細(xì)胞融合和單克隆抗體

1、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體教學(xué)目標(biāo)：教學(xué)目標(biāo)： 1、了解并能簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、了解并能簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程、條件及應(yīng)用的過(guò)程、條件及應(yīng)用 2、舉例說(shuō)出動(dòng)物細(xì)胞融合與單、舉例說(shuō)出動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體的原理和應(yīng)用克隆抗體的原理和應(yīng)用教學(xué)重點(diǎn)和難點(diǎn)：教學(xué)重點(diǎn)和難點(diǎn)： 1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程及條件動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程及條件 2.單克隆抗體的制備和應(yīng)用單克隆抗體的制備和應(yīng)用 復(fù)習(xí)回顧：復(fù)習(xí)回顧： 1、植物體細(xì)胞雜交的過(guò)程是怎樣的？、植物體細(xì)胞雜交的過(guò)程是怎樣的？ 2、動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞有何不同、動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞有何不同 ？一、動(dòng)物細(xì)胞融合：一、動(dòng)物細(xì)胞融合：1、概念：也、概念

2、：也稱稱 ，是，是指指 或或 動(dòng)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。形成的細(xì)胞的過(guò)程。形成的單核細(xì)胞稱為單核細(xì)胞稱為 。2、過(guò)程：不同、過(guò)程：不同 的的兩個(gè)細(xì)胞兩個(gè)細(xì)胞 細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞雜交細(xì)胞雜交兩個(gè)兩個(gè)多個(gè)多個(gè)雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞DNA雜交雜交 3、動(dòng)物細(xì)胞融合原理與植物原生質(zhì)體動(dòng)物細(xì)胞融合原理與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？融合的基本原理是否相同？ 誘導(dǎo)方法：誘導(dǎo)方法： 、 、 。 思考：為什么滅活病毒能夠作為誘導(dǎo)劑？思考：為什么滅活病毒能夠作為誘導(dǎo)劑？不滅活的是否可以？不滅活的是否可以？ 4、動(dòng)物細(xì)胞融合的意義：克服了、動(dòng)物細(xì)胞融合的意義：克服了 雜交的不親和性。雜交的不親

3、和性。物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法生物法生物法遠(yuǎn)緣遠(yuǎn)緣滅活的病毒對(duì)細(xì)胞沒(méi)有感染能力。滅活的病毒對(duì)細(xì)胞沒(méi)有感染能力。動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞愈傷組織愈傷組織雜種植株雜種植株植物細(xì)胞植物細(xì)胞A植物細(xì)胞植物細(xì)胞B 原生質(zhì)體原生質(zhì)體A原生質(zhì)體原生質(zhì)體B植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交去壁去壁融合融合組培組培物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法生物法：生物法：滅活的病毒滅活的病毒動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞A動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞B雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞5、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較：細(xì)胞雜交的比較：比較比較項(xiàng)目項(xiàng)目細(xì)胞融合細(xì)胞融合的原理的原理細(xì)胞融合細(xì)胞融合的方法的方法誘導(dǎo)手段誘導(dǎo)手段用法用法植物植

4、物體細(xì)體細(xì)胞雜胞雜交交細(xì)胞膜的細(xì)胞膜的流動(dòng)性流動(dòng)性去壁后誘去壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)導(dǎo)原生質(zhì)體融合體融合物理法（離物理法（離心、振動(dòng)、心、振動(dòng)、電激）化學(xué)電激）化學(xué)法（聚乙二法（聚乙二醇醇獲得獲得雜種雜種植株植株動(dòng)物動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞融合融合細(xì)胞膜的細(xì)胞膜的流動(dòng)性流動(dòng)性使細(xì)胞分使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合細(xì)胞融合除以上方法，除以上方法，還有生物法還有生物法制備制備單克單克隆抗隆抗體體二、單克隆抗體：二、單克隆抗體： 1.其由何種細(xì)胞產(chǎn)生？其由何種細(xì)胞產(chǎn)生？ 2.主要分布在哪里？主要分布在哪里？ 3.如何得到抗體？如何得到抗體？提問(wèn)提問(wèn)？動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞A動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞B雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞用動(dòng)物細(xì)胞融合的方

5、法制備單克隆抗體用動(dòng)物細(xì)胞融合的方法制備單克隆抗體試一試試一試聚乙二醇或滅活的病毒聚乙二醇或滅活的病毒雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)提取抗體提取抗體效應(yīng)細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞腫瘤細(xì)胞2.2.制備過(guò)程：制備過(guò)程：誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞，雜交怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞有何優(yōu)點(diǎn)瘤細(xì)胞有何優(yōu)點(diǎn)注射抗原的目的是什么注射抗原的目的是什么為何要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和專為何要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測(cè)，多次篩選一抗體檢測(cè)，多次篩選大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法抗的方法單單克克隆隆抗抗體

6、體制制備備過(guò)過(guò)程程示示意意圖圖 注意：注意： 對(duì)小鼠做何處理？對(duì)小鼠做何處理？ 細(xì)胞融合后，培養(yǎng)液中共有幾種細(xì)胞？有幾種細(xì)胞融合后，培養(yǎng)液中共有幾種細(xì)胞？有幾種融合細(xì)胞？融合細(xì)胞？ 雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量 ，又能，又能產(chǎn)生產(chǎn)生 。 思考思考：產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞如何篩選出來(lái)的？產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞如何篩選出來(lái)的？注射特定的抗原蛋白注射特定的抗原蛋白五種（五種（B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞、B-B、骨骨、雜交瘤細(xì)胞）、骨骨、雜交瘤細(xì)胞） 其中三種融合細(xì)胞。其中三種融合細(xì)胞。繁殖繁殖專一的抗體專一的抗體提示：抑制骨髓瘤細(xì)胞的提示：抑制骨髓瘤細(xì)胞的DNA

7、復(fù)制。復(fù)制。單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)和應(yīng)用單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)和應(yīng)用單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn) 強(qiáng)，強(qiáng)， 高，高， 大。大。單克隆抗體的應(yīng)用：?jiǎn)慰寺】贵w的應(yīng)用： 作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種 物質(zhì)的物質(zhì)的細(xì)微差別，并跟細(xì)微差別，并跟 的結(jié)合，具的結(jié)合，具有有 、 、 、 的優(yōu)點(diǎn)。的優(yōu)點(diǎn)。 用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于治用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于治療療 ，可制成，可制成“ ”，也有少量用，也有少量用于治療其他疾病。于治療其他疾病。特異性特異性靈敏度靈敏度產(chǎn)量產(chǎn)量抗原抗原一定抗原發(fā)生特異性一定抗原發(fā)生特異性準(zhǔn)確準(zhǔn)確 高效高效 簡(jiǎn)易簡(jiǎn)易 快速快速癌癥癌癥生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈v

8、1、從母羊甲的體細(xì)胞中取出細(xì)胞核，注入到母羊、從母羊甲的體細(xì)胞中取出細(xì)胞核，注入到母羊乙去掉核的卵細(xì)胞中，融合后的細(xì)胞經(jīng)卵裂形成早乙去掉核的卵細(xì)胞中，融合后的細(xì)胞經(jīng)卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宮內(nèi)，出生小期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宮內(nèi)，出生小羊的大多數(shù)性狀羊的大多數(shù)性狀 ( ) A.難以預(yù)測(cè)難以預(yù)測(cè) B.像甲像甲 C.像乙像乙 D.像丙像丙v2（2004年，全國(guó)）用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單年，全國(guó)）用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤的是（克隆抗體，下列實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤的是（ ）vA將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋淋巴

9、細(xì)胞巴細(xì)胞vB用纖維素酶處理用纖維素酶處理B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞vC用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合vD篩選雜交資金積累細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所篩選雜交資金積累細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體BBv3.動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是確的是 （ ）v誘導(dǎo)融合的方法完全相同誘導(dǎo)融合的方法完全相同 所用的技術(shù)手段所用的技術(shù)手段不相同不相同 所采用的原理完全相

10、同所采用的原理完全相同 都能形成雜都能形成雜種細(xì)胞種細(xì)胞vA. B. C. D.v4. 單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ）v 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞vA BvC D CA創(chuàng)新應(yīng)用訓(xùn)練創(chuàng)新應(yīng)用訓(xùn)練5右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。據(jù)圖回答：方案。據(jù)圖回答：（1）該方案能達(dá)到預(yù)）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？期效果嗎？。原因是。原因是 。（2）圖中）圖中為為過(guò)程，過(guò)程，常用常用作為誘導(dǎo)劑。作為誘導(dǎo)劑。該細(xì)胞繼承了該細(xì)胞繼承了 ，因此不僅能分泌，因此不僅能分泌 ，還有，還有 本領(lǐng)。本領(lǐng)。（3）該方案的目的是）該方案的目的是。不能不能 沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲得產(chǎn)生單一抗體的獲得產(chǎn)生單一抗