液相色譜法-2

1、 內(nèi)部硅氧交聯(lián)結(jié)構(gòu)多孔結(jié)構(gòu) 表面有硅醇基氫鍵作用吸附活性中心1）與極性物質(zhì)或不飽和化合物形成氫鍵 物質(zhì)極性，吸附能力強(qiáng)極性吸附中心，不易洗脫 吸附活性次序：活潑型束縛型游離型 2）吸水失活 105110OC烘干30分鐘(可逆失水)吸附力最大 500OC烘干(不可逆失水)活性喪失，無吸附力分析酸性或中性物質(zhì) 續(xù)前流動(dòng)相的選擇三方面1.被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、極性與吸附力的關(guān)系2.吸附劑的活性與被分離組分極性關(guān)系3.洗脫劑的極性與被分離組分的關(guān)系續(xù)前圖示圖示L0L1L2在展開劑中出現(xiàn)的幾率為單位時(shí)間內(nèi)一個(gè)分子設(shè)R在固定相中出現(xiàn)的幾率為單位時(shí)間內(nèi)一個(gè)分子設(shè)R101010LLtLtLuuRR) 1(R01L

2、LRf原點(diǎn)到溶劑前沿的距離心的距離原點(diǎn)到組分斑點(diǎn)質(zhì)量中mSVVKR11又110LLLVVKmS定時(shí)展開保留比續(xù)前smmmSfVKVVVVKRR11fRK續(xù)前Rf值重現(xiàn)性值重現(xiàn)性: 影響Rf值的因素較多，Rf值重現(xiàn)性較差，相對(duì)比移值Rst：以消除因色譜操作條件而引起的誤差。Rst的定義為： 可在同一塊板上可消除誤差 心的距離原點(diǎn)到參考物質(zhì)斑點(diǎn)中原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心的距離stR21LLRRRffs中心的距離原點(diǎn)到參考物斑點(diǎn)質(zhì)量心的距離原點(diǎn)到組分斑點(diǎn)質(zhì)量中（參）（組）根據(jù)被測(cè)物極性和吸附劑的吸附能力 被測(cè)物極性強(qiáng)弱極性吸附劑 被測(cè)物極性弱強(qiáng)極性吸附劑根據(jù)被測(cè)組分、吸附劑和展開劑本身的極性展開劑展開劑吸附劑

3、被分離組分非極性極性非極性極性I 級(jí)V 級(jí)展開劑、吸附劑和被分離組分關(guān)系示意圖 實(shí)際工作中，1.選擇展開劑需通過實(shí)驗(yàn)來摸索。一般先用單一溶劑進(jìn)行展開，根據(jù)待測(cè)組分在薄層板上的分離效果，2.進(jìn)一步改變展開劑的極性，或使用混合溶劑，按一定比例混合后進(jìn)行試驗(yàn)，直到能良好分離為止。3.通常要求組分的Rf值在0.20.8之間，各組分間的Rf值之差應(yīng)大于0.05。 注： 在用多元混合展開劑時(shí)，各種溶劑所起作用不同。 占比例大的溶劑在展開過程中主要起溶解物質(zhì)和基本分離作用。 占比例較小的溶劑主要起調(diào)整改善各組分Rf值的作用。 分離酸性或堿性組分： 在展開劑中加入少量酸或堿，可使某些極性物質(zhì)斑點(diǎn)集中，提高分離

4、度。環(huán)已烷 丙酮 水 二乙胺 10 5 5 2 實(shí)際應(yīng)用中： 從文獻(xiàn)上查找：薄層色譜用的吸附劑和展開劑 在參考他人工作的基礎(chǔ)上，加以必要的改進(jìn)。 操作技術(shù) 1薄層板的類型、制備和活化 （1）類型 薄層板有不加粘合劑的軟板和加粘合劑的硬板兩種類型。軟板無商品，須自制。硬板有商品，也可以自制。常用的粘合劑：常用的粘合劑： 煅石膏(Gypsum，2CaSO4H2O)、羧甲基纖維素鈉（CMCNa）、淀粉和聚丙烯酸（為高效薄層板常用粘合劑）。商品硬板有：商品硬板有： 硅膠G（含煅石膏作粘合劑）、硅膠H、硅膠HF254、硅膠GF254、硅膠HF254+366及高效硅膠薄層板等。 F代表含熒光劑，在254

5、nm或366 nm紫外光下可觀察到熒光。這類薄層板適用于本身不發(fā)熒光且不易顯色的試樣。這類薄層板適用于本身不發(fā)熒光且不易顯色的試樣。氧化鋁：氧化鋁：與硅膠相似，也因是否含粘合劑或熒光劑而分為氧化鋁G，氧化鋁GF254及氧化鋁HF254等品種。（2）制備 薄層板制備的好壞直接影響薄層色譜的效果，薄層要求均勻而且厚度（0.251 mm）一致。 薄層色譜通常采用硬板，用濕法制備，即在加粘合 劑的吸附劑內(nèi)按一定比例加水或其它溶劑，調(diào)成糊 狀后鋪層。 濕法鋪層有傾注法、刮層平鋪法和涂鋪器鋪層 法，其中涂鋪器制板簡(jiǎn)單，制成的板均勻光滑。 （3）活化活化 把涂好的薄層板于室溫下平放，自然涼干后放入烘箱中加熱

6、活化?；罨瘲l件根據(jù)需要而定。 硅膠板：硅膠板：一般在烘箱中逐漸升溫，維持105110活化30 min。 氧化鋁氧化鋁板：在200烘4 h可得活性II級(jí)的薄層，150160烘4 h可得活性IIIIV級(jí)的薄層。2點(diǎn)樣點(diǎn)樣 樣品溶于低沸點(diǎn)且極性與展開劑相似的溶劑，配成0.5%1%試液，應(yīng)避免用水，以防樣點(diǎn)在展開時(shí)擴(kuò)散。 用直徑小于1 mm的毛細(xì)管或微量注射器點(diǎn)樣，也可用濾紙移樣。點(diǎn)樣量要適中，并控制斑點(diǎn)直徑不超過23 mm。 現(xiàn)已有商品點(diǎn)樣裝置可供使用?，F(xiàn)已有商品點(diǎn)樣裝置可供使用。 3展開展開 待樣點(diǎn)上溶劑揮干后，即可進(jìn)行展開。展開缸要求磨口密閉。 上行展開法：上行展開法：軟板采用近水平方向展開（與

7、水平約成510角），硬板用近垂直方向展開（與水平成4560角或垂直）。 對(duì)對(duì)Rf值小的物質(zhì)可用下行展開法：值小的物質(zhì)可用下行展開法： 即在薄層板上方放置一溶劑槽，用濾紙或紗巾把溶劑引到板的上端，借助重力作用使展開劑下移。組成復(fù)雜的混合物：組成復(fù)雜的混合物： 可采用二次展開、連續(xù)展開或雙向展開。或用相同、不同極性的溶劑以同樣的方法再展開一次。 連續(xù)展開：連續(xù)展開：需在特制的展開缸中進(jìn)行，將薄層板頂部敞于缸外，溶劑上升到板頂部即向外界不斷揮發(fā)，它是不增加板長(zhǎng)而改進(jìn)分離的一種方法。 雙向展開：雙向展開：所用薄層板為正方形，將試樣點(diǎn)在板的一角，先向一個(gè)方向展開至前沿后，取出板揮干溶劑，再用另一種溶劑于

8、前次展開的垂直方向以同樣方式再展開一次，這種方法分離效果較好。當(dāng)用混合溶劑展開時(shí)，要防止產(chǎn)生“邊緣效應(yīng)”（edge effect）。 邊緣效應(yīng)是指同一組分的斑點(diǎn)在薄層中部比在邊緣移動(dòng)慢的現(xiàn)象。規(guī)定展開高度溶劑前沿展開方向邊緣效應(yīng)邊緣效應(yīng)產(chǎn)生原因：產(chǎn)生原因： 由于展開缸中混合溶劑未飽和，極性弱的溶劑在兩邊緣處易揮發(fā)，使展開劑組成與中部不同，邊緣處含更多極性大的溶劑，洗脫能力強(qiáng)，因此Rf值較大。 可用在展開缸內(nèi)襯一濾紙以加速溶劑蒸發(fā)飽和，或?qū)⒈影鍍蓚?cè)邊緣吸附劑刮去12 mm的方法消除邊緣效應(yīng)。4顯色顯色 展開后的斑點(diǎn)若沒有顏色，則需用顯色方法定位。常用方法有：常用方法有：（1）紫外光照射法 在紫

9、外光（常用汞弧燈）照射下， 如樣品能產(chǎn)生熒光，可觀察熒光斑點(diǎn)； 若樣品不產(chǎn)生熒光而吸附劑中含熒光物質(zhì)（如硅膠GF254），則板上顯熒光，而斑點(diǎn)為暗色。（2）氣熏顯色法 將幾粒碘置于密閉容器中，待碘蒸氣飽和后，將展開后的干燥薄層板放入，碘與化合物可逆地結(jié)合，斑點(diǎn)顯淡棕色。薄層板取出后，碘即升華逸出。因此顯色后應(yīng)立即標(biāo)記斑點(diǎn)。 （3）噴灑顯色劑法 軟板一般采用濕態(tài)顯色，硬板應(yīng)在溶劑揮干后才噴顯色劑顯色。此法顯色后的物質(zhì)已被破壞，不能再行回收。 mSfVVKR11實(shí)驗(yàn)方法（三）定性定量 與薄層色譜相似，紙色譜法定性的依據(jù)也是Rf值。對(duì)未知物樣品，應(yīng)使用多種不同溶劑分別進(jìn)行展開，若所得到的各Rf 值均與純品的R