覺的紅斑2 中度至嚴重紅斑中度至嚴重紅斑3 嚴重紅斑至輕度焦茄形成嚴重紅斑至輕度焦茄形成4水