藥物雜質(zhì)檢查(1)知識(shí)分享

1、吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心藥物雜質(zhì)檢查(1)吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心目的要求目的要求掌握一般雜質(zhì)檢查的目的和原理。熟悉雜質(zhì)檢查的一般操作方法。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理1. 氯化物檢查法氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀作用，生成氯化銀微粒而顯白色渾濁，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液和硝酸銀在同樣的條件下，用同法處理生成的氯化銀渾濁程度相比較，測(cè)定供試品中氯化物的限量。Cl- + Ag+ AgCl吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理2. 重金屬檢查法重金屬是指在

2、弱酸性(pH33.5)溶液中，能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用生成硫化物的金屬雜質(zhì)。在藥品生產(chǎn)中遇到鉛的機(jī)會(huì)比較多，鉛又易積蓄中毒，故檢查時(shí)以鉛為代表。同上法，硫代乙酰胺分別和樣品、標(biāo)準(zhǔn)品生成有硫化物的均勻沉淀，再比較判斷樣品中的重金屬限量。 CH2CSNH2+H2O CH3CONH2+H2S Pb 2+ + H2S PbS吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理3. 砷鹽檢查法砷鹽檢查法本法系采用鋅和酸作用所產(chǎn)生的初生態(tài)氫與本法系采用鋅和酸作用所產(chǎn)生的初生態(tài)氫與供試品中微量砷鹽化合物反應(yīng)生成揮發(fā)性砷供試品中微量砷鹽化合物反應(yīng)生成揮發(fā)性砷化氫，再與溴化汞試紙作用生成黃

3、色至棕色化氫，再與溴化汞試紙作用生成黃色至棕色砷斑。比較供試品與標(biāo)準(zhǔn)砷溶液在同一條件砷斑。比較供試品與標(biāo)準(zhǔn)砷溶液在同一條件下所顯的砷斑的顏色深淺，以測(cè)得供試品的下所顯的砷斑的顏色深淺，以測(cè)得供試品的含砷限度。含砷限度。AsO33-3Zn9H+AsH33Zn2+3H2OAsH32HgBr22HBrAsH(HgBr)2(黃色黃色)AsH33HgBr23HBrAs(HgBr)3(棕色棕色)（選做）（選做）吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 五價(jià)砷在酸性溶液中也能被金屬鋅還原為砷化氫，但五價(jià)砷在酸性溶液中也能被金屬鋅還原為砷化氫，但生成砷化氫比三價(jià)砷慢。三價(jià)砷生成

4、砷化氫在生成砷化氫比三價(jià)砷慢。三價(jià)砷生成砷化氫在2h內(nèi)已內(nèi)已反應(yīng)完全，而五價(jià)砷在同時(shí)間內(nèi)僅五分之一起反應(yīng)。反應(yīng)完全，而五價(jià)砷在同時(shí)間內(nèi)僅五分之一起反應(yīng)。為了防止五價(jià)砷存在，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，故必為了防止五價(jià)砷存在，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，故必須加入碘化鉀、酸性氯化亞錫還原劑，將五價(jià)砷還原須加入碘化鉀、酸性氯化亞錫還原劑，將五價(jià)砷還原為三價(jià)砷。碘化鉀被氧化生成為三價(jià)砷。碘化鉀被氧化生成I2，以氧化亞錫來(lái)還原，以氧化亞錫來(lái)還原，使反應(yīng)液中維持有碘化鉀的還原劑存在。使反應(yīng)液中維持有碘化鉀的還原劑存在。 AsO43-2I-2H+AsO33-I2H2O AsO43-Sn2+2H+AsO33-Sn4+H

5、2OI2Sn2+2 I-Sn4+ 溶液中的碘離子，與反應(yīng)中產(chǎn)生的鋅離子能形成配合溶液中的碘離子，與反應(yīng)中產(chǎn)生的鋅離子能形成配合物，使生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行。物，使生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行。 4I-Zn2+ZnI42-吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 氯化亞錫與碘化鉀存在，還可抑制銻化氯化亞錫與碘化鉀存在，還可抑制銻化氫生成，在實(shí)驗(yàn)條件下，氫生成，在實(shí)驗(yàn)條件下，100 g銻存在銻存在不至于干擾測(cè)定。同時(shí)氯化亞錫的作用不至于干擾測(cè)定。同時(shí)氯化亞錫的作用可在鋅粒表面形成鋅錫齊（鋅錫的合金）可在鋅粒表面形成鋅錫齊（鋅錫的合金）起去極化作用，使鋅粒與鹽酸作用緩和

6、，起去極化作用，使鋅粒與鹽酸作用緩和，放出氫氣均勻，使產(chǎn)生的砷化氫氣體一放出氫氣均勻，使產(chǎn)生的砷化氫氣體一致，有利于砷斑的形成，增加反應(yīng)的靈致，有利于砷斑的形成，增加反應(yīng)的靈敏度與準(zhǔn)確度。敏度與準(zhǔn)確度。 Sn2+ZnSnZn2+吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心樣品 標(biāo)準(zhǔn)砷溶液還 原 反 應(yīng)(25-40 )AsH3 砷斑標(biāo)準(zhǔn)砷 溶液樣品醋酸鉛棉花醋酸鉛棉花 溴化汞試溴化汞試紙紙 H2S 吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心試劑與器材試劑與器材1、材料：藥用葡萄糖（分析型）、稀硝酸、材料：藥用葡萄糖（分析型）、稀硝酸、硝酸銀、氯化鈉、磺基水楊酸、硝酸鉛、

7、硝酸銀、氯化鈉、磺基水楊酸、硝酸鉛、醋酸銨、稀硫酸或濃硫酸、濃鹽酸醋酸銨、稀硫酸或濃硫酸、濃鹽酸2、器材：天平、容量瓶、器材：天平、容量瓶10 ml、納氏比色、納氏比色管管 （25 ml） 等等吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟1. 溶液的澄清度與顏色 取藥用葡萄糖（分析型）5.0 g置于100ml燒杯中，加熱水溶解后放冷，用去離子水稀釋至10 ml，溶液應(yīng)澄清無(wú)色，如顯渾濁，與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液(1) （取濁度標(biāo)準(zhǔn)原液5.0 ml，加水95.0 ml，搖勻）10 ml比較，不得更深，如顯色，與對(duì)照液（取比色氯化鈷液3 ml，比色用重鉻酸鉀液3 ml與比色用硫

8、酸銅液6 ml，加水稀釋至50 ml）1.0 ml加水稀釋至10 ml，比較，不得更深。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟2. 氯化物(2) 取藥用葡萄糖（分析型）0.3 g置于100ml燒杯中，加去離子水溶解使成12.5 ml（如顯堿性，可滴加稀硝酸使遇石蕊試紙顯中性反應(yīng)），再加稀硝酸5 ml，溶液如不澄清，應(yīng)過(guò)濾。置25 ml納氏比色管中，加水適量使成約 20 ml (3)，加硝酸銀試液0.5 ml，用水稀釋使成25 ml，搖勻在暗處放置5 min，如發(fā)生渾濁，與（標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液1.0 ml，加入一定量的硝酸銀試液，再加水稀釋使成50 ml，搖勻，在暗

9、處放置5 min），比較，不得比更濃。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟3. 蛋白質(zhì) 取藥用葡萄糖（分析型）1.0 g置于100ml燒杯中，加去離子水10 ml溶解后，加入磺基水楊酸溶液3 ml，不得發(fā)生沉淀。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟4. 重金屬 取25 ml納氏比色管兩支，一管加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2.0 ml，醋酸鹽緩沖液(5) (pH 3.5)2.0 ml，加水至25 ml；另一支管取藥用葡萄糖（分析型） 4.0 g，加去離子水23 ml溶解，加醋酸鹽緩沖液 (pH 3.5) 2.0 ml；各管分別加硫代乙酰胺試

10、液(6) 2 ml，搖勻，放置2 min，同置白紙上，自上向下透視，供試液顯出的顏色與標(biāo)準(zhǔn)比較不得更深。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)臨用時(shí)現(xiàn)配，使用前充分搖勻。標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法。目的是稀釋Cl-濃度，產(chǎn)生渾濁而不是沉淀。酸性物質(zhì)可沉淀蛋白質(zhì)。在pH33.5時(shí)PbS沉淀較完全。硫代乙酰銨試液是硫代乙酰胺溶液1ml與混合液5ml水浴加熱20s，冷卻后立即使用。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心思考題思考題實(shí)驗(yàn)中各項(xiàng)雜質(zhì)檢查的目的是什么？重金屬檢查原理是什么？實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意些什么？（實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵）藥物中特殊雜質(zhì)的檢查吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)吉林大學(xué)生

11、物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心教學(xué)中心1、目的要求目的要求2、試劑與器材試劑與器材3、實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟4、注解注解5、思考題思考題吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心目的要求目的要求1. 掌握試驗(yàn)中特殊雜質(zhì)的來(lái)源和檢查原理。2. 掌握特殊雜質(zhì)檢查中的一般操作方法。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心試劑與器材試劑與器材1、材料：阿司匹林、乙醇、硫酸鐵銨、水、材料：阿司匹林、乙醇、硫酸鐵銨、水楊酸、冰醋酸、楊酸、冰醋酸、 氫化可的松、氯仿、甲氫化可的松、氯仿、甲醇、二氯甲烷、乙醚、四氮唑藍(lán)、氫氧醇、二氯甲烷、乙醚、四氮唑藍(lán)、氫氧化鈉化鈉2、器材：容量瓶（、器材：容量瓶

12、（1000 ml/50 ml）、試管）、試管或或10 ml EP管、層析板管、層析板 10 cm5 cm、層、層析缸、析缸、110 烘箱、噴壺（薄層層析噴顯烘箱、噴壺（薄層層析噴顯色劑用）色劑用）吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟1. 阿司匹林中游離水楊酸的檢查 取本品0.1 g，加乙醇1 ml溶解后，加冷水適量使成50 ml，立即加新制的稀硫酸鐵銨溶液1ml，搖勻；30 s內(nèi)如顯色，與對(duì)照液（水楊酸鐵試液 ）比較，不得更深（0.1%）。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟2. 氫化可的松中其它甾體的檢查 取本品，加氯仿

13、-甲醇(9:1)制成每1 ml中含5.0 mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加氯仿-甲醇(9:1)稀釋制成每1 ml中含600 mg的溶液，作為對(duì)照液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 ml，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水(385:60:30:2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，晾干，在105干燥10分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑藍(lán)試液，立即檢視。供試品溶液如顯示雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3個(gè)，其顏色與對(duì)照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心點(diǎn)樣 微量注射器或定量毛細(xì)管。一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊2.0cm，樣點(diǎn)直徑為24mm，點(diǎn)間距離

14、約為1.52.0cm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1. 游離水楊酸的檢查樣品應(yīng)盡量干燥，不得帶入過(guò)多水分，否則樣品加醇后不易溶解。2. 點(diǎn)樣采用微量注射器進(jìn)行，在距薄層板2.5 cm處開(kāi)始，點(diǎn)樣應(yīng)少量多次點(diǎn)于同一原點(diǎn)處，原點(diǎn)面積應(yīng)盡量小。3 堿性四氮唑藍(lán)試液應(yīng)臨用新配。新鮮試劑應(yīng)黃色，顏色如變深色不宜使用。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心思考題思考題薄層色譜法檢查氫化可的松中其它甾體的原理是什么？為何用稀釋液作對(duì)照？2. 試計(jì)算阿司匹林中游離水楊酸、氫化可

15、的松中其它甾體的雜質(zhì)限度。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心本實(shí)驗(yàn)中各溶液的配制方法本實(shí)驗(yàn)中各溶液的配制方法1，標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液： 稱取氯化鈉0.165g，置于1000ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。臨用前，取儲(chǔ)備液10ml，置于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得。（每1ml10g的Cl）2，標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液： 稱取硝酸鉛0.160g置于1000ml容量瓶中，加硝酸5ml，水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。臨用前，取儲(chǔ)備液10ml，置于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得。 （每1ml10g的Pb）3 ，硫代乙酰胺試液 取硫代乙

16、酰胺4g，加水使溶解成100ml,置冰箱中保存。臨用前取混合液由1mol/L氫氧化鈉溶液15ml、水5.0ml及甘油20ml組成5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加熱20秒鐘，冷卻，立即使用。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心本實(shí)驗(yàn)中各溶液的配制方法本實(shí)驗(yàn)中各溶液的配制方法4，硫酸鐵銨指示液： 取硫酸鐵銨8g，加水溶解，稀釋至100ml，即得。5，濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備： 稱取于105干燥至恒重的硫酸肼1.00g，置100ml量瓶中，加水適量使溶解，必要時(shí)可在40的水浴中溫?zé)崛芙猓⒂盟♂屩量潭?，搖勻，放置46小時(shí)；取此溶液與等容量的10%烏洛托品溶液混

17、合，搖勻，于25避光靜置24小時(shí)，即得。本液置冷處避光保存，可在兩個(gè)月內(nèi)使用，用前搖勻。6，濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的制備： 濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液15.0ml，置1000ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，取適量，置1cm吸收池中，照紫外-可見(jiàn)分光光度法(附錄A)，在550nm的波長(zhǎng)處測(cè)定，其吸光度應(yīng)在0.120.15范圍內(nèi)。本液應(yīng)在48小時(shí)內(nèi)使用，用前搖勻。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心本實(shí)驗(yàn)中各溶液的配制方法本實(shí)驗(yàn)中各溶液的配制方法7，濁度標(biāo)準(zhǔn)液的制備： 濁度標(biāo)準(zhǔn)液的制備取濁度標(biāo)準(zhǔn)原液與水，按下表配制，即得。本液應(yīng)臨用時(shí)制備，使用前充分搖勻。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基

18、礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心本實(shí)驗(yàn)中各溶液的配制方法本實(shí)驗(yàn)中各溶液的配制方法8，堿性四氮唑藍(lán)溶液： 取含0.2四氮唑藍(lán)的甲醇溶液10ml與12NaOH的甲醇溶液30ml，臨用時(shí)混合。9，比色對(duì)照液： 取比色氯化鈷液3 ml，比色用重鉻酸鉀液3 ml與比色用硫酸銅液6 ml，加水稀釋至50 ml。比色氯化鈷、比色用重鉻酸鉀、比色用硫酸銅配制方法如下：吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心本實(shí)驗(yàn)中各溶液的配制方法本實(shí)驗(yàn)中各溶液的配制方法10，稀硝酸 ： 取硝酸10.5ml，加水稀釋至100ml，即得。本液含HNO3應(yīng)為9.510.5。11，醋酸鹽緩沖液： 醋酸-醋酸鈉緩沖液（PH3.6），取醋酸鈉5.1g，加冰醋酸20ml，用水稀釋至250ml即得。吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心本實(shí)驗(yàn)中各溶液的配制方法本實(shí)驗(yàn)中各溶液的配制方法12，硝酸銀溶液 ： 取硝酸銀18.4g，溶解于適量水中，定容至1000ml即得。0.1mol/LAgNO313，水楊酸鐵試液 ：（1）取硫酸鐵銨0.1g，加稀硫酸2ml與水適量使成100ml。（2）取水楊酸鈉1.15g，加水使溶解成100ml。（3）取醋酸鈉13.6g，加水使溶解成100ml。（4）取上述硫酸鐵銨溶液1ml，水楊酸鈉溶液0.5ml，醋酸鈉溶液0.8ml與稀醋