紫外分光光度法測定氨茶堿的含量ppt課件

1、實驗四：紫外分光光度法測實驗四：紫外分光光度法測 定氨茶堿的含量定氨茶堿的含量紫外紫外- -可見分光光度法藥典相關規(guī)定可見分光光度法藥典相關規(guī)定1.1.對溶劑的要求對溶劑的要求 含雜原子的有機溶劑，通常具有末端吸收。因此，含雜原子的有機溶劑，通常具有末端吸收。因此，它它們的適用范圍不能小于截止波長。例如甲醇、乙醇的截們的適用范圍不能小于截止波長。例如甲醇、乙醇的截止使止使用波長為用波長為205nm205nm。另外，當溶劑不純時，也能夠添加干。另外，當溶劑不純時，也能夠添加干擾吸擾吸收。因此，在測定樣品前，應先檢查所用溶劑在樣品所收。因此，在測定樣品前，應先檢查所用溶劑在樣品所用波用波長附近能否

2、符合要求，即將溶劑置長附近能否符合要求，即將溶劑置1cm1cm石英吸收池中，石英吸收池中，以空以空氣為空白測定其吸光度。溶劑和吸收池的吸光度在氣為空白測定其吸光度。溶劑和吸收池的吸光度在220-220-240nm240nm范圍內不超越范圍內不超越0.40.4，在，在241-250nm241-250nm范圍內不得超越范圍內不得超越0.20.2，在在251-300nm251-300nm范圍內不得超越范圍內不得超越0.100.10，在，在300nm300nm以上時不得以上時不得超越超越0.05.0.05.測定法測定法 應以配制樣品溶液的同批溶劑為空白對照，應以配制樣品溶液的同批溶劑為空白對照，吸收峰

3、波長應在該種類項下規(guī)定的波長吸收峰波長應在該種類項下規(guī)定的波長2nm2nm以內，以內，并以吸光度最大的波長為測定波長。并以吸光度最大的波長為測定波長。含量測定含量測定1 1對照品比較法對照品比較法2 2吸收系數法吸收系數法3 3計算分光光度法計算分光光度法4 4比色法比色法 樣品本身在紫外樣品本身在紫外- -可見區(qū)沒有強吸收，或在可見區(qū)沒有強吸收，或在紫外區(qū)雖有吸收但為防止干擾或提高靈敏度，可紫外區(qū)雖有吸收但為防止干擾或提高靈敏度，可參與適當的顯色劑顯色后測定。參與適當的顯色劑顯色后測定。藥物其他分析定量方法藥物其他分析定量方法l規(guī)范曲線法規(guī)范曲線法l 也稱外標法或直接比較法，是一也稱外標法或

4、直接比較法，是一種簡便、快速的定量方法。與分光光度分種簡便、快速的定量方法。與分光光度分析中的規(guī)范曲線法類似，首先用欲測組分析中的規(guī)范曲線法類似，首先用欲測組分的規(guī)范樣品繪制規(guī)范曲線。的規(guī)范樣品繪制規(guī)范曲線。 l內標法內標法規(guī)范曲線法規(guī)范曲線法l 規(guī)范曲線的橫坐標規(guī)范曲線的橫坐標(X)(X)表示可以準確丈量的變量表示可以準確丈量的變量( (如規(guī)范溶液的濃度如規(guī)范溶液的濃度) )，稱為普通變量，縱坐標，稱為普通變量，縱坐標(Y)(Y)表表示儀器的呼應值示儀器的呼應值( (也稱丈量值，如吸光度、電極電位也稱丈量值，如吸光度、電極電位等等) )，稱為隨機變量。當，稱為隨機變量。當X X取值為取值為X

5、1, X2, XnX1, X2, Xn時，時，儀器測得的儀器測得的Y Y值分別為值分別為Y1, Y2, YnY1, Y2, Yn。將這些丈量。將這些丈量點點Xi, YiXi, Yi描畫在坐標系中，用直尺繪出一條表示描畫在坐標系中，用直尺繪出一條表示X X與與Y Y之間的直線線性關系，這就是常用的規(guī)范曲線法。之間的直線線性關系，這就是常用的規(guī)范曲線法。l 用作繪制規(guī)范曲線的規(guī)范物質，它的含量范圍應用作繪制規(guī)范曲線的規(guī)范物質，它的含量范圍應包括試祥中被測物質的含量，規(guī)范曲線不能恣意延伸。包括試祥中被測物質的含量，規(guī)范曲線不能恣意延伸。l規(guī)范曲線法的優(yōu)點是：繪制好規(guī)范任務曲線后測規(guī)范曲線法的優(yōu)點是：

6、繪制好規(guī)范任務曲線后測定任務就變得相當簡單，可直接從規(guī)范任務曲線定任務就變得相當簡單，可直接從規(guī)范任務曲線上讀出含量，因此特別適宜于大量樣品的分析。上讀出含量，因此特別適宜于大量樣品的分析。l規(guī)范曲線法的缺陷是：每次樣品分析的色譜條件規(guī)范曲線法的缺陷是：每次樣品分析的色譜條件檢測器的呼應性能，柱溫，流動相流速及組成，檢測器的呼應性能，柱溫，流動相流速及組成，進樣量，柱效等很難完全一樣，因此容易出現進樣量，柱效等很難完全一樣，因此容易出現較大誤差。此外，規(guī)范任務曲線繪制時，普通運較大誤差。此外，規(guī)范任務曲線繪制時，普通運用欲測組分的規(guī)范樣品或知準確含量的樣品，用欲測組分的規(guī)范樣品或知準確含量的樣

7、品，而實踐樣品的組成卻千差萬別，因此必將給丈量而實踐樣品的組成卻千差萬別，因此必將給丈量帶來一定的誤差。帶來一定的誤差。內標法內標法l內標法內標法 internal standard method internal standard method 是色譜分析中一種比是色譜分析中一種比較準確的定量方法，尤其在沒有規(guī)范物對照時，此方法更較準確的定量方法，尤其在沒有規(guī)范物對照時，此方法更顯其優(yōu)越性。它尤其廣泛的運用于高效液相色譜中。這種顯其優(yōu)越性。它尤其廣泛的運用于高效液相色譜中。這種方法可以抵消儀器和操作過程帶來的誤差。方法可以抵消儀器和操作過程帶來的誤差。l內標法是將一定分量的純物質作為內標物加

8、到一定量的被內標法是將一定分量的純物質作為內標物加到一定量的被分析樣品混合物中，然后對含有內標物的樣品進展色譜分分析樣品混合物中，然后對含有內標物的樣品進展色譜分析，分別測定內標物和待測組分的峰面積或峰高及相析，分別測定內標物和待測組分的峰面積或峰高及相對校正因子，內標物在色譜圖上得到分別的峰。根據知含對校正因子，內標物在色譜圖上得到分別的峰。根據知含量的內標物的峰面積和樣品的峰面積，計算組分的百分含量的內標物的峰面積和樣品的峰面積，計算組分的百分含量。量。 內標物的選擇要符合以下要求：內標物的選擇要符合以下要求：1 1內標物的峰與組分峰能完全分別。內標物的峰與組分峰能完全分別。2 2內標物峰

9、在色譜圖上出現的位置，最好在欲定量組分內標物峰在色譜圖上出現的位置，最好在欲定量組分 峰的臨近位置。假設樣品中有幾個組分需求定量，并峰的臨近位置。假設樣品中有幾個組分需求定量，并 且他們的且他們的kk值差別較大，這時就需求用幾個內標物來值差別較大，這時就需求用幾個內標物來 作定量測定。作定量測定。3 3內標物的性質和濃度盡量與預測定峰的接近。內標物的性質和濃度盡量與預測定峰的接近。4 4內標物是樣品中不存在的，與樣品各組分、柱填料和內標物是樣品中不存在的，與樣品各組分、柱填料和 挪動相不發(fā)生化學反響。挪動相不發(fā)生化學反響。內標法優(yōu)缺陷內標法優(yōu)缺陷l優(yōu)點：內標法可以消除大部分的誤差，如優(yōu)點：內標

10、法可以消除大部分的誤差，如儀器呵斥的。外標法無法消除，需求求儀儀器呵斥的。外標法無法消除，需求求儀器不產生誤差。器不產生誤差。l缺陷：操作復雜。缺陷：操作復雜。實驗目的實驗目的Y 了解紫外分光光度法檢測藥物含量的原理；了解紫外分光光度法檢測藥物含量的原理；Y 熟習紫外分光光度計的根本構造和功能；熟習紫外分光光度計的根本構造和功能；Y 掌握紫外分光光度法檢測藥物含量根本過程掌握紫外分光光度法檢測藥物含量根本過程;Y 掌握規(guī)范曲線的建立方法。掌握規(guī)范曲線的建立方法。實驗原理實驗原理 單色光輻射穿過被測物質溶液時，被該物質吸收的量單色光輻射穿過被測物質溶液時，被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚

11、度光路長度成正比，即朗與該物質的濃度和液層的厚度光路長度成正比，即朗伯伯- -比爾定律，這是吸收光譜法定量的實際根據，其關系比爾定律，這是吸收光譜法定量的實際根據，其關系式如下式如下A = ECLA = ECL式式(3-1)(3-1) 式中式中A A為吸收度為吸收度 ；E E為吸收系數，即單位濃度、單位為吸收系數，即單位濃度、單位液層厚度的吸收度數值；液層厚度的吸收度數值；C C為溶液濃度；為溶液濃度；L L為液層厚度。為液層厚度。 紫外紫外- -可見分光光度法是根據物質分子對波長為可見分光光度法是根據物質分子對波長為200-200-760nm760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立的光譜分

12、析方這一范圍的電磁波的吸收特性所建立的光譜分析方法。其主要特點為：靈敏度高，可達法。其主要特點為：靈敏度高，可達10-4g/ml10-4g/ml10-7g/ml10-7g/ml；準確度高，相對誤差為準確度高，相對誤差為2 2-5-5。中藥中有紫外吸收的成。中藥中有紫外吸收的成分或本身有顏色的成分，在一定的濃度范圍內，其溶液的分或本身有顏色的成分，在一定的濃度范圍內，其溶液的吸收度與濃度符合朗伯吸收度與濃度符合朗伯- -比爾定律，均可用此法進展分析。比爾定律，均可用此法進展分析。實驗儀器與資料實驗儀器與資料S實驗儀器：紫外分光光度計、精細天平、實驗儀器：紫外分光光度計、精細天平、石英比色皿、石英

13、比色皿、50ml50ml燒杯、玻璃棒、稱量紙、燒杯、玻璃棒、稱量紙、10ml10ml容量瓶、容量瓶、25ml25ml容量瓶、洗瓶。容量瓶、洗瓶。S實驗資料：氨茶堿原料、氨茶堿規(guī)范品、實驗資料：氨茶堿原料、氨茶堿規(guī)范品、蒸餾水、氫氧化鈉。蒸餾水、氫氧化鈉。S0.01M NaOH0.01M NaOH溶液的配制：稱取氫氧化鈉溶液的配制：稱取氫氧化鈉0.4g0.4g，用蒸餾水定容至，用蒸餾水定容至1000ml1000ml，即得。，即得。實驗方法實驗方法規(guī)范品溶液的制備：精細稱取氨茶堿對照品規(guī)范品溶液的制備：精細稱取氨茶堿對照品12.5mg12.5mg置于置于25mL25mL容量瓶中，先用少量容量瓶中，

14、先用少量0.01M0.01M的的NaOHNaOH溶液振搖使溶解，再用該溶液定容至刻度，配成溶液振搖使溶解，再用該溶液定容至刻度，配成濃度為濃度為0.5mg/mL0.5mg/mL的規(guī)范貯藏液；的規(guī)范貯藏液；樣品溶液的制備：精細稱取氨茶堿原料藥樣品溶液的制備：精細稱取氨茶堿原料藥12.5mg12.5mg，置于置于25ml25ml容量瓶中，用容量瓶中，用0.01M NaOH0.01M NaOH溶液溶解并定溶液溶解并定容至刻度，搖勻，再從中取出容至刻度，搖勻，再從中取出0.2ml0.2ml定容至定容至10ml10ml，即得氨茶堿樣品溶液。即得氨茶堿樣品溶液。一、規(guī)范曲線的建立一、規(guī)范曲線的建立 精細汲

15、取氨茶堿規(guī)范貯藏液分別為精細汲取氨茶堿規(guī)范貯藏液分別為100100、150150、200200、250250、300l300l于于10mL10mL容量瓶中，容量瓶中，然后用然后用0.01M0.01M的的NaOHNaOH溶液定容至刻度，搖勻，溶液定容至刻度，搖勻，照紫外分光光度法在照紫外分光光度法在275nm275nm波優(yōu)點測定吸光波優(yōu)點測定吸光度，并以濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐度，并以濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，進展線性回歸，并建立規(guī)范曲線。標，進展線性回歸，并建立規(guī)范曲線。二、氨茶堿樣品含量測定二、氨茶堿樣品含量測定 取已配制好的氨茶堿樣品溶液適量，取已配制好的氨茶堿樣品溶液適量，置于石英比色皿中，采用紫外分光光光度置于石英比色皿中，采用紫外分光光光度法在法在275nm275nm波優(yōu)點測定溶液中氨茶堿吸光度，波優(yōu)點測定溶液中氨茶堿吸光度，最后經過規(guī)范曲線計算樣品中氨茶堿的含最后經過規(guī)范曲線計算樣品中氨茶