第1章 細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)

1、 本章要點(diǎn)：本章要點(diǎn)：細(xì)菌的形態(tài)和大小細(xì)菌的形態(tài)和大小基本結(jié)構(gòu)和特殊結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)和特殊結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁的異同點(diǎn)細(xì)胞壁的異同點(diǎn)1. 染色標(biāo)本的檢查染色標(biāo)本的檢查弧菌弧菌 如：霍亂弧菌如：霍亂弧菌 螺菌螺菌 如：鼠咬熱螺菌如：鼠咬熱螺菌細(xì)菌結(jié)構(gòu)模式圖細(xì)菌結(jié)構(gòu)模式圖鞭毛鞭毛莢膜莢膜芽胞芽胞菌毛菌毛細(xì)胞壁細(xì)胞壁細(xì)胞膜細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)核質(zhì)核質(zhì)細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)細(xì)菌的細(xì)胞壁細(xì)菌的細(xì)胞壁特殊成分特殊成分基本成分基本成分肽聚糖肽聚糖革蘭陽性菌革蘭陽性菌磷壁酸磷壁酸革蘭陰性菌革蘭陰性菌外膜外膜G（+）菌）菌G（-）菌）菌聚糖骨架聚糖骨架聚糖骨架聚糖骨架四肽側(cè)鏈四肽側(cè)鏈（谷、丙、

2、（谷、丙、賴賴、丙）、丙）四肽側(cè)鏈四肽側(cè)鏈（谷、丙、谷、丙、二氨基庚二酸二氨基庚二酸、丙）、丙）五肽交聯(lián)橋五肽交聯(lián)橋溶菌酶作用位點(diǎn)溶菌酶作用位點(diǎn)青霉素作用點(diǎn)青霉素作用點(diǎn)甘氨酸五肽橋甘氨酸五肽橋脂蛋白脂蛋白脂質(zhì)雙層脂質(zhì)雙層脂多糖脂多糖 核心多糖核心多糖特異性多糖特異性多糖脂質(zhì)脂質(zhì)A細(xì)胞膜模式圖細(xì)菌核質(zhì)電鏡觀察球菌(coccus)腦膜炎奈瑟菌腦膜炎奈瑟菌雙球菌雙球菌(diplococcus)肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌鏈球菌鏈球菌(streptococcus)球菌(coccus)球菌(coccus)葡萄球菌葡萄球菌(streptococcus)球菌(coccus)四聯(lián)球菌四聯(lián)球菌(tetrad)球菌(co

3、ccus)八疊球菌八疊球菌(sarcina)桿菌(bacillus)不同桿菌的大小、長短、粗細(xì)很不一致。不同桿菌的大小、長短、粗細(xì)很不一致。炭疽芽胞桿菌 3-10 m大中大腸埃希菌 2-3 m小布魯菌 0.6-1.5 m桿菌的形態(tài)多樣桿菌的形態(tài)多樣桿菌(bacillus)兩端齊平炭疽芽胞桿菌炭疽芽胞桿菌兩端尖細(xì)白喉棒狀桿菌白喉棒狀桿菌桿菌(bacillus)桿菌的形態(tài)多樣桿菌的形態(tài)多樣分枝桿菌分枝桿菌雙歧桿菌雙歧桿菌螺形菌(spiral bacterium)弧菌弧菌螺菌螺菌螺桿菌螺桿菌二、細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)1、鞭毛從胞漿長出，伸到胞壁外的細(xì)長呈波浪形從胞漿長出，伸到胞壁外的細(xì)長呈波浪形彎曲的絲狀物

4、。彎曲的絲狀物。l陽性菌鞭毛的基體由S、M兩個環(huán)組成，陰性菌鞭毛的基體由L、P、S、M四個環(huán)組成，環(huán)中央有鞭毛桿（rod）串插著，鞭毛桿外側(cè)聯(lián)接一個鉤形鞘（hook），其上長有一條長約1020m的鞭毛絲（filament）。鞭毛絲一般是由三股鞭毛蛋白鏈呈螺旋、平行或中間方式緊密結(jié)合組成的。鞭毛的構(gòu)造鞭毛的構(gòu)造l電鏡觀察電鏡觀察l特殊染色后用普通光學(xué)顯微鏡觀察；特殊染色后用普通光學(xué)顯微鏡觀察；l壓滴法或懸滴法觀察細(xì)菌動力；壓滴法或懸滴法觀察細(xì)菌動力；l接種于半固體培養(yǎng)基觀察其擴(kuò)散生長現(xiàn)象。接種于半固體培養(yǎng)基觀察其擴(kuò)散生長現(xiàn)象。檢查細(xì)菌鞭毛的方法：檢查細(xì)菌鞭毛的方法：l有鞭毛能運(yùn)動的細(xì)菌其菌落往往

5、大而扁平，周緣不整齊，而運(yùn)動能力特強(qiáng)的細(xì)菌則出現(xiàn)更大、更扁平的菌落，其邊緣從不規(guī)則、缺刻狀直至出現(xiàn)遷居性的菌落。 根據(jù)鞭毛的數(shù)量、位置可將鞭毛菌分成四類根據(jù)鞭毛的數(shù)量、位置可將鞭毛菌分成四類: 單毛菌單毛菌 雙毛菌雙毛菌 叢毛菌叢毛菌 周毛菌周毛菌鞭毛菌分類單毛菌單毛菌雙毛菌雙毛菌叢毛菌叢毛菌周毛菌周毛菌l運(yùn)動器官：運(yùn)動器官：有鞭毛的細(xì)菌在液體環(huán)境中能自由的運(yùn)動。l致病性：致病性：有些細(xì)菌的鞭毛與致病性有關(guān)。如:霍亂弧菌l抗原性：抗原性：H 抗原，有特異性，對細(xì)菌的鑒別、分型有一定的意義。鞭毛的功能鞭毛的功能（二）菌毛（pilus） l許多革蘭陰性菌和個別革蘭陽性菌細(xì)胞的周圍具有一許多革蘭陰性

6、菌和個別革蘭陽性菌細(xì)胞的周圍具有一些比鞭毛更纖細(xì)、短直而堅(jiān)硬的絲狀物，稱為菌毛，些比鞭毛更纖細(xì)、短直而堅(jiān)硬的絲狀物，稱為菌毛，與細(xì)菌的運(yùn)動無關(guān)。與細(xì)菌的運(yùn)動無關(guān)。 l光學(xué)顯微鏡下看不到，須用電鏡觀察。光學(xué)顯微鏡下看不到，須用電鏡觀察。根據(jù)功能不同，菌毛可分為：l普通菌毛：粘附作用，與細(xì)菌的致病性密切相關(guān)。 l性菌毛：傳遞遺傳物質(zhì)。噬菌體吸附的受體。 （三）莢膜（三）莢膜l某些細(xì)菌在細(xì)胞壁外包繞的一層粘液性物質(zhì)。能牢固地與細(xì)胞壁結(jié)合，厚度 0.2 m，邊緣明顯。l微莢膜(microcapsule)-厚度 0.2 m者。l粘液層(slime layer)-邊界不明顯且已被洗脫者。l莢膜的化學(xué)組成：

7、多糖；多肽；透明質(zhì)酸。l莢膜的形成：在人和動物的體內(nèi)或營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中易形成。在普通培養(yǎng)基上或連續(xù)傳代則易消失。光滑型菌落（S）失去莢膜后會轉(zhuǎn)變成粗糙型菌落（R）。l莢膜的功能：抗吞噬作用；抗殺傷；抗干燥；致病性；鑒定細(xì)菌；免疫原性。 l莢膜的染色特點(diǎn)：l不易著色，通常用負(fù)染色法染色后觀察。 l莢膜的醫(yī)學(xué)意義：l細(xì)菌的毒力成分；l可用來作細(xì)菌分型（莢膜腫脹試驗(yàn))莢膜莢膜4. 芽胞芽胞(endospore/spore) l某些細(xì)菌（主要為某些細(xì)菌（主要為G+）在一定條件下，細(xì)胞）在一定條件下，細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)濃縮脫水而形成一個折光性很強(qiáng)，具質(zhì)、核質(zhì)濃縮脫水而形成一個折光性很強(qiáng)，具有多層膜狀結(jié)構(gòu)、通

8、透性很低的圓形或卵圓形有多層膜狀結(jié)構(gòu)、通透性很低的圓形或卵圓形的小體。的小體。l不同細(xì)菌的芽胞形態(tài)、大小、位置有所差異，不同細(xì)菌的芽胞形態(tài)、大小、位置有所差異，是鑒別細(xì)菌的指標(biāo)之一。是鑒別細(xì)菌的指標(biāo)之一。 l芽胞的形成l細(xì)菌形成芽胞的能力是由菌體內(nèi)的芽孢基因決定的。芽胞一般只在動物體外才形成。營養(yǎng)缺乏時易形成。軸絲形成軸絲形成 形成前芽孢形成前芽孢 前芽孢隔膜形成前芽孢隔膜形成 前芽孢發(fā)育成熟前芽孢發(fā)育成熟芽孢形成芽孢形成 芽孢囊芽孢囊裂解裂解 芽孢的特性芽孢的特性l對高溫、干燥、輻射、化學(xué)藥物有強(qiáng)大的抵抗力。 l含水量低、壁厚而致密，通透性差,不易著色，折光性強(qiáng)。l芽胞內(nèi)新陳代謝幾乎停止，處

9、于休眠狀態(tài)，但保持潛在萌發(fā)力。l芽胞形成后保存細(xì)菌全部生命物質(zhì)l芽胞不是細(xì)菌的繁殖形式 芽胞的作用和意義芽胞的作用和意義l增強(qiáng)細(xì)菌抵抗力l以芽胞是否被殺死作為滅菌效果的指標(biāo)l芽胞大小、形狀、在菌體內(nèi)的位置有助于細(xì)菌鑒別l保存菌種芽胞的大小、形狀、位置等隨菌種而異，有重要的鑒別意義。芽胞的大小、形狀、位置等隨菌種而異，有重要的鑒別意義。炭疽芽胞桿菌肉毒梭菌肉毒梭菌破傷風(fēng)梭菌破傷風(fēng)梭菌三、細(xì)菌的非典型形態(tài)與結(jié)構(gòu)三、細(xì)菌的非典型形態(tài)與結(jié)構(gòu)l影響細(xì)菌形態(tài)的因素l培養(yǎng)條件l菌齡l環(huán)境中不利于細(xì)菌生長的物質(zhì)l細(xì)菌的典型形態(tài)l生長條件適宜l培養(yǎng)8-18小時什么是什么是L型細(xì)菌？型細(xì)菌？l革蘭陽性菌細(xì)胞壁缺失

10、后，原生質(zhì)僅被一層細(xì)胞膜包住，稱為原生質(zhì)體（protoplast）；革蘭陰性菌肽聚糖層受損后尚有外膜保護(hù)，稱為原生質(zhì)球（spheroplast）。這種細(xì)胞壁受損的細(xì)菌能夠生長和分裂者稱為細(xì)菌細(xì)胞壁缺陷型或細(xì)菌L型（L form）， 因其1935年首先在Lister研究院發(fā)現(xiàn)而得名。革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁幾乎完全缺失，僅剩一層細(xì)胞膜，稱為原生質(zhì)體。革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁幾乎完全缺失，僅剩一層細(xì)胞膜，稱為原生質(zhì)體。革蘭氏陰性菌因有外膜保護(hù)，且胞內(nèi)滲透壓較低，對低滲環(huán)境仍有一定革蘭氏陰性菌因有外膜保護(hù)，且胞內(nèi)滲透壓較低，對低滲環(huán)境仍有一定抵抗力，其抵抗力，其細(xì)菌細(xì)菌L型稱為園球體。型稱為園球體。 細(xì)菌L型呈

11、高度多形性，大小不一。著色不勻，無論其原為革蘭陽性或陰性菌，形成L型大多染成革蘭陰性。蠟樣芽胞桿菌蠟樣芽胞桿菌L型的鏡下形態(tài)（多形性）型的鏡下形態(tài)（多形性）細(xì)菌細(xì)菌L型的形態(tài)和染色性型的形態(tài)和染色性l細(xì)菌L型生長緩慢，營養(yǎng)要求高，對滲透壓敏感，普通營養(yǎng)基上不能生長，培養(yǎng)時必須用高滲的含血清的培養(yǎng)基。l細(xì)菌L型在高滲的含血清的培養(yǎng)基上生長后形成三種類型的菌落。 絲狀菌落絲狀菌落 顆粒型菌落顆粒型菌落 油煎蛋樣菌落油煎蛋樣菌落（典型（典型L型菌落）型菌落）細(xì)菌細(xì)菌L型的培養(yǎng)特性和菌落形態(tài)型的培養(yǎng)特性和菌落形態(tài)荷包蛋狀菌落細(xì)菌細(xì)菌L型的生物學(xué)特性型的生物學(xué)特性l嗜高滲性：l只有在高滲環(huán)境中才能生長，

12、在普通的培養(yǎng)基上不生長；由于已經(jīng)失去了堅(jiān)固的菌壁，只剩下一層胞漿膜，故在非高滲的環(huán)境中，菌體就會迅速地溶解而死亡l返祖l當(dāng)抑制物去除后，L型細(xì)菌仍可回復(fù)至原來的形態(tài)，此為L型的返祖。有些較穩(wěn)定的L型不易返祖l抗原性l細(xì)菌變?yōu)長型后，抗原性減弱，在體內(nèi)可以逃避免疫攻擊，得以長期存活，這可能和某些感染性疾病易轉(zhuǎn)為慢性或復(fù)發(fā)有關(guān)。l對抗生素的敏感性l抗生素對L型菌的抑制作用比原菌強(qiáng)（細(xì)胞壁不完整的原因）醫(yī)學(xué)意義lL型細(xì)菌在體內(nèi)、外均能形成，尤其在使用于細(xì)胞壁的藥物治療過程中反復(fù)出現(xiàn)，某些L型細(xì)菌仍有致病力，可引起尿路感染、骨髓炎、心內(nèi)膜炎等疾病；l在進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢查時，L型細(xì)菌往往被漏檢而造成病原

13、菌感染的漏診。第二節(jié)第二節(jié)細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢驗(yàn) l形態(tài)學(xué)檢查法的概念l形態(tài)學(xué)檢查需借助的工具顯微鏡顯微鏡顯微鏡l普通光學(xué)顯微鏡l暗視野顯微鏡l相差顯微鏡l熒光顯微鏡l電子顯微鏡l掃描隧道顯微鏡早期的顯微鏡早期的顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡暗視野顯微鏡暗視野顯微鏡相差顯微鏡相差顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡掃描電子顯微鏡掃描電子顯微鏡透射電子顯微鏡透射電子顯微鏡掃描隧道顯微鏡掃描隧道顯微鏡一、細(xì)菌染色標(biāo)本檢查法一、細(xì)菌染色標(biāo)本檢查法染色標(biāo)本檢查法染色標(biāo)本檢查法l為了更好地顯示細(xì)菌的形態(tài)排列、染色和結(jié)構(gòu)組成等特點(diǎn)，常先將細(xì)菌標(biāo)本制片染色后再進(jìn)行鏡檢。涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色水洗、

14、吸干水洗、吸干鏡檢鏡檢制備涂片標(biāo)本制備涂片標(biāo)本染色染色染色標(biāo)本檢查的基本程序染色標(biāo)本檢查的基本程序l涂片制備涂片干燥固定注：固定的目的1、殺死細(xì)菌，保持細(xì)菌原有的形態(tài)和結(jié)構(gòu)2、增加細(xì)菌的通透性，使細(xì)菌易于著色3、使細(xì)菌牢牢地黏附在玻片上，不至于在染色的過程中被水沖掉染色方法染色方法l單染法l復(fù)染法l其他染色法單染法單染法l只用一種染料染色l形態(tài)、大小、排列及簡單結(jié)構(gòu)l常用亞甲藍(lán)或復(fù)紅等復(fù)染法（鑒別染色法）復(fù)染法（鑒別染色法）l需用兩種或兩種以上的染料染色，可觀察不同的染色性。l常用的有：革蘭染色、抗酸染色分為四個步驟：初染媒染脫色復(fù)染其他染色法其他染色法l特殊染色法l負(fù)染色法l熒光顯微鏡檢查法

15、鏡檢鏡檢l先用低倍鏡找出標(biāo)本位置，再轉(zhuǎn)用油鏡l粗調(diào)微調(diào)l香柏油的作用：玻片和空氣密度不同，使部分光線經(jīng)空氣折射后不能進(jìn)入透鏡，而香柏油的折光率與玻璃相近，可使進(jìn)入油鏡的光線增多，視野光度增強(qiáng)，物像清晰l鏡頭要保持清潔（可用二甲苯擦拭鏡頭）革蘭染色革蘭染色-基本步驟基本步驟l初染：結(jié)晶紫 1 min；l媒染：碘液 1 min；l脫色：95%乙醇 l至無紫色脫落為止；l復(fù)染：石碳酸復(fù)紅30s，自然干燥后鏡檢染色方法染色方法革蘭陽性菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌革蘭陰性菌革蘭染色結(jié)果革蘭染色結(jié)果l紫色革蘭陽性菌l紅色革蘭陰性菌染色原理染色原理l滲透學(xué)說：與肽聚糖結(jié)構(gòu)有關(guān)。l化學(xué)學(xué)說：與細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中核糖核酸鎂

16、鹽有關(guān)。l等電點(diǎn)學(xué)說：與細(xì)菌所帶電荷有關(guān)。臨床意義臨床意義l細(xì)菌分類l選擇用藥l了解細(xì)菌致病性影響革蘭染色的因素影響革蘭染色的因素l操作因素l涂片的厚??；脫色時間的長短。l染液因素l盧戈碘液放置時間過長；95乙醇揮發(fā)；結(jié)晶紫與草酸銨混合時間太長。l細(xì)菌因素l細(xì)菌種類；細(xì)菌菌齡等。萋尼抗酸染色萋尼抗酸染色l分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分枝菌脂質(zhì)，主要是分枝菌酸酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過著色，要經(jīng)過加熱和延長染色時間加熱和延長染色時間來促使其著色。但來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌

17、酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名脫色劑脫色，故名抗酸染色抗酸染色。l齊齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用鹽酸酒精處理也不脫色。用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色紅色，而其，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色藍(lán)色。二、實(shí)驗(yàn)原理：三、實(shí)驗(yàn)材料：三、實(shí)驗(yàn)材料：細(xì)菌：結(jié)核桿菌染液：碳酸復(fù)紅液、3%鹽酸酒精、呂氏堿性亞甲藍(lán)液其它：接種環(huán)、酒精燈、載玻片等四、

18、實(shí)驗(yàn)方法：四、實(shí)驗(yàn)方法：1、細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備、細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備 涂片涂片 干燥干燥 固定固定2、染、染 色色3、油鏡觀察油鏡觀察1）初染：）初染：用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時離開，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱3-5分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。2）脫色：）脫色： 3%鹽酸酒精脫色301；用水沖洗。3）復(fù)染復(fù)染：用堿性美蘭溶液復(fù)染1，用水沖洗后用吸水紙吸干。其他染色法其他染色法l特殊染色法l負(fù)染色法l熒光顯微鏡檢查法不染色標(biāo)本檢查法不染色標(biāo)本檢查法1、壓滴法、壓滴法載玻片載玻片細(xì)菌懸液細(xì)菌懸液蓋玻片蓋玻片2、懸滴法、懸滴法鏡檢鏡檢蓋玻片蓋玻片細(xì)菌懸液細(xì)菌懸液凹玻片凹玻片暗視野映光法暗視野映光法電子顯微