Exp12-13DNA指紋的遺傳分析

1、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)12-13DNA指紋的遺傳分析指紋的遺傳分析一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?了解了解DNA指紋分析的基本原理指紋分析的基本原理 熟悉指紋分析在遺傳學(xué)上的應(yīng)用熟悉指紋分析在遺傳學(xué)上的應(yīng)用 二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理1. DNA指紋圖譜的基本特點(diǎn)指紋圖譜的基本特點(diǎn) 多位點(diǎn)性多位點(diǎn)性 核心序列核心序列: :2-300bp重復(fù)次數(shù)重復(fù)次數(shù): :可變的可變的高變異性高變異性 穩(wěn)定的遺傳性穩(wěn)定的遺傳性 2. DNA指紋分析的原理指紋分析的原理 1# CS: VNTR D1S80核心序列核心序列: 16bp拷貝數(shù)拷貝數(shù): 14-41 等位基因等位基因: 29種種父母遺傳性父母遺傳性長(zhǎng)度多態(tài)性長(zhǎng)度多態(tài)性 材料

2、材料: :口腔上皮細(xì)胞口腔上皮細(xì)胞; ;VNTR D1S80 試劑試劑: 5%Chelex樹(shù)脂樹(shù)脂,瓊脂糖瓊脂糖,TAE,50bp Marker, 上樣上樣buffer,Gelstain,PCR Kit, 蛋白酶蛋白酶K 引物引物1: : 5-GAAACTGGCCTCCAAACACTGCCCGCCG-3引物引物2: : 5-GTCTTGTTGGAGATGCACGTGCCCCTTGC-3 器械器械: :滅菌鍋滅菌鍋, ,離心機(jī)離心機(jī), ,電泳裝置電泳裝置, ,凝膠成像儀凝膠成像儀, ,PCR儀儀, , 加樣槍加樣槍, ,槍頭槍頭, ,1.5ml EP管管,200 l擴(kuò)增管擴(kuò)增管,棉簽棉簽(滅菌滅

3、菌)三、實(shí)驗(yàn)材料、用具三、實(shí)驗(yàn)材料、用具 收集收集DNA樣品樣品 PCR擴(kuò)增擴(kuò)增D1S80等位基因等位基因 擴(kuò)增產(chǎn)物的鑒定與分析擴(kuò)增產(chǎn)物的鑒定與分析四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 收集收集DNA樣本樣本 漱口漱口,以滅菌棉簽充分擦刮口腔內(nèi)壁以滅菌棉簽充分擦刮口腔內(nèi)壁,剪下棉簽頭放入剪下棉簽頭放入1ml DW的的EP管管 振蕩振蕩10s, 10K離心離心1 勿攪動(dòng)沉淀勿攪動(dòng)沉淀,吸出上清吸出上清900 l 加加200 l 5%樹(shù)脂樹(shù)脂,振蕩振蕩10s,混勻混勻 加加2 l PK,混勻混勻,56保溫保溫5 劇烈振蕩劇烈振蕩10s,沸水浴沸水浴8 10K離心離心3,吸取吸取8 l上清用作模板上清用作模

4、板2. PCR擴(kuò)增擴(kuò)增D1S80等位基因等位基因 PCR反應(yīng)體系反應(yīng)體系(20 l )PCR pre-mix 10 l引物引物F (10 mol/L) 1 l引物引物R (10 mol/L) 1 l口腔細(xì)胞口腔細(xì)胞DNA樣本樣本 8 l 離心離心10s反應(yīng)程序反應(yīng)程序94預(yù)變性預(yù)變性1min94變性變性15s66退火退火15s72延伸延伸15s 30個(gè)循環(huán)個(gè)循環(huán)72延伸延伸10min3. 擴(kuò)增產(chǎn)物的鑒定與分析擴(kuò)增產(chǎn)物的鑒定與分析 2% agarose gel瓊脂糖瓊脂糖60ml 1 TAE煮沸煮沸3次次,冷卻冷卻55, 2 l Gelstain2 l上樣上樣buffer +10 l PCR產(chǎn)物產(chǎn)物10 l 100bp Ladder60V電泳電泳35min 凝膠成像觀察凝膠成像觀察結(jié)果與分析結(jié)果與分析 D1S80座位的雜合率約座位的雜合率約86% 純合體純合體1條帶條帶, ,雜合體雜合體2條條 重復(fù)數(shù)重復(fù)數(shù)= =1+(PCR產(chǎn)物大小產(chǎn)物大小 161)/16結(jié)果記錄表結(jié)果記錄表五、思考題五、思考題 1.用用PCR、RFLP、RAPD方法產(chǎn)生方法產(chǎn)生DNA指紋圖指紋圖譜各有哪些利弊？譜各有哪些利弊？2.如果一個(gè)個(gè)體的兩個(gè)如果一個(gè)個(gè)