探索色譜新領(lǐng)域

1、探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州故障排除故障排除探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州 發(fā)現(xiàn)問題發(fā)現(xiàn)問題 定位問題定位問題 糾正問題糾正問題 防止問題的再發(fā)生防止問題的再發(fā)生 主要規(guī)則主要規(guī)則探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州故障特征故障特征1. 色譜峰展寬2. 壓力升高螺絲、金屬箍、毛細(xì)管螺絲、金屬箍、毛細(xì)管相應(yīng)的對策相應(yīng)的對策1. 用配套的螺絲、金屬箍和毛細(xì)管2. 連接進(jìn)樣器和色譜柱之間的管道 (柱外死體積)應(yīng)盡可

2、能地短螺絲、金屬箍和毛細(xì)管故障螺絲、金屬箍和毛細(xì)管故障探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州死體積死體積連接螺絲包括一個(gè)螺母和一個(gè)套在毛細(xì)管上的金屬箍；它們必須和完全匹配當(dāng)完全匹配時(shí)，毛細(xì)管的頂端將和儀器或柱子的端口恰好吻合，而不至于形成死體積死體積會導(dǎo)致出現(xiàn)肩峰和雙重峰注意：注意：不同生產(chǎn)廠家的螺絲和金屬不同生產(chǎn)廠家的螺絲和金屬箍是不能通用的。箍是不能通用的。螺絲、金屬箍、毛細(xì)管螺絲、金屬箍、毛細(xì)管探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州毛細(xì)管毛細(xì)管1. 從泵到檢測器所有毛細(xì)連接中，

3、毛細(xì)管的內(nèi)徑應(yīng)逐漸減小。(如泵-進(jìn)樣器連接用內(nèi)徑為0.5 mm的毛細(xì)管；進(jìn)樣器-柱子以及柱子-檢測器連接用0.2 mm的毛細(xì)管)3. 大內(nèi)徑的毛細(xì)管導(dǎo)致寬峰4. 太長的管子導(dǎo)致峰的分辨率差，特別是換用微徑柱時(shí)2. 在使用微徑柱(3 mm或2 mm)或梯度解吸時(shí)，選擇合適內(nèi)徑和合適長度的毛細(xì)管尤為重要注意：注意：使用短的和內(nèi)徑小的毛細(xì)管可以將和毛細(xì)管有關(guān)的柱外體積使用短的和內(nèi)徑小的毛細(xì)管可以將和毛細(xì)管有關(guān)的柱外體積 效應(yīng)降到最低效應(yīng)降到最低螺絲、金屬箍、毛細(xì)管螺絲、金屬箍、毛細(xì)管探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州流動相的準(zhǔn)備流動相的準(zhǔn)備

4、1. 使用色譜純的溶劑和優(yōu)級純的試劑2. 用S&S公司的0.45 m 的濾膜將所用的溶劑和緩沖溶液過濾3. 使用HPLC級(或梯度級)的溶劑(如MERCK的溶劑事先都經(jīng)過過濾)4. 使用醋酸鹽緩沖溶液比使用磷酸鹽緩沖溶液要好，但應(yīng)注意醋酸鹽緩 沖液在近紫外區(qū)的吸收5. 使用酸或堿準(zhǔn)備緩沖溶液要比使用鹽好6. 使用0.04%的疊氮鈉溶液以防止流動相長菌 溶劑溶劑探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州流動相脫氣流動相脫氣使用不脫氣或脫氣不完全的流動相會導(dǎo)致形成氣泡、泵性能不穩(wěn)定、檢測器噪音高以及其它檢測器故障0204060801001

5、20HeatingHeliumVacuumUltrasonic 注意：注意： 1. 加熱是流動相脫氣的最好方加熱是流動相脫氣的最好方 法，但不方便法，但不方便2. 氦氣脫氣也很方便，僅需幾氦氣脫氣也很方便，僅需幾 分鐘就可以完成分鐘就可以完成 3. 真空過濾脫氣效果較差，但真空過濾脫氣效果較差，但 很方便，也很經(jīng)濟(jì)，不失為很方便，也很經(jīng)濟(jì)，不失為 一常規(guī)辦法一常規(guī)辦法溶劑溶劑探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州溶劑純度的影響溶劑純度的影響溶劑中的雜質(zhì)會導(dǎo)致出現(xiàn)“鬼峰”，特別是梯度解吸時(shí)注意：注意： 只能使用色譜級的溶劑只能使用色譜級的溶

6、劑! 不能使用舊的或未經(jīng)過濾的緩沖溶液不能使用舊的或未經(jīng)過濾的緩沖溶液溶劑溶劑探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州溶劑混合產(chǎn)生的問題溶劑混合產(chǎn)生的問題流動相中所使用的不同溶劑必須互溶注意：注意：過高濃度的磷酸鹽緩沖溶液可能會在有機(jī)溶劑中析出過高濃度的磷酸鹽緩沖溶液可能會在有機(jī)溶劑中析出流動相中溶劑不互溶會導(dǎo)致:1. 基線漂移，2. 保留時(shí)間的重現(xiàn)性差，3. 出現(xiàn)肩峰和“鬼峰”的問題.溶劑溶劑探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州樣品的溶解樣品的溶解樣品應(yīng)該溶解于流動相中，如果樣品在

7、流動相中的溶解性實(shí)在太差，則應(yīng)將進(jìn)樣體積降到很低(如1 l)選用不合適的溶劑溶解樣品可能會導(dǎo)致保留時(shí)間的重現(xiàn)性差，肩峰、雙重峰和“鬼峰”溶劑溶劑探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州緩沖溶液和離子對系統(tǒng)緩沖溶液和離子對系統(tǒng)1. 應(yīng)保持緩沖溶液的濃度在20 mM到50mM之間，以獲得最佳的分析結(jié)果2. 濃度過低的緩沖溶液體系會導(dǎo)致峰形差，分辨率低3. 一種緩沖溶液的最有效的緩沖pH范圍是偏離其pKa值 1 pH單位不同緩沖體系的緩沖范圍不同緩沖體系的緩沖范圍緩沖溶液種類緩沖溶液種類 pKa 緩沖范圍緩沖范圍磷酸鹽 2.1 1.1 - 3.1

8、 7.2 6.2 - 8.212.311.3 - 13.3醋酸鹽 4.8 3.8 - 5.8檸檬酸鹽 3.1 2.1 - 4.1 4.7 3.7 - 5.7 5.4 4.4 - 6.4溶劑溶劑探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州故障特征故障特征“鬼峰”(由已被污染的過濾頭造成)保留時(shí)間不斷改變(由于過濾頭堵塞或部分堵塞)清洗步驟清洗步驟：1. 水2. 稀硝酸3. 水4. 異丙醇5. 水(超聲波清洗超聲波清洗)流動相過濾頭產(chǎn)生的問題流動相過濾頭產(chǎn)生的問題溶劑溶劑探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-

9、03-16 臺州進(jìn)樣體積進(jìn)樣體積進(jìn)樣量過大會導(dǎo)致峰形不對稱以及保留時(shí)間變短的問題通常引起色譜柱過載或超出檢測器的檢測限是由于樣品濃度過高而不是體積的問題過大的進(jìn)樣體積會導(dǎo)致產(chǎn)生寬峰注意：注意： 使用微徑柱時(shí)，必須保使用微徑柱時(shí)，必須保 證柱子不要過載證柱子不要過載進(jìn)樣進(jìn)樣探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州Sample size effectsSample amount 1 g/g silicaok 10 g/g silicaprobably ok100 g/g silicaoverloaded; ok for preparative

10、LC探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州獲得高重現(xiàn)性結(jié)果的要求獲得高重現(xiàn)性結(jié)果的要求 各批次之間的重現(xiàn)性好每根柱子之間的重現(xiàn)性好峰形對稱分離效率高，選擇性好色譜柱故障的原因色譜柱故障的原因柱子的壽命 63%反壓升高 23%重現(xiàn)性變差18%分離效率降低12%色譜柱色譜柱探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州避免問題的避免問題的“秘訣秘訣” 使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度）大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2 - 8.0避免流動相組成及極性的劇烈變化流

11、動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢將柱子沖洗干凈，并保存在乙腈中壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號色譜柱色譜柱探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州非極性固定相非極性固定相(如反相色譜填料RP-18,RP-8等)的再生： 水 乙腈 氯仿(或異丙醇) 乙腈 水0.05 M 稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱色譜柱的再生色譜柱的再生 直接將色譜柱連接到泵，每種清洗溶劑用20倍柱體積極性固定相極性固定相(如Si, NH2, CN, DIOL基色譜填料)的再生：正庚烷 氯仿 乙酸乙酯 丙酮 乙醇 水注意：在

12、通常情況下，最好是更換色譜柱；花費(fèi)太多的時(shí)間用于色譜柱再生而不能注意：在通常情況下，最好是更換色譜柱；花費(fèi)太多的時(shí)間用于色譜柱再生而不能 保證正常的分析工作是得不償失的。保證正常的分析工作是得不償失的。色譜柱色譜柱探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州柱外死體積柱外死體積柱頭的死體積會導(dǎo)致產(chǎn)生雙重峰或脫尾峰而且，已被污染的預(yù)柱或柱子濾網(wǎng)也會導(dǎo)致產(chǎn)生類似的問題色譜柱色譜柱探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州色譜柱色譜柱(壓力壓力)問題問題當(dāng)色譜柱連接到泵當(dāng)色譜柱連接到泵 將柱子反向沖

13、洗； 和進(jìn)樣器時(shí)，壓力和進(jìn)樣器時(shí)，壓力 柱頭濾網(wǎng)堵塞 更換濾網(wǎng)；特別高特別高 更換色譜柱 柱頭填料變臟將柱子反向沖洗；取下濾網(wǎng)，挖去柱頭變臟的填料，填入新的填料； 更換色譜柱當(dāng)柱子連接到檢測當(dāng)柱子連接到檢測器時(shí)器時(shí),壓力很高壓力很高 柱子和檢測器之間 停泵!(危險(xiǎn)：檢測池可能會堵塞) 的管道堵塞 更換管子可能原因可能原因 解決辦法解決辦法探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州壓力高壓力高沒有出峰沒有出峰;峰高改變峰高改變解決問題解決問題 可能原因可能原因 解決辦法解決辦法 預(yù)柱堵塞 更換預(yù)柱 柱頭堵塞 更換柱頭的濾網(wǎng)；反向沖洗柱子； 更換

14、色譜柱 毛細(xì)管堵塞 更換毛細(xì)管可能原因可能原因泵沒有開流速；系統(tǒng)有漏進(jìn)樣體積或濃度的重現(xiàn)性差解決辦法解決辦法檢查泵；檢查接頭；檢查流動相的組成；檢查系統(tǒng)是否有漏檢查進(jìn)樣系統(tǒng)以及樣品的均勻性探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州噪音高或基線漂移噪音高或基線漂移解決問題解決問題可能原因可能原因柱子沒有平衡好雜質(zhì)組分從色譜柱中緩慢流出雜質(zhì)在柱子中的富集檢測器或色譜柱的溫度差異系統(tǒng)有氣泡檢測器氘燈需更換電壓不穩(wěn)造成干擾解決辦法解決辦法繼續(xù)沖洗色譜柱至平衡利用強(qiáng)極性的溶劑沖洗色譜柱沖洗色譜柱；改進(jìn)和提高樣品的預(yù)處理；使用液相色譜純的溶劑使用色譜柱恒

15、溫箱流動相脫氣；使用反壓調(diào)節(jié)器更換氘燈（氘燈使用壽命一般為1000小時(shí)）使用穩(wěn)壓電源；檢查供電系統(tǒng)探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州出現(xiàn)出現(xiàn)“鬼峰鬼峰”解決問題解決問題可能原因可能原因上一針樣品中沒有完全流出的物質(zhì)樣品中未知的組分色譜柱被污染溶劑中有雜質(zhì)流動相和溶解樣品的溶劑不互溶三氟乙酸被氧化解決辦法解決辦法待樣品中的組分盡可能完全流出后才進(jìn)下一個(gè)樣品；每運(yùn)行完一個(gè)樣品后用強(qiáng)極性的溶劑沖洗色譜柱；改進(jìn)樣品的預(yù)處理；組分復(fù)雜的樣品盡可能使用梯度解吸的方法改進(jìn)樣品的預(yù)處理每運(yùn)行完一個(gè)樣品后用強(qiáng)極性的溶劑沖洗色譜柱；改進(jìn)樣品的預(yù)處理使用色

16、譜純的溶劑盡可能用流動相溶解樣品流動相盡量每天新配；使用三氟乙酸時(shí)，應(yīng)使用抗氧劑探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州出現(xiàn)肩峰或出現(xiàn)肩峰或前延峰前延峰解決問題解決問題可能原因可能原因預(yù)柱被污染或選用了不合適的預(yù)柱柱頭“塌陷”造成死體積或是柱子內(nèi)部有短流出現(xiàn)溶解樣品的溶劑選擇錯誤干擾物質(zhì)的存在；樣品中的雜質(zhì)色譜柱過載柱外效應(yīng)的影響解決辦法解決辦法更換預(yù)柱更換色譜柱用流動相溶解樣品，如果不可以，應(yīng)將進(jìn)樣體積降至很低（如1微升）改進(jìn)樣品預(yù)處理；用測試的混合物檢驗(yàn)色譜柱；使用色譜純?nèi)軇悠废♂寵z查毛細(xì)管連接探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索

17、色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州峰形展寬峰形展寬解決問題解決問題解決辦法解決辦法更換色譜柱或預(yù)柱減少進(jìn)樣體積；稀釋樣品用流動相溶解樣品使用濃度稍高的緩沖溶液或者換用其它的緩沖溶液檢查毛細(xì)管連接檢查是否有漏；使用小的檢測池提高色譜柱溫度使用內(nèi)徑較細(xì)的較短的毛細(xì)管連接；檢查柱外死體積使用較小粒徑填料的色譜柱；更換色譜柱可能原因可能原因色譜柱或預(yù)柱被污染或不合適色譜柱“過載”或進(jìn)樣體積過大溶解樣品的溶劑選用不當(dāng)緩沖溶液的濃度太稀柱外效應(yīng)的影響色譜柱和檢測器之間有漏；檢測器的檢測池過大色譜柱溫度太低；流動相的黏度太高連接用的毛細(xì)管太長；柱外死體積太大色譜柱柱效下降探索色譜新領(lǐng)域

18、，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州出現(xiàn)脫尾峰出現(xiàn)脫尾峰解決問題解決問題解決辦法解決辦法減少樣品體積；增大色譜柱內(nèi)徑；使用高容量的固定相改進(jìn)樣品預(yù)處理；調(diào)節(jié)流動相的組成；使用測試樣品混合物檢查色譜柱；使用色譜純?nèi)軇┦褂昧鲃酉喔男詣ㄈ缛野罚?；提高緩沖溶液或鹽溶液的濃度（離子對色譜）降低流動相的pH值；使用堿性去活的色譜柱更換濾網(wǎng)；使用柱前過濾系統(tǒng)；將樣品過濾檢查毛細(xì)管連接更換色譜柱；使用性質(zhì)較溫和的分離條件可能原因可能原因色譜柱過載干擾峰；雜質(zhì)硅膠表面未完全鍵合的硅羥基的影響色譜柱的濾網(wǎng)堵塞柱外效應(yīng)的影響；死體積色譜柱有“塌陷”、短流或斷流探索色譜

19、新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州出現(xiàn)雙重峰或出現(xiàn)雙重峰或分叉峰分叉峰解決問題解決問題可能原因可能原因樣品體積過大；色譜柱過載溶解樣品的溶劑選用不當(dāng)色譜柱有“塌陷”、短流或斷流色譜柱濾網(wǎng)堵塞進(jìn)樣器沒有徹底清洗解決辦法解決辦法減少進(jìn)樣體積；稀釋樣品；將樣品在流動相中溶解；如果不行，盡可能將進(jìn)樣體積降低（如1微升）更換色譜柱；使用較溫和的分離條件更換色譜柱的濾網(wǎng)；使用柱前過濾裝置；過濾樣品徹底清洗進(jìn)樣器；更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州保留時(shí)間變長保留時(shí)間變長解決問題解決

20、問題可能原因可能原因流速降低硅膠表面有活性點(diǎn)鍵合相流失流動相的組成有變化溫度降低解決辦法解決辦法檢查系統(tǒng)是否有漏；更換泵的密封圈；排凈氣泡；使用流動相改性劑（如加入三乙胺）；使用堿性去活的色譜柱保持流動相pH值在2-7.5 范圍內(nèi)檢查泵；檢查濾網(wǎng)；防止流動相的揮發(fā)或降解使用色譜柱恒溫箱探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州保留時(shí)間縮短保留時(shí)間縮短解決問題解決問題可能原因可能原因流速升高色譜柱過載鍵合相流失流動相組成發(fā)生變化溫度升高色譜柱老化解決辦法解決辦法檢查泵；檢查流速降低樣品的濃度或進(jìn)樣體積流動相的pH值保持在2-7.5 范圍內(nèi)檢查泵；檢查濾網(wǎng)；防止流動相的揮發(fā)或降解使用色譜柱恒溫箱更換色譜柱；使用預(yù)柱探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！探索色譜新領(lǐng)域，默克與您共同努力！2005-03-16 臺州保留時(shí)間保留時(shí)間無規(guī)則改變無規(guī)則改變解決問題解決問題可能原因可能原因流速發(fā)生變化色譜柱尚未平衡；緩沖溶液容量不夠流動相組成發(fā)生變化