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1、植物根尖壓片技術(shù)植物根尖壓片技術(shù)有絲分裂觀察有絲分裂觀察尹若春尹若春問題?問題?n為了獲得更多的有絲分裂細胞,一般在固定之為了獲得更多的有絲分裂細胞,一般在固定之前對根尖進行前處理,通常用的化學(xué)物質(zhì)是?前對根尖進行前處理,通常用的化學(xué)物質(zhì)是?A A 秋水仙素;秋水仙素;B B 對二氯苯;對二氯苯;C 8-C 8-羥基喹啉;羥基喹啉;D D 二甲亞砜;二甲亞砜;E E 二甲苯二甲苯n有絲分裂實驗中用于固定植物根尖的溶液的配有絲分裂實驗中用于固定植物根尖的溶液的配方是?方是?A 3A 3份乙醇和份乙醇和1 1份冰醋酸;份冰醋酸;B 3B 3份冰醋酸和份冰醋酸和1 1份乙醇;份乙醇;C 3C 3份甲
2、醇和份甲醇和1 1份冰醋酸;份冰醋酸;D 3D 3份冰醋酸和份冰醋酸和1 1份甲醇;份甲醇;n在植物的根的結(jié)構(gòu)中,用于有絲分裂觀察實驗在植物的根的結(jié)構(gòu)中,用于有絲分裂觀察實驗的是?的是?A A 成熟區(qū)(根毛區(qū));成熟區(qū)(根毛區(qū));B B 伸長區(qū);伸長區(qū);C C 分生區(qū);分生區(qū);D D 根冠;根冠;問題?問題?n為了清晰地觀察到分裂期細胞中染色體的形態(tài),為了清晰地觀察到分裂期細胞中染色體的形態(tài),一般選用的物鏡倍數(shù)是?一般選用的物鏡倍數(shù)是? A 4A 4倍;倍;B 10B 10倍;倍;C 20C 20倍;倍;D 40D 40倍;倍;E 100E 100倍倍實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康恼莆崭馊旧w壓片技術(shù)掌握
3、根尖染色體壓片技術(shù)掌握植物有絲分裂過程各期的特點掌握植物有絲分裂過程各期的特點及主要區(qū)別及主要區(qū)別實驗原理實驗原理細胞經(jīng)過生長和分裂而完成增殖的全過細胞經(jīng)過生長和分裂而完成增殖的全過程稱為程稱為細胞增殖周期細胞增殖周期。有絲分裂(又稱。有絲分裂(又稱間接分裂)是高等生物體細胞增殖的主間接分裂)是高等生物體細胞增殖的主要形式。要形式。根尖染色體壓片法,是觀察植物染色體根尖染色體壓片法,是觀察植物染色體最常用的方法,也是研究染色體組型、最常用的方法,也是研究染色體組型、染色體分帶、染色體畸變和姊妹染色單染色體分帶、染色體畸變和姊妹染色單體交換的基礎(chǔ)。體交換的基礎(chǔ)。實驗原理實驗原理n每種生物的染色體
4、數(shù)目是恒定的,染色每種生物的染色體數(shù)目是恒定的,染色體的數(shù)目和形態(tài)特征是物種的特征。體的數(shù)目和形態(tài)特征是物種的特征。 蔥屬植物的染色體組型分析蔥屬植物的染色體組型分析實驗原理實驗原理細胞周期細胞周期間期間期G1期:期:RNA和蛋白質(zhì)合成和蛋白質(zhì)合成S期:期:DNA復(fù)制復(fù)制G2期:期:紡錘體微管形成,能量儲積紡錘體微管形成,能量儲積分裂期分裂期前期前期中期中期后期后期末期末期根尖的結(jié)構(gòu)根尖的結(jié)構(gòu)實驗材料與試劑實驗材料與試劑n蠶豆、大蒜、洋蔥的根尖蠶豆、大蒜、洋蔥的根尖n0.1%秋水仙堿秋水仙堿n卡諾固定液:無水乙醇卡諾固定液:無水乙醇3份,冰醋酸份,冰醋酸1份份n0.5%醋酸地衣紅染液醋酸地衣紅
5、染液n1MHCl實驗操作實驗操作n取材與前處理取材與前處理n將大蒜、洋蔥的鱗基置于盛有水的培養(yǎng)皿中,將大蒜、洋蔥的鱗基置于盛有水的培養(yǎng)皿中,20-25恒溫箱中培養(yǎng),當(dāng)根長為恒溫箱中培養(yǎng),當(dāng)根長為1-2cm左左右時取材,放入右時取材,放入0.1%秋水仙堿水溶液中浸秋水仙堿水溶液中浸泡處理泡處理4-5hr,自來水沖洗后固定。,自來水沖洗后固定。n固定:固定:n卡諾氏固定液卡諾氏固定液 固定固定24小時,轉(zhuǎn)小時,轉(zhuǎn)70%酒精中酒精中4冰箱保存冰箱保存固定的目的是用化學(xué)的方法把細胞迅速殺死,使蛋白質(zhì)變性,固定的目的是用化學(xué)的方法把細胞迅速殺死,使蛋白質(zhì)變性,并盡量保持原來的分裂狀態(tài),同時更易于著色。并
6、盡量保持原來的分裂狀態(tài),同時更易于著色。 改變細胞質(zhì)的粘度,抑制或破壞紡錘絲改變細胞質(zhì)的粘度,抑制或破壞紡錘絲的形成,促使染色體縮短和分散等。除的形成,促使染色體縮短和分散等。除了秋水仙素外,對二氯苯和了秋水仙素外,對二氯苯和 8-羥基喹羥基喹啉也是常用的。啉也是常用的。 實驗操作實驗操作n解離解離n酸解:酸解:蒸餾水漂洗蒸餾水漂洗 0.1MHCl 60水浴解離水浴解離10-15min( 1MHCl 8-12min ) 蒸餾水漂洗蒸餾水漂洗n酶解:酶解:2%纖維素酶纖維素酶+0.5%果膠酶果膠酶28 溫箱中解離溫箱中解離4-5hr實驗操作實驗操作n染色:染色:n截取延長區(qū)及分生組織區(qū)(截取延長
7、區(qū)及分生組織區(qū)( 0.5cm ),),0.5%醋醋酸地衣紅染色酸地衣紅染色5minn壓片:壓片:n截取分生組織區(qū)(截取分生組織區(qū)(1-3mm),),n大蒜根尖:蓋上蓋玻片,用鑷子輕輕敲打蓋玻片(用拇指大蒜根尖:蓋上蓋玻片,用鑷子輕輕敲打蓋玻片(用拇指垂直下壓),使材料分散均勻成薄層垂直下壓),使材料分散均勻成薄層n蠶豆根尖:用鑷子將根尖組織夾碎(染液中),去除大的蠶豆根尖:用鑷子將根尖組織夾碎(染液中),去除大的組織塊后蓋上蓋玻片,壓片觀察組織塊后蓋上蓋玻片,壓片觀察n顯微觀察顯微觀察n低倍鏡找到處于分裂期的細胞,高倍鏡下觀察不同低倍鏡找到處于分裂期的細胞,高倍鏡下觀察不同分裂相細胞。分裂相細
8、胞。實驗說明實驗說明n對于種子難以發(fā)芽的植物,可用莖尖做材料對于種子難以發(fā)芽的植物,可用莖尖做材料n前處理的目的是降低細胞質(zhì)粘度,使染色體縮前處理的目的是降低細胞質(zhì)粘度,使染色體縮短分散,防止紡錘體形成,讓更多的細胞處于短分散,防止紡錘體形成,讓更多的細胞處于分裂中期。秋水仙堿、對二氯苯、分裂中期。秋水仙堿、對二氯苯、8-羥基喹啉羥基喹啉n解離的目的是使分生組織細胞間的果膠質(zhì)分解,解離的目的是使分生組織細胞間的果膠質(zhì)分解,細胞壁軟化或部分分解,使細胞和染色體容易細胞壁軟化或部分分解,使細胞和染色體容易分散壓平分散壓平洋蔥根尖的有絲分裂洋蔥根尖的有絲分裂注意事項注意事項n壓片材料要少,避免細胞緊貼在一起壓片材料要少,避免細胞緊貼在一起n用鑷子敲打蓋玻片時,用力要均勻用鑷子敲打蓋玻片時,用力要均勻n40倍物鏡就夠倍物鏡就夠n解離時間和染色時間的摸索解離時間和染色
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