生物：1.2《基因工程的基本操作程序》ppt(新人教版選修3)

1、 1. “分子手術(shù)刀分子手術(shù)刀”是是_，主要來源于，主要來源于_。經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的。經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端片段末端通常有兩種形式：通常有兩種形式：_ _和和_ _。 2.“分子縫合針分子縫合針” 是是_， 分為兩類：分為兩類： 和和 。 3.“分子運輸車分子運輸車” 是是_ _，種類：，種類：_、 _、 _。 4.載體具備的條件載體具備的條件 能夠在宿主細(xì)胞中能夠在宿主細(xì)胞中_并穩(wěn)定保存。并穩(wěn)定保存。 有一個或多個有一個或多個_切割位點，供外源基因插入。切割位點，供外源基因插入。 具有特殊的具有特殊的_，共重組，共重組DNA的鑒定和選擇。的鑒定和選擇。 對受體細(xì)胞對受體細(xì)胞 。 5

2、.GAATTC CTTAAG 被切割后形成的片段是：被切割后形成的片段是： 和和 。餐前小菜餐前小菜基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1 1、目的基因的獲取、目的基因的獲取2 2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3 3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4 4、目的基因的檢測與鑒定、目的基因的檢測與鑒定一、目的基因的獲取一、目的基因的獲取1 1、目的基因主要是指、目的基因主要是指_編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。是一些具有調(diào)控作用的因子。2 2、獲取目的基因的常用方法、獲取目的基因的常用方法（1 1）從基因文庫中獲?。幕?/p>

3、文庫中獲?。? 2）利用）利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增（3 3）人工合成）人工合成原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 與與RNARNA聚合酶結(jié)合位點聚合酶結(jié)合位點啟動子啟動子終止子終止子啟動子：啟動子：位于基因首端一段能與位于基因首端一段能與RNARNA聚合酶結(jié)合并能起聚合酶結(jié)合并能起始始mRNAmRNA合成的序列。沒有啟動子，基因就不能轉(zhuǎn)錄。合成的序列。沒有啟動子，基因就不能轉(zhuǎn)錄。終止子：終止子：位于基因的尾端的一段特殊的位于基因的尾端的一段特殊的DNADNA片斷，它能片斷，它能阻礙阻礙RNARNA聚

4、合酶的移動，并使其從聚合酶的移動，并使其從DNADNA模板鏈上脫離下來，模板鏈上脫離下來，使轉(zhuǎn)錄終止。使轉(zhuǎn)錄終止。RNARNA聚合酶聚合酶: :能夠識別啟動子上的結(jié)合位點并與其結(jié)合能夠識別啟動子上的結(jié)合位點并與其結(jié)合的一種蛋白質(zhì)的一種蛋白質(zhì).(.(以模板轉(zhuǎn)錄然后脫落以模板轉(zhuǎn)錄然后脫落) )原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)( (補充內(nèi)容）補充內(nèi)容）非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 與與RNARNA聚合酶結(jié)合位點聚合酶結(jié)合位點啟動子啟動子終止子終止子不編碼蛋白質(zhì)。不編碼蛋白質(zhì)。：編碼蛋白質(zhì)：編碼蛋白質(zhì) , ,連續(xù)不間斷連續(xù)不間斷編碼區(qū)編碼區(qū)

5、非編碼區(qū)非編碼區(qū)原核原核細(xì)胞細(xì)胞的的 基因基因結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)調(diào)控遺傳信息表達(dá)調(diào)控遺傳信息表達(dá), ,上上 游有啟動子，下游有終止子游有啟動子，下游有終止子編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與與RNARNA聚合酶聚合酶結(jié)合位點結(jié)合位點內(nèi)含子內(nèi)含子 外顯子外顯子 能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子 不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子含子啟動子啟動子終止子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 內(nèi)含子：內(nèi)含子： 外顯子：外顯子： 真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)真核真核細(xì)胞細(xì)胞的的 基因基因結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子

6、：能編碼蛋白質(zhì)的序列外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列：有調(diào)控作用的核苷酸序列，：有調(diào)控作用的核苷酸序列， 包括位于編碼區(qū)上游的包括位于編碼區(qū)上游的RNARNA 聚合酶結(jié)合位點等。聚合酶結(jié)合位點等。非編碼序列：非編碼序列： 包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子原核細(xì)胞原核細(xì)胞真核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點不同點編碼區(qū)是編碼區(qū)是_的的編碼區(qū)是間隔的、編碼區(qū)是間隔的、_的的相同點相同點都由能夠編碼蛋白質(zhì)的都由能夠編碼蛋白質(zhì)的_和具和具有調(diào)控作用的有調(diào)控作用的_區(qū)組成的區(qū)組成的原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較思考思考編碼相同

7、數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長嗎？細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長嗎？連續(xù)連續(xù)不連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼非編碼餐前小菜味道如何？餐前小菜味道如何？ 思考：思考：啟動子與起始密碼子，終止子與終啟動子與起始密碼子，終止子與終止密碼子是否相同，如不同有何區(qū)別？止密碼子是否相同，如不同有何區(qū)別？啟動子、終止子：在啟動子、終止子：在 上，分上，分別表示別表示 的開始與結(jié)束的開始與結(jié)束起始密碼子、終止密碼子：起始密碼子、終止密碼子：在在 上，分別表示上，分別表示 的開的開始與結(jié)束始與結(jié)束轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄翻譯翻譯DNARNA正餐開始。正餐開始。(1)從基因文庫中

8、獲取目的基因從基因文庫中獲取目的基因1、什么是基因文庫？、什么是基因文庫？2、什么是基因組文庫？、什么是基因組文庫？3、什么是部分基因文庫？、什么是部分基因文庫？4、怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因？、怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因？5、目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？、目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？閱讀課本第閱讀課本第9頁的相關(guān)內(nèi)容，回答以下問題頁的相關(guān)內(nèi)容，回答以下問題自主學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)(1)從基因文庫中獲取目的基因從基因文庫中獲取目的基因2、什么是基因組文庫？、什么是基因組文庫？3、什么是部分基因文庫？、什么是部分基因文庫？4、怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因？、怎樣

9、從基因文庫中得到我們所需的目的基因？5、目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？、目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？閱讀課本閱讀課本9頁的相關(guān)內(nèi)容，回答一下問題頁的相關(guān)內(nèi)容，回答一下問題自主學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí) 基因文庫基因文庫：將含有某種生物不同基因的許多：將含有某種生物不同基因的許多DNA片段片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲存導(dǎo)入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因物的不同的基因,稱為基因文庫稱為基因文庫(gene library)(1)從基因文庫中獲取目的基因從基因文庫中獲取目的基因3、什么是部分基因文庫？、什么是部分基因文庫？4、怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的

10、基因？、怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因？5、目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？、目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？閱讀課本閱讀課本9頁的相關(guān)內(nèi)容，回答一下問題頁的相關(guān)內(nèi)容，回答一下問題自主學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí) 基因文庫基因文庫：將含有某種生物不同基因的許多：將含有某種生物不同基因的許多DNA片段片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲存導(dǎo)入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因物的不同的基因,稱為基因文庫稱為基因文庫(gene library)基因組文庫：基因組文庫：基因文庫中包含了一種生物所有的基因基因文庫中包含了一種生物所有的基因,這種基因文庫叫做基因組文庫這種基

11、因文庫叫做基因組文庫(1)從基因文庫中獲取目的基因從基因文庫中獲取目的基因4、怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因？、怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因？5、目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？、目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？閱讀課本閱讀課本9頁的相關(guān)內(nèi)容，回答一下問題頁的相關(guān)內(nèi)容，回答一下問題自主學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí) 基因文庫基因文庫：將含有某種生物不同基因的許多：將含有某種生物不同基因的許多DNA片段片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲存導(dǎo)入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因物的不同的基因,稱為基因文庫稱為基因文庫(gene library)基因組文庫：基

12、因組文庫：基因文庫中包含了一種生物所有的基因基因文庫中包含了一種生物所有的基因,這種基因文庫叫做基因組文庫這種基因文庫叫做基因組文庫部分基因組文庫：部分基因組文庫：基因文庫中包含了一種生物的一部分基因文庫中包含了一種生物的一部分基因基因,這種基因文庫叫做部分基因文庫這種基因文庫叫做部分基因文庫.（如如cDNA文庫文庫）基因組文基因組文庫與部分庫與部分基因文庫基因文庫的關(guān)系的關(guān)系 閱讀課本閱讀課本P10生物技術(shù)資料卡生物技術(shù)資料卡 提出你的疑問？提出你的疑問？提取某種生物的提取某種生物的某器官某器官或或特定發(fā)育時期特定發(fā)育時期的的mRNAmRNA單鏈單鏈DNADNA雙鏈雙鏈cDNAcDNA片段片

13、段重組載體重組載體與載體連接與載體連接cDNAcDNA文庫文庫反（逆）轉(zhuǎn)錄酶反（逆）轉(zhuǎn)錄酶DNADNA聚合酶聚合酶導(dǎo)入受體菌中儲存導(dǎo)入受體菌中儲存 cDNA文庫的構(gòu)建文庫的構(gòu)建-反（反（逆）轉(zhuǎn)錄法：逆）轉(zhuǎn)錄法： 提取某種生物的全部提取某種生物的全部DNADNA用適當(dāng)?shù)南拗泼盖杏眠m當(dāng)?shù)南拗泼盖幸欢ù笮〉囊欢ù笮〉腄NADNA片段片段將將DNADNA片段與載體連接片段與載體連接導(dǎo)入受體菌中儲存導(dǎo)入受體菌中儲存基因組文庫基因組文庫5.5.基因文庫的構(gòu)建方法之一基因文庫的構(gòu)建方法之一（1 1）直接分離法）直接分離法( (鳥槍法鳥槍法) )小小大大無無有有無無有有某種生物的部分基因某種生物的部分基因 某

14、種生物的全部基因某種生物的全部基因可以可以部分基因可以部分基因可以 概念：概念：PCRPCR全稱為全稱為_，是一項，是一項 在生物在生物_復(fù)制復(fù)制_的核酸合成技術(shù)的核酸合成技術(shù) 前提：前提：_原理：原理：_方式：方式：以以_方式擴(kuò)增，即方式擴(kuò)增，即_（n n為擴(kuò)增為擴(kuò)增循循 環(huán)的次數(shù)）環(huán)的次數(shù)）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外體外特定特定DNADNA片段片段DNADNA雙鏈復(fù)制雙鏈復(fù)制指數(shù)指數(shù)2 2n n要有一段已知目的基因的核苷酸序列要有一段已知目的基因的核苷酸序列自主學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)閱讀課本閱讀課本P10-P11頁的相關(guān)內(nèi)容，回答一下問題頁的相關(guān)內(nèi)容，回答一下問題（2 2）利用）利用PCRPC

15、R技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因過程：過程： 過程過程高溫變性（高溫變性（解旋為單鏈解旋為單鏈）低溫退火（低溫退火（引物與單鏈互補結(jié)合引物與單鏈互補結(jié)合）適溫延伸（適溫延伸（在在TaqTaq酶的作用下合成酶的作用下合成 與模板互補的與模板互補的DNADNA雙鏈雙鏈）重復(fù)循環(huán)重復(fù)循環(huán)進(jìn)一步思考：在這個過程中進(jìn)一步思考：在這個過程中都需要什么條件？都需要什么條件？模板模板DNA；四種脫氧核苷酸；四種脫氧核苷酸；熱穩(wěn)定熱穩(wěn)定DNA聚合酶聚合酶（Taq酶）；酶）；能量；能量；DNA引物；引物；具體過程具體過程PCR技術(shù)擴(kuò)增與技術(shù)擴(kuò)增與DNA復(fù)制的比較復(fù)制的比較PCRPCR技術(shù)技術(shù)DNADNA復(fù)制復(fù)制

16、相相同同點點原理原理原料原料條件條件不不同同點點解旋解旋方式方式場所場所酶酶結(jié)果結(jié)果堿基互補配對堿基互補配對四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸模板、能量、酶、原料、引物模板、能量、酶、原料、引物DNADNA在高溫下在高溫下變性解旋變性解旋解旋酶催化解旋酶催化體外復(fù)制體外復(fù)制主要細(xì)胞核內(nèi)主要細(xì)胞核內(nèi)熱穩(wěn)定的熱穩(wěn)定的DNADNA聚合酶聚合酶 細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)的DNADNA聚合酶聚合酶大量的大量的DNADNA片段片段形成整個形成整個DNADNA分子分子（3 3）、人工合成的目的基因）、人工合成的目的基因牛刀小試牛刀小試 同步練習(xí)冊同步練習(xí)冊P6 基礎(chǔ)鞏固基礎(chǔ)鞏固1 1、3 3從前你要擴(kuò)增從前你要擴(kuò)增DNAD

17、NA， 總有培養(yǎng)大批細(xì)胞的重任要你背。總有培養(yǎng)大批細(xì)胞的重任要你背。 這時有個家伙叫這時有個家伙叫KaryKary Mullis Mullis博士的，博士的， 他鉆出來說體外合成也一樣他鉆出來說體外合成也一樣OKOK！ 只要把你的模板混上緩沖液，再加些引只要把你的模板混上緩沖液，再加些引物，物， 還有核苷和聚合酶。還有核苷和聚合酶。 變性，退火，和延伸。變性，退火，和延伸。 加熱加熱 冷卻冷卻 加熱加熱 太神奇了！太神奇了！ 當(dāng)你想要檢測突變，來啊做當(dāng)你想要檢測突變，來啊做PCRPCR吧！吧！ 當(dāng)你想要基因重組，來啊做當(dāng)你想要基因重組，來啊做PCRPCR吧！吧！ 當(dāng)你想知道孩子他爹到底是誰，來

18、啊做當(dāng)你想知道孩子他爹到底是誰，來啊做PCRPCR吧！吧！ 當(dāng)你想要偵破大案，來啊做當(dāng)你想要偵破大案，來啊做PCRPCR吧！吧！二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建核心核心問題問題1為何要構(gòu)建基因表達(dá)載體？為何要構(gòu)建基因表達(dá)載體？ 問題問題2作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？就可以完成任務(wù)嗎？為什么？問題問題3基因表達(dá)載體的構(gòu)建需要哪些工具酶，如何基因表達(dá)載體的構(gòu)建需要哪些工具酶，如何將目的基因與運載體連接起來形成重組將目的基因與運載體連接起來形成重組DNA分子（以分子（以質(zhì)粒為運載體）？質(zhì)粒為運載體）？問題問題4將目

19、的基因與載體混合并用將目的基因與載體混合并用DNA連接酶處理連接酶處理后，會出現(xiàn)幾種結(jié)果，怎樣從中篩選處所需要重組質(zhì)后，會出現(xiàn)幾種結(jié)果，怎樣從中篩選處所需要重組質(zhì)粒？粒？ 小組討論：小組討論：a、使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給子代、使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給子代b、同時使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用、同時使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用問題問題2 2：作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建核心核心問題問題1 1：為何要構(gòu)建基因表達(dá)載體？為何要構(gòu)建基因表

20、達(dá)載體？1.1.基因表達(dá)載體的作用：基因表達(dá)載體的作用：2.2.基因表達(dá)載體的組成：基因表達(dá)載體的組成：它們有什么作用？它們有什么作用？a、目的基因、目的基因b、啟動子、啟動子c、終止子、終止子d、標(biāo)記基因、標(biāo)記基因位于基因的首端位于基因的首端,是是mRNA聚合酶結(jié)合位點聚合酶結(jié)合位點位于基因的尾端位于基因的尾端,終終止轉(zhuǎn)錄止轉(zhuǎn)錄檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞問題問題3 3：基因表達(dá)載體的構(gòu)建需要哪些工具酶？基因表達(dá)載體的構(gòu)建需要哪些工具酶？如何將目的基因與運載體結(jié)合起來形成重組如何將目的基因與運載體結(jié)合起來形成重組DNADNA分子（以質(zhì)粒為運載體）？分子（以質(zhì)粒為運

21、載體）？工具酶：限制酶、工具酶：限制酶、DNADNA連接酶連接酶質(zhì)粒質(zhì)粒目的基因目的基因限制酶處理限制酶處理一個切口一個切口兩個黏性末端兩個黏性末端兩個切口兩個切口獲得目的基因獲得目的基因DNADNA連接酶連接酶表表達(dá)達(dá)載載體體同種同種過程過程: :問題問題4 4：將目的基因與載體混合并用將目的基因與載體混合并用DNADNA連接酶處連接酶處理后，會出現(xiàn)幾種結(jié)果，怎樣從中篩選處所需要理后，會出現(xiàn)幾種結(jié)果，怎樣從中篩選處所需要重組質(zhì)粒？重組質(zhì)粒？ 目的基因目的基因-目的基因連接物目的基因連接物 目的基因目的基因-載體連接物載體連接物 載體載體-載體連接物載體連接物 例例1圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡圖，

22、小箭頭所指圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，的酶切位點，ampR為青霉素抗性基因，為青霉素抗性基因，tetR為四環(huán)素抗性基因，為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子，為啟動子，T為終止子，為終止子，ori為復(fù)制原點。已知目為復(fù)制原點。已知目的基因的兩端分別有包括的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多在內(nèi)的多種酶的酶切位點。據(jù)圖回答：種酶的酶切位點。據(jù)圖回答：（1）將含有目的基因的）將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒表達(dá)載體分別用與質(zhì)粒表達(dá)載體分別用EcoRI酶切，酶切，酶切產(chǎn)物用酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個連

23、接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個DNA片段之間片段之間連接形成的產(chǎn)物有連接形成的產(chǎn)物有_、_、_ _三種。若要從這些連接產(chǎn)物中分離出重組三種。若要從這些連接產(chǎn)物中分離出重組質(zhì)粒，需要對這些連接產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)粒，需要對這些連接產(chǎn)物進(jìn)行_。（2）用上述）用上述3種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化實驗。之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長實驗。之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是_；若接；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接種到含青霉素的

24、培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是產(chǎn)物是_ _。（3）目的基因表達(dá)時，）目的基因表達(dá)時，RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點是聚合酶識別和結(jié)合的位點是_，其合成的產(chǎn)物是，其合成的產(chǎn)物是_。（4）在上述實驗中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后）在上述實驗中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應(yīng)選用的酶是產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應(yīng)選用的酶是_。 分離純化分離純化 載體載體-載體連接物載體連接物 目的基因目的基因-載體連接物、載體載體連接物、載體-載體連接物載體連接物 啟動子啟動子 mRNA EcoRI和和BamHI 目的基因目的基因-目的基因連接

25、物目的基因連接物 目的基因目的基因-載體連接物載體連接物 載體載體-載體連接物載體連接物 載體載體與與表達(dá)載體表達(dá)載體的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點兩部分和復(fù)制原點兩部分DNADNA片段。表達(dá)載體在載體片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動子、終止子目的基因、啟動子、終止子三部三部分結(jié)構(gòu)分結(jié)構(gòu)用到的工具酶：用到的工具酶：既用到限制酶切割載體，又既用到限制酶切割載體，又用到用到DNADNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵啟動子、終止子啟動子、終止子對于目的基因表

26、達(dá)必不可少對于目的基因表達(dá)必不可少目的基因不能單獨進(jìn)入受體細(xì)胞，目的基因不能單獨進(jìn)入受體細(xì)胞，必需以表必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。注意注意轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化 方法方法將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胫参锛?xì)胞植物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)雱游锛?xì)胞動物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胛⑸锛?xì)胞微生物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法用用CaCa+ +處理細(xì)胞處理細(xì)胞目的基因進(jìn)入目的基因進(jìn)入_內(nèi)，并且在受體內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持細(xì)胞內(nèi)維持 和和 的過程的過程受體細(xì)胞受體細(xì)胞穩(wěn)定穩(wěn)定表達(dá)表達(dá)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w

27、細(xì)胞1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）農(nóng)桿菌）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化法特點特點:能感染能感染雙子葉植物雙子葉植物和和祼子植物祼子植物,對對單子葉植物無感染能力單子葉植物無感染能力Ti質(zhì)粒質(zhì)粒的的TDNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到其染色體上胞并整合到其染色體上轉(zhuǎn)化過程轉(zhuǎn)化過程:Ti質(zhì)粒質(zhì)粒目的基因目的基因構(gòu)建構(gòu)建表表達(dá)達(dá)載載體體導(dǎo)入導(dǎo)入植植物物細(xì)細(xì)胞胞插入插入植物細(xì)胞植物細(xì)胞染色染色DNA表達(dá)表達(dá)新新性性狀狀轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)入農(nóng)農(nóng)桿桿菌菌（2）基因槍法（基因槍法（成本高成本高）（3）花粉管通道法花粉管通道法2 2、將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞、將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞方法：顯微注射法方法

28、：顯微注射法程序：程序：目的基因表達(dá)載體提純目的基因表達(dá)載體提純 取卵（受精卵）取卵（受精卵） 顯微注射顯微注射 受精卵受精卵移植到子宮或移植到子宮或輸卵管輸卵管受精卵發(fā)育受精卵發(fā)育新性狀動物新性狀動物受體細(xì)胞是什么？受體細(xì)胞是什么？為什么采用受精卵？為什么采用受精卵？體積大，易操作；體積大，易操作；全能性高全能性高3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常用法常用法：Ca2+處理處理常用菌常用菌：大腸桿菌：大腸桿菌微生物作受體細(xì)胞原因：微生物作受體細(xì)胞原因：繁殖快繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少過程：過程：Ca2+處理處理大腸桿菌大腸桿菌感受態(tài)感受

29、態(tài)細(xì)胞細(xì)胞表達(dá)載體表達(dá)載體與感受態(tài)與感受態(tài)細(xì)胞混合細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)感受態(tài)細(xì)胞吸收胞吸收DNACa2+處理：處理：可增大細(xì)胞壁的通透性，使重組質(zhì)粒能夠可增大細(xì)胞壁的通透性，使重組質(zhì)粒能夠?qū)氲绞荏w細(xì)胞導(dǎo)入到受體細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中的方法的比較將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中的方法的比較生物種類生物種類植物細(xì)胞植物細(xì)胞動物細(xì)胞動物細(xì)胞微生物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法常用方法受體細(xì)胞受體細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程轉(zhuǎn)化過程農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法, ,基基因槍法，花粉管因槍法，花粉管通道法通道法顯微注射法顯微注射法Ca2Ca2處理法處理法體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵受精卵原核細(xì)胞原核細(xì)胞目的基因插入目的基因插入TiTi質(zhì)質(zhì)粒的粒

30、的T-DNAT-DNA上上農(nóng)農(nóng)桿菌桿菌導(dǎo)入植物細(xì)導(dǎo)入植物細(xì)胞胞整合到受體細(xì)整合到受體細(xì)胞的染色體胞的染色體DNADNA表達(dá)表達(dá)目的基因表達(dá)目的基因表達(dá)載體提純載體提純?nèi)∪÷崖? (受精卵受精卵)顯微注射顯微注射受受精卵發(fā)育精卵發(fā)育獲獲得具有新性狀得具有新性狀的動物的動物Ca2Ca2處理細(xì)胞處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞重重組表達(dá)載體與感組表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收感受態(tài)細(xì)胞吸收DNADNA分子分子( (四四) )目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定檢測檢測導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞方法方法 DNADNA分子雜交分子雜交知識延伸

31、知識延伸DNADNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù) 該方法是根據(jù)堿基互補配對原則，把互補的雙鏈該方法是根據(jù)堿基互補配對原則，把互補的雙鏈DNA解開，把單股的解開，把單股的DNA小片段用同位素、熒光分子或小片段用同位素、熒光分子或化學(xué)發(fā)光催化劑等進(jìn)行標(biāo)記，之后同被檢測的化學(xué)發(fā)光催化劑等進(jìn)行標(biāo)記，之后同被檢測的DNA中的中的同源互補序列雜交，從而檢出所要查明的同源互補序列雜交，從而檢出所要查明的DNA或基因。或基因。( (四四) )目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定檢測檢測導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞方法方法 DNADNA分子雜交分子雜交表達(dá)檢測表達(dá)檢測轉(zhuǎn)錄

32、檢測轉(zhuǎn)錄檢測分子雜交分子雜交翻譯檢測翻譯檢測抗原抗原-抗體抗體雜交雜交2 2、檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了、檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA3 3、檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)、檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)方法方法: :分分 子子 雜雜 交交方法方法: :抗原抗原- -抗體雜交抗體雜交過程過程: 用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的mRNA雜交雜交,若出現(xiàn)雜交帶若出現(xiàn)雜交帶,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNA( (四四) )目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定檢測檢測導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞方法方法 DNADNA分子雜交分子雜交表達(dá)檢測表達(dá)檢測轉(zhuǎn)錄檢測轉(zhuǎn)錄檢測分子雜交分子雜交翻譯檢測翻譯檢測抗原抗原-抗體抗體雜交雜交分分子