第三章_培養(yǎng)基設(shè)計(jì)-3

1、v大綱要求：大綱要求：v掌握培養(yǎng)基的主要營(yíng)養(yǎng)成分及其作用。掌握培養(yǎng)基的主要營(yíng)養(yǎng)成分及其作用。v了解培養(yǎng)基的主要類型及其特征。了解培養(yǎng)基的主要類型及其特征。v掌握培養(yǎng)基配方設(shè)計(jì)的一般思路。掌握培養(yǎng)基配方設(shè)計(jì)的一般思路。 第三章第三章 工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基設(shè)計(jì)工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基設(shè)計(jì)能力培養(yǎng) 能正確選擇工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的材料；能正確選擇工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的材料；v能配制適合不同發(fā)酵階段需要的培養(yǎng)基。能配制適合不同發(fā)酵階段需要的培養(yǎng)基。 第三章第三章 工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基第一節(jié)第一節(jié) 培養(yǎng)基的要求及成分來源培養(yǎng)基的要求及成分來源第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基類型培養(yǎng)基類型第三節(jié)第三節(jié) 培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)原理和優(yōu)化方法培養(yǎng)基的

2、設(shè)計(jì)原理和優(yōu)化方法* 培養(yǎng)基培養(yǎng)基：廣義上講培養(yǎng)基是指一切廣義上講培養(yǎng)基是指一切可供微生物細(xì)胞生長(zhǎng)可供微生物細(xì)胞生長(zhǎng) 繁殖所需的一組營(yíng)繁殖所需的一組營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和原料。養(yǎng)物質(zhì)和原料。 同時(shí)培養(yǎng)基也為微生物培養(yǎng)提供除營(yíng)同時(shí)培養(yǎng)基也為微生物培養(yǎng)提供除營(yíng)養(yǎng)外的其它所必須的條件。養(yǎng)外的其它所必須的條件。 發(fā)酵培養(yǎng)基的作用：發(fā)酵培養(yǎng)基的作用： 滿足菌體的生長(zhǎng)滿足菌體的生長(zhǎng) 促進(jìn)產(chǎn)物的形成促進(jìn)產(chǎn)物的形成 第一節(jié)第一節(jié) 培養(yǎng)基的要求及成分來源培養(yǎng)基的要求及成分來源一、一、設(shè)計(jì)工業(yè)發(fā)酵的培養(yǎng)基應(yīng)遵循原則設(shè)計(jì)工業(yè)發(fā)酵的培養(yǎng)基應(yīng)遵循原則* * * * 1、必須提供合成微生物細(xì)胞和發(fā)酵產(chǎn)物的基、必須提供合成微生物細(xì)胞和

3、發(fā)酵產(chǎn)物的基本成分；本成分；2、有利于減少培養(yǎng)基原料的單耗，即提高單、有利于減少培養(yǎng)基原料的單耗，即提高單位營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)換率。位營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)換率。3、有利于提高產(chǎn)物的濃度，以提高單位容積、有利于提高產(chǎn)物的濃度，以提高單位容積發(fā)酵罐的生產(chǎn)能力。發(fā)酵罐的生產(chǎn)能力。4、有利于提高產(chǎn)物的合成速度，縮短發(fā)酵周、有利于提高產(chǎn)物的合成速度，縮短發(fā)酵周期。期。5、盡量減少副產(chǎn)物的形成，便于產(chǎn)物分離純化。、盡量減少副產(chǎn)物的形成，便于產(chǎn)物分離純化。6、原料價(jià)格低廉，質(zhì)量穩(wěn)定，取材容易。、原料價(jià)格低廉，質(zhì)量穩(wěn)定，取材容易。7、所用的原料盡可能減少對(duì)發(fā)酵過程中的通氣攪、所用的原料盡可能減少對(duì)發(fā)酵過程中的通氣攪拌的影響

4、，利于提高氧的利用率。降低能耗。拌的影響，利于提高氧的利用率。降低能耗。8、有利于產(chǎn)品的分離純化，并盡可能減少、有利于產(chǎn)品的分離純化，并盡可能減少“三廢三廢”物質(zhì)。物質(zhì)。二、二、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分1、碳源碳源 構(gòu)成菌體細(xì)胞和代謝產(chǎn)物的構(gòu)成菌體細(xì)胞和代謝產(chǎn)物的主要元主要元素素，提供生物生命活動(dòng)中所需，提供生物生命活動(dòng)中所需能源能源的原的原料。料。 糖類、油脂、有機(jī)酸、低碳醇和碳?xì)涮穷?、油脂、有機(jī)酸、低碳醇和碳?xì)浠衔?。化合物。v速效碳速效碳(葡萄糖葡萄糖)：迅速利用的碳源，有利于菌體的生長(zhǎng)。但對(duì)許迅速利用的碳源，有利于菌體的生長(zhǎng)。但對(duì)許多產(chǎn)物合成有阻遏作用。多產(chǎn)物合成有阻遏作用。v

5、緩效碳（糊精）：緩效碳（糊精）：多數(shù)有利于產(chǎn)物的形成。多數(shù)有利于產(chǎn)物的形成。* * * * 邊糖化邊發(fā)酵工藝原理及應(yīng)用。邊糖化邊發(fā)酵工藝原理及應(yīng)用。工業(yè)上常用的糖類工業(yè)上常用的糖類 葡萄糖葡萄糖 所有的微生物都能利用葡萄糖所有的微生物都能利用葡萄糖 但是過量使用往往會(huì)引起但是過量使用往往會(huì)引起 “ 葡葡萄糖效應(yīng)萄糖效應(yīng)”q 葡萄糖過多，會(huì)引起葡萄糖效應(yīng)過多，會(huì)引起葡萄糖效應(yīng)* 即會(huì)過分地加速菌體的呼吸，使培養(yǎng)基中的溶即會(huì)過分地加速菌體的呼吸，使培養(yǎng)基中的溶解氧供不應(yīng)求，使一些中間代謝產(chǎn)物（如丙酮解氧供不應(yīng)求，使一些中間代謝產(chǎn)物（如丙酮酸、乳酸、乙酸等）不能完全氧化而積累在菌酸、乳酸、乙酸等）不

6、能完全氧化而積累在菌體內(nèi)或培養(yǎng)基中，導(dǎo)致體內(nèi)或培養(yǎng)基中，導(dǎo)致pH下降，影響某些酶下降，影響某些酶的活性，從而抑制微生物的生長(zhǎng)和產(chǎn)物的合成。的活性，從而抑制微生物的生長(zhǎng)和產(chǎn)物的合成。 糖蜜糖蜜 糖蜜主要含有蔗糖，總糖可達(dá)糖蜜主要含有蔗糖，總糖可達(dá)50%75%。一般糖蜜分甘蔗糖蜜和甜菜糖蜜葡萄糖蜜一般糖蜜分甘蔗糖蜜和甜菜糖蜜葡萄糖蜜。不同的制糖工藝生產(chǎn)的糖液質(zhì)量差別很大不同的制糖工藝生產(chǎn)的糖液質(zhì)量差別很大%100(%)(%)DE干物質(zhì)含量還原糖含量值%100(%)(%)DX干物質(zhì)含量葡萄糖含量值不用加工方法對(duì)甘蔗糖蜜的影響不用加工方法對(duì)甘蔗糖蜜的影響糖蜜使用的注意點(diǎn)：糖蜜使用的注意點(diǎn)：除糖份外，含

7、有較多的雜質(zhì)，其中有些是有用的，除糖份外，含有較多的雜質(zhì)，其中有些是有用的，但是許多都會(huì)對(duì)發(fā)酵產(chǎn)生不利的影響，需要進(jìn)行但是許多都會(huì)對(duì)發(fā)酵產(chǎn)生不利的影響，需要進(jìn)行預(yù)處理。預(yù)處理。例：谷氨酸發(fā)酵例：谷氨酸發(fā)酵有害物質(zhì)：膠體成分（起泡、結(jié)晶）、鈣鹽有害物質(zhì)：膠體成分（起泡、結(jié)晶）、鈣鹽（結(jié)晶）生物素（發(fā)酵控制）（結(jié)晶）生物素（發(fā)酵控制）預(yù)處理：澄清預(yù)處理：澄清脫鈣脫鈣脫除生物素脫除生物素例：檸檬酸發(fā)酵例：檸檬酸發(fā)酵有害物質(zhì)：鐵離子含量高（導(dǎo)致異檸檬酸的生成）有害物質(zhì)：鐵離子含量高（導(dǎo)致異檸檬酸的生成）可用亞鐵氰化鉀，除鐵可用亞鐵氰化鉀，除鐵。 淀粉、糊精淀粉、糊精使用條件：微生物必須能分泌水解淀粉、

8、使用條件：微生物必須能分泌水解淀粉、 糊精的酶類。糊精的酶類。缺點(diǎn)：難利用、發(fā)酵液比較稠、一般缺點(diǎn)：難利用、發(fā)酵液比較稠、一般2.0%時(shí)加入一定的時(shí)加入一定的-淀粉酶成分比較淀粉酶成分比較復(fù)雜，有直鏈淀粉和支鏈淀粉等等。復(fù)雜，有直鏈淀粉和支鏈淀粉等等。優(yōu)點(diǎn)：來源廣泛、價(jià)格低優(yōu)點(diǎn)：來源廣泛、價(jià)格低 難利用，可以解除葡萄糖效應(yīng)難利用，可以解除葡萄糖效應(yīng)。例：地衣牙孢桿菌生產(chǎn)例：地衣牙孢桿菌生產(chǎn)-淀粉酶淀粉酶碳源對(duì)生長(zhǎng)和產(chǎn)酶的影響碳源對(duì)生長(zhǎng)和產(chǎn)酶的影響碳源碳源 細(xì)胞量細(xì)胞量 -淀粉酶淀粉酶葡萄糖葡萄糖 4.2 0 蔗糖蔗糖 4.02 0糊精糊精 3.06 38.2淀粉淀粉 3.09 40.2 、醇類

9、：醇類： 甘露醇、甘油、低濃度的乙醇。甘露醇、甘油、低濃度的乙醇。 、脂肪酸脂肪酸： 甲酸、乙酸、丙酸、丁酸。甲酸、乙酸、丙酸、丁酸。 油酸和亞油酸油酸和亞油酸 、正烷烴：正烷烴：14C至至18C的直鏈烷烴混合物。的直鏈烷烴混合物。 嗜堿芽胞桿菌(AC-2)中碳源對(duì)堿性纖維素酶分泌的影響結(jié)果：各種碳源相差不大結(jié)果：各種碳源相差不大推論：該菌種的堿性纖維素酶為組成型推論：該菌種的堿性纖維素酶為組成型蘇勤，林業(yè)化學(xué)與工業(yè)，2004二、氮源二、氮源 氮源主要用于構(gòu)成菌體細(xì)胞物質(zhì)（氨基酸，蛋氮源主要用于構(gòu)成菌體細(xì)胞物質(zhì)（氨基酸，蛋白質(zhì)、核酸等）和含氮代謝物。常用的氮源可分白質(zhì)、核酸等）和含氮代謝物。常

10、用的氮源可分為兩大類：有機(jī)氮源和無機(jī)氮源。為兩大類：有機(jī)氮源和無機(jī)氮源。 1、無機(jī)氮源、無機(jī)氮源種類：種類：氨鹽、硝酸鹽和氨水氨鹽、硝酸鹽和氨水尿素，硫酸銨（銨鹽）、尿素，硫酸銨（銨鹽）、氣態(tài)氮?dú)鈶B(tài)氮特點(diǎn)：特點(diǎn)：微生物對(duì)它們的吸收快，所以也稱之謂微生物對(duì)它們的吸收快，所以也稱之謂迅速利迅速利用的氮源用的氮源。但無機(jī)氮源的迅速利用常會(huì)引起。但無機(jī)氮源的迅速利用常會(huì)引起pH的變的變化如：化如： (NH4)2SO4 2NH3 + 2H2SO4 NaNO3 + 4H2 NH3 + 2H2O + NaOH 生理酸性物質(zhì)生理酸性物質(zhì)，如硫酸胺，如硫酸胺生理堿性物質(zhì)生理堿性物質(zhì)，如硝酸鈉，如硝酸鈉* 正確使

11、用生理酸堿性物質(zhì)，對(duì)穩(wěn)定正確使用生理酸堿性物質(zhì)，對(duì)穩(wěn)定和調(diào)節(jié)發(fā)酵過程的和調(diào)節(jié)發(fā)酵過程的pH有積極作用。有積極作用。 * 所以選擇合適的無機(jī)氮源有兩層意義：所以選擇合適的無機(jī)氮源有兩層意義： (1) 滿足菌體生長(zhǎng)滿足菌體生長(zhǎng); (2) 穩(wěn)定和調(diào)節(jié)發(fā)酵穩(wěn)定和調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中的過程中的pH。 在制液體曲時(shí)，用制液體曲時(shí)，用 NaNONaNO3 3 作氮源作氮源，菌絲體長(zhǎng)得粗壯，培養(yǎng)時(shí)間短，且糖化菌絲體長(zhǎng)得粗壯，培養(yǎng)時(shí)間短，且糖化能力較高。能力較高。 因?yàn)橐驗(yàn)?NaNONaNO3 3 的代謝得到的的代謝得到的 NaOH NaOH 可可中和曲霉生長(zhǎng)中釋放的酸，使中和曲霉生長(zhǎng)中釋放的酸，使 pH pH 穩(wěn)定

12、穩(wěn)定在工藝要求的范圍之內(nèi)。在工藝要求的范圍之內(nèi)。舉例：舉例：以鏈霉素為例，以鏈霉素為例，合成合成 1 mol 1 mol 鏈霉素需要消耗鏈霉素需要消耗 7 mol 7 mol 的的 NHNH3 3 。生產(chǎn)中采用流加氨水。生產(chǎn)中采用流加氨水。* * * * 使用氨水時(shí)要注意：使用氨水時(shí)要注意： (1) (1) 要少量多次流加，加強(qiáng)攪拌，防止局部過要少量多次流加，加強(qiáng)攪拌，防止局部過堿。堿。（2 2）使用前用石棉等介質(zhì)過濾，除去多種嗜堿）使用前用石棉等介質(zhì)過濾，除去多種嗜堿性微生物，防止染菌。性微生物，防止染菌。氨水氨水毛霉產(chǎn)蛋白酶的研究毛霉產(chǎn)蛋白酶的研究陳濤，中國(guó)釀造，2004初始pH的影響:p

13、H偏酸比較好，中性蛋白酶影響大無機(jī)氮源的影響：硫酸銨硝酸銨硝酸鈉尿素2、有機(jī)氮源、有機(jī)氮源來源：來源：花生餅粉、黃豆餅粉、棉子餅花生餅粉、黃豆餅粉、棉子餅粉、玉米漿、玉米蛋白粉、蛋白胨、粉、玉米漿、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉、魚粉、蠶蛹粉、廢菌絲體和酵母粉、魚粉、蠶蛹粉、廢菌絲體和酒糟酒糟。成分復(fù)雜成分復(fù)雜：除提供氮源外，有些有機(jī)：除提供氮源外，有些有機(jī)氮源還提供大量的無機(jī)鹽及生長(zhǎng)因子。氮源還提供大量的無機(jī)鹽及生長(zhǎng)因子。 *玉米漿玉米漿是玉米淀粉生產(chǎn)中的副產(chǎn)是玉米淀粉生產(chǎn)中的副產(chǎn)物，其中固體物含量在物，其中固體物含量在50?？扇苄钥扇苄缘鞍住⑸L(zhǎng)因子（生物素）、苯乙酸蛋白、生長(zhǎng)因子（生物素）、

14、苯乙酸還含有有機(jī)酸、還原糖、磷、微量元還含有有機(jī)酸、還原糖、磷、微量元素、生長(zhǎng)素。素、生長(zhǎng)素。 成分成分(%) 液體液體 固體固體干物干物 46.8049.60 90.3791.74 灰分灰分 8.0410.43 12.9813.74總氮總氮 3.333.67 7.368.33總糖總糖(以葡萄糖計(jì)以葡萄糖計(jì)) 0.744.39 5.715.88乳糖乳糖 11.6019.30 15.0617.72酸度酸度(ml 0.1mol/L NaOH/10g) 108144 169.0198.0揮發(fā)酸揮發(fā)酸(ml 0.1mol/L NaOH/10g) 0.11.1 0.501.35鐵鐵 0.0090.027

15、 磷磷 1.51.9 2.62.8鈣鈣 0.020.07 鉀鉀 2.02.5 鋅鋅 0.0050.012 SO2 微量微量0.02 沉淀固體沉淀固體 38.452.9 PH 4.04.7 3.03.6使用什么樣的玉米漿才能使發(fā)酵的進(jìn)使用什么樣的玉米漿才能使發(fā)酵的進(jìn)程更優(yōu)化、發(fā)酵結(jié)果更穩(wěn)定？程更優(yōu)化、發(fā)酵結(jié)果更穩(wěn)定？* v因?yàn)橐后w玉米漿不均一、穩(wěn)定性差、極容易因?yàn)橐后w玉米漿不均一、穩(wěn)定性差、極容易沉淀，夏天更易染菌變質(zhì)而導(dǎo)致其有效成分沉淀，夏天更易染菌變質(zhì)而導(dǎo)致其有效成分的喪失或不足，從而影響發(fā)酵的穩(wěn)定性。所的喪失或不足，從而影響發(fā)酵的穩(wěn)定性。所以，現(xiàn)今微生物技術(shù)領(lǐng)先的大型發(fā)酵企業(yè)以，現(xiàn)今微生物

16、技術(shù)領(lǐng)先的大型發(fā)酵企業(yè)（尤其是某些技術(shù)先進(jìn)的抗菌素和酶制劑廠（尤其是某些技術(shù)先進(jìn)的抗菌素和酶制劑廠家）都紛紛改用玉米漿的最新?lián)Q代產(chǎn)品家）都紛紛改用玉米漿的最新?lián)Q代產(chǎn)品“高氮高氮”型玉米漿干粉型玉米漿干粉，因其有著極大的優(yōu)點(diǎn)，因其有著極大的優(yōu)點(diǎn)，且蛋白質(zhì)含量可高達(dá)且蛋白質(zhì)含量可高達(dá)50%.氮源使用時(shí)要注意的問題氮源使用時(shí)要注意的問題q1. 有機(jī)氮源和無機(jī)氮源應(yīng)當(dāng)混合使用有機(jī)氮源和無機(jī)氮源應(yīng)當(dāng)混合使用*早期：容易利用易同化的氮源早期：容易利用易同化的氮源無機(jī)氮源。無機(jī)氮源。中期：菌體的代謝酶系已形成、則利用蛋白質(zhì)。中期：菌體的代謝酶系已形成、則利用蛋白質(zhì)。 實(shí)驗(yàn)室中常用：實(shí)驗(yàn)室中常用： 玉米漿、蛋

17、白胨、牛肉膏、酵母膏等。玉米漿、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏等。 工業(yè)生產(chǎn)上常用：工業(yè)生產(chǎn)上常用： 硫酸銨、尿素、氨水、豆餅粉、花生餅硫酸銨、尿素、氨水、豆餅粉、花生餅粉、麩皮等。粉、麩皮等。 2 2、合適的、合適的C C、N N比比C C：N N f ( f ( 菌種、發(fā)酵階段、碳菌種、發(fā)酵階段、碳源種類、氮源種類、通氣強(qiáng)度源種類、氮源種類、通氣強(qiáng)度 、攪拌強(qiáng)度等等、攪拌強(qiáng)度等等) )，無完全統(tǒng)一的，無完全統(tǒng)一的 標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)。* * * * * * * * 一般來說，細(xì)菌和酵母細(xì)胞的碳氮比一般來說，細(xì)菌和酵母細(xì)胞的碳氮比為為 5:1 5:1，霉菌細(xì)胞的碳氮比為，霉菌細(xì)胞的碳氮比為10:110:1，

18、所以霉菌，所以霉菌 培養(yǎng)基的碳氮比大而細(xì)菌的碳氮比小。培養(yǎng)基的碳氮比大而細(xì)菌的碳氮比小。 考慮產(chǎn)物，以谷氨酸為例，一般工業(yè)的考慮產(chǎn)物，以谷氨酸為例，一般工業(yè)的發(fā)酵培養(yǎng)基碳氮比是發(fā)酵培養(yǎng)基碳氮比是100100：0.20.22.02.0，而谷，而谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基的碳氮比是氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基的碳氮比是100100：15152121，當(dāng)當(dāng) C:NC:N100:0.5 100:0.5 時(shí)只合成菌體，不產(chǎn)谷時(shí)只合成菌體，不產(chǎn)谷氨酸，當(dāng)氨酸，當(dāng) C:NC:N100:11 100:11 以上才開始合成谷以上才開始合成谷氨酸。氨酸。 對(duì)于生產(chǎn)氨基酸等含氮的化合物時(shí)，對(duì)于生產(chǎn)氨基酸等含氮的化合物時(shí)，它的發(fā)酵培養(yǎng)基除供

19、給充足的碳源物質(zhì)它的發(fā)酵培養(yǎng)基除供給充足的碳源物質(zhì)外，還應(yīng)該添加足夠的銨鹽或尿素等氮外，還應(yīng)該添加足夠的銨鹽或尿素等氮素化合物。素化合物。快速利用和緩慢利用的碳、快速利用和緩慢利用的碳、氮源的結(jié)合。氮源的結(jié)合。氮源：過多氮源：過多生長(zhǎng)過于旺盛、生長(zhǎng)過于旺盛、pHpH偏高、偏高、 代謝產(chǎn)物積累不利。代謝產(chǎn)物積累不利。 過少過少菌體量少，影響產(chǎn)量。菌體量少，影響產(chǎn)量。碳源：過多碳源：過多pHpH容易下降。容易下降。 過少過少容易引起菌體衰老和自溶。容易引起菌體衰老和自溶。 工業(yè)工業(yè)C:N C:N 的范圍：的范圍： 100 100 ：0.20.22.0 2.0 吉林坨牌吉林坨牌 玉米粉玉米粉: :尿

20、素尿素100100：0.050.050.080.08。 尿素含氮尿素含氮 46 46 。 玉米中含蛋白質(zhì)約為玉米中含蛋白質(zhì)約為 8.5 8.5 。 * * * * 培養(yǎng)基的碳氮比不僅會(huì)影響微生物培養(yǎng)基的碳氮比不僅會(huì)影響微生物菌體的生長(zhǎng)，同時(shí)也會(huì)影響到發(fā)酵的代菌體的生長(zhǎng)，同時(shí)也會(huì)影響到發(fā)酵的代謝途徑。不同的微生物菌種、不同的發(fā)謝途徑。不同的微生物菌種、不同的發(fā)酵產(chǎn)物所要求的碳氮比是不同的，即使酵產(chǎn)物所要求的碳氮比是不同的，即使是同一微生物在不同的培養(yǎng)階段，對(duì)培是同一微生物在不同的培養(yǎng)階段，對(duì)培養(yǎng)基的碳氮比的要求也是不一樣的。養(yǎng)基的碳氮比的要求也是不一樣的。3 . 有些產(chǎn)物會(huì)受氮源的阻遏有些產(chǎn)物會(huì)

21、受氮源的阻遏 避免使用阻遏性氮源。避免使用阻遏性氮源。 例如蛋白酶合成會(huì)受到例如蛋白酶合成會(huì)受到銨鹽銨鹽、磷酸、磷酸鹽類所阻遏鹽類所阻遏 如構(gòu)巢曲霉的蛋白酶的合成可為如構(gòu)巢曲霉的蛋白酶的合成可為銨銨鹽鹽所阻遏所阻遏 。三、無機(jī)鹽的微量元素作用三、無機(jī)鹽的微量元素作用 * * * *構(gòu)成菌體成分；構(gòu)成菌體成分；作為酶活性基的組成部分或維持酶作為酶活性基的組成部分或維持酶的活性；的活性；調(diào)節(jié)滲透壓、調(diào)節(jié)滲透壓、pH值、氧化還值、氧化還原電原電位等；位等；作為自養(yǎng)菌的能源。作為自養(yǎng)菌的能源。 主要元素有主要元素有P、S、Mg、K、Ca等；等； 微量元素有微量元素有Fe、Cu、Mn、Zn、Mo、Co、

22、B等。等。 鋅、鈷、錳、銅等微量元素鋅、鈷、錳、銅等微量元素 大部份作大部份作為酶的輔基和激活劑，一般來講，只在合為酶的輔基和激活劑，一般來講，只在合成培養(yǎng)基中才加入這些元素。成培養(yǎng)基中才加入這些元素。 一般在復(fù)合培養(yǎng)基中由于加入許多動(dòng)植物一般在復(fù)合培養(yǎng)基中由于加入許多動(dòng)植物原料等都含有微量元素原料等都含有微量元素。4、無機(jī)鹽的微量元素?zé)o機(jī)鹽的微量元素使用注意點(diǎn)使用注意點(diǎn)* 有的來源可能帶有過多的某種無機(jī)離有的來源可能帶有過多的某種無機(jī)離子和微量元素在發(fā)酵過程中必須加以子和微量元素在發(fā)酵過程中必須加以考慮?？紤]。B. 要避免鈣鹽過多時(shí)，以免形成磷酸鈣要避免鈣鹽過多時(shí)，以免形成磷酸鈣沉淀。因此，

23、當(dāng)培養(yǎng)基中的磷和鈣的沉淀。因此，當(dāng)培養(yǎng)基中的磷和鈣的濃度都很高時(shí)，可將兩者分別滅菌或濃度都很高時(shí)，可將兩者分別滅菌或逐步加；逐步加；C.先要將配好的培養(yǎng)基用堿調(diào)到先要將配好的培養(yǎng)基用堿調(diào)到pH近中近中性，再將碳酸鈣加入培養(yǎng)基中，保留性，再將碳酸鈣加入培養(yǎng)基中，保留其緩沖力其緩沖力。例：鐵離子例：鐵離子 青霉素發(fā)酵中，鐵離子的濃度要小于青霉素發(fā)酵中，鐵離子的濃度要小于20g/ml 發(fā)酵罐必須進(jìn)行表面處理發(fā)酵罐必須進(jìn)行表面處理使用時(shí)注意鹽的形式（使用時(shí)注意鹽的形式（pH的變化）的變化）例例：黑曲酶黑曲酶NRRL-330,生產(chǎn)生產(chǎn)-淀粉酶，淀粉酶，pH對(duì)酶對(duì)酶活的影響活的影響. pH 酶活酶活不加不

24、加 4.25 120分鐘分鐘加加 K2HPO4 5.45 30分鐘分鐘加加 KH2PO4 4.62 75分鐘分鐘四、生長(zhǎng)因子、前體和產(chǎn)物促進(jìn)劑四、生長(zhǎng)因子、前體和產(chǎn)物促進(jìn)劑 從廣義上講，凡是微生物生長(zhǎng)不可缺少?gòu)膹V義上講，凡是微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量的有機(jī)物質(zhì)，如氨基酸、嘌呤、嘧啶、的微量的有機(jī)物質(zhì)，如氨基酸、嘌呤、嘧啶、維生素等均稱生長(zhǎng)因子。維生素等均稱生長(zhǎng)因子。 1、生長(zhǎng)因子、生長(zhǎng)因子 如以糖質(zhì)原料為碳源的谷氨酸生產(chǎn)菌均如以糖質(zhì)原料為碳源的谷氨酸生產(chǎn)菌均為生物素缺陷型，以生物素為生長(zhǎng)因子為生物素缺陷型，以生物素為生長(zhǎng)因子, ,生生長(zhǎng)因子對(duì)發(fā)酵的調(diào)控起到重要的作用長(zhǎng)因子對(duì)發(fā)酵的調(diào)控起到重要的作

25、用 。 以谷氨酸為例生物素是生物素是B B族維生素，影響細(xì)胞膜的透性族維生素，影響細(xì)胞膜的透性* * * *生產(chǎn)上常用的生產(chǎn)上常用的生物素生物素來源的原料及其生物素含來源的原料及其生物素含量（量（ug/kgug/kg）玉米漿玉米漿 180 180 干酵母干酵母 60060018001800豆餅水解液豆餅水解液 120 120 甘蔗糖蜜甘蔗糖蜜 12001200麩皮麩皮 200 200 米糠米糠 270270甜菜糖蜜甜菜糖蜜 5353 有機(jī)氮源是這些生長(zhǎng)因子的重要來有機(jī)氮源是這些生長(zhǎng)因子的重要來源，多數(shù)有機(jī)氮源含有較多的源，多數(shù)有機(jī)氮源含有較多的B族維生族維生素和微量元素及一些微生物生長(zhǎng)不可缺素

26、和微量元素及一些微生物生長(zhǎng)不可缺少的生長(zhǎng)因子少的生長(zhǎng)因子 。 * * * * 前體指某些化合物加入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，前體指某些化合物加入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，能直接被微生物在生物合成過程中合成到能直接被微生物在生物合成過程中合成到產(chǎn)物產(chǎn)物物分子中去，而其自身的結(jié)構(gòu)并沒有多大變化，物分子中去，而其自身的結(jié)構(gòu)并沒有多大變化，但是產(chǎn)物的產(chǎn)量卻因加入前體而有較大的提高但是產(chǎn)物的產(chǎn)量卻因加入前體而有較大的提高。2、前體、前體青霉素：分子量青霉素：分子量356苯乙酸苯乙酸:分子量分子量136 苯乙酸苯乙酸及其衍生物是青霉素青霉素的前體物質(zhì)。用法用法：前體使用時(shí)普遍采用流加的方法：前體使用時(shí)普遍采用流加的方法 前體

27、一般都有毒性，濃度過大對(duì)菌體的生長(zhǎng)不前體一般都有毒性，濃度過大對(duì)菌體的生長(zhǎng)不利利 . 苯乙酸，一般基礎(chǔ)料中僅僅添加苯乙酸，一般基礎(chǔ)料中僅僅添加0.07%. 前體相對(duì)價(jià)格較高，添加過多，容易引起揮發(fā)前體相對(duì)價(jià)格較高，添加過多，容易引起揮發(fā)和氧化，流加也有利于提高前提的轉(zhuǎn)化率和氧化，流加也有利于提高前提的轉(zhuǎn)化率.3、產(chǎn)物促進(jìn)劑、產(chǎn)物促進(jìn)劑 促進(jìn)劑提高產(chǎn)量的機(jī)制還不完全清楚，其原因促進(jìn)劑提高產(chǎn)量的機(jī)制還不完全清楚，其原因是多方面的。是多方面的。 有些促進(jìn)劑本身是酶的誘導(dǎo)物；有些促進(jìn)劑本身是酶的誘導(dǎo)物；有些促進(jìn)劑是表面活性劑，可改善細(xì)胞的透性，有些促進(jìn)劑是表面活性劑，可改善細(xì)胞的透性，改善細(xì)胞與氧的接

28、觸從而促進(jìn)酶的分泌與生產(chǎn)，改善細(xì)胞與氧的接觸從而促進(jìn)酶的分泌與生產(chǎn)， 也有人認(rèn)為表面活性劑對(duì)酶的表面失活有保護(hù)也有人認(rèn)為表面活性劑對(duì)酶的表面失活有保護(hù)作用；作用； 有些促進(jìn)劑的作用是沉淀或螯合有害的重金屬有些促進(jìn)劑的作用是沉淀或螯合有害的重金屬離子。離子。五、水五、水 水源質(zhì)量的主要考慮參數(shù)包括水源質(zhì)量的主要考慮參數(shù)包括pH值、值、溶解氧、可溶性固體、污染程度以及礦溶解氧、可溶性固體、污染程度以及礦物質(zhì)組成和含量。物質(zhì)組成和含量。 對(duì)于常規(guī)發(fā)酵，可靠、持久，能提對(duì)于常規(guī)發(fā)酵，可靠、持久，能提供大量成分一致清潔的水。供大量成分一致清潔的水。 種子培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基一般采用深種子培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基一般

29、采用深井水或自來水。井水或自來水。第二節(jié) 培養(yǎng)基的類型培養(yǎng)基按其組成物質(zhì)的純度、狀態(tài)、用途進(jìn)行分類。培養(yǎng)基按其組成物質(zhì)的純度、狀態(tài)、用途進(jìn)行分類。一、按純度一、按純度 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基( synthetic medium ) : 原料其化學(xué)成原料其化學(xué)成分明確、穩(wěn)定分明確、穩(wěn)定 。 適合于研究菌種基本代謝和過程的物質(zhì)變化規(guī)律。適合于研究菌種基本代謝和過程的物質(zhì)變化規(guī)律。 q 培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)單一，價(jià)格較高，不適合用于大規(guī)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)單一，價(jià)格較高，不適合用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)模工業(yè)生產(chǎn)。天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基( complex medium ) : 采用天然原料采用天然原料v原料來源豐富原料來源豐富(大

30、多為農(nóng)副產(chǎn)品大多為農(nóng)副產(chǎn)品)、價(jià)格低、價(jià)格低廉、適于工業(yè)化生產(chǎn)。廉、適于工業(yè)化生產(chǎn)。v原料質(zhì)量等方面不加控制會(huì)影響生產(chǎn)穩(wěn)定原料質(zhì)量等方面不加控制會(huì)影響生產(chǎn)穩(wěn)定性。性。半合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基 ( semi synthetic medium ) 采用一部分天然有機(jī)物作碳源、氮源采用一部分天然有機(jī)物作碳源、氮源和生長(zhǎng)因子的來源，再適當(dāng)加入一些化和生長(zhǎng)因子的來源，再適當(dāng)加入一些化學(xué)藥品以補(bǔ)充無機(jī)鹽成分，使其更能充學(xué)藥品以補(bǔ)充無機(jī)鹽成分，使其更能充分滿足微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需要。分滿足微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需要。M培養(yǎng)基培養(yǎng)基(1L)： Na2HPO4 6g，KH2PO4 3g， NaCl 0.5g， NH4Cl

31、1g， MgSO4.7H2O 0.5g， CaCl2 0.011g，葡萄糖，葡萄糖 2-10, pH 7.0 。 YPS培養(yǎng)基：酪蛋白胨（日本大五營(yíng)養(yǎng)）培養(yǎng)基：酪蛋白胨（日本大五營(yíng)養(yǎng)）10g，酵，酵母提取物（英國(guó)母提取物（英國(guó)Oxoid）5g, NaCl 10g，PH 7.2 培養(yǎng)大腸桿菌常用兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌常用兩種培養(yǎng)基二、按狀態(tài)固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 : 半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基: :即在配好的液體培養(yǎng)基中加即在配好的液體培養(yǎng)基中加入少量的瓊脂，一般用量為入少量的瓊脂，一般用量為0.5%0.8% ,主要用于微生物的鑒定。主要用于微生物的鑒定。 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基:三、按用途（從發(fā)酵生

32、產(chǎn)應(yīng)用考慮）三、按用途（從發(fā)酵生產(chǎn)應(yīng)用考慮） 培養(yǎng)基按其用途可分為培養(yǎng)基按其用途可分為孢子（斜面）孢子（斜面）培養(yǎng)基、培養(yǎng)基、種子種子培養(yǎng)基和培養(yǎng)基和發(fā)酵發(fā)酵培養(yǎng)基三種培養(yǎng)基三種 。v選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、富集培養(yǎng)基等選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、富集培養(yǎng)基等生理代謝菌種篩選種子培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵生產(chǎn)中的培養(yǎng)基類型 工業(yè)發(fā)酵中培養(yǎng)基往往是依據(jù)生產(chǎn)流工業(yè)發(fā)酵中培養(yǎng)基往往是依據(jù)生產(chǎn)流程和作用分為：程和作用分為： 斜面培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基 種子培養(yǎng)基種子培養(yǎng)基 發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基1斜面培養(yǎng)基 作用：作用： 供給細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖或保藏菌種用的。供給細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖或保藏菌種用的。斜面培養(yǎng)基特點(diǎn)：斜面培養(yǎng)基特點(diǎn)：*

33、 * * *1.富含有機(jī)氮源，少含或不含糖分。有機(jī)富含有機(jī)氮源，少含或不含糖分。有機(jī)氮有利于菌體的生長(zhǎng)繁殖，能獲得更多氮有利于菌體的生長(zhǎng)繁殖，能獲得更多的細(xì)胞。的細(xì)胞。2.但對(duì)于放線菌或霉菌的產(chǎn)孢子培養(yǎng)基，但對(duì)于放線菌或霉菌的產(chǎn)孢子培養(yǎng)基，則氮源和碳源均不宜太豐富，否則容易則氮源和碳源均不宜太豐富，否則容易長(zhǎng)菌絲而較少形成孢子。長(zhǎng)菌絲而較少形成孢子。3.斜面培養(yǎng)基中宜加少量無機(jī)鹽類，供給斜面培養(yǎng)基中宜加少量無機(jī)鹽類，供給必要的生長(zhǎng)因子和微量元素。必要的生長(zhǎng)因子和微量元素。 2種子培養(yǎng)基種子培養(yǎng)：短時(shí)間內(nèi)獲得數(shù)量多、質(zhì)量高的大種子培養(yǎng)：短時(shí)間內(nèi)獲得數(shù)量多、質(zhì)量高的大量菌種；使細(xì)胞迅速進(jìn)行分裂或菌

34、絲快速生量菌種；使細(xì)胞迅速進(jìn)行分裂或菌絲快速生長(zhǎng)。長(zhǎng)。 包括：搖瓶種子培養(yǎng)基包括：搖瓶種子培養(yǎng)基 小罐種子培養(yǎng)基小罐種子培養(yǎng)基 種子培養(yǎng)基特點(diǎn)：種子培養(yǎng)基特點(diǎn)：*1.1.用于孢子發(fā)芽生長(zhǎng)，營(yíng)養(yǎng)要求豐富、完全，用于孢子發(fā)芽生長(zhǎng)，營(yíng)養(yǎng)要求豐富、完全，氮源和生長(zhǎng)因子含量較高。氮源和生長(zhǎng)因子含量較高。2.2.各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度不必太高。各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度不必太高。3.3.最后一級(jí)的種子培養(yǎng)基成份要接近于發(fā)酵最后一級(jí)的種子培養(yǎng)基成份要接近于發(fā)酵培養(yǎng)基，以縮短停滯期。培養(yǎng)基，以縮短停滯期。3發(fā)酵培養(yǎng)基*作用：最大限度地獲得目的產(chǎn)物。作用：最大限度地獲得目的產(chǎn)物。 。 要滿足菌體生長(zhǎng)、繁殖的需要。要滿足菌體

35、生長(zhǎng)、繁殖的需要。 但比種子培但比種子培養(yǎng)基稍不豐富。養(yǎng)基稍不豐富。 要有合成產(chǎn)物所需的特定元素、前體和促進(jìn)要有合成產(chǎn)物所需的特定元素、前體和促進(jìn)劑等。劑等。 如果生長(zhǎng)和合成產(chǎn)物的最佳條件不同時(shí)，可如果生長(zhǎng)和合成產(chǎn)物的最佳條件不同時(shí)，可考慮分批補(bǔ)料?？紤]分批補(bǔ)料。 赤霉素種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的配比比較赤霉素種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的配比比較 種子培養(yǎng)基種子培養(yǎng)基 發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基 花生粉花生粉 1.65 % 0.16 % 葡萄糖葡萄糖 1.50 % 0.70 % MgSO4 0.10 % 0.05 % KH2PO4 0.10 % 0.18 % 消沫油消沫油 0.40 % 0.08 % 糊糊

36、 精精 1.0 % 黃豆餅粉黃豆餅粉 0.2 % 玉米淀粉玉米淀粉 6.0 % -淀粉酶淀粉酶 0.03% 對(duì)于抗生素發(fā)酵的種子培養(yǎng)，快速利用對(duì)于抗生素發(fā)酵的種子培養(yǎng)，快速利用碳（氮）源比例要相對(duì)高一些（有利于碳（氮）源比例要相對(duì)高一些（有利于大量快速生長(zhǎng)）。大量快速生長(zhǎng)）。* * * *在產(chǎn)物合成階段快速利用碳（氮）源比在產(chǎn)物合成階段快速利用碳（氮）源比例要相對(duì)低一些（有利于次級(jí)代謝產(chǎn)物例要相對(duì)低一些（有利于次級(jí)代謝產(chǎn)物抗生素的大量合成）?；虿捎昧骷涌股氐拇罅亢铣桑??；虿捎昧骷拥霓k法。的辦法。* * * *第三節(jié)第三節(jié) 培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)原理和優(yōu)化方法培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)原理和優(yōu)化方法 *一、培養(yǎng)基設(shè)計(jì)

37、與優(yōu)化過程一般的思路。一、培養(yǎng)基設(shè)計(jì)與優(yōu)化過程一般的思路。 1、根據(jù)前人經(jīng)驗(yàn)、菌種特性、發(fā)酵工藝的要求，提、根據(jù)前人經(jīng)驗(yàn)、菌種特性、發(fā)酵工藝的要求，提取工藝要求及經(jīng)濟(jì)可行的培養(yǎng)基成分來源，初步確定取工藝要求及經(jīng)濟(jì)可行的培養(yǎng)基成分來源，初步確定可能的培養(yǎng)基組分；可能的培養(yǎng)基組分； 2、通過單因子實(shí)驗(yàn)搖瓶確定最為適合的的各個(gè)培養(yǎng)、通過單因子實(shí)驗(yàn)搖瓶確定最為適合的的各個(gè)培養(yǎng)基組分及其最適濃度；基組分及其最適濃度； 3、最后通過多因子實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步優(yōu)化培養(yǎng)、最后通過多因子實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步優(yōu)化培養(yǎng)基的各種成分及其最適濃度?；母鞣N成分及其最適濃度。 以合成培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，摸索實(shí)驗(yàn)條件。以合成培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，摸索實(shí)

38、驗(yàn)條件。首先是其成份的確定，其次確定培養(yǎng)基配比，首先是其成份的確定，其次確定培養(yǎng)基配比，然后確定各種重要金屬和非金屬離子對(duì)發(fā)酵然后確定各種重要金屬和非金屬離子對(duì)發(fā)酵的影響，確定最適范圍和最佳用量。最后在的影響，確定最適范圍和最佳用量。最后在復(fù)合培養(yǎng)基上試驗(yàn)。復(fù)合培養(yǎng)基上試驗(yàn)。 4、中、小試發(fā)酵罐規(guī)模進(jìn)一步優(yōu)化配方。、中、小試發(fā)酵罐規(guī)模進(jìn)一步優(yōu)化配方。 5、在生產(chǎn)規(guī)模優(yōu)化培養(yǎng)基配方。、在生產(chǎn)規(guī)模優(yōu)化培養(yǎng)基配方。一、培養(yǎng)基設(shè)計(jì)時(shí)候要注意的一些問題一、培養(yǎng)基設(shè)計(jì)時(shí)候要注意的一些問題*1、滿足菌體的同化能力，營(yíng)養(yǎng)組成豐富，濃、滿足菌體的同化能力，營(yíng)養(yǎng)組成豐富，濃度恰當(dāng)，滿足不同培養(yǎng)需求。度恰當(dāng)，滿足不

39、同培養(yǎng)需求。 菌體的同化能力菌體的同化能力 保證所選用的營(yíng)養(yǎng)成分保證所選用的營(yíng)養(yǎng)成分是微生物能夠利用的。是微生物能夠利用的。 碳源、氮源碳源、氮源 例如：酵母菌，一般只能利用例如：酵母菌，一般只能利用2 23 3糖，最多糖，最多為為4 4糖。糖。 例如：例如： 大多數(shù)氨基酸產(chǎn)生菌，缺乏蛋白質(zhì)分解大多數(shù)氨基酸產(chǎn)生菌，缺乏蛋白質(zhì)分解酶，不能利用有機(jī)氮源（復(fù)雜的大分子酶，不能利用有機(jī)氮源（復(fù)雜的大分子蛋白質(zhì)）。蛋白質(zhì)）。 常用的有大豆餅粉、花生餅粉的水解液，常用的有大豆餅粉、花生餅粉的水解液，其制備方法是：豆餅粉（其制備方法是：豆餅粉（100kg100kg）水）水（133kg133kg）+ HCl

40、+ HCl 常壓水解常壓水解16 h 16 h 各種氨基酸各種氨基酸2、在一定的條件下，各原料之間彼此不、在一定的條件下，各原料之間彼此不 反應(yīng)性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定。反應(yīng)性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定。3、黏度適中，具有適當(dāng)?shù)臐B透壓。、黏度適中，具有適當(dāng)?shù)臐B透壓。4、注意與代謝產(chǎn)物合成過程中的調(diào)節(jié)關(guān)、注意與代謝產(chǎn)物合成過程中的調(diào)節(jié)關(guān) 系，有利于產(chǎn)物合成。系，有利于產(chǎn)物合成。 注意代謝調(diào)節(jié)物的影響注意代謝調(diào)節(jié)物的影響 * 有些物質(zhì)存在于培養(yǎng)基中往往能明顯地促進(jìn)或有些物質(zhì)存在于培養(yǎng)基中往往能明顯地促進(jìn)或抑制發(fā)酵產(chǎn)物的形成。抑制發(fā)酵產(chǎn)物的形成。 （1）前體物質(zhì)）前體物質(zhì) （2）誘導(dǎo)劑）誘導(dǎo)劑 （3）阻遏物及抑制劑）阻遏物及抑

41、制劑 （4）金屬離子）金屬離子 金屬離子的影響金屬離子的影響 * 有些種類的發(fā)酵生產(chǎn)對(duì)金屬離子相當(dāng)敏有些種類的發(fā)酵生產(chǎn)對(duì)金屬離子相當(dāng)敏感，因?yàn)橛行┙饘匐x子是中間代謝酶的抑制感，因?yàn)橛行┙饘匐x子是中間代謝酶的抑制劑或激活劑。（設(shè)備材質(zhì)，內(nèi)襯）劑或激活劑。（設(shè)備材質(zhì)，內(nèi)襯） 因此對(duì)于有重大影響的金屬離子必須嚴(yán)因此對(duì)于有重大影響的金屬離子必須嚴(yán)格控制。如檸檬酸發(fā)酵中鐵、錳和鋅離子都格控制。如檸檬酸發(fā)酵中鐵、錳和鋅離子都能明顯影響產(chǎn)量，能明顯影響產(chǎn)量， 鈣離子對(duì)細(xì)菌淀粉酶的生產(chǎn)有促進(jìn)作用，鈣離子對(duì)細(xì)菌淀粉酶的生產(chǎn)有促進(jìn)作用， 鈷離子對(duì)葡萄糖異構(gòu)酶的發(fā)酵是必需。鈷離子對(duì)葡萄糖異構(gòu)酶的發(fā)酵是必需。5、既不影響通氣與攪拌的效果，又不、既不影響通氣與攪拌的效果，又不 影響或稍微影響產(chǎn)物的分離精制和影響或稍微影響產(chǎn)物的分離精制和 廢物處理。廢物處理。6、盡可能因地制宜，質(zhì)優(yōu)價(jià)廉，成本、盡可能因地制宜，質(zhì)優(yōu)價(jià)廉，成本 低，來源豐富，質(zhì)量穩(wěn)定，并盡量低，來源豐