微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1

1、微生物包括哪五類：微生物包括哪五類：真菌真菌原生動(dòng)物原生動(dòng)物特點(diǎn)：特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單, ,個(gè)體多數(shù)十分微小個(gè)體多數(shù)十分微小. .通通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu). .且體內(nèi)一般不含有葉綠且體內(nèi)一般不含有葉綠素素. .不能進(jìn)行光合作用不能進(jìn)行光合作用. . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一、培養(yǎng)基的概念、種類及營(yíng)養(yǎng)要素一、培養(yǎng)基的概念、種類及營(yíng)養(yǎng)要素1概念：人們按照微生物對(duì)概念：人們按照微生物對(duì)_的不的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。同需求，配制出供

2、其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。2種類：按照培養(yǎng)基的形態(tài)劃分。種類：按照培養(yǎng)基的形態(tài)劃分。(1)液體培養(yǎng)基：配制成的液體培養(yǎng)基：配制成的_狀態(tài)的基質(zhì)。狀態(tài)的基質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)液體液體(2)固體培養(yǎng)基：配制成的固體培養(yǎng)基：配制成的_狀態(tài)的基質(zhì)。在液狀態(tài)的基質(zhì)。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑，如瓊脂，制成瓊脂固體培體培養(yǎng)基中加入凝固劑，如瓊脂，制成瓊脂固體培養(yǎng)基，是實(shí)驗(yàn)室中最常用的培養(yǎng)基之一，微生物在養(yǎng)基，是實(shí)驗(yàn)室中最常用的培養(yǎng)基之一，微生物在其上面生長(zhǎng)，可形成肉眼可見(jiàn)的其上面生長(zhǎng)，可形成肉眼可見(jiàn)的_，主要用于，主要用于微生物的分離、鑒定等。微生物的分離、鑒定等。固體固體菌落菌落培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基種類特點(diǎn)特點(diǎn)用

3、途用途液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基不加凝固劑不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基加凝固劑，加凝固劑，如瓊脂如瓊脂觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定分類鑒定固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基微生物分離、鑒定、微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種按照培養(yǎng)基的物理性質(zhì)劃分按照培養(yǎng)基的物理性質(zhì)劃分液體培養(yǎng)基：表面生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)半固體培養(yǎng)基：無(wú)動(dòng)力 有動(dòng)力(彌散固體培養(yǎng)基：菌落固體培養(yǎng)基：菌落按照培養(yǎng)基的化學(xué)成分劃分按照培養(yǎng)基的化學(xué)成分劃分用用途途選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng)基基培養(yǎng)基中加入某培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促生物的生長(zhǎng)

4、，促進(jìn)所需要的微生進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生培養(yǎng)、分離出特定微生物物(如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉可在培養(yǎng)基中加入青霉素；培養(yǎng)金黃色葡萄球素；培養(yǎng)金黃色葡萄球菌，可在培養(yǎng)基中加入菌，可在培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽高濃度食鹽)鑒別鑒別培養(yǎng)培養(yǎng)基基根據(jù)微生物的代根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物，鑒別不同種類的微生物，如可用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)如可用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌中是否有大腸桿菌(若有，若有，菌落呈現(xiàn)黑菌落呈現(xiàn)黑色，并

5、帶有金屬光澤色，并帶有金屬光澤)選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: 分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: 分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基: 分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基: 分離自養(yǎng)型微生物鑒定培養(yǎng)基：鑒定所培養(yǎng)生物的類型2、培養(yǎng)基配制原則： （1）目的要明確：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制培養(yǎng)基的種類，因?yàn)椴煌奈⑸飳?duì)培養(yǎng)物質(zhì)的需求不同。 （2）營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。 （3）pH要適宜：各種微生物適宜生長(zhǎng)的pH范圍不同。 細(xì)菌pH為：6.5-7.5； 放線菌pH為：7.5-8.5； 真菌pH為：5.0-6.0。3、培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成 不管哪種培養(yǎng)

6、基，一般都含有不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),例如例如:生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子(即細(xì)菌生長(zhǎng)必即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物需，而自身不能合成的化合物,如維生如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。 碳源碳源氮源氮源生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子概念概念凡能為微生物提供凡能為微生物提供所需碳元素的營(yíng)養(yǎng)所需碳元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)物質(zhì)凡能為微生物提凡能為微生物提供所需氮元素的供所需氮

7、元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)微生物生長(zhǎng)不可微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)缺少的微量有機(jī)物物來(lái)源來(lái)源無(wú)機(jī)碳源：無(wú)機(jī)碳源：CO2、NaHCO3等；有機(jī)等；有機(jī)碳源：糖類、脂肪碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石酸、花生粉餅、石油等油等無(wú)機(jī)氮源：無(wú)機(jī)氮源：N2、氨、銨鹽、硝酸氨、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)氮源：鹽等；有機(jī)氮源：尿素、牛肉膏、尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸蛋白胨、氨基酸等等酵母膏、蛋白胨、酵母膏、蛋白胨、動(dòng)植物組織提取動(dòng)植物組織提取液液最常最常用來(lái)用來(lái)源源糖類，尤其是葡萄糖類，尤其是葡萄糖糖銨鹽、硝酸鹽銨鹽、硝酸鹽維生素、氨基酸、維生素、氨基酸、堿基堿基作用作用主要用于構(gòu)成微生主要用于構(gòu)成微生物的細(xì)胞物質(zhì)

8、和一物的細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；異養(yǎng)些代謝產(chǎn)物；異養(yǎng)微生物的主要能源微生物的主要能源物質(zhì)物質(zhì)主要用于合成蛋主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸以及白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物含氮的代謝產(chǎn)物酶和核酸的組成酶和核酸的組成成分成分特別提示特別提示(1)微生物最常用的碳源是糖類，尤其微生物最常用的碳源是糖類，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。是葡萄糖；最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。(2)對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō)，含對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō)，含C、H、O、N的有機(jī)物的有機(jī)物既是碳源，又是氮源、能源。既是碳源，又是氮源、能源。(3)有些培養(yǎng)基不需要添加生長(zhǎng)因子，生物自己能有些培養(yǎng)基不需要添加生長(zhǎng)因子，生物自己能合成；而絕大

9、多數(shù)微生物培養(yǎng)需要加入生長(zhǎng)因子，合成；而絕大多數(shù)微生物培養(yǎng)需要加入生長(zhǎng)因子，原因是他們?nèi)狈铣蛇@些物質(zhì)所需要的酶或合成原因是他們?nèi)狈铣蛇@些物質(zhì)所需要的酶或合成能力有限。能力有限。pH 特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 氧氣氧氣 維生素維生素 酸性酸性 中性或微堿性中性或微堿性 無(wú)氧無(wú)氧 二、無(wú)菌技術(shù)二、無(wú)菌技術(shù)1獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止_的入的入侵，具體操作如下：侵，具體操作如下：(1)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的_、操作者的衣著和手進(jìn)行清、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒。潔和消毒。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)

10、行滅菌。等器具進(jìn)行滅菌。(3)為避免周?chē)h(huán)境中為避免周?chē)h(huán)境中_的污染，實(shí)驗(yàn)操作的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。(4)實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與_相接觸。相接觸。外來(lái)雜菌外來(lái)雜菌空間空間微生物微生物周?chē)奈锲分車(chē)奈锲放詸谒伎碱}旁欄思考題1無(wú)無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？解析解析許多微生物對(duì)人類是有害的，因此實(shí)許多微生物對(duì)人類是有害的，因此實(shí)驗(yàn)室中無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生驗(yàn)室中無(wú)菌技術(shù)還

11、能有效避免操作者自身被微生物感染。物感染。答案答案無(wú)無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。微生物感染。2消毒和滅菌消毒和滅菌(1)消毒消毒概念：使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物概念：使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或體表面或_一部分對(duì)人體有危害的微生物一部分對(duì)人體有危害的微生物(不不包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子)。常用方法：常用方法：_消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法等。劑消毒法等。(2)滅菌滅菌概念：使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外概念：使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外_的的微生物。微生物。常用方法：灼燒滅菌、干熱滅菌

12、、常用方法：灼燒滅菌、干熱滅菌、_滅滅菌。菌。內(nèi)部?jī)?nèi)部煮沸煮沸所有所有高壓蒸汽高壓蒸汽(1)消消毒和滅菌的區(qū)別毒和滅菌的區(qū)別條件條件結(jié)果結(jié)果常用的方法常用的方法消消毒毒較為溫和較為溫和的物理或的物理或化學(xué)方法化學(xué)方法僅殺死物體表面或僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物有害的微生物(不不包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外氏消毒法、紫外線或化學(xué)藥物消線或化學(xué)藥物消毒法毒法滅滅菌菌強(qiáng)烈的理強(qiáng)烈的理化因素化因素殺死物體內(nèi)外所有殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽的微生物，包括芽孢和孢子孢和孢子灼燒滅菌、干熱灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、高壓

13、蒸汽滅菌滅菌方法方法條件條件作用對(duì)象作用對(duì)象消消毒毒煮沸煮沸消毒消毒法法100 ，煮沸，煮沸56 min殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢胞和一部分芽孢巴氏巴氏消毒消毒法法7075 ,煮煮30 min或或80 ,煮煮15 min不耐高溫的液體不耐高溫的液體化學(xué)化學(xué)藥藥劑消劑消毒法毒法70%的酒精的酒精對(duì)雙手消毒對(duì)雙手消毒50%的石炭酸、來(lái)蘇水的石炭酸、來(lái)蘇水對(duì)空氣消毒對(duì)空氣消毒一定濃度的乳酸、食醋一定濃度的乳酸、食醋通過(guò)熏蒸對(duì)空氣進(jìn)行通過(guò)熏蒸對(duì)空氣進(jìn)行消毒消毒紫外紫外線法線法紫外線照射紫外線照射30 min物體表面或空氣中的物體表面或空氣中的微生物微生物 （2 2）常用的消毒、

14、滅菌手段）常用的消毒、滅菌手段 方法方法滅菌操作滅菌操作適用對(duì)象適用對(duì)象灼燒灼燒滅菌滅菌在酒精燈火焰的充分在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒燃燒層灼燒對(duì)接種環(huán)、接種針或其對(duì)接種環(huán)、接種針或其他金屬工具滅菌，也可他金屬工具滅菌，也可以對(duì)試管口、瓶口滅菌以對(duì)試管口、瓶口滅菌干熱干熱滅菌滅菌在干熱滅菌箱內(nèi)，在干熱滅菌箱內(nèi)，160170 條件下，條件下，加熱加熱12 h耐高溫且需保持干燥的耐高溫且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金物品，如玻璃器皿和金屬用具等屬用具等高壓高壓蒸汽蒸汽滅菌滅菌在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，121 ，100 kPa，滅，滅菌菌1530 min培養(yǎng)基、發(fā)酵設(shè)備等培養(yǎng)基、發(fā)酵

15、設(shè)備等紫外紫外線滅線滅菌菌30 W照射照射30 min小型接種室、接種箱等小型接種室、接種箱等(2)滅菌所依據(jù)的原理基本都是使菌體內(nèi)的蛋白質(zhì)和核滅菌所依據(jù)的原理基本都是使菌體內(nèi)的蛋白質(zhì)和核酸發(fā)生變性，從而達(dá)到殺菌的效果。酸發(fā)生變性，從而達(dá)到殺菌的效果。(3)消毒時(shí)一般不能殺死微生物的芽孢的原因是：芽孢消毒時(shí)一般不能殺死微生物的芽孢的原因是：芽孢是細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育后期，在細(xì)胞內(nèi)形成的一個(gè)圓柱或橢圓是細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育后期，在細(xì)胞內(nèi)形成的一個(gè)圓柱或橢圓形形 、厚壁、含水量極低、抗逆性很強(qiáng)的休眠體，它抗、厚壁、含水量極低、抗逆性很強(qiáng)的休眠體，它抗熱、抗化學(xué)藥物、抗靜水壓的能力極強(qiáng)。熱、抗化學(xué)藥物、抗靜水壓的能

16、力極強(qiáng)。思維激活思維激活1 用用酒精擦拭實(shí)驗(yàn)者手臂屬消毒還是滅酒精擦拭實(shí)驗(yàn)者手臂屬消毒還是滅菌？菌？70%與與95%的酒精，哪一種效果更好？為什的酒精，哪一種效果更好？為什么？么？提示提示酒精擦拭屬化學(xué)消毒，酒精消毒時(shí)，酒精擦拭屬化學(xué)消毒，酒精消毒時(shí)，70%的酒精殺菌效果最好。原因是：濃度過(guò)高，使菌的酒精殺菌效果最好。原因是：濃度過(guò)高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能滲入其中；濃度過(guò)低，殺菌力減弱。滲入其中；濃度過(guò)低，殺菌力減弱。1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存三、純化大

17、腸桿菌的無(wú)菌操作三、純化大腸桿菌的無(wú)菌操作本實(shí)驗(yàn)使用本實(shí)驗(yàn)使用_固體培養(yǎng)基進(jìn)行大腸固體培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)，可分成桿菌的純化培養(yǎng)，可分成_和純化大和純化大腸桿菌兩個(gè)階段進(jìn)行。腸桿菌兩個(gè)階段進(jìn)行。牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨制備培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基1制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟： 稱量稱量 倒平板。倒平板。(2)倒平板的過(guò)程：倒平板的過(guò)程：在火焰旁右手拿錐形瓶，左手在火焰旁右手拿錐形瓶，左手 。右手拿錐形瓶，使錐形瓶的瓶口迅速通過(guò)右手拿錐形瓶，使錐形瓶的瓶口迅速通過(guò) 。左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條縫隙，右手將

18、培養(yǎng)基倒入培左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條縫隙，右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立刻養(yǎng)皿，左手立刻 。待平板冷卻凝固后，將平板待平板冷卻凝固后，將平板 放置，使皿蓋放置，使皿蓋在下、皿底在上。在下、皿底在上。計(jì)算計(jì)算溶化溶化滅菌滅菌拔出棉塞拔出棉塞火焰火焰蓋上皿蓋蓋上皿蓋倒過(guò)來(lái)倒過(guò)來(lái)1制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計(jì)計(jì)算：依據(jù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方比例，計(jì)算：依據(jù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方比例，計(jì)算配制算配制100 mL 的培養(yǎng)基時(shí)，各種成分的用量的培養(yǎng)基時(shí)，各種成分的用量 稱量：牛肉膏比較黏稠，可用稱量紙稱取，牛稱量：牛肉膏比較黏稠，可用稱量紙稱取，牛肉膏和蛋白胨都易吸潮，稱取時(shí)動(dòng)作要迅

19、速，稱肉膏和蛋白胨都易吸潮，稱取時(shí)動(dòng)作要迅速，稱后要及時(shí)蓋上瓶蓋后要及時(shí)蓋上瓶蓋無(wú)菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入無(wú)菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37的溫室中培養(yǎng)的溫室中培養(yǎng)2448小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。倒平板倒平板:微生物培養(yǎng)中有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作的注意事項(xiàng)微生物培養(yǎng)中有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作的注意事項(xiàng)1倒平板操作倒平板操作(1)培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻至培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻至50 左右時(shí)才能倒平左右時(shí)才能倒平板，原因是瓊脂在板，原因是瓊脂在44 以下凝固。以下凝固。(2)培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開(kāi)。打開(kāi)。(3)整個(gè)操作過(guò)程要在酒精燈火焰

20、旁進(jìn)行，避免雜整個(gè)操作過(guò)程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。菌污染。(4)平板冷凝后要倒置的原因：防止皿蓋上的冷凝平板冷凝后要倒置的原因：防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，造成污染。水落入培養(yǎng)基，造成污染。(5)若倒平板時(shí)，培養(yǎng)基濺在皿蓋和皿底之間的部若倒平板時(shí)，培養(yǎng)基濺在皿蓋和皿底之間的部位，這個(gè)平板應(yīng)丟棄。位，這個(gè)平板應(yīng)丟棄。倒平板操作討論題倒平板操作討論題1培培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時(shí)，左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？溫度？答案答案可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶

21、，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。進(jìn)行倒平板了。2為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？答案答案通通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。染培養(yǎng)基。3平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答案答案平平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水

22、珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答案答案空空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。養(yǎng)微生物。（二）、純化大腸桿菌接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法:通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫(huà)線的操作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.

23、在數(shù)次畫(huà)線后,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體,這就是菌落.菌落： 單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落落。 菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異 霉菌的菌落特征因種而異菌落接種環(huán)接種針 平板劃線的操作方法交叉劃線法連續(xù)劃線法 1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種

24、環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。 2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？ 答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得

25、到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。涂布器 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？ 應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周?chē)鹊?。四、課題成果評(píng)價(jià) （一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無(wú)菌要求 如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)， (在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊)則說(shuō)明接

26、種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，(在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了3種特征不同的菌落，原因有培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌感染等。)則說(shuō)明接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。（三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同，及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。31培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對(duì)照對(duì)照，若有菌落形成，說(shuō)明培養(yǎng)，若有菌落形成，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不徹底?；鶞缇粡氐?。32在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白白

27、色，為圓形，光滑有光色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。澤，邊緣整齊。33培養(yǎng)培養(yǎng)12h和和24h后的菌落大小后的菌落大小不同不同（相同、不同）；菌落分（相同、不同）；菌落分布位置布位置相同相同（相同、不同）。原因是時(shí)間越長(zhǎng)，菌落中細(xì)菌繁殖（相同、不同）。原因是時(shí)間越長(zhǎng)，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大；菌落的位置不動(dòng)，但菌落數(shù)增多。越多，菌落體積越大；菌落的位置不動(dòng)，但菌落數(shù)增多。34在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了3種特征不同的菌落，原因有培養(yǎng)基滅菌種特征不同的菌落，原因有培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌感染等。不徹底或雜菌感染等。n結(jié)果分析與評(píng)價(jià)n課題延伸（P20）1、臨時(shí)保藏法對(duì)象：溫度： 缺點(diǎn)： 2、甘油管藏法： 對(duì)象： 溫度：頻繁使用的菌種 4（冰箱） 容易被污染或產(chǎn)生變異 長(zhǎng)期保存的菌種 -20（冷凍箱） 本課題知識(shí)小結(jié):【典例解析】 例1關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無(wú)機(jī)物只提供無(wú)機(jī)鹽