無菌檢驗標準操作規(guī)程SOP樣本

1、無菌檢驗標準操作規(guī)程SOP文件名稱無菌檢驗標準操作規(guī)程（SOP頁碼：1/5文件編號YZ-Q3(z)-ZL-10-版次第三版制定審核批準制定日期審核日期批準日期頒發(fā)部門頒發(fā)數(shù)量生效日期分發(fā)單位目的：制定無菌檢驗標準操作規(guī)程，確保檢驗操作正確。范圍：本標準適用于本公司大容量注射劑無菌檢驗操作。責任者：質管部、化驗室主任、QC檢驗員內容：1、標準依據(jù)：中國藥典二部附錄XIH。2、簡述：無菌檢查方法系用于檢查藥品是否無菌的一種方法。檢查項目包括需氣菌、厭氣菌及真菌檢查。若供試品符合該項檢查方法的有關規(guī)定，僅表明了在該檢驗條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。3、環(huán)境要求：該項檢查應在環(huán)境潔凈度萬級（C級）背景下的局

2、部百級（A級）的單向流區(qū)域內或隔離系統(tǒng)中進行。其全過程必須嚴格遵守無菌操作。防止微生物污染，但所采取的措施不得影響供試品中微生物的檢出。操作前環(huán)境潔凈度應經(jīng)驗證。日常檢驗需對試驗環(huán)境進行監(jiān)控。5、方法驗證：進行該項檢查前應按照無菌檢查方法驗證規(guī)程確認該方法的適用性。4、人員要求：無菌檢查人員必須具備微生物專業(yè)知識，并經(jīng)過無菌技術培訓。6、檢驗數(shù)量及檢驗量：6.1、 接種每種培養(yǎng)基所需的最少檢驗數(shù)量：2%或10個（取較少者），文檔僅供參考，不當之處，請聯(lián)系改正。供試品無菌檢查若采用薄膜過濾法，應增加1/2的最小檢驗數(shù)量作陽性對照用；若采用直接過濾法，應增加供試品無菌檢查時每個培養(yǎng)基容器接種的樣品

3、量作陽性對照用。6.2、 每支供試品接入每種培養(yǎng)基的最少量：半量（100mlwVW200ml）,采用薄膜過濾法時，檢驗量應不少于直接接種的供試品總接種量，只要供試品特性允許，應將所有容器內的全部內容物過濾。7、細菌培養(yǎng)溫度為3035C,真菌培養(yǎng)溫度為2328C。8、儀器用具：垂直層流超凈工作臺、生化培養(yǎng)箱、電熱恒溫水浴箱、顯微鏡、離心機、雙碟、試管、三角瓶、刻度離心管、注射器（針頭）、剪刀、鐐子、注射器盒、75%酒精棉球、紫外光燈365nm、真空泵、一次性使用集菌培養(yǎng)器。9、消毒劑配制：9.1、 75%乙醇溶液（配制酒精棉球用）。9.2、 0.2%新潔爾滅溶液（配制消毒棉球用）。9.3、 2%

4、來蘇爾溶液（配制消毒棉球用）。10、試劑及培養(yǎng)基的配制：10.1、 0.1%蛋白月東水溶液：取蛋白月東1.0g,加水1000ml,微溫使溶解，濾清，調節(jié)PH值至7.1±0.2,分裝，滅菌。10.2、 pH7.0滅菌氯化鈉蛋白月東緩沖液：取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23S氯化鈉4.304蛋白月東1.0g,加水1000ml微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。10.3、 根據(jù)供試品特性，可選用其它經(jīng)驗證的適宜溶液作為稀釋液、沖洗文檔僅供參考，不當之處，請聯(lián)系改正。液。如需要，可在上述稀釋液或沖洗液的滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑。10.4、 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：按商品說明稱取培養(yǎng)

5、基，配制，搖勻，分裝，按培養(yǎng)基說明高壓滅菌，保存?zhèn)溆谩７盅b的容器應適當，其裝量與容器高度比例應符合培養(yǎng)結束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的1/2。供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5,否則須經(jīng)100c水浴加熱至粉紅色消失（不超過20分鐘），迅速冷卻只限加熱一次，并應防止被污染。10.5、 改良馬丁培養(yǎng)基：取商品干燥培養(yǎng)基28.5g,加水1000ml,加熱溶解，分裝，121c高壓滅菌15分鐘（若干燥培養(yǎng)基結塊應勿使用）。10.6、 選擇性培養(yǎng)基：按上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基的處方及制法，在培養(yǎng)基滅菌或使用前加入適量的中和劑、滅活劑或表面活性劑，其用量

6、同方法驗證試驗10.7、 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：按商品說明稱取培養(yǎng)基，配制，加熱，溶解，分裝，按培養(yǎng)基說明高壓滅菌，保存?zhèn)溆谩?0.8、 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：取商品干燥培養(yǎng)基3.4g,加蒸儲水1000ml,加熱溶解分裝，121c高壓滅菌15分鐘。10.9、 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基：取商品干燥培養(yǎng)基制備或按改良馬丁培養(yǎng)基的處方及制法，加入14.0g瓊脂，調節(jié)PH值使滅菌后PH值為6.4±0.2,分裝，121c高壓滅菌15分鐘。10.10、 制備好的培養(yǎng)基應保存在225C,避光的環(huán)境中。培養(yǎng)基若保文檔僅供參考，不當之處，請聯(lián)系改正。存于非密閉容器中，一般在三周內使用。若保存于密閉容器中，一般可在一年內

7、使用。1.1、 驗前的準備工作1.2、 用具的洗刷1.2.1、 玻璃器皿：如試管、量筒、移液管、刻度吸管、離心管、三角瓶、雙碟等用清潔液浸泡，用流水洗滌，再用蒸儲水洗滌45次，倒置,晾干。試管、移液管、三角瓶等使用過后，應先消毒倒出內容物后，再清洗晾干。1.2.2、 注射器用水沖洗后，用洗滌劑沖洗，然后用水沖洗干凈，再用蒸儲水沖洗3次。1.2.3、 剪刀、鐐子用水及去污粉洗滌，用水沖洗干凈，再用蒸儲水洗滌3次。1.2.4、 多用薄膜過濾器，玻璃管等用飲用水及蒸儲水洗凈、晾干。1.2.5、 潔凈服、褲、帽子、口罩等用水洗滌潔凈后，晾干。1.3、 用具的包扎及滅菌1.3.1、 移液管、刻度吸管在管

8、口上端內，松松塞入少許脫脂藥物，然后每支管用白紙嚴密卷好，再用兩層牛皮紙一起包扎。1.3.2、 洗滌潔凈的注射器及適配針頭各部件與剪刀、鐐子一并入墊有紗布的鋁盒內，一層層放好，蓋上紗布，將鋁盒蓋好，用牛皮紙包扎。1.3.3、 試管、三角瓶等在管（瓶）口塞上紗布棉紗用牛皮紙包裝嚴密。11.2.6、 將潔凈服、等用布口袋配套裝入，扎緊口袋，用牛皮紙包扎11.2.7、 將以上包扎好的用具在121c蒸汽滅菌20分鐘?；虿扇∵m宜的滅菌方法。（適宜高溫滅菌的器皿可采用160c干熱滅菌）11.2.8、 物品滅菌完畢，勿立即置冷處，以免急速冷卻導致染菌，應置恒溫培養(yǎng)箱中干燥。11.3、 潔凈室的清潔與滅菌11

9、.3.1、 潔凈室及超凈臺，每周用高鎰酸鉀加甲醛薰蒸滅菌。11.3.2、 在每次操作前，應作好清潔工作，并用0.2%新潔爾滅溶液或2%來蘇爾或75%乙醇擦洗超凈臺工作臺面及可能污染的死角，然后開啟紫外線燈殺菌半小時，超凈臺空氣過濾器自凈半小時。操作完畢后，用上述消毒液，再次處理工作臺面，開紫外光燈殺菌30分鐘以上。12、操作12.1、 開啟傳遞窗外側門，將物品表面消毒后置傳遞窗內，關閉窗門。12.2、 操作人員按進入潔凈室更衣程序洗手、更衣?lián)Q工作鞋，換無菌衣、褲、口罩。進入潔凈室內，開啟內側門，取出物品，關閉內側門，經(jīng)緩沖間帶入潔凈室內，物品放置于實驗臺上，關閉潔凈室門，人員離開潔凈室，繼續(xù)用

10、紫外燈照射半小時，關燈，再將用具放入超凈臺內。12.3、 培養(yǎng)基適用性檢查：無菌檢查用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基等應符合的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品檢查前或與供試品檢查同時進行。12.3.1、 無菌效果檢查：每批培養(yǎng)基隨機取不少于5支（瓶）培養(yǎng)14天，應無菌生長12.3.2、 靈敏度檢查：12.3.2.1、 菌種及菌液制備：12.3.2.1.1、 檢查用菌種包括：金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)CMCC(B)26003銅綠假單胞菌(Pstudomonasaeruginosa)CMCC(B)10104枯草芽抱桿菌(Bacillussubti

11、lis)CMCC(B)63501生抱梭菌(Clostridiumsporgenes)CMCC(B)64941白色念珠菌(Candidaalbicaus)CMCC(F)98001黑曲菌(Aspergillusniger)CMCC(F)9800312.3.2.1.2、 菌液制備方法：銅綠假單胞菌菌懸液的制備方法同金黃色葡萄球菌菌懸液制備方法。12.3.2.2、 培養(yǎng)基接種：取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種小于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌、生抱梭菌各2支，另一支不接種，作為空白對照，培養(yǎng)3天；每管裝量為9ml的改良馬丁培養(yǎng)基5支分別接種小于100CFU的白色念珠菌、黑曲菌各2支