第四章 中藥制劑中各類化學(xué)成分分析0

1、 第四章中藥制劑中各類化學(xué)成分分析中藥制劑中各類化學(xué)成分分析藥物分析教研室第一節(jié)第一節(jié) 生物堿類成分分析生物堿類成分分析 生物堿是生物界除生物體必須的含氮化合物（如氨基酸、生物堿是生物界除生物體必須的含氮化合物（如氨基酸、蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)和B B族維生素等）之外的所有含氮有機(jī)化合物，因族維生素等）之外的所有含氮有機(jī)化合物，因其結(jié)構(gòu)中氮原子上的未共享電子對而大多具有堿性。其結(jié)構(gòu)中氮原子上的未共享電子對而大多具有堿性。 生物堿絕大多數(shù)具有顯著的生物活性生物堿絕大多數(shù)具有顯著的生物活性, ,因此中藥制劑中因此中藥制劑中有含有生物堿類成分的中藥時(shí)，常選擇該中藥含有的生物有含有生物堿類成分的中藥時(shí)，常選擇

2、該中藥含有的生物堿成分作為定性定量的依據(jù)。堿成分作為定性定量的依據(jù)。 一、一、 生物堿類成分的主要性質(zhì)及分析特征生物堿類成分的主要性質(zhì)及分析特征（一）結(jié)構(gòu)特征（一）結(jié)構(gòu)特征 生物堿大多由生物堿大多由C C、H H、N N、O O元素組成，極少數(shù)分子中尚元素組成，極少數(shù)分子中尚含有其他元素；大多結(jié)構(gòu)復(fù)雜，結(jié)構(gòu)類型較多含有其他元素；大多結(jié)構(gòu)復(fù)雜，結(jié)構(gòu)類型較多. . 結(jié)構(gòu)中的氮原子有多種形式：脂氮、芳氮；季胺、叔結(jié)構(gòu)中的氮原子有多種形式：脂氮、芳氮；季胺、叔胺、仲胺及伯胺；游離狀態(tài)和與酸結(jié)合狀態(tài)；還有以氮氧胺、仲胺及伯胺；游離狀態(tài)和與酸結(jié)合狀態(tài)；還有以氮氧配位鍵形式存在的。配位鍵形式存在的。 此外，

3、結(jié)構(gòu)中除烷烴、羥基取代外還有羧基、酚羥基此外，結(jié)構(gòu)中除烷烴、羥基取代外還有羧基、酚羥基等酸性官能團(tuán)及酯鍵的取代。等酸性官能團(tuán)及酯鍵的取代。 （二）理化性質(zhì)（二）理化性質(zhì)1 1、物理性狀、物理性狀 多數(shù)生物堿為結(jié)晶型固體，少數(shù)為無定型粉末，還有多數(shù)生物堿為結(jié)晶型固體，少數(shù)為無定型粉末，還有一些小分子生物堿為液體，例如檳榔堿、菸堿等；液體一些小分子生物堿為液體，例如檳榔堿、菸堿等；液體狀的生物堿及個(gè)別小分子生物堿尚有揮發(fā)性甚至升華性，狀的生物堿及個(gè)別小分子生物堿尚有揮發(fā)性甚至升華性，如麻黃堿具有揮發(fā)性、咖啡因具有升華性等。如麻黃堿具有揮發(fā)性、咖啡因具有升華性等。 一般生物堿為無色或白色，但結(jié)構(gòu)中具

4、有較長共軛體一般生物堿為無色或白色，但結(jié)構(gòu)中具有較長共軛體系，并有助色團(tuán)的，可顯不同顏色。系，并有助色團(tuán)的，可顯不同顏色。 生物堿結(jié)構(gòu)中如有手性碳原子或?yàn)槭中苑肿拥木哂行飰A結(jié)構(gòu)中如有手性碳原子或?yàn)槭中苑肿拥木哂行庑裕⒋蠖嗯c生物堿的生理活性有關(guān)，通常左旋體比光性，并大多與生物堿的生理活性有關(guān)，通常左旋體比右旋體生理活性強(qiáng)。右旋體生理活性強(qiáng)。 2. 2. 溶解性溶解性 由于生物堿結(jié)構(gòu)復(fù)雜，生物堿的溶解性也是多樣化。由于生物堿結(jié)構(gòu)復(fù)雜，生物堿的溶解性也是多樣化。 大多數(shù)生物堿成分極性較小，游離狀態(tài)下難溶于水大多數(shù)生物堿成分極性較小，游離狀態(tài)下難溶于水, ,易易溶氯仿、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有

5、機(jī)溶劑，溶氯仿、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有機(jī)溶劑， 與酸結(jié)合生成生物堿鹽后水溶性增加，但與生物堿結(jié)合與酸結(jié)合生成生物堿鹽后水溶性增加，但與生物堿結(jié)合的酸不同，生成的鹽水溶性也有差異，一般含氧無機(jī)酸及的酸不同，生成的鹽水溶性也有差異，一般含氧無機(jī)酸及小分子有機(jī)酸的生物堿鹽水溶性較大。小分子有機(jī)酸的生物堿鹽水溶性較大。 季銨型生物堿、有氮氧配位鍵的生物堿易溶于水，季銨型生物堿、有氮氧配位鍵的生物堿易溶于水， 液體生物堿及一些小分子固體生物堿則既溶于水也可溶于液體生物堿及一些小分子固體生物堿則既溶于水也可溶于有機(jī)溶劑。有機(jī)溶劑。 含有酸性官能團(tuán)或酯鍵的生物堿還可溶于一些堿液或熱苛含有酸性官能團(tuán)或酯鍵的

6、生物堿還可溶于一些堿液或熱苛性堿液。性堿液。 3. 3. 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) 大多數(shù)生物堿在酸性水溶液中可以與某些試劑生成大多數(shù)生物堿在酸性水溶液中可以與某些試劑生成不溶于水的復(fù)鹽或分子復(fù)合物，這些試劑稱生物堿沉淀不溶于水的復(fù)鹽或分子復(fù)合物，這些試劑稱生物堿沉淀試劑。試劑。 生物堿的沉淀試劑根據(jù)其組成有碘化物復(fù)鹽、重金生物堿的沉淀試劑根據(jù)其組成有碘化物復(fù)鹽、重金屬鹽和大分子酸三大類。屬鹽和大分子酸三大類。 生物堿的沉淀反應(yīng)可以檢查中藥制劑中生物堿的存生物堿的沉淀反應(yīng)可以檢查中藥制劑中生物堿的存在，當(dāng)某些沉淀試劑與生物堿生成的沉淀組成恒定時(shí)，在，當(dāng)某些沉淀試劑與生物堿生成的沉淀組成恒定時(shí)，還可以用

7、于中藥制劑中生物堿成分的含量測定。還可以用于中藥制劑中生物堿成分的含量測定。 4 4顯色反應(yīng)顯色反應(yīng) 生物堿與一些濃無機(jī)酸為主的試劑反應(yīng)產(chǎn)生不同生物堿與一些濃無機(jī)酸為主的試劑反應(yīng)產(chǎn)生不同的顏色，這些呈色反應(yīng)多用于檢識和區(qū)別純品生物堿，的顏色，這些呈色反應(yīng)多用于檢識和區(qū)別純品生物堿，而較少用于中藥制劑中生物堿成分的分析。而較少用于中藥制劑中生物堿成分的分析。 生物堿在一定生物堿在一定pHpH條件下可與一些酸性染料（多為條件下可與一些酸性染料（多為磺酸肽類）生成有色絡(luò)合物，可被氯仿等有機(jī)溶劑定磺酸肽類）生成有色絡(luò)合物，可被氯仿等有機(jī)溶劑定量提出量提出. . 還有些結(jié)構(gòu)中具有酯鍵的酯堿如烏頭堿等可與

8、異還有些結(jié)構(gòu)中具有酯鍵的酯堿如烏頭堿等可與異羥肟酸鐵試劑反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色，這些特點(diǎn)可用于中藥羥肟酸鐵試劑反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色，這些特點(diǎn)可用于中藥制劑中生物堿成分的分析。制劑中生物堿成分的分析。5 5堿性堿性 大多數(shù)生物堿呈堿性反應(yīng)，能使紅色石蕊試紙變藍(lán)。生大多數(shù)生物堿呈堿性反應(yīng)，能使紅色石蕊試紙變藍(lán)。生物堿之所以能顯堿性，是因?yàn)樗鼈兎肿又械由系墓码娢飰A之所以能顯堿性，是因?yàn)樗鼈兎肿又械由系墓码娮訉|(zhì)子有一定程度的親和力，因而表現(xiàn)出堿性。子對對質(zhì)子有一定程度的親和力，因而表現(xiàn)出堿性。6 6紫外光譜特征紫外光譜特征 結(jié)構(gòu)中具有共軛體系的生物堿均有紫外吸收，其中包括結(jié)構(gòu)中具有共軛體系的生物堿均有紫

9、外吸收，其中包括結(jié)構(gòu)母核即為共軛體系的和只有部分結(jié)構(gòu)為共軛系統(tǒng)的。結(jié)構(gòu)母核即為共軛體系的和只有部分結(jié)構(gòu)為共軛系統(tǒng)的。 紫外光譜的吸收峰位置除與其他化合物一樣與共軛系統(tǒng)紫外光譜的吸收峰位置除與其他化合物一樣與共軛系統(tǒng)中助色團(tuán)的種類、位置、數(shù)量有關(guān)外，需要特別指出的是，中助色團(tuán)的種類、位置、數(shù)量有關(guān)外，需要特別指出的是，結(jié)構(gòu)中的氮原子與發(fā)色團(tuán)直接連接或參與發(fā)色團(tuán)的生物堿，結(jié)構(gòu)中的氮原子與發(fā)色團(tuán)直接連接或參與發(fā)色團(tuán)的生物堿，其吸收峰位置還與測定時(shí)溶劑的其吸收峰位置還與測定時(shí)溶劑的pHpH有關(guān)。有關(guān)。 二、生物堿類成分分析方法二、生物堿類成分分析方法（一）單體生物堿分析（一）單體生物堿分析1 1、定性

10、鑒別、定性鑒別 沉淀反應(yīng)是生物堿理化鑒別常用方法，主要利用生物沉淀反應(yīng)是生物堿理化鑒別常用方法，主要利用生物堿能與一些試劑生成沉淀這一特性。此反應(yīng)一般在酸性水堿能與一些試劑生成沉淀這一特性。此反應(yīng)一般在酸性水溶液中進(jìn)行。溶液中進(jìn)行。2 2、單體生物堿的含量測定、單體生物堿的含量測定 （1 1）薄層色譜法）薄層色譜法 此法簡便、快捷。選用的吸附劑、展開劑及顯色方法與鑒別嚴(yán)格，此法簡便、快捷。選用的吸附劑、展開劑及顯色方法與鑒別嚴(yán)格，但比鑒別嚴(yán)格。但比鑒別嚴(yán)格。 （2 2）高效液相色譜法）高效液相色譜法 可用液可用液- -液分配色譜法、液液分配色譜法、液- -固吸附固吸附 色譜法以及離子交換色譜法

11、。色譜法以及離子交換色譜法。 （3 3）氣相色譜法）氣相色譜法（二）中藥中生物堿分析（二）中藥中生物堿分析 1 1、總堿分析、總堿分析（1 1）定性鑒別）定性鑒別 由于中藥制劑中成分復(fù)雜，有些成分如蛋白質(zhì)、多肽由于中藥制劑中成分復(fù)雜，有些成分如蛋白質(zhì)、多肽和鞣質(zhì)等也可與試劑生成沉淀而造成假陽性結(jié)果，因此，和鞣質(zhì)等也可與試劑生成沉淀而造成假陽性結(jié)果，因此，制備樣品供試液時(shí)必須凈化處理，除去干擾成分，方能用制備樣品供試液時(shí)必須凈化處理，除去干擾成分，方能用沉淀反應(yīng)進(jìn)行中藥制劑中生物堿類成分的鑒別沉淀反應(yīng)進(jìn)行中藥制劑中生物堿類成分的鑒別. . （2 2）總生物堿的含量測定）總生物堿的含量測定 化學(xué)分

12、析法化學(xué)分析法 化學(xué)分析法包括重量分析法和容量分析法。目前主要化學(xué)分析法包括重量分析法和容量分析法。目前主要使用酸堿滴定法。使用酸堿滴定法。 強(qiáng)堿滴定生物堿鹽時(shí)強(qiáng)堿滴定生物堿鹽時(shí), ,在在70%-90%70%-90%的乙醇介質(zhì)中終點(diǎn)比的乙醇介質(zhì)中終點(diǎn)比在水中明顯在水中明顯, ,因此常將生物堿鹽溶于因此常將生物堿鹽溶于90%90%乙醇乙醇, ,再用標(biāo)準(zhǔn)堿再用標(biāo)準(zhǔn)堿乙醇液滴定乙醇液滴定. . 酸堿滴定法指示反應(yīng)終點(diǎn)可用指示劑和各種電位法。酸堿滴定法指示反應(yīng)終點(diǎn)可用指示劑和各種電位法。 分光光度法分光光度法 目前多用單波長光度法，測定波長可選用待測生物堿目前多用單波長光度法，測定波長可選用待測生物堿

13、成分本身的吸收波長，也可加入某些試劑如亞硝酸鈉試劑、成分本身的吸收波長，也可加入某些試劑如亞硝酸鈉試劑、雷氏鹽試劑及酸性染料等反應(yīng)顯色后用可見光波測定。雷氏鹽試劑及酸性染料等反應(yīng)顯色后用可見光波測定。 常用方法：直接測定、離子對萃取比色法常用方法：直接測定、離子對萃取比色法 直接測定直接測定 不經(jīng)過化學(xué)反應(yīng)不經(jīng)過化學(xué)反應(yīng), ,利用生物堿物質(zhì)自身的光吸收直接進(jìn)利用生物堿物質(zhì)自身的光吸收直接進(jìn)行比色測定的方法行比色測定的方法; ; 一般用于藥味較少、干擾不大的中藥制劑中總生物堿一般用于藥味較少、干擾不大的中藥制劑中總生物堿的含量測定的含量測定; ;2 2、離子對萃取比色法、離子對萃取比色法 酸性染

14、料比色法酸性染料比色法 應(yīng)用本法的關(guān)鍵在于介質(zhì)的應(yīng)用本法的關(guān)鍵在于介質(zhì)的pHpH、酸性染料的種類和有機(jī)溶、酸性染料的種類和有機(jī)溶劑的選擇劑的選擇; ; 常用的酸性染料有甲基橙、溴麝香草酚蘭（常用的酸性染料有甲基橙、溴麝香草酚蘭（BTBBTB）和溴甲）和溴甲酚綠等；酚綠等； PHPH的選擇要根據(jù)染料的性質(zhì)及生物堿的堿性的選擇要根據(jù)染料的性質(zhì)及生物堿的堿性(pKa)(pKa)大小來大小來確定確定; ; 選擇有機(jī)溶劑的原則是根據(jù)離子對與有機(jī)相能否形成氫鍵選擇有機(jī)溶劑的原則是根據(jù)離子對與有機(jī)相能否形成氫鍵以及形成氫鍵能力的強(qiáng)弱而定以及形成氫鍵能力的強(qiáng)弱而定. . 氯仿、二氯甲烷與離子對形成氫鍵氯仿、二

15、氯甲烷與離子對形成氫鍵, ,有中等程度的提取率有中等程度的提取率, ,且選擇性也較好且選擇性也較好, ,故是常故是常 用的提取溶劑用的提取溶劑. . 3 3、高效液相色譜法、高效液相色譜法 以反相高效液相色譜應(yīng)用較多。在以反相高效液相色譜應(yīng)用較多。在反相高效液相色譜中反相高效液相色譜中, ,由于硅膠表面殘由于硅膠表面殘留硅醇基的影響留硅醇基的影響, ,使生物堿分析易產(chǎn)生使生物堿分析易產(chǎn)生保留時(shí)間延長、峰形變寬、拖尾保留時(shí)間延長、峰形變寬、拖尾. .可采可采取改進(jìn)流動相、固定相等措施以克服游取改進(jìn)流動相、固定相等措施以克服游離硅醇基的影響離硅醇基的影響, ,滿足定量定量分析的要求滿足定量定量分析

16、的要求. . 中藥制劑中生物堿成分時(shí)行高效液相色譜法測定時(shí)中藥制劑中生物堿成分時(shí)行高效液相色譜法測定時(shí), ,使使用較多的是紫外檢測器用較多的是紫外檢測器. . 4 4、氣相色譜法、氣相色譜法 只適用于有揮發(fā)性的、只適用于有揮發(fā)性的、遇熱不分解的生物堿類遇熱不分解的生物堿類; ;生生物堿鹽在急速加熱過程中物堿鹽在急速加熱過程中產(chǎn)生的酸對色譜柱和檢測產(chǎn)生的酸對色譜柱和檢測器不利器不利, ,應(yīng)該注意應(yīng)該注意. . 制備供試品溶液時(shí)一般應(yīng)采用冷提取制備供試品溶液時(shí)一般應(yīng)采用冷提取, ,凈化過程凈化過程也要避免加熱也要避免加熱, ,以防成分流失以防成分流失, ,最后需用氯仿等低極最后需用氯仿等低極性有機(jī)

17、溶劑為溶媒制備成供試液性有機(jī)溶劑為溶媒制備成供試液. . 2 2、各生物堿組分分析、各生物堿組分分析 根據(jù)總生物堿中各生物堿的性質(zhì)差異，如堿根據(jù)總生物堿中各生物堿的性質(zhì)差異，如堿性差異、極性差異。通常采用色譜法對每種生物性差異、極性差異。通常采用色譜法對每種生物堿進(jìn)行分離后分析堿進(jìn)行分離后分析（三）應(yīng)用示例（三）應(yīng)用示例戊已丸中生物堿的含量測定戊已丸中生物堿的含量測定處方組成：黃連、吳茱萸（制）、白芍（炒）。處方組成：黃連、吳茱萸（制）、白芍（炒）。取本品粉末（過三號篩）取本品粉末（過三號篩）0.7-0.9g0.7-0.9g，精密稱定，置索，精密稱定，置索氏提取器中，加鹽酸氏提取器中，加鹽酸-

18、 -甲醇（甲醇（1 1：100100）適量，加熱回）適量，加熱回流至提取液無色，提取液濃縮后移至流至提取液無色，提取液濃縮后移至25ml25ml量瓶中，加量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取5ml5ml，置氧化鋁柱，置氧化鋁柱（內(nèi)徑約（內(nèi)徑約0.9cm0.9cm，中性氧化鋁，中性氧化鋁5g5g，濕法裝柱，用乙醇，濕法裝柱，用乙醇30ml30ml預(yù)洗）上，用乙醇預(yù)洗）上，用乙醇35ml35ml洗脫。收集洗脫液，置洗脫。收集洗脫液，置50ml50ml量瓶中，加乙醇稀釋到刻度，搖勻，照分光光度量瓶中，加乙醇稀釋到刻度，搖勻，照分光光度法，在法，在345nm345nm

19、處測定吸收度，按鹽酸小處測定吸收度，按鹽酸小糪糪堿的吸收系堿的吸收系數(shù)數(shù)728728計(jì)算，即得。本品按干燥品計(jì)算，每計(jì)算，即得。本品按干燥品計(jì)算，每1g1g含生物含生物堿以鹽酸小堿以鹽酸小糪糪堿堿( (C20H18ClNO4) )計(jì)，不得少于計(jì)，不得少于30mg30mg。 第二節(jié)第二節(jié) 蒽醌類成分分析蒽醌類成分分析一、概述一、概述 中藥中醌類化合物主要有苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四種類中藥中醌類化合物主要有苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四種類型。型。 其中以蒽醌類化合物最為多見，包括蒽醌及其不同還原程其中以蒽醌類化合物最為多見，包括蒽醌及其不同還原程度的產(chǎn)物和二聚物，如蒽酚、氧化蒽酚、蒽酮、二蒽酮、度的產(chǎn)

20、物和二聚物，如蒽酚、氧化蒽酚、蒽酮、二蒽酮、二蒽醌等。二蒽醌等。 這些化合物在中藥中可游離存在，也可與糖結(jié)合成苷，稱這些化合物在中藥中可游離存在，也可與糖結(jié)合成苷，稱為蒽苷。為蒽苷。 二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)類型及特征（一）結(jié)構(gòu)類型及特征苯醌類苯醌類 苯醌類化合物從結(jié)構(gòu)上可分為鄰苯醌及對苯醌苯醌類化合物從結(jié)構(gòu)上可分為鄰苯醌及對苯醌兩大類。因前者不穩(wěn)定，故天然存在的苯醌化兩大類。因前者不穩(wěn)定，故天然存在的苯醌化合物多為對苯醌的衍生物，且在醌核上多有合物多為對苯醌的衍生物，且在醌核上多有-OH-OH、-OCH3-OCH3、-CH3-CH3等基團(tuán)或更長的烴類側(cè)鏈。等基團(tuán)

21、或更長的烴類側(cè)鏈。 OO123456OO123456 對苯醌對苯醌 鄰苯醌鄰苯醌 2 2、萘醌類、萘醌類 萘醌化合物從結(jié)構(gòu)上考慮可以有萘醌化合物從結(jié)構(gòu)上考慮可以有(1,4)(1,4)、(1,2)(1,2)及及amphi(2,6)amphi(2,6)三種類型。但迄今為止從自然界得到的幾乎均為三種類型。但迄今為止從自然界得到的幾乎均為-萘醌類。萘醌類。OO12345678910OO12345678910OO -（1 1，4 4）萘醌）萘醌 -（1 1，2 2）萘醌）萘醌 amphi-(2,6)amphi-(2,6)萘醌萘醌3 3、菲醌類、菲醌類天然菲醌衍生物包括鄰醌（天然菲醌衍生物包括鄰醌（A A

22、）及對醌（）及對醌（B B）兩種類型。）兩種類型。21OORROOOHRO（A） （B）4 4、蒽醌類、蒽醌類 蒽醌類成分包括蒽醌衍生物及其不同還原程度的產(chǎn)蒽醌類成分包括蒽醌衍生物及其不同還原程度的產(chǎn)物，如氧化蒽酚、蒽酚、蒽酮及蒽酮的二聚物等。物，如氧化蒽酚、蒽酚、蒽酮及蒽酮的二聚物等。OO123456784a9a8a10a910OOHOOOHHOOOH蒽醌蒽醌 氧化蒽酚氧化蒽酚 蒽酮蒽酮 蒽酚蒽酚理化性質(zhì)理化性質(zhì)1 1、溶解性、溶解性苯醌及萘醌多以游離狀態(tài)存在；而蒽醌類則苯醌及萘醌多以游離狀態(tài)存在；而蒽醌類則往往結(jié)合成苷存在于植物體中；往往結(jié)合成苷存在于植物體中；游離的醌類多具有升華性；游離

23、的醌類多具有升華性；小分子的苯醌及萘醌類具有揮發(fā)性，能隨水小分子的苯醌及萘醌類具有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾，可據(jù)此進(jìn)行提取、精制工作。蒸氣蒸餾，可據(jù)此進(jìn)行提取、精制工作。游離醌類多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有游離醌類多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有機(jī)溶劑，微溶于或不溶于水。機(jī)溶劑，微溶于或不溶于水。結(jié)合成苷后極性增大，易溶于甲醇、乙醇中，結(jié)合成苷后極性增大，易溶于甲醇、乙醇中，在熱水中也可溶解，幾乎不溶于乙醚、苯、在熱水中也可溶解，幾乎不溶于乙醚、苯、氯仿等非極性溶劑中。氯仿等非極性溶劑中。 2 2、酸堿性、酸堿性 蒽醌類化合物分子中多具有酚羥基，蒽醌類化合物分子中多具有酚羥基，故具有一定酸性，在

24、堿性水溶液中易溶，故具有一定酸性，在堿性水溶液中易溶，但加酸酸化時(shí)又可重新沉淀析出，所謂但加酸酸化時(shí)又可重新沉淀析出，所謂堿提取堿提取酸沉淀即是根據(jù)這個(gè)道理進(jìn)行酸沉淀即是根據(jù)這個(gè)道理進(jìn)行的。的。 根據(jù)以上性質(zhì)，醌類化合物的提取可根據(jù)以上性質(zhì)，醌類化合物的提取可采用堿提取采用堿提取- -酸沉淀法。酸沉淀法。 3 3、顯色反應(yīng)、顯色反應(yīng) 醌類的顏色反應(yīng)主要取決于其氧化還原性質(zhì)以及存在的醌類的顏色反應(yīng)主要取決于其氧化還原性質(zhì)以及存在的酚羥基的性質(zhì)。酚羥基的性質(zhì)。堿性條件下的呈色反應(yīng)：羥基蒽醌類在堿性溶液中會引起堿性條件下的呈色反應(yīng)：羥基蒽醌類在堿性溶液中會引起顏色改變并加深。顏色改變并加深。與金屬離

25、子的反應(yīng)：在蒽醌類化合物結(jié)構(gòu)中，如果有與金屬離子的反應(yīng)：在蒽醌類化合物結(jié)構(gòu)中，如果有-酚羥基或具有鄰位二酚羥基時(shí)，則可與酚羥基或具有鄰位二酚羥基時(shí)，則可與Pb2+Pb2+、Mg2+Mg2+等金屬等金屬離子形成絡(luò)合物。與離子形成絡(luò)合物。與Pb2+Pb2+形成的絡(luò)合物在一定形成的絡(luò)合物在一定pHpH條件下能條件下能沉淀析出，故可用于該化合物的精制。沉淀析出，故可用于該化合物的精制。與對亞硝基二甲基苯胺反應(yīng)：與對亞硝基二甲基苯胺反應(yīng)：9 9位或位或1010位未取代的羥基蒽位未取代的羥基蒽酮類化合物，尤其是酮類化合物，尤其是1 1，8-8-二羥基衍生物，酮基對位的亞甲二羥基衍生物，酮基對位的亞甲基上的

26、氫很活潑，可與對亞硝基二甲基苯胺反應(yīng)，縮合產(chǎn)基上的氫很活潑，可與對亞硝基二甲基苯胺反應(yīng)，縮合產(chǎn)生各種顏色。生各種顏色。 三、定性鑒別三、定性鑒別1 1、顯色反應(yīng)、顯色反應(yīng) 將中藥制劑用適當(dāng)方法提取分離，制成供試品液，將中藥制劑用適當(dāng)方法提取分離，制成供試品液，利用堿性條件下的呈色反應(yīng)或醋酸鎂顯色反應(yīng)等可對利用堿性條件下的呈色反應(yīng)或醋酸鎂顯色反應(yīng)等可對羥基蒽醌類成分進(jìn)行鑒別。羥基蒽醌類成分進(jìn)行鑒別。2 2、升華法、升華法 游離的蒽醌及其他醌類衍生物多具有升華性。中游離的蒽醌及其他醌類衍生物多具有升華性。中藥制劑中如含有這類成分量較大，可采用升華法得到藥制劑中如含有這類成分量較大，可采用升華法得到

27、升華物，可見光下觀察或加堿性試液顯色定性。如大升華物，可見光下觀察或加堿性試液顯色定性。如大黃流浸膏的鑒別。黃流浸膏的鑒別。3 3、薄層鑒別、薄層鑒別1 1）吸附劑：多用硅膠）吸附劑：多用硅膠2 2）展開劑：）展開劑：A A：乙酸乙酯：乙酸乙酯- -甲醇甲醇- -水（水（100100：16.516.5：13.513.5或相近的比或相近的比例），適于他離蒽醌苷元和蒽醌苷。例），適于他離蒽醌苷元和蒽醌苷。 B B：正丙醇：正丙醇- -乙酸乙酯乙酸乙酯- -水（水（4 4：4 4：3 3）和異丙醇）和異丙醇- -乙酸乙酯乙酸乙酯- -水（水（9 9：9 9：4 4），適于分離番瀉苷和二蒽酮苷），適于

28、分離番瀉苷和二蒽酮苷 C C：不含水或甲醇的混合溶媒適合于他離蒽醌類的苷元。：不含水或甲醇的混合溶媒適合于他離蒽醌類的苷元。3 3）顯色方法：主要有噴堿性試劑或醋酸鎂甲醇液、氨氣）顯色方法：主要有噴堿性試劑或醋酸鎂甲醇液、氨氣熏及在紫外燈下觀察熒光，亦可在可見光下直接觀察色熏及在紫外燈下觀察熒光，亦可在可見光下直接觀察色斑。斑。 四、含量測定四、含量測定蒽醌類成分含量測定蒽醌類成分含量測定1 1、游離蒽醌的測定、游離蒽醌的測定 中藥中含有游離蒽醌的量一般不高，且為脂溶性的，故此中藥中含有游離蒽醌的量一般不高，且為脂溶性的，故此部分另用弱極性溶劑如乙醚、氯仿等提取后加堿比色測定。部分另用弱極性溶

29、劑如乙醚、氯仿等提取后加堿比色測定。 2 2、結(jié)合蒽醌的測定、結(jié)合蒽醌的測定通常是取游離蒽醌測定項(xiàng)下的藥渣將苷提出，水解成苷元后通常是取游離蒽醌測定項(xiàng)下的藥渣將苷提出，水解成苷元后再測定；再測定；將藥渣先行酸水解，然后用非極性溶劑提取苷元后測定；將藥渣先行酸水解，然后用非極性溶劑提取苷元后測定；取待測樣品先行酸水解，然后用非極性溶劑提取苷元后測定，取待測樣品先行酸水解，然后用非極性溶劑提取苷元后測定，其結(jié)果為總蒽醌含量，從中減去游離蒽醌含量，即得結(jié)合蒽其結(jié)果為總蒽醌含量，從中減去游離蒽醌含量，即得結(jié)合蒽醌的含量。醌的含量。 3 3、蒽醌類單體成分的測定、蒽醌類單體成分的測定中藥制劑中蒽醌類單體

30、成分的測定一般要將樣品水解中藥制劑中蒽醌類單體成分的測定一般要將樣品水解后再進(jìn)行測定，測定方法主要有薄層掃描法和高效液相后再進(jìn)行測定，測定方法主要有薄層掃描法和高效液相色譜法。色譜法。 薄層掃描法為蒽醌類成分常用定量分析方法，經(jīng)層析薄層掃描法為蒽醌類成分常用定量分析方法，經(jīng)層析分離后，可在可見光、紫外光及熒光下掃描測定。分離后，可在可見光、紫外光及熒光下掃描測定。 蒽醌類成分在紫外及可見光下均有強(qiáng)吸收，利用高效蒽醌類成分在紫外及可見光下均有強(qiáng)吸收，利用高效液相色譜液相色譜- -紫外可見光檢測器測定蒽醌類單體成分，具紫外可見光檢測器測定蒽醌類單體成分，具有靈敏、準(zhǔn)確、簡便等特點(diǎn)。在含蒽醌類化合物

31、的中藥有靈敏、準(zhǔn)確、簡便等特點(diǎn)。在含蒽醌類化合物的中藥制劑分析中應(yīng)用日趨增多。制劑分析中應(yīng)用日趨增多。第三節(jié)第三節(jié) 黃酮類成分分析黃酮類成分分析一、概述一、概述 黃酮類化合物（黃酮類化合物（flavonoidsflavonoids）是廣泛存在于自然）是廣泛存在于自然界的一大類化合物。多具有顏色，在植物體內(nèi)大界的一大類化合物。多具有顏色，在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷，一部分以游離形式存在。部分與糖結(jié)合成苷，一部分以游離形式存在。 黃酮類化合物最集中的是被子植物，類型最全，黃酮類化合物最集中的是被子植物，類型最全，結(jié)構(gòu)最復(fù)雜，含量也高。由這些中藥參與配伍的結(jié)構(gòu)最復(fù)雜，含量也高。由這些中藥參與配伍的

32、中藥制劑也較多見。中藥制劑也較多見。 二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特征（一）結(jié)構(gòu)特征 黃酮類化合物是指基本母核為黃酮類化合物是指基本母核為2-2-苯基色原酮類化合物，苯基色原酮類化合物，現(xiàn)在則是泛指兩苯環(huán)通過中央三碳鏈相互聯(lián)結(jié)而成的一系現(xiàn)在則是泛指兩苯環(huán)通過中央三碳鏈相互聯(lián)結(jié)而成的一系列化合物。在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷，一部分以游列化合物。在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷，一部分以游離形式存在。離形式存在。 根據(jù)基本結(jié)構(gòu)又可分為黃酮、黃酮醇、雙黃酮、異黃根據(jù)基本結(jié)構(gòu)又可分為黃酮、黃酮醇、雙黃酮、異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇、查耳酮、橙酮、花青素、黃酮、二氫黃酮、二氫黃

33、酮醇、查耳酮、橙酮、花青素、黃烷等類型。烷等類型。 多數(shù)黃酮結(jié)構(gòu)中存在有桂皮?；氨郊柞；M成的交多數(shù)黃酮結(jié)構(gòu)中存在有桂皮?；氨郊柞；M成的交叉共軛體系，故在叉共軛體系，故在200-400nm200-400nm波長區(qū)域內(nèi)有強(qiáng)烈的吸收帶，波長區(qū)域內(nèi)有強(qiáng)烈的吸收帶，此是光譜法及色譜此是光譜法及色譜光譜法分析的基礎(chǔ)。光譜法分析的基礎(chǔ)。 大多黃酮及其苷類含有游離酚羥基，可與聚酰胺形成大多黃酮及其苷類含有游離酚羥基，可與聚酰胺形成氫鍵，可用聚酰胺色譜法進(jìn)行分析。氫鍵，可用聚酰胺色譜法進(jìn)行分析。 （二）理化性質(zhì)（二）理化性質(zhì)1 1、物理性狀、物理性狀 黃酮類化合物多為晶性固體，少數(shù)（如黃酮苷）黃酮類化合

34、物多為晶性固體，少數(shù)（如黃酮苷）為無定形粉末。為無定形粉末。 游離的苷元中，除二氫黃酮、二氫黃酮醇、黃游離的苷元中，除二氫黃酮、二氫黃酮醇、黃烷及黃烷醇有旋光性外，其余則無。苷類由于在結(jié)烷及黃烷醇有旋光性外，其余則無。苷類由于在結(jié)構(gòu)中引入糖的分子，故均有旋光性，且多為左旋。構(gòu)中引入糖的分子，故均有旋光性，且多為左旋。2 2、溶解度、溶解度 黃酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)（苷或黃酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)（苷或苷元，單糖苷、雙糖苷或三糖苷）不同而有很大差苷元，單糖苷、雙糖苷或三糖苷）不同而有很大差異。異。 游離苷元難溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、游離苷元難溶或不溶于水，易溶于甲醇

35、、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有機(jī)溶劑及稀堿液中。乙酸乙酯、乙醚等有機(jī)溶劑及稀堿液中。 黃酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等強(qiáng)極性溶劑黃酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等強(qiáng)極性溶劑中，但難溶或不溶于苯、氯仿等。中，但難溶或不溶于苯、氯仿等。 3 3、酸堿性、酸堿性 酸性：酸性：黃酮類化合物因分子中多有酚羥基，故顯黃酮類化合物因分子中多有酚羥基，故顯酸性，可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酸性，可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。酰胺中。 堿性堿性氧原子的性質(zhì)氧原子的性質(zhì) 黃酮類化合物分子中黃酮類化合物分子中-吡喃酮環(huán)上的吡喃酮環(huán)上的1-1-位氧原子，位氧原子，因有未共用的電子對，故表現(xiàn)出微

36、弱的堿性，可與強(qiáng)因有未共用的電子對，故表現(xiàn)出微弱的堿性，可與強(qiáng)無機(jī)酸，如濃硫酸、鹽酸等生成鹽，常表現(xiàn)出特殊的無機(jī)酸，如濃硫酸、鹽酸等生成鹽，常表現(xiàn)出特殊的顏色，可用于鑒別。顏色，可用于鑒別。 生成的鹽極不穩(wěn)定，加水后即可分解。生成的鹽極不穩(wěn)定，加水后即可分解。 4 4、顯色反應(yīng)、顯色反應(yīng) 還原反應(yīng)：與鹽酸還原反應(yīng)：與鹽酸鎂粉（或鋅粉）反應(yīng)，鎂粉（或鋅粉）反應(yīng)， 金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)：黃酮類化合物分子中多有金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)：黃酮類化合物分子中多有下列結(jié)構(gòu)，故?？膳c鋁鹽、鉛鹽、鋯鹽、鎂鹽等試劑反下列結(jié)構(gòu)，故?？膳c鋁鹽、鉛鹽、鋯鹽、鎂鹽等試劑反應(yīng)，生成有色絡(luò)合物。應(yīng)，生成有色絡(luò)合物。 OHO

37、oOOHOHOH 鋁鹽：鋁鹽：常用試劑為常用試劑為1%1%三氯化鋁或硝酸鋁溶液。生成的三氯化鋁或硝酸鋁溶液。生成的絡(luò)合物多為黃色（絡(luò)合物多為黃色（max=415nmmax=415nm）, ,并有熒光，可用于定并有熒光，可用于定性及定量分析。性及定量分析。 鉛鹽：鉛鹽：常用常用1%1%醋酸鉛及堿式醋酸鉛水溶液，可生成黃醋酸鉛及堿式醋酸鉛水溶液，可生成黃至紅色沉淀。據(jù)此不僅可用于鑒定，也可用于提取及分至紅色沉淀。據(jù)此不僅可用于鑒定，也可用于提取及分離工作。離工作。 鋯鹽：鋯鹽：多用多用2%2%二氯氧化鋯甲醇溶液。黃酮類化合物分二氯氧化鋯甲醇溶液。黃酮類化合物分子中有游離的子中有游離的3-3-或或5

38、-OH5-OH存在時(shí)，均可反應(yīng)生成黃色的鋯存在時(shí)，均可反應(yīng)生成黃色的鋯絡(luò)合物。但兩種鋯絡(luò)合物對酸的穩(wěn)定性不同，當(dāng)反應(yīng)液絡(luò)合物。但兩種鋯絡(luò)合物對酸的穩(wěn)定性不同，當(dāng)反應(yīng)液中接著加入枸櫞酸后，中接著加入枸櫞酸后，5-5-羥基黃酮的黃色溶液顯著褪色，羥基黃酮的黃色溶液顯著褪色，而而3-3-羥基黃酮溶液的呈鮮黃色（鋯羥基黃酮溶液的呈鮮黃色（鋯枸櫞酸反應(yīng)）。枸櫞酸反應(yīng)）。 5 5、紫外光譜特征、紫外光譜特征 黃酮類由于具有黃酮類由于具有2-2-苯基色原酮的基本結(jié)構(gòu)，具有特苯基色原酮的基本結(jié)構(gòu)，具有特定的紫外吸收峰，常有兩個(gè)較強(qiáng)的吸收帶，定的紫外吸收峰，常有兩個(gè)較強(qiáng)的吸收帶，I I帶在帶在300400nm3

39、00400nm范圍內(nèi)，它是由于范圍內(nèi)，它是由于B B環(huán)桂皮?；鸬?，環(huán)桂皮?；鸬?，帶為帶為240285nm240285nm范圍內(nèi)，它是由于范圍內(nèi)，它是由于A A環(huán)上的苯甲?；h(huán)上的苯甲?；鸬?。起的。 黃酮類化合物當(dāng)加入一些位移試劑如甲醇鈉、醋酸黃酮類化合物當(dāng)加入一些位移試劑如甲醇鈉、醋酸鈉、氯化鋁等，可使最大吸收波長發(fā)生位移，選擇性鈉、氯化鋁等，可使最大吸收波長發(fā)生位移，選擇性提高，還可消除雜質(zhì)的干擾，有利于含量測定。提高，還可消除雜質(zhì)的干擾，有利于含量測定。 三、定性鑒別三、定性鑒別（一）顯色反應(yīng)（一）顯色反應(yīng) 黃酮類化合物的顏色反應(yīng)多與分子中的酚羥基及黃酮類化合物的顏色反應(yīng)多與

40、分子中的酚羥基及-吡喃酮環(huán)有關(guān)。吡喃酮環(huán)有關(guān)。 常用鹽酸常用鹽酸- -鎂粉（或鋅粉）反應(yīng)鎂粉（或鋅粉）反應(yīng) 與金屬鹽類試劑的配合反應(yīng)與金屬鹽類試劑的配合反應(yīng) 黃酮類化合物分子中有游離的黃酮類化合物分子中有游離的3-OH3-OH、5-OH5-OH或鄰二酚羥或鄰二酚羥基時(shí)可與基時(shí)可與Al3+Al3+、Zr4+Zr4+、Pb2+Pb2+、Sr2+Sr2+等形成絡(luò)合物，這些絡(luò)等形成絡(luò)合物，這些絡(luò)合物有的產(chǎn)生熒光或顏色加深（如合物有的產(chǎn)生熒光或顏色加深（如Al3+Al3+、Zr4+Zr4+），有的產(chǎn)），有的產(chǎn)生沉淀（如生沉淀（如Pb2+Pb2+、Sr2+Sr2+） （二）色譜鑒別（二）色譜鑒別 吸附劑：

41、硅膠、聚酰胺；吸附劑：硅膠、聚酰胺； 硅膠色譜分離弱極性化合物較好；硅膠色譜分離弱極性化合物較好； 聚酰胺色譜他離含游離酚羥游離羥基的黃酮及其苷為聚酰胺色譜他離含游離酚羥游離羥基的黃酮及其苷為佳；佳； 纖維素薄層則適用于分離多糖苷混合物；纖維素薄層則適用于分離多糖苷混合物； 顯色反應(yīng)：采用在紫外光下觀察熒光和噴顯色劑相配顯色反應(yīng)：采用在紫外光下觀察熒光和噴顯色劑相配合的方法。合的方法。 四、黃酮類成分定量分析四、黃酮類成分定量分析 中藥制劑中如含有黃酮類成分，可根據(jù)要求測定制中藥制劑中如含有黃酮類成分，可根據(jù)要求測定制劑中的總黃酮含量、黃酮類單體成分的含量或二者同時(shí)測劑中的總黃酮含量、黃酮類單

42、體成分的含量或二者同時(shí)測定。定。 直接測定直接測定: : 黃酮類化合物具有特定的紫外吸收峰黃酮類化合物具有特定的紫外吸收峰, ,含黃酮類化合含黃酮類化合物的原料藥及部分制劑經(jīng)一定的提取純化后物的原料藥及部分制劑經(jīng)一定的提取純化后, ,可直接于最可直接于最大吸收波長處測定其吸收度大吸收波長處測定其吸收度, ,以蘆丁等為對照品計(jì)算其含以蘆丁等為對照品計(jì)算其含量量. . 顯色測定顯色測定: : 黃酮類化合物顯色以后顯色物與背景最大吸收波長差黃酮類化合物顯色以后顯色物與背景最大吸收波長差別較大別較大, ,可消除背景可消除背景( (即陰性空白即陰性空白) )的干擾的干擾, ,以提高本法的選以提高本法的選

43、擇性及靈敏度擇性及靈敏度. .常用鋁鹽作顯色試劑常用鋁鹽作顯色試劑. .（二）黃酮類單體成分的含量測定（二）黃酮類單體成分的含量測定1 1、薄層色譜法、薄層色譜法 樣品經(jīng)有機(jī)溶劑或水提取后，可用硅膠、纖維素或聚樣品經(jīng)有機(jī)溶劑或水提取后，可用硅膠、纖維素或聚酰胺進(jìn)行層析，達(dá)到分離目的。酰胺進(jìn)行層析，達(dá)到分離目的。 層析后可將含有待測組分的色斑刮下，再用適當(dāng)?shù)娜軐游龊罂蓪⒑写郎y組分的色斑刮下，再用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵摵?，用紫外劑洗脫后，用紫? -可見分光光度法測定?？梢姺止夤舛确y定。 更常用的是薄層掃描儀（單波長或雙波長法）直接在更常用的是薄層掃描儀（單波長或雙波長法）直接在薄層板上掃描測定。薄層

44、板上掃描測定。 2 2、高效液相色譜法、高效液相色譜法 由于黃酮類化合物在紫外區(qū)有較強(qiáng)的吸收，使用由于黃酮類化合物在紫外區(qū)有較強(qiáng)的吸收，使用HPLCHPLC法檢測靈敏度較高，故該法在黃酮類單體成分的法檢測靈敏度較高，故該法在黃酮類單體成分的定量分析中最常用。定量分析中最常用。 黃酮類成分的黃酮類成分的HPLCHPLC條件他為條件他為正相和反相色譜兩類，反相色正相和反相色譜兩類，反相色譜應(yīng)用較多。譜應(yīng)用較多。 反相色譜測定多有反相色譜測定多有C18C18鍵合相固定液，流動相常用鍵合相固定液，流動相常用甲醇甲醇- -水水- -乙酸（或磷酸緩沖液）及乙腈乙酸（或磷酸緩沖液）及乙腈- -水。檢測器水。

45、檢測器主要采用紫外檢測器或熒光檢測器。主要采用紫外檢測器或熒光檢測器。 應(yīng)用示例應(yīng)用示例雙黃連口服液中黃芩苷的含量測定雙黃連口服液中黃芩苷的含量測定處方組成：金銀花、黃芩、連翹處方組成：金銀花、黃芩、連翹1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇為填充劑；甲醇-水水-冰醋酸（冰醋酸（50：50：1）為流動相；檢）為流動相；檢測波長測波長274nm。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500.2、對照品溶液的制備：精密稱取黃芩苷對照品、對照品溶液的制備：精密稱取黃芩苷對照品10mg，置，置1

46、00ml量瓶中，加量瓶中，加50%甲醇適量，置水浴中振搖使溶解，甲醇適量，置水浴中振搖使溶解，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得（每放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含黃芩中含黃芩苷苷0.1mg）。）。3 3、供試品溶液的制備：精密量取本品、供試品溶液的制備：精密量取本品1ml1ml，置，置50ml50ml量瓶中，量瓶中，加加50%50%甲醇適量，超聲處理甲醇適量，超聲處理20min20min，放置至室溫，加，放置至室溫，加50%50%甲甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。醇稀釋至刻度，搖勻，即得。4 4、測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各、測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液

47、各5ul5ul，注，注入液相色譜儀，測定，即得。入液相色譜儀，測定，即得。 本品每支含黃芩以黃芩苷（本品每支含黃芩以黃芩苷（C21H18O11）計(jì)，不得少于）計(jì)，不得少于80mg80mg。第四節(jié)第四節(jié) 皂苷類成分分析皂苷類成分分析 一、概述一、概述 三萜是由三萜是由3030個(gè)碳原子組成的萜類化合物，大多數(shù)三萜化合個(gè)碳原子組成的萜類化合物，大多數(shù)三萜化合物均可看作由物均可看作由6 6個(gè)異戊二烯單位聯(lián)結(jié)而成。個(gè)異戊二烯單位聯(lián)結(jié)而成。 游離三萜類化合物通常多不溶于水，而與糖結(jié)合成苷后，游離三萜類化合物通常多不溶于水，而與糖結(jié)合成苷后，則大多可溶于水，振搖后可生成膠體溶液，并有持久性似則大多可溶于水，

48、振搖后可生成膠體溶液，并有持久性似肥皂溶液的泡沫，故有三萜皂苷之稱。肥皂溶液的泡沫，故有三萜皂苷之稱。 二、理化性質(zhì)二、理化性質(zhì)溶解度溶解度u可溶于水，易溶于熱水、含水稀醇、熱甲醇和熱乙可溶于水，易溶于熱水、含水稀醇、熱甲醇和熱乙醇中，幾乎不溶于或難溶于乙醚、苯等極性小的有機(jī)醇中，幾乎不溶于或難溶于乙醚、苯等極性小的有機(jī)溶劑。溶劑。u在含水丁醇或戊醇中溶解度較好，且又能與水分成在含水丁醇或戊醇中溶解度較好，且又能與水分成二相，可利用此性質(zhì)從水溶液中用正丁醇或戊醇提取二相，可利用此性質(zhì)從水溶液中用正丁醇或戊醇提取皂苷，借以與親水性的糖、蛋白質(zhì)等分離。皂苷，借以與親水性的糖、蛋白質(zhì)等分離。u三萜皂

49、苷元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等有機(jī)三萜皂苷元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑，而不溶于水。溶劑，而不溶于水。顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)u醋酐醋酐- -濃硫酸反應(yīng)（濃硫酸反應(yīng)（Liebermann-BurchardLiebermann-Burchard反應(yīng)）；反應(yīng)）；u五氯化銻反應(yīng)五氯化銻反應(yīng)(Kahlenberg(Kahlenberg反應(yīng)反應(yīng)) )；u三氯醋酸反應(yīng)三氯醋酸反應(yīng)(Rosen-Heimer(Rosen-Heimer反應(yīng)反應(yīng)) )；u冰醋酸冰醋酸- -乙酰氯反應(yīng)乙酰氯反應(yīng)(Tschugaeff(Tschugaeff反應(yīng)反應(yīng)) )；u氯仿氯仿- -濃硫酸反應(yīng)濃硫酸反應(yīng)(Salkowsk

50、i(Salkowski反應(yīng)反應(yīng)) )。 三、定性鑒別：三、定性鑒別：理化鑒別理化鑒別泡沫反應(yīng)：多用于檢驗(yàn)含有皂苷的原料藥；泡沫反應(yīng)：多用于檢驗(yàn)含有皂苷的原料藥；u化學(xué)顯色反應(yīng)：僅在組成藥物較少的中藥制劑中使用?；瘜W(xué)顯色反應(yīng)：僅在組成藥物較少的中藥制劑中使用。薄層色譜法薄層色譜法u由于皂苷類成分大多無明顯的紫外吸收，故經(jīng)薄層色譜由于皂苷類成分大多無明顯的紫外吸收，故經(jīng)薄層色譜分離，然后選用適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色觀察，是皂苷定性鑒別分離，然后選用適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色觀察，是皂苷定性鑒別中最常用的方法。中最常用的方法。u三萜皂苷類成分進(jìn)行薄層層析時(shí)通常采用硅膠為吸附劑，三萜皂苷類成分進(jìn)行薄層層析時(shí)通常采用硅膠

51、為吸附劑，也有采用氧化鋁、硅藻土等為吸附劑。也有采用氧化鋁、硅藻土等為吸附劑。u薄層層析后，可選用三氯醋酸、氯磺酸薄層層析后，可選用三氯醋酸、氯磺酸- -醋酸、醋酸、50%50%及及10%10%硫酸乙醇液、三氯化銻、磷鉬酸、濃硫酸硫酸乙醇液、三氯化銻、磷鉬酸、濃硫酸- -醋酸酐、碘醋酸酐、碘蒸氣等顯色劑進(jìn)行顯色，其中以不同濃度的硫酸乙醇液為蒸氣等顯色劑進(jìn)行顯色，其中以不同濃度的硫酸乙醇液為最常用。最常用。四、三萜皂苷類成分的定量分析四、三萜皂苷類成分的定量分析 中藥制劑中皂苷類成分的定量分析可分為中藥制劑中皂苷類成分的定量分析可分為總皂苷測定總皂苷測定、皂皂苷元測定苷元測定和和單體皂苷測定單體

52、皂苷測定。（一）總皂苷的含量測定（一）總皂苷的含量測定 1 1、提取分離、提取分離u總皂苷的含量測定一般需要用適當(dāng)?shù)娜軇┨崛?。由于皂苷總皂苷的含量測定一般需要用適當(dāng)?shù)娜軇┨崛?。由于皂苷在極性溶劑中溶解度較大，因此提取溶劑可為各種濃度的甲在極性溶劑中溶解度較大，因此提取溶劑可為各種濃度的甲醇（醇（70%-95%70%-95%）、乙醇、異丙醇、丁醇、戊醇。）、乙醇、異丙醇、丁醇、戊醇。u提取后經(jīng)分離得到總皂苷成分，分離可用有機(jī)溶劑，如水提取后經(jīng)分離得到總皂苷成分，分離可用有機(jī)溶劑，如水飽和的正丁醇萃取，飽和的正丁醇萃取，u也可用大孔吸附樹脂處理后溶劑洗脫。也可用大孔吸附樹脂處理后溶劑洗脫。2 2、

53、測定方法、測定方法重量法重量法l該方法主要用于含皂苷的原料藥質(zhì)量控制。該方法主要用于含皂苷的原料藥質(zhì)量控制。l在中藥制劑中，如處方中藥味含皂苷類成分較多時(shí)，常用在中藥制劑中，如處方中藥味含皂苷類成分較多時(shí)，常用正丁醇作溶劑，測定正丁醇浸出物。正丁醇作溶劑，測定正丁醇浸出物。比色法比色法l常用三萜皂苷顯色劑有香草醛常用三萜皂苷顯色劑有香草醛- -硫酸、香草醛硫酸、香草醛- -高氯酸、醋高氯酸、醋酐酐- -硫酸、高氯酸、濃硫酸以及亞甲藍(lán)等。硫酸、高氯酸、濃硫酸以及亞甲藍(lán)等。l用比色法測定中藥制劑中總皂苷或總苷元的含量時(shí)，可選用比色法測定中藥制劑中總皂苷或總苷元的含量時(shí)，可選用單體皂苷或皂苷元作對照

54、品，但要注意測定單體皂苷或用單體皂苷或皂苷元作對照品，但要注意測定單體皂苷或皂苷元與總皂苷的換算系數(shù)。皂苷元與總皂苷的換算系數(shù)。（二）皂苷元的含量測定（二）皂苷元的含量測定皂苷元的獲得：皂苷元的獲得：u得到總皂苷后，加酸（如硫酸、鹽酸）加熱水解，得到得到總皂苷后，加酸（如硫酸、鹽酸）加熱水解，得到皂苷元；皂苷元；u將樣品先行水解，再用有機(jī)溶劑從水解后的溶液中提取將樣品先行水解，再用有機(jī)溶劑從水解后的溶液中提取皂苷元。皂苷元。u測定方法：主要有薄層色譜法、高效液相色譜法和比色測定方法：主要有薄層色譜法、高效液相色譜法和比色法。法。( (三三) ) 三萜皂苷類單體成分含量測定三萜皂苷類單體成分含量

55、測定1 1、薄層色譜法、薄層色譜法u樣品經(jīng)適當(dāng)?shù)奶崛?、純化后，用薄層色譜法分離，可樣品經(jīng)適當(dāng)?shù)奶崛　⒓兓?，用薄層色譜法分離，可排除其他組分的干擾，常用于測定中藥制劑中的皂苷元排除其他組分的干擾，常用于測定中藥制劑中的皂苷元或單體皂苷，定量方法可采用薄層洗脫或單體皂苷，定量方法可采用薄層洗脫比色法或薄層比色法或薄層掃描法。掃描法。2 2、高效液相色譜法、高效液相色譜法u大多數(shù)三萜皂苷類成分，如人參皂苷、三七皂苷等可大多數(shù)三萜皂苷類成分，如人參皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外區(qū)的末端吸收來檢測，但靈敏度相對要低。利用其在紫外區(qū)的末端吸收來檢測，但靈敏度相對要低。u若中藥制劑中所含三萜皂苷類成分本身

56、具有較強(qiáng)的紫若中藥制劑中所含三萜皂苷類成分本身具有較強(qiáng)的紫外吸收，如甘草酸、遠(yuǎn)志皂苷等，可用外吸收，如甘草酸、遠(yuǎn)志皂苷等，可用HPLCHPLC分離并用紫分離并用紫外檢測器檢測。外檢測器檢測。u蒸發(fā)光散射檢測器（蒸發(fā)光散射檢測器（ELSDELSD）用于高效液相色譜法檢測）用于高效液相色譜法檢測三萜皂苷類成分的應(yīng)用日漸廣泛。三萜皂苷類成分的應(yīng)用日漸廣泛。 第五節(jié)第五節(jié) 揮發(fā)性成分分析揮發(fā)性成分分析 一、概述一、概述 揮發(fā)性成分是指中藥中一類具有芳香氣并易揮發(fā)揮發(fā)性成分是指中藥中一類具有芳香氣并易揮發(fā)的成分，其化學(xué)組成復(fù)雜，主要包括揮發(fā)油類成的成分，其化學(xué)組成復(fù)雜，主要包括揮發(fā)油類成分和其他分子量較

57、小、易揮發(fā)的化合物。揮發(fā)油分和其他分子量較小、易揮發(fā)的化合物。揮發(fā)油為易流動的油狀液體，具香味和揮發(fā)性，可隨水為易流動的油狀液體，具香味和揮發(fā)性，可隨水蒸汽蒸餾。蒸汽蒸餾。 二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特征（一）結(jié)構(gòu)特征 揮發(fā)油中成分按化學(xué)結(jié)構(gòu)分類，可分為萜類化合物、脂肪族化揮發(fā)油中成分按化學(xué)結(jié)構(gòu)分類，可分為萜類化合物、脂肪族化合物及芳香族化合物等。合物及芳香族化合物等。顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)u揮發(fā)油中若含有酚類成分，加入三氯化鐵的乙醇溶液，可產(chǎn)生藍(lán)揮發(fā)油中若含有酚類成分，加入三氯化鐵的乙醇溶液，可產(chǎn)生藍(lán)色、藍(lán)紫色或綠色反應(yīng)；色、藍(lán)紫色或綠色反應(yīng)；u若含有羰基化合物，加入苯

58、肼或苯肼衍生物、羥胺等試劑，可生若含有羰基化合物，加入苯肼或苯肼衍生物、羥胺等試劑，可生成結(jié)晶性的衍生物；成結(jié)晶性的衍生物；u若含有醛類化合物，加入硝酸銀氨試液，可發(fā)生銀鏡反應(yīng)；若含有醛類化合物，加入硝酸銀氨試液，可發(fā)生銀鏡反應(yīng)；u若含有內(nèi)酯類化合物，于樣品的吡啶溶液中加入亞硝酰鐵氰化鈉若含有內(nèi)酯類化合物，于樣品的吡啶溶液中加入亞硝酰鐵氰化鈉及氫氧化鈉溶液，出現(xiàn)紅色并逐漸消失；及氫氧化鈉溶液，出現(xiàn)紅色并逐漸消失；若含有不飽和化合物，于樣品中加入溴，紅棕色褪去；若含有不飽和化合物，于樣品中加入溴，紅棕色褪去；u若含有奧類衍生物，加入濃硫酸，可產(chǎn)生藍(lán)色或紫色反應(yīng)。若含有奧類衍生物，加入濃硫酸，可產(chǎn)

59、生藍(lán)色或紫色反應(yīng)。 （二）薄層色譜法（二）薄層色譜法 揮發(fā)油成分薄層色譜的條件主要是根據(jù)極性大小加揮發(fā)油成分薄層色譜的條件主要是根據(jù)極性大小加以分離的。油中所含各類化合物的極性順序?yàn)椋阂苑蛛x的。油中所含各類化合物的極性順序?yàn)椋?烴（萜）醚酯醛、酮醇、酚酸烴（萜）醚酯醛、酮醇、酚酸 因此可試用不同極性的展開劑進(jìn)行分離因此可試用不同極性的展開劑進(jìn)行分離 常用的吸附劑為硅膠、氧化鋁等，其中以硅膠常用常用的吸附劑為硅膠、氧化鋁等，其中以硅膠常用 常用展開劑為石油醚或正己烷，可使不含氧的烴類常用展開劑為石油醚或正己烷，可使不含氧的烴類成分展開，而含氧化合物一般留在原點(diǎn)。成分展開，而含氧化合物一般留在原點(diǎn)

60、。 四、含量測定四、含量測定u含量測定可分為含量測定可分為總揮發(fā)油總揮發(fā)油和和單一成分單一成分的測定。的測定。u總揮發(fā)油的測定，采用揮發(fā)油測定器，用蒸總揮發(fā)油的測定，采用揮發(fā)油測定器，用蒸餾法測定，可分別測定相對密度在餾法測定，可分別測定相對密度在1.01.0以下和以下和1.01.0以上的揮發(fā)油含量。以上的揮發(fā)油含量。 u單一成分測定：主要采用氣相色譜法和薄層單一成分測定：主要采用氣相色譜法和薄層色譜法。色譜法。 第六節(jié)、多糖、有機(jī)酸類成分分析第六節(jié)、多糖、有機(jī)酸類成分分析一、多糖的鑒別與含量測定一、多糖的鑒別與含量測定（一）多糖的鑒別（一）多糖的鑒別1. 1. 薄層色譜法薄層色譜法 多糖可采