實驗二《檢測生物組織中的糖類、蛋白質、脂肪》(整理)-精

1、一一.實驗原理：實驗原理：.還原性糖的鑒定：還原性糖的鑒定：還原性糖還原性糖+.脂肪的鑒定：脂肪的鑒定： 脂肪脂肪+ 脂肪脂肪+ .蛋白質的鑒定：蛋白質的鑒定：蛋白質蛋白質+ +斐林試劑斐林試劑磚紅色沉淀磚紅色沉淀蘇丹蘇丹橘黃色橘黃色蘇丹蘇丹紅色紅色雙縮脲試劑雙縮脲試劑紫色紫色習題習題基礎題1.（1）；（2）X。選材：含糖量較高的選材：含糖量較高的白色或近于白色的植物組織白色或近于白色的植物組織(排除色素對排除色素對顯色的干擾顯色的干擾)，蘋果、梨最好，蘋果、梨最好 。 l實驗流程實驗流程(步驟步驟)1.可溶性還原糖可溶性還原糖 制備組織樣液：制備組織樣液：制漿：去皮、切塊、研磨，制漿：去皮、

2、切塊、研磨，過濾：（用單層紗布）過濾：（用單層紗布）取液：取液：（mL）顯色反應顯色反應 mL組織樣液剛配制的斐林試劑mL現(xiàn)象：現(xiàn)象： (用前混勻用前混勻)5065.C水浴水浴加熱加熱2min還原糖的檢測和觀察：還原糖的檢測和觀察：還原糖的檢測結果還原糖的檢測結果2.脂肪的鑒定脂肪的鑒定 取材：花生種子（浸泡取材：花生種子（浸泡h），去皮，將子葉削成薄片），去皮，將子葉削成薄片 制片：制片：選取最薄的薄片移至載玻片中央選取最薄的薄片移至載玻片中央在薄片上滴加在薄片上滴加蘇丹蘇丹(或蘇丹或蘇丹) 染液染液2 3滴，滴，染色染色min滴加體積分數(shù)為滴加體積分數(shù)為50%的酒精的酒精溶液溶液12滴，洗

3、滴，洗去浮色去浮色(多余的蘇丹多余的蘇丹 )吸去余液，滴吸去余液，滴1-2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片，制成滴蒸餾水，蓋上蓋玻片，制成臨時裝片臨時裝片顯微觀察：顯微觀察： 先在低倍鏡下找到已著色的薄片，后用高倍鏡觀察先在低倍鏡下找到已著色的薄片，后用高倍鏡觀察現(xiàn)象：現(xiàn)象：有被染成有被染成橘黃色橘黃色(或紅色或紅色)的脂肪微粒的脂肪微粒脂肪微粒脂肪微粒脂肪的檢測結果脂肪的檢測結果3.蛋白質的鑒定蛋白質的鑒定 選材與制備選材與制備組織樣液：組織樣液：黃豆組織樣液（或雞蛋蛋清稀釋液）黃豆組織樣液（或雞蛋蛋清稀釋液）黃豆浸泡黃豆浸泡 去皮去皮切片切片研磨研磨過濾過濾濾液濾液 顯色反應顯色反應mL組織樣液雙縮脲

4、試劑mL現(xiàn)象：現(xiàn)象：無色無色紫色或紫紅色紫色或紫紅色(創(chuàng)設堿性條件創(chuàng)設堿性條件)(提供提供Cu2+)蛋白質的檢測結果蛋白質的檢測結果蛋白質的鑒定蛋白質的鑒定-雙縮脲試劑雙縮脲試劑雞蛋清溶液雞蛋清溶液 NaOH 溶液溶液滴加滴加CuSO2 溶液溶液, 每次滴加均需搖勻每次滴加均需搖勻結果顯示結果顯示: 紫色紫色(3)蛋白質的檢測和觀察蛋白質的檢測和觀察選材與制備：鮮肝提取液或黃豆?jié){濾液選材與制備：鮮肝提取液或黃豆?jié){濾液結論：組織樣液中存在蛋白質結論：組織樣液中存在蛋白質 在蛋白質的鑒定實驗中，如果用蛋清稀釋液作為實在蛋白質的鑒定實驗中，如果用蛋清稀釋液作為實驗材料，一定要稀釋到一定程度，否則，與

5、雙縮脲試劑驗材料，一定要稀釋到一定程度，否則，與雙縮脲試劑 發(fā)生反應后會粘在試管的內壁上，使反應不徹底，試發(fā)生反應后會粘在試管的內壁上，使反應不徹底，試 管也不易洗刷干凈管也不易洗刷干凈.1.你的預測與實驗結果是否一致？2.小組間交流實驗結果。你有什么發(fā)現(xiàn)？3.全班共檢測了多少種生物材料？這些生物 材料中有機化合物的種類、含量一樣嗎？ 這對我們選擇食物有什么啟發(fā)？討論討論4.淀粉的鑒定淀粉的鑒定取材：馬鈴薯勻漿取材：馬鈴薯勻漿檢測：檢測：mL組織樣液碘液碘液2滴滴現(xiàn)象：現(xiàn)象： 搖勻后變成藍色搖勻后變成藍色問題探討問題探討:1、在做還原糖、蛋白質鑒定的實驗時，為什么要留出、在做還原糖、蛋白質鑒定

6、的實驗時，為什么要留出一部分樣液？一部分樣液？作對照作對照2、使用雙縮脲試劑時為什么、使用雙縮脲試劑時為什么B液只能加液只能加34滴而不能滴而不能過量？過量？ 過量的雙縮脲試劑過量的雙縮脲試劑B B會與試劑會與試劑A A反應，使溶液呈藍色，反應，使溶液呈藍色，而掩蓋生成的紫色。而掩蓋生成的紫色。3、為什么斐林試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，不能放置太久？為什么斐林試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，不能放置太久？ 時間太長，時間太長，Cu(OH)Cu(OH)2 2懸濁液就沉淀在試管底部而懸濁液就沉淀在試管底部而無法參與反應。無法參與反應。l深化深化比較項比較項目目試劑及成試劑及成分分原理原理溶液濃度溶液濃度方法方法加熱加熱與否與

7、否結結果果可溶還可溶還原糖的原糖的鑒定鑒定斐林試劑斐林試劑NaOHNaOH和和CuSOCuSO4 4磚磚紅紅色色沉沉淀淀蛋白質蛋白質的鑒定的鑒定雙縮脲試雙縮脲試劑劑NaOHNaOH和和CuSOCuSO4 4溶溶液液呈呈紫紫色色4、(1)斐林試劑與雙縮脲試劑兩者有何不同？斐林試劑與雙縮脲試劑兩者有何不同？新配制新配制的的Cu(OH)2溶液溶液在堿性在堿性環(huán)境下環(huán)境下的的Cu2+NaOH濃度為濃度為0.1g/mLCuS04濃度為濃度為0.05g/mLNaOH濃度為濃度為0.1g/mLCuS04濃度為濃度為0.01g/mL先把先把NaOH溶液和溶液和CuSO4溶液溶液混合混合，而后而后立即使用立即使

8、用。先先加入加入Na0H1mL，然，然后后再加再加CuS044滴，搖勻。滴，搖勻。(不能過量不能過量)水浴水浴加熱加熱不不需需要要(2)斐林試劑與雙縮脲試劑的比較斐林試劑與雙縮脲試劑的比較斐林試劑斐林試劑雙縮脲試劑雙縮脲試劑鑒定鑒定成分成分還原糖還原糖蛋白質蛋白質鑒定鑒定原理原理還原糖中的醛基還原糖中的醛基(CHO)在加熱條件下在加熱條件下能將能將Cu(OH)2中的中的Cu2還原成還原成Cu，從，從而生成磚紅色的而生成磚紅色的Cu2O沉淀沉淀雙縮脲雙縮脲(H2NOCNHCONH2)在堿性溶液中能與在堿性溶液中能與Cu2結合生成紫色絡合物，結合生成紫色絡合物，蛋白質分子中含有與雙縮蛋白質分子中含

9、有與雙縮脲結構相似的肽鍵脲結構相似的肽鍵5、實驗的材料的選擇和處理有什么要求？、實驗的材料的選擇和處理有什么要求？材料的選擇材料的選擇材料的處理材料的處理還原性糖的鑒定還原性糖的鑒定脂肪的鑒定脂肪的鑒定含糖高，顏色為含糖高，顏色為白色的植物組織，白色的植物組織，如蘋果和梨如蘋果和梨富含脂肪的種子富含脂肪的種子，如花生，如花生浸泡浸泡34小時小時/蛋白質的鑒定蛋白質的鑒定富含蛋白質的富含蛋白質的黃豆或雞蛋清黃豆或雞蛋清黃豆需浸泡黃豆需浸泡1-2天，天，雞蛋清要先稀釋雞蛋清要先稀釋淀粉的鑒定淀粉的鑒定馬鈴薯馬鈴薯/ 各種可供實驗的材料各種可供實驗的材料梨梨 黃桃黃桃 胡蘿卜胡蘿卜 黃豆黃豆 花生種

10、子花生種子 小麥種子小麥種子 其中適合于鑒定其中適合于鑒定可溶性還原糖可溶性還原糖的是的是 ，理由是，理由是梨的組織細胞梨的組織細胞 ，你打算用什么試劑鑒定你打算用什么試劑鑒定? 。 小麥種子不如花生種子更適合用來鑒定脂肪，這是小麥種子不如花生種子更適合用來鑒定脂肪，這是因為因為 ，你打，你打算用什么試劑鑒定算用什么試劑鑒定? . 例例 做生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋做生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質的鑒定實驗時，需要根據實驗需要選擇不同的白質的鑒定實驗時，需要根據實驗需要選擇不同的實驗材料。請根據下表所列各種材料回答問題：實驗材料。請根據下表所列各種材料回答問題：梨梨 顏色為白色，并

11、且糖含量較高顏色為白色，并且糖含量較高 斐林試劑斐林試劑脂肪含量不如花生高，也不容易做切片脂肪含量不如花生高，也不容易做切片 用蘇丹用蘇丹或蘇丹或蘇丹試劑試劑小麥種子中糖類化合物小麥種子中糖類化合物 含量很高，卻不適合用含量很高，卻不適合用來鑒定來鑒定 _，這是因為，這是因為 _。 適合于鑒定蛋白質的是適合于鑒定蛋白質的是 ，理由是，理由是 ，鑒定所用的試劑是，鑒定所用的試劑是 。 蛋白質含量高蛋白質含量高 黃豆和花生黃豆和花生 雙縮脲試劑雙縮脲試劑淀粉淀粉 可溶性還原糖可溶性還原糖 淀粉是非還原糖且不溶于水淀粉是非還原糖且不溶于水 1、青蘋果汁遇碘液顯藍色，熟蘋果汁能與斐林試劑青蘋果汁遇碘液

12、顯藍色，熟蘋果汁能與斐林試劑作用產生磚紅色沉淀，下列結論中最合理的是作用產生磚紅色沉淀，下列結論中最合理的是 ( ) A青蘋果汁中有淀粉，不含還原糖青蘋果汁中有淀粉，不含還原糖 B熟蘋果汁中含還原糖，沒有淀粉熟蘋果汁中含還原糖，沒有淀粉 C蘋果轉熟時，大量淀粉水解成還原糖蘋果轉熟時，大量淀粉水解成還原糖 D蘋果轉熟時單糖聚合成淀粉蘋果轉熟時單糖聚合成淀粉 Cl例題例題、安徽阜陽劣質奶粉事件震驚全國，引起、安徽阜陽劣質奶粉事件震驚全國，引起世人注目。鑒定脫脂淡奶粉是否為偽劣產品，世人注目。鑒定脫脂淡奶粉是否為偽劣產品，肯定不需要用到的化學試劑是肯定不需要用到的化學試劑是( ) A.斐林試劑斐林試

13、劑 B. 紅墨水紅墨水C.雙縮脲試劑雙縮脲試劑 D.蘇丹蘇丹染液染液 Bl例題例題3(2005.廣東廣東)生物組織中還原糖、脂肪和蛋白質三種有機生物組織中還原糖、脂肪和蛋白質三種有機物的鑒定實驗中，以下操作錯誤的是物的鑒定實驗中，以下操作錯誤的是( )A、可溶性還原糖的鑒定，可用酒精燈直接加熱產生磚紅、可溶性還原糖的鑒定，可用酒精燈直接加熱產生磚紅色沉淀色沉淀B、只有脂肪的鑒定需要使用顯微鏡、只有脂肪的鑒定需要使用顯微鏡C、用雙縮脲試劑檢測蛋白質不需要加熱、用雙縮脲試劑檢測蛋白質不需要加熱D、使用斐林試劑和雙縮脲試劑最好是現(xiàn)配現(xiàn)用、使用斐林試劑和雙縮脲試劑最好是現(xiàn)配現(xiàn)用A 練習練習1.(200

14、8廣東理基廣東理基)雙縮脲試劑可以鑒定蛋白質，是由于雙縮脲試劑可以鑒定蛋白質，是由于蛋白質有蛋白質有()A.肽鍵肽鍵B.氨基酸氨基酸C.羧基羧基D.氨基氨基解析：解析：在堿性溶液中，雙縮脲在堿性溶液中，雙縮脲(H2NOCNHCONH2)能與能與Cu2作用，形成紫色的絡合物。由于蛋白質分子中含有作用，形成紫色的絡合物。由于蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵，因此，蛋白質可與雙縮很多與雙縮脲結構相似的肽鍵，因此，蛋白質可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應，從而用來鑒定蛋白質的存在。脲試劑發(fā)生顏色反應，從而用來鑒定蛋白質的存在。答案：答案：A2.(2007廣東理基廣東理基)下列健康人的下列健康人的4種

15、液體樣本中，能與雙種液體樣本中，能與雙縮脲試劑發(fā)生紫色顏色反應的是縮脲試劑發(fā)生紫色顏色反應的是()尿液尿液胃液胃液汗液汗液唾液唾液A.B.C.D. 解析：解析：雙縮脲試劑是用于鑒定蛋白質的試劑，可與蛋雙縮脲試劑是用于鑒定蛋白質的試劑，可與蛋白質發(fā)生紫色反應。胃液中含有胃蛋白酶，唾液中含白質發(fā)生紫色反應。胃液中含有胃蛋白酶，唾液中含有唾液淀粉酶，它們都屬于蛋白質。有唾液淀粉酶，它們都屬于蛋白質。答案：答案：D3.(2007江蘇高考江蘇高考)若以雞蛋蛋白液為材料進行蛋白質鑒若以雞蛋蛋白液為材料進行蛋白質鑒定實驗，發(fā)現(xiàn)蛋白液與雙縮脲試劑發(fā)生反應后會粘固定實驗，發(fā)現(xiàn)蛋白液與雙縮脲試劑發(fā)生反應后會粘固在試管壁上。下列關于這一現(xiàn)象形成原因的描述中正在試管壁上。下列關于這一現(xiàn)象形成原因的描述中正確的是確的是()A.雞蛋蛋白液稀釋不夠，攪拌不勻雞蛋蛋白液稀釋不夠，攪拌不勻B.只添加了雙縮脲試劑只添加了雙縮脲試劑A，未添加雙縮脲試劑，未添加雙縮脲試劑BC.雞蛋蛋白液不是合適的實驗材料雞蛋蛋白液不是合適的實驗材料D.蛋白液與雙縮脲試劑的反應時間不夠長蛋白液與雙縮脲試劑的反應時間不夠長解析：解析：如果蛋白液稀釋不夠，與雙縮脲試劑發(fā)生反應后如果蛋白液稀釋不夠，與雙縮脲試劑發(fā)生反應后會粘固在試管的內壁上，使反應不容易進行徹底，并且會粘固在試管的內