第16章細(xì)胞因子與粘附因子檢測(cè)

1、 第十六章第十六章 細(xì)胞因子與黏附分子檢測(cè)細(xì)胞因子與黏附分子檢測(cè)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院免疫教研室醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院免疫教研室齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫復(fù)復(fù) 習(xí)習(xí)1.1.T T細(xì)胞增殖試驗(yàn)的原理、刺激物？細(xì)胞增殖試驗(yàn)的原理、刺激物？2.T2.T細(xì)胞增殖試驗(yàn)的主要細(xì)胞增殖試驗(yàn)的主要方法？方法？3.T3.T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)主要方法？細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)主要方法？掌握：掌握：細(xì)胞因子、粘附分子概念；細(xì)胞因子、粘附分子概念； 臨床常用的測(cè)定方法臨床常用的測(cè)定方法熟悉：熟悉：細(xì)胞因子的特性與功能；細(xì)胞因子的特性與功能；了解：了解：其他其他齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫第一節(jié)第一節(jié) 概述概述第二節(jié)第二節(jié) 臨床常用的測(cè)定方法臨床常用的測(cè)定方

2、法第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞因子與黏附分子測(cè)定的臨床細(xì)胞因子與黏附分子測(cè)定的臨床應(yīng)用應(yīng)用齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述 細(xì)胞因子細(xì)胞因子(cytokine)(cytokine) 是由免疫細(xì)胞及組織細(xì)胞表達(dá)并分是由免疫細(xì)胞及組織細(xì)胞表達(dá)并分泌，通過結(jié)合細(xì)胞表面的相應(yīng)受體，在泌，通過結(jié)合細(xì)胞表面的相應(yīng)受體，在細(xì)胞間發(fā)揮相互調(diào)控作用的一類小分子細(xì)胞間發(fā)揮相互調(diào)控作用的一類小分子蛋白質(zhì)或多肽。蛋白質(zhì)或多肽。齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫掌握掌握1.細(xì)胞因子的種類 白細(xì)胞介素（IL） 干擾素（IFN） 集落刺激因子（CSF） 腫瘤壞死因子（TNF） 生長(zhǎng)因子（GF） 趨化因子一、細(xì)胞因子及其受體的特性與功能一、

3、細(xì)胞因子及其受體的特性與功能齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫熟悉熟悉自分泌自分泌內(nèi)分泌內(nèi)分泌血液循環(huán)血液循環(huán)遠(yuǎn)距離作用遠(yuǎn)距離作用旁分泌旁分泌作用于比鄰細(xì)胞作用于比鄰細(xì)胞細(xì)胞因子發(fā)揮作用的三種方式細(xì)胞因子發(fā)揮作用的三種方式作用于分泌細(xì)胞自身作用于分泌細(xì)胞自身2.細(xì)胞因子的共同特性與生物學(xué)功能細(xì)胞因子的共同特性與生物學(xué)功能齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫熟悉熟悉高效性、多效性、重疊性、網(wǎng)絡(luò)性、高效性、多效性、重疊性、網(wǎng)絡(luò)性、協(xié)同性、拮抗性協(xié)同性、拮抗性迅速迅速高效性高效性非特異性非特異性 2.細(xì)胞因子的共同特性齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫熟悉熟悉肥大細(xì)胞肥大細(xì)胞胸腺細(xì)胞胸腺細(xì)胞B BIL-4活化、增殖、分化活化、增殖、分化增殖增殖 增

4、殖增殖 多效性多效性齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫IL-2、 IL-4、 IL-5IL-4 + IL-5IL-4IFN- 拮抗性拮抗性重疊性重疊性協(xié)同性協(xié)同性均有刺激均有刺激B B細(xì)胞增細(xì)胞增殖的功能殖的功能更有效地誘導(dǎo)更有效地誘導(dǎo)IgEIgE類別轉(zhuǎn)換類別轉(zhuǎn)換IL-4 IL-4 阻斷阻斷IFN-IFN- 誘導(dǎo)類別轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)類別轉(zhuǎn)化的作用的作用BBB齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫2.2.細(xì)胞因子的生物學(xué)功能細(xì)胞因子的生物學(xué)功能l參與調(diào)控免疫細(xì)胞的發(fā)育、分化和功能l參與調(diào)控免疫應(yīng)答l抗感染l抗腫瘤l誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫了解了解 3、細(xì)胞因子受體的共同特性、細(xì)胞因子受體的共同特性l細(xì)胞因子發(fā)揮作用：細(xì)胞因子發(fā)揮作用

5、： 細(xì)胞因子細(xì)胞因子與與靶細(xì)胞表面特異性受體靶細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合結(jié)合l細(xì)胞因子受體結(jié)構(gòu)：細(xì)胞因子受體結(jié)構(gòu)： 胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)組成胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)組成l細(xì)胞因子家族：細(xì)胞因子家族：型細(xì)胞因子受體家族、型細(xì)胞因子受體家族、 型細(xì)胞因子受體家族、腫瘤型細(xì)胞因子受體家族、腫瘤壞死因子受體超家族、免疫球蛋白受體超家族、趨化壞死因子受體超家族、免疫球蛋白受體超家族、趨化因子受體家族。因子受體家族。齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫了解了解齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫二、 黏附分子的特性與功能黏附分子（AM） 是介導(dǎo)細(xì)胞間或細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間相互結(jié)合的分子。齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫掌握掌握1.黏附分子的特性黏附分子的特

6、性 黏附分子均為跨膜糖蛋白，由胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)三部分組成，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)可分為免疫球蛋白超家族、整合素家族、選擇素家族和鈣黏蛋白家族。齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫了解了解2.黏附分子的主要生物學(xué)功能黏附分子的主要生物學(xué)功能l參與細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與活化、細(xì)胞分化參與細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與活化、細(xì)胞分化及發(fā)育及發(fā)育 l參與免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)、淋巴細(xì)胞歸參與免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)、淋巴細(xì)胞歸巢、傷口愈合與血栓形成、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋巢、傷口愈合與血栓形成、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡等功能亡等功能齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫了解了解B細(xì)胞與Th細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞粘附分子齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫第二節(jié)第二節(jié) 臨床常用的測(cè)定方法臨床常用的測(cè)定方法一、酶聯(lián)

7、免疫吸附試驗(yàn)方法二、化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗(yàn)三、流式細(xì)胞分析法四、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)五、免疫學(xué)測(cè)定方法學(xué)評(píng)價(jià)齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫l 基因水平：基因水平：PCRPCR技術(shù)。技術(shù)。l檢測(cè)水平檢測(cè)水平 生物活性測(cè)定生物活性測(cè)定 l 蛋白水平蛋白水平l 免疫學(xué)測(cè)定免疫學(xué)測(cè)定 第二節(jié)第二節(jié) 臨床常用的測(cè)定方法臨床常用的測(cè)定方法掌握掌握齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫 生物活性測(cè)定：生物活性測(cè)定：測(cè)測(cè)活性活性。靈敏。靈敏 性高性高, ,特異性低特異性低蛋白水平蛋白水平 ELISA ELISA 免疫學(xué)測(cè)定免疫學(xué)測(cè)定 化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗(yàn)化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗(yàn) （ 含量含量） 流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù) 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn) 第二節(jié)

8、第二節(jié) 臨床常用的測(cè)定方法臨床常用的測(cè)定方法掌握掌握齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫一、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)一、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（一）基本方法（一）基本方法1.1.直接法直接法-雙抗體夾心法雙抗體夾心法 （測(cè)（測(cè)CKCK最常用方法）最常用方法）2.2.間接法間接法3.3.抗原競(jìng)爭(zhēng)法抗原競(jìng)爭(zhēng)法齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫熟悉熟悉敏感性偏低不能區(qū)分細(xì)胞因子的生物學(xué)活性（二）方法學(xué)評(píng)價(jià)（二）方法學(xué)評(píng)價(jià)特異、簡(jiǎn)便成本低、易于推廣和標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)可同時(shí)檢測(cè)大量標(biāo)本且試驗(yàn)廢棄物便于處理細(xì)胞因子測(cè)定的首選方法缺點(diǎn)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫了解了解二、化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗(yàn)二、化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗(yàn)l是以發(fā)光劑作為酶免疫測(cè)定的底物，通過發(fā)光反

9、應(yīng)增強(qiáng)測(cè)定的靈敏度。（一）基本方法l雙抗體夾心法（二）方法學(xué)評(píng)價(jià)特異性好、靈敏度高、線性范圍寬、試劑穩(wěn)定、可自動(dòng)化檢測(cè)齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫了解了解三、流式細(xì)胞術(shù)三、流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry, FCM)分離和分離和培養(yǎng)培養(yǎng)待檢細(xì)胞待檢細(xì)胞 細(xì)胞破膜與固定細(xì)胞破膜與固定 封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn) 染色與分析染色與分析 基本方法基本方法了解了解方法學(xué)評(píng)價(jià)方法學(xué)評(píng)價(jià)l優(yōu)點(diǎn)：特異、高效、靈敏.l應(yīng)用: 對(duì)單個(gè)細(xì)胞水平CK或AM檢測(cè)； 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)CK；膜上AM、CK受體同一細(xì)胞內(nèi)兩種以上細(xì)胞因子表達(dá) 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫熟悉熟悉四、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)四、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(ELIS

10、POT)(ELISPOT) 包被有待測(cè)細(xì)胞因子抗體的微孔板 分泌相應(yīng)細(xì)胞因子的待測(cè)細(xì)胞 有或無刺激物培養(yǎng)細(xì)胞因子被板上的特異性抗體捕獲后續(xù)的反應(yīng)如同ELISA 一個(gè)斑點(diǎn)一個(gè)斑點(diǎn)代表一個(gè)細(xì)胞因子代表一個(gè)細(xì)胞因子分泌細(xì)胞分泌細(xì)胞，斑點(diǎn)的顏，斑點(diǎn)的顏色深淺程度與細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子量相關(guān)色深淺程度與細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子量相關(guān) 基本原理+ +了解了解齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫方法學(xué)評(píng)價(jià)方法學(xué)評(píng)價(jià)比常規(guī)比常規(guī)ELISAELISA法的靈敏度提法的靈敏度提高高200200倍倍應(yīng)用應(yīng)用：檢測(cè)分泌特定細(xì)胞因子的：檢測(cè)分泌特定細(xì)胞因子的細(xì)胞細(xì)胞熟悉熟悉五、免疫學(xué)測(cè)定方法學(xué)評(píng)價(jià)五、免疫學(xué)測(cè)定方法學(xué)評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 特異性高 操

11、作簡(jiǎn)便、快速，無需依賴細(xì)胞株 影響因素較少且易控制，重復(fù)性好，方法容易標(biāo)準(zhǔn)化。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 所測(cè)定含量，與其生物活性不一定呈正比 結(jié)果與所用的抗體來源及親和力有很大的關(guān)系 敏感性相對(duì)較低標(biāo)本中可溶性受體，會(huì)影響特異性抗體對(duì)細(xì)胞因子結(jié)合熟悉熟悉第第三節(jié)三節(jié) 細(xì)胞因子與黏附分子細(xì)胞因子與黏附分子測(cè)定的臨床應(yīng)用測(cè)定的臨床應(yīng)用1.1.特定疾病的輔助診斷特定疾病的輔助診斷2.2.機(jī)體免疫狀態(tài)的評(píng)估機(jī)體免疫狀態(tài)的評(píng)估3.3.臨床疾病治療效果的監(jiān)測(cè)和指導(dǎo)用藥臨床疾病治療效果的監(jiān)測(cè)和指導(dǎo)用藥4.4.疾病預(yù)防的應(yīng)用疾病預(yù)防的應(yīng)用熟悉熟悉一、臨床應(yīng)用原則一、臨床應(yīng)用原則 方法選擇和結(jié)果判斷作出綜合考慮: 異質(zhì)性

12、功能交叉性和多樣性 來源的復(fù)雜性 組織細(xì)胞的非特異性細(xì)胞因子和粘附分子細(xì)胞因子和粘附分子 全身免疫或炎癥狀態(tài)血漿、血清炎癥局部細(xì)胞因子的水平局部分泌液細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的特性外周單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞表面細(xì)胞因子受體或黏附分子定位檢測(cè)疾病療效觀察和預(yù)后判斷1.標(biāo)本的適當(dāng)選取敏感性高-特異性低，廢棄物難處理活性測(cè)定-不能精確蛋白定量基因分析-操作繁瑣，有助于疾病分析多種方法綜合分析正確評(píng)價(jià) 2.方法的聯(lián)合應(yīng)用意義： 細(xì)胞因子具有網(wǎng)絡(luò)狀調(diào)節(jié)的特點(diǎn) 級(jí)聯(lián)效應(yīng)或相互抑制作用的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng) 有助于提供有效的疾病診斷和機(jī)體免疫狀態(tài)信息舉例：免疫細(xì)胞分泌：IL-1、 IL-2、IFN-和GM-CSFTh1/Th2細(xì)胞平衡

13、狀態(tài)：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-3.細(xì)胞因子的聯(lián)合檢測(cè)二、特定疾病的輔助診斷（一）細(xì)胞因子與疾病1.細(xì)胞因子風(fēng)暴IL-1IL-1、IL-2IL-2、IL-6IL-6、IFN-IFN-等等 引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征2.變態(tài)反應(yīng)性疾病哮喘IL-4促進(jìn)IgE合成3.自身免疫病類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（TNF-、IL-1、IL-6、IL-8、MCP-1）（一）細(xì)胞因子與疾病4.免疫缺陷病IL-2R基因缺陷（重癥聯(lián)合免疫缺陷?。?；IL-6（漿細(xì)胞瘤、膀胱癌）5.器官移植排斥反應(yīng)TNF-、IL-1、 IL-2、IL-6、IFN-水平升高6.惡性腫瘤檢測(cè)IL-2、IL-6、IFN-水平用于療效的評(píng)估（二）

14、黏附分子與疾病1.1.動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)脈粥樣硬化ICAMICAM、P-P-選擇素選擇素 2.2.腎臟疾病腎臟疾病ICAMICAM3.3.肝臟疾病肝臟疾病- VCAM-1- VCAM-1、ICAM-1ICAM-1、IL-1IL-14.4.自身免疫病自身免疫病-SLE-SLE（E-選擇素、選擇素、ICAM-1） 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（E-E-選擇素）選擇素） 三、評(píng)估機(jī)體的免疫狀態(tài)三、評(píng)估機(jī)體的免疫狀態(tài)機(jī)體免疫應(yīng)答的強(qiáng)弱作為觀察治療效果和判斷預(yù)后的重要指標(biāo)對(duì)保證治療效果具有指導(dǎo)意義四、疾病療效檢測(cè)及指導(dǎo)用藥 根據(jù)患者相關(guān)細(xì)胞因子水平或免疫狀態(tài)的檢測(cè)結(jié)果選擇細(xì)胞因子的種類和劑量。 細(xì)胞因子水平過

15、表達(dá)/可溶性黏附分子增高使用相應(yīng)的細(xì)胞因子拮抗劑或抗體1 1細(xì)胞因子和細(xì)胞粘附分子的概念？細(xì)胞因子可分細(xì)胞因子和細(xì)胞粘附分子的概念？細(xì)胞因子可分為幾類？為幾類？2 2臨床檢測(cè)中常用細(xì)胞因子與細(xì)胞黏附分子的免疫臨床檢測(cè)中常用細(xì)胞因子與細(xì)胞黏附分子的免疫學(xué)檢測(cè)方法有哪些？學(xué)檢測(cè)方法有哪些？3 3細(xì)胞因子及黏附分子檢測(cè)的臨床意義是什么？細(xì)胞因子及黏附分子檢測(cè)的臨床意義是什么？思考題思考題1.1.細(xì)胞外可溶性黏附分子主要測(cè)定法是細(xì)胞外可溶性黏附分子主要測(cè)定法是( )( ) A.ELISA B.A.ELISA B.酶免疫組化法酶免疫組化法C.C.熒光免疫法熒光免疫法 D.D.流式細(xì)胞儀測(cè)定法流式細(xì)胞儀測(cè)

16、定法E.E.時(shí)間分辨熒光免疫法時(shí)間分辨熒光免疫法2.2.下列對(duì)下列對(duì)FCMFCM檢測(cè)細(xì)胞因子的描述中錯(cuò)誤的是檢測(cè)細(xì)胞因子的描述中錯(cuò)誤的是( )( ) A. A.靈敏度高靈敏度高 B.B.可測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子可測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子 C.C.特異性高特異性高 D.D.單細(xì)胞水平分析單細(xì)胞水平分析 E.mRNAE.mRNA表達(dá)水平表達(dá)水平3 3用用ELISAELISA方法測(cè)定細(xì)胞因子，錯(cuò)誤的是方法測(cè)定細(xì)胞因子，錯(cuò)誤的是( )( )A.A.特異性高特異性高 B B. .可測(cè)活性可測(cè)活性 C.C.操作簡(jiǎn)便操作簡(jiǎn)便 D.D.可定量分析可定量分析 E.E.時(shí)間短時(shí)間短4.4.在檢測(cè)可溶性在檢測(cè)可溶性黏附黏附分子中

17、，分子中，ELISAELISA常用常用( )( )A.A.直接法直接法 B.B.間接法間接法 C.C.夾心法夾心法 D. D.競(jìng)爭(zhēng)法競(jìng)爭(zhēng)法 E.E.組化法組化法A AE EB BC C 5. 5.不屬于細(xì)胞因子特點(diǎn)的是不屬于細(xì)胞因子特點(diǎn)的是( )( )A.A.分泌型蛋白質(zhì)分泌型蛋白質(zhì) B.B.自分泌自分泌 C.C.低分子量低分子量 D.D.不受不受MHCMHC限制限制 E.E.半衰期長(zhǎng)半衰期長(zhǎng)6.6.黏附黏附分子作用是分子作用是( )( )A.A.細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)與活化細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)與活化 B.B.細(xì)胞的伸展與轉(zhuǎn)移細(xì)胞的伸展與轉(zhuǎn)移C.C.細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化 D.D.創(chuàng)傷的愈合創(chuàng)傷的愈合

18、E.E.以上都是以上都是7.7.慢性肝炎的急性期和活動(dòng)期水平顯著升高慢性肝炎的急性期和活動(dòng)期水平顯著升高, ,而穩(wěn)而穩(wěn)定期和恢復(fù)期有明顯下降的細(xì)胞因子定期和恢復(fù)期有明顯下降的細(xì)胞因子( )( ) A.TNF A.TNF和和IL-6 B.TNFIL-6 B.TNF和和IL-10 C.TNFIL-10 C.TNF和和EPO EPO D.GM-CSF D.GM-CSF和和EPO E. GM-CSFEPO E. GM-CSF和和IL-6 IL-6 E EE EA A8.8.細(xì)胞因子生物學(xué)測(cè)定法最重要的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞因子生物學(xué)測(cè)定法最重要的優(yōu)點(diǎn)是( )( ) A. A.高特異性高特異性 B. B.操作簡(jiǎn)單操作簡(jiǎn)單 C. C.低靈敏性低靈敏性 D.D.活性測(cè)定活性測(cè)定 E. E.實(shí)驗(yàn)成本低實(shí)驗(yàn)成本低9.9.關(guān)于細(xì)胞因子免疫學(xué)測(cè)定關(guān)于細(xì)胞因子免疫學(xué)測(cè)定, ,錯(cuò)誤者錯(cuò)誤者( )( )