真核細(xì)胞RNA的制備和逆轉(zhuǎn)錄PCR-毛宇彬

1、實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 真核細(xì)胞真核細(xì)胞RNA的制備的制備和和n RNARNA通常以單鏈形式通常以單鏈形式存在，但也可形成局部存在，但也可形成局部的雙螺旋結(jié)構(gòu)。的雙螺旋結(jié)構(gòu)。n RNARNA分子的種類(lèi)較多，分子的種類(lèi)較多，分子大小變化較大，功分子大小變化較大，功能多樣化。能多樣化。RNA的種類(lèi)、分布、功能的種類(lèi)、分布、功能核核蛋蛋白白體體RNA信信使使RNA轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)運(yùn)運(yùn)RNA核核內(nèi)內(nèi)不不均均一一RNA核核內(nèi)內(nèi)小小RNA胞胞漿漿小小RNA 細(xì)細(xì)胞胞核核和和胞胞液液線線粒粒體體功功能能rRNAmRNA mt rRNAtRNAmt mRNAmt tRNAHnRNASnRNASnoRNAscRNA/7SL-RNA

2、核核蛋蛋白白體體組組分分蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)合合成成模模板板轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)運(yùn)運(yùn)氨氨基基酸酸成成熟熟mRNA的的前前體體參參與與hnRNA的的剪剪接接、轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)運(yùn)運(yùn)rRNA的的加加工工、修修飾飾蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)內(nèi)內(nèi)質(zhì)質(zhì)網(wǎng)網(wǎng)定定位位合合成成的的信信號(hào)號(hào)識(shí)識(shí)別別體體的的組組分分核核仁仁小小RNA核核蛋蛋白白體體RNA信信使使RNA轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)運(yùn)運(yùn)RNA核核內(nèi)內(nèi)不不均均一一RNA核核內(nèi)內(nèi)小小RNA胞胞漿漿小小RNA 細(xì)細(xì)胞胞核核和和胞胞液液線線粒粒體體功功能能rRNAmRNA mt rRNAtRNAmt mRNAmt tRNAHnRNASnRNASnoRNAscRNA/7SL-RNA 核核蛋蛋白白體體組組分分蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)合合成成模模板

3、板轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)運(yùn)運(yùn)氨氨基基酸酸成成熟熟mRNA的的前前體體參參與與hnRNA的的剪剪接接、轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)運(yùn)運(yùn)rRNA的的加加工工、修修飾飾蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)內(nèi)內(nèi)質(zhì)質(zhì)網(wǎng)網(wǎng)定定位位合合成成的的信信號(hào)號(hào)識(shí)識(shí)別別體體的的組組分分核核仁仁小小RNAn掌握逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)的基本原理、實(shí)驗(yàn)基本條件n熟悉PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化和注意事項(xiàng)，PCR引物設(shè)計(jì)的基本原則，定量PCR的原理和用途。組織細(xì)胞：新鮮動(dòng)物肝臟塑料制品： 盡可能使用無(wú)菌、一次性塑料制品，已標(biāo)明 RNase-Free 的塑料制 品，如沒(méi)有開(kāi)封使用過(guò)通常沒(méi)有必要再次處理。對(duì)于國(guó)產(chǎn)塑料制品，原則上都必須處理方可使用。處理步驟如下： 1在玻璃燒杯中注入去離子水，加入 DEPC

4、（焦碳酸二乙酯） 使 DEPC 的終濃度為 0.1%。注意：DEPC 為劇毒物，活性很強(qiáng)，小心在通 風(fēng)柜中使用。2處理的塑料制品放入一個(gè)可以高溫滅菌的容器中，注入 DEPC 水溶液， 使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。 3在通風(fēng)柜中室溫處理過(guò)夜。 4將 DEPC 水溶液小心倒到廢液瓶中，用鋁箔封住DEPC 水處理 過(guò)的塑料制品的燒杯，7080烘拷干燥，高溫高壓蒸氣滅菌至少 30 分鐘。 5烘箱用合適的溫度（7080）烘拷至干燥。置于干凈處備用。 玻璃和金屬物品：250 烘烤3小時(shí)以上或180烘烤8小時(shí)。 其它試劑：無(wú)水乙醇、氯仿 、DEPC處理過(guò)的水、75%乙醇（用DEPC處理水 配制）、0.5%（m/V）SDS（DEPC處理）三、方法和步驟三、方法和步驟四、注意事項(xiàng)瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠