江蘇省徐州市王杰中學(xué)高中生物微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)新人教選修學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1江蘇省徐州市王杰中學(xué)高中生物微生物的實(shí)江蘇省徐州市王杰中學(xué)高中生物微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)驗(yàn)室培養(yǎng)(piyng)新人教選修新人教選修第一頁(yè)，共63頁(yè)。微生物包括微生物包括(boku)(boku)哪五類：哪五類：特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單, ,個(gè)體多數(shù)十分微小個(gè)體多數(shù)十分微小. .通常要通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒(méi)用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)有細(xì)胞結(jié)構(gòu). .且體內(nèi)一般且體內(nèi)一般(ybn)(ybn)不含有葉綠素不含有葉綠素. .不能不能進(jìn)行光合作用進(jìn)行光合作用. . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界第

2、1頁(yè)/共63頁(yè)第二頁(yè)，共63頁(yè)。圖圖1-1 常見(jiàn)的三種細(xì)菌典型形態(tài)常見(jiàn)的三種細(xì)菌典型形態(tài)(xngti)A.球菌球菌 B.桿菌桿菌 C.弧菌弧菌第2頁(yè)/共63頁(yè)第三頁(yè)，共63頁(yè)。第3頁(yè)/共63頁(yè)第四頁(yè)，共63頁(yè)。傷傷寒寒桿桿菌菌細(xì)細(xì)胞胞壁壁中中含含毒毒素素第4頁(yè)/共63頁(yè)第五頁(yè)，共63頁(yè)。 有些有些(yuxi)(yuxi)細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有

3、的細(xì)菌的芽孢，煮沸3 3小小時(shí)以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如時(shí)以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌. .第5頁(yè)/共63頁(yè)第六頁(yè)，共63頁(yè)。第6頁(yè)/共63頁(yè)第七頁(yè)，共63頁(yè)。菌落(jnlu)細(xì)菌的菌落細(xì)菌的菌落(jnlu)(jnlu)特征因特征因種而異種而異 第7頁(yè)/共63頁(yè)第八頁(yè)，共63頁(yè)。1 1、結(jié)構(gòu)：、結(jié)構(gòu)：?jiǎn)渭?xì)胞原核單細(xì)胞原核(yun h)(yun h)分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）第8頁(yè)/共63頁(yè)第九頁(yè)，

4、共63頁(yè)。鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素氯霉素、紅霉素、慶大霉素 微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中(qzhng)2/3(qzhng)2/3是是由放線菌產(chǎn)生的由放線菌產(chǎn)生的 應(yīng)用應(yīng)用(yngyng(yngyng): ):第9頁(yè)/共63頁(yè)第十頁(yè)，共63頁(yè)。病毒病毒(bngd)的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)第10頁(yè)/共63頁(yè)第十一頁(yè)，共63頁(yè)。病毒病毒(bngd) 第11頁(yè)/共63頁(yè)第十二頁(yè)，共63頁(yè)。SARS病毒病毒(bngd)、 禽流感禽流感病毒病毒(bngd)第12頁(yè)/共63頁(yè)第十三頁(yè)，共63頁(yè)。第13頁(yè)/共63頁(yè)第十四頁(yè)，共63頁(yè)。2、

5、病毒、病毒(bngd)的增殖：的增殖：第14頁(yè)/共63頁(yè)第十五頁(yè)，共63頁(yè)。真菌真菌(zhnjn)第15頁(yè)/共63頁(yè)第十六頁(yè)，共63頁(yè)。如圖是酵母菌電子顯微鏡如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)下的形態(tài)(xngti)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌(mjn)青霉青霉第16頁(yè)/共63頁(yè)第十七頁(yè)，共63頁(yè)。生殖生殖(shngzh)直立直立(zh l)菌絲菌絲 營(yíng)營(yíng)養(yǎng)菌絲養(yǎng)菌絲腐生腐生(fshng)生活生活孢子生殖孢子生殖第17頁(yè)/共63頁(yè)第十八頁(yè)，共63頁(yè)。第18頁(yè)/共63頁(yè)第十九頁(yè)，共63頁(yè)。第19頁(yè)/共63頁(yè)第二十頁(yè)，共63頁(yè)。 了解了解(lioji)有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)

6、行無(wú)菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。行無(wú)菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。 一、課題一、課題(kt)目標(biāo)：目標(biāo)： 掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線板劃線(hu xin)法等基本操作技術(shù)，熟練法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，成功地培養(yǎng)微生、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。物。無(wú)菌技術(shù)的操作。無(wú)菌技術(shù)的操作。二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：三、技能目標(biāo)：三、技能目標(biāo)：第20頁(yè)/共63頁(yè)第二十一頁(yè)，共63頁(yè)。一、基礎(chǔ)知識(shí)：一、基礎(chǔ)知識(shí)：（一）培養(yǎng)基（一）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，

7、專供微生物生長(zhǎng)成的，專供微生物生長(zhǎng)(shngzhng)繁殖使用繁殖使用的混合營(yíng)養(yǎng)液。的混合營(yíng)養(yǎng)液。（1 1）按物理狀態(tài)來(lái)分：培養(yǎng)基可分為固體培養(yǎng)）按物理狀態(tài)來(lái)分：培養(yǎng)基可分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離基和液體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。、鑒定菌落等。（2 2）按功能來(lái)分，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別）按功能來(lái)分，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別(jinbi)(jinbi)培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。（3 3）按成分來(lái)分，可分為天然培養(yǎng)基和合成培）按成分來(lái)分，可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。養(yǎng)基。1.1.培養(yǎng)基的類型培養(yǎng)基的類型(lixng)(lixng)和用途和用途第21頁(yè)/共6

8、3頁(yè)第二十二頁(yè)，共63頁(yè)。 2. 2.不同的微生物往往需要采用不同不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方的培養(yǎng)基配方 ( (參考教材附錄參考教材附錄(fl)(fl)內(nèi)容內(nèi)容) ) 3. 3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、和氮源、 無(wú)機(jī)鹽、等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要無(wú)機(jī)鹽、等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pHpH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì), ,例如例如: :生生長(zhǎng)因子長(zhǎng)因子( (即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物合物, ,如維生素、某些如維生素、某些(mu xi)(mu xi)氨基酸、嘌呤

9、氨基酸、嘌呤、嘧啶、嘧啶) )以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。 第22頁(yè)/共63頁(yè)第二十三頁(yè)，共63頁(yè)。加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: : 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞加入氨基分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)

10、胞加入氨基(nj)(nj)喋喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基: : 分離雜交瘤細(xì)胞分離雜交瘤細(xì)胞第23頁(yè)/共63頁(yè)第二十四頁(yè)，共63頁(yè)。 根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類(zhngli)和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。 優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對(duì)固定;成本低 缺點(diǎn)： 缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長(zhǎng)需要。 合成合成(hchng)(hchng)培養(yǎng)基培養(yǎng)基: :第24頁(yè)/共63頁(yè)第二十五頁(yè)，共63頁(yè)。 天然培養(yǎng)天然培養(yǎng)(piyng)(piyng)基有血清、血基有血清、血漿、和組織

11、提取液（如雞胚和牛胚浸漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。液）。優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)(piyng)(piyng)效果好效果好缺點(diǎn)：來(lái)源受限缺點(diǎn)：來(lái)源受限; ;成分復(fù)雜，影響對(duì)某成分復(fù)雜，影響對(duì)某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析; ;易發(fā)生支原體污染易發(fā)生支原體污染; ;天然天然(tinrn)(tinrn)培養(yǎng)基培養(yǎng)基：第25頁(yè)/共63頁(yè)第二十六頁(yè)，共63頁(yè)。血清中含有：血清中含有：多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）、鐵蛋白等）多種金屬離子；多種金屬離子； 激素激素(j s)(j s)；促貼附物質(zhì)，如纖粘

12、蛋白、冷促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。析球蛋白、膠原等。各種生長(zhǎng)因子各種生長(zhǎng)因子轉(zhuǎn)移蛋白轉(zhuǎn)移蛋白不明成分不明成分 人工合成培養(yǎng)基只能人工合成培養(yǎng)基只能(zh nn)維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。長(zhǎng)和繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。第26頁(yè)/共63頁(yè)第二十七頁(yè)，共63頁(yè)。液體液體(yt)(yt)培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：表面表面(biomin)生長(zhǎng)生長(zhǎng)均勻均勻(jnyn)混混濁生長(zhǎng)濁生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)第27頁(yè)/共63頁(yè)第二十八頁(yè)，共63頁(yè)。固體固體(gt)培養(yǎng)基：菌落，菌苔培養(yǎng)基：菌落，菌苔第28頁(yè)/共63頁(yè)

13、第二十九頁(yè)，共63頁(yè)。半固體半固體(gt)培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：無(wú)動(dòng)力無(wú)動(dòng)力(dngl) (dngl) 有動(dòng)力有動(dòng)力(dngl)(dngl)(彌散彌散) )( (是否是否(sh fu)(sh fu)運(yùn)動(dòng)運(yùn)動(dòng)) ) 第29頁(yè)/共63頁(yè)第三十頁(yè)，共63頁(yè)。4.4.培養(yǎng)基的用途培養(yǎng)基的用途(yngt)(yngt)液體培養(yǎng)基：增菌液體培養(yǎng)基：增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌半固體培養(yǎng)基：動(dòng)力半固體培養(yǎng)基：動(dòng)力(dngl)檢測(cè)，保檢測(cè)，保種種第30頁(yè)/共63頁(yè)第三十一頁(yè)，共63頁(yè)。1.1.無(wú)菌技術(shù)無(wú)菌技術(shù)(jsh)(jsh)的概念的概念 無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)

14、微生物的操作中，所有防止雜菌污染防止雜菌污染(wrn)(wrn)的方法。無(wú)論是隨后將要的方法。無(wú)論是隨后將要學(xué)到的倒平板、平板劃線操作，還是平板稀釋涂學(xué)到的倒平板、平板劃線操作，還是平板稀釋涂布法，其操作中的每一步都需要做到布法，其操作中的每一步都需要做到“無(wú)菌無(wú)菌”，即防止雜菌污染即防止雜菌污染(wrn)(wrn)。只有熟練、規(guī)范地進(jìn)。只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。行無(wú)菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。 第31頁(yè)/共63頁(yè)第三十二頁(yè)，共63頁(yè)。（）消毒定義：（）消毒定義：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過(guò)程微生物的過(guò)程(guc

15、hng)(guchng)。區(qū)分為高程度消。區(qū)分為高程度消毒（毒（High-level DisinfectionHigh-level Disinfection）、中程度消）、中程度消毒（毒（Intermediate-level DisinfectionIntermediate-level Disinfection）、）、低程度消毒（低程度消毒（Low-level DisinfectionLow-level Disinfection）三種）三種方式。方式。2.2.消毒與滅菌消毒與滅菌(mi jn)(mi jn)的概念及兩者的區(qū)別的概念及兩者的區(qū)別 第32頁(yè)/共63頁(yè)第三十三頁(yè)，共63頁(yè)。（2 2）

16、滅菌）滅菌(mi jn)(mi jn)的定義：的定義：以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生物，以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無(wú)菌之過(guò)程。，而達(dá)到完全無(wú)菌之過(guò)程。 滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)(yugun)工作中最普通也是最重要的技術(shù)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。第33頁(yè)/共63頁(yè)第三十四頁(yè)，共63頁(yè)。1 1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下

17、煮15min15min3 3、化學(xué)藥劑、化學(xué)藥劑(yoj)(yoj)消毒法消毒法: :用用75%75%酒精酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒; ;氯氣消毒水氯氣消毒水源源4 4、紫外線消毒、紫外線消毒(1)消毒消毒(xio d)的方法：的方法：3.3.常用的消毒與滅菌常用的消毒與滅菌(mi jn)(mi jn)的的方法方法第34頁(yè)/共63頁(yè)第三十五頁(yè)，共63頁(yè)。1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌2 2、干熱滅菌：、干熱滅菌：160-170 160-170 下加下加熱熱(ji r)1-2h(ji r)1-2h。3 3、高壓蒸氣滅菌、高壓蒸氣滅菌：100kPa100kPa、121 121

18、 下維持下維持15-15-30min.30min.(2)滅菌滅菌(mi jn)的方法：的方法：第35頁(yè)/共63頁(yè)第三十六頁(yè)，共63頁(yè)。 最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時(shí)可以基本保生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時(shí)可以基本保持持(boch)(boch)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。 有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防止雜菌，有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃

19、燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過(guò)，而空氣中的其他微生物不能通膠帽，它們只可讓空氣通過(guò)，而空氣中的其他微生物不能通過(guò)。過(guò)。 而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計(jì)的。止空氣中微生物的污染而設(shè)計(jì)的。 第36頁(yè)/共63頁(yè)第三十七頁(yè)，共63頁(yè)。分類分類定義定義方法方法滅菌法滅菌法殺滅一切微生物殺滅一切微生物物理法：熱力、輻射、微物理法：熱力、輻射、微波、等離子體波、等離子體化學(xué)法：醛類、烷化劑化學(xué)法：醛類、

20、烷化劑高效消高效消毒法毒法殺滅一切致病微殺滅一切致病微生物生物紫外線、含氯劑、臭氧、紫外線、含氯劑、臭氧、復(fù)配劑等復(fù)配劑等中效消中效消毒法毒法殺滅除芽孢外的殺滅除芽孢外的致病微生物致病微生物超聲波、碘類、醇類、酚超聲波、碘類、醇類、酚類類低效消低效消毒法毒法殺滅細(xì)菌繁殖體、殺滅細(xì)菌繁殖體、親脂病毒親脂病毒單鏈季胺鹽、雙胍類、中單鏈季胺鹽、雙胍類、中草藥、金屬離子草藥、金屬離子第37頁(yè)/共63頁(yè)第三十八頁(yè)，共63頁(yè)。1 1、器具的滅菌、器具的滅菌2 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制3 3、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接種、微生物接種(jizhng)(jizhng)

21、6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng)7 7、菌種的保存、菌種的保存第38頁(yè)/共63頁(yè)第三十九頁(yè)，共63頁(yè)。1.1.無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)他外來(lái)(wili)(wili)微生物污染外，還有什么目的？微生物污染外，還有什么目的？2.2.請(qǐng)你判斷請(qǐng)你判斷(pndun)(pndun)以下材料或用具是否需以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實(shí)驗(yàn)操作者的

22、雙手實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 答：無(wú)菌技術(shù)還能有效答：無(wú)菌技術(shù)還能有效(yuxio)避免操避免操作者自身被微生物感染。作者自身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒）需要消毒。第39頁(yè)/共63頁(yè)第四十頁(yè)，共63頁(yè)。三、實(shí)驗(yàn)三、實(shí)驗(yàn)(shyn)操作操作 1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)(piyng)基（用于基（用于培養(yǎng)培養(yǎng)(piyng)細(xì)菌）細(xì)菌）第40頁(yè)/共63頁(yè)第四十一頁(yè)，共63頁(yè)。1 1計(jì)算、稱量計(jì)算、稱量2 2溶化溶化3 3調(diào)調(diào)pHpH：pH7pH76 64 4過(guò)濾：這一步可以省去。過(guò)濾：這一步可以省去。5 5分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)

23、基分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角起污染。分裝三角(snjio)(snjio)燒瓶的量以燒瓶的量以不超過(guò)三角不超過(guò)三角(snjio)(snjio)燒瓶容積的一半為燒瓶容積的一半為宜。宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步驟操作步驟第41頁(yè)/共63頁(yè)第四十二頁(yè)，共63頁(yè)。 8 8滅菌滅菌: : 將將50ml50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為菌鍋，在壓力為100kPa100kPa、溫度為、

24、溫度為121121，滅菌，滅菌151530min30min。將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放入干。將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在熱滅菌箱內(nèi)，在160160170 170 下滅菌下滅菌2h2h。 9 9倒平板倒平板: : 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到50 50 左右時(shí)，在酒精燈附左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見(jiàn)課本近倒平板。（倒平板操作見(jiàn)課本(kbn)(kbn)）2d2d后后觀察平板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種觀察平板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種. . 10 10無(wú)菌檢查：無(wú)菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入3737的溫室中培養(yǎng)的溫室中培養(yǎng)24482448小時(shí)，以檢查滅菌是否徹

25、底。小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。第42頁(yè)/共63頁(yè)第四十三頁(yè)，共63頁(yè)。第43頁(yè)/共63頁(yè)第四十四頁(yè)，共63頁(yè)。1.1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右時(shí)，左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板才能用來(lái)倒平板(pngbn)(pngbn)。你用什么辦法來(lái)估。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行就可以進(jìn)行(jnxng)倒平板了。倒平板了。2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？ 答：通

26、過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。污染培養(yǎng)基。第44頁(yè)/共63頁(yè)第四十五頁(yè)，共63頁(yè)。3.3.平板平板(pngbn)(pngbn)冷凝后，為什么要將平板冷凝后，為什么要將平板(pngbn)(pngbn)倒置？倒置？4.4.在倒平板在倒平板(pngbn)(pngbn)的過(guò)程中，如果不小心將的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板(pngbn)(pngbn)還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的

27、培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置(dozh)(dozh)，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。生物。第45頁(yè)/共63頁(yè)第四十六頁(yè)，共63頁(yè)。2 2、純化、純化(chn hu)(chn hu)大腸桿菌大腸桿菌接種方法有：接種方法有：平板劃線平板劃線(hu xi

28、n)(hu xin)法和稀釋涂布平板法法和稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃線法:通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作的操作(cozu),將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. 在數(shù)次畫線后在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體的子細(xì)胞群體,這就是菌落這就是菌落.第46頁(yè)/共63頁(yè)第四十七頁(yè)，共63頁(yè)。第47頁(yè)/共63頁(yè)第四十八頁(yè)，共63頁(yè)。第48頁(yè)/共63頁(yè)第四十九頁(yè)，共63頁(yè)。 1. 1.為什么在操作的第一步以及每次劃線為什么在操作的第一步以及

29、每次劃線(hu xin)(hu xin)之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線(hu xin)(hu xin)操作結(jié)束時(shí)，仍操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了(wi le)避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了(wi le)殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。第49頁(yè)/共63

30、頁(yè)第五十頁(yè)，共63頁(yè)。2.2.在灼燒接種環(huán)之后在灼燒接種環(huán)之后(zhhu)(zhhu)，為什么要，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免答：以免(ymin)(ymin)接種環(huán)溫度太高，殺死菌接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。種。3.3.在作第二次以及其后的劃線操作在作第二次以及其后的劃線操作(cozu)(cozu)時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增

31、加而逐步減少，細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。第50頁(yè)/共63頁(yè)第五十一頁(yè)，共63頁(yè)。第51頁(yè)/共63頁(yè)第五十二頁(yè)，共63頁(yè)。第52頁(yè)/共63頁(yè)第五十三頁(yè)，共63頁(yè)。 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰(huyn)(huyn)附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第要求，想一想，第2 2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？ 應(yīng)從操作應(yīng)從操作(cozu)(cozu)的各個(gè)細(xì)節(jié)保證的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的

32、距離要合適、吸管頭不要例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。第53頁(yè)/共63頁(yè)第五十四頁(yè)，共63頁(yè)。第54頁(yè)/共63頁(yè)第五十五頁(yè)，共63頁(yè)。第55頁(yè)/共63頁(yè)第五十六頁(yè)，共63頁(yè)。 1 1、臨時(shí)保藏、臨時(shí)保藏(bocng)(bocng)：接種到：接種到固體斜面培養(yǎng)基，固體斜面培養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)成后置于菌落長(zhǎng)成后置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、長(zhǎng)期保存：甘、長(zhǎng)期保存：甘油冷凍管藏法油冷凍管藏法第56頁(yè)/共63頁(yè)第五十七頁(yè)，共63頁(yè)。四、課題成果四、課題成果(chnggu)評(píng)價(jià)評(píng)價(jià) （一）培養(yǎng)基的制作

33、是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無(wú)菌后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。備。（二）接種操作是否符合無(wú)菌要求（二）接種操作是否符合無(wú)菌要求 如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作是一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明接符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)

34、到要求，需要分析原因，再種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。次練習(xí)。（三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察（三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察(gunch)(gunch)與記錄與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同，及時(shí)觀察顯不同，及時(shí)觀察(gunch)(gunch)記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察，并能觀察(gunch)(gunch)到其他一些細(xì)微的變化。這一步到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。第57頁(yè)/共63頁(yè)

35、第五十八頁(yè)，共63頁(yè)。本課題知識(shí)本課題知識(shí)(zh shi)(zh shi)小結(jié)小結(jié): :第58頁(yè)/共63頁(yè)第五十九頁(yè)，共63頁(yè)?！镜淅馕觥镜淅馕?ji x)(ji x)】 例例1 1關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是A.A.是碳源的物質(zhì)不可能是碳源的物質(zhì)不可能(knng)(knng)同時(shí)是氮源同時(shí)是氮源 B. B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的無(wú)機(jī)物只提供無(wú)機(jī)鹽除水以外的無(wú)機(jī)物只提供無(wú)機(jī)鹽 D. D.無(wú)機(jī)氮源也能提供能量無(wú)機(jī)氮源也能提供能量 解析：不同的微生物，所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要解析：不同的微生物，所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對(duì)

36、微生物的具體情況分析。對(duì)于針對(duì)微生物的具體情況分析。對(duì)于A A、B B選項(xiàng)，它的表達(dá)是選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時(shí)是氮源，如可同時(shí)是氮源，如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同時(shí)是能源，如；有的碳源同時(shí)是能源，如葡萄糖；有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白葡萄糖；有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白(dnbi)(dnbi)胨。對(duì)于胨。對(duì)于C C選項(xiàng)，除水以外的無(wú)機(jī)物種類繁多，功選項(xiàng)，除水以外的無(wú)機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無(wú)機(jī)鹽；而，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無(wú)機(jī)鹽；而NaClNaCl則只能提供無(wú)機(jī)鹽。對(duì)于則只能提供無(wú)機(jī)鹽。對(duì)于D D選項(xiàng)，無(wú)機(jī)氮源提供能量的情況選項(xiàng)，無(wú)機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如還是存在的，如NH3NH3可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源?？蔀橄趸?xì)菌提供能量和氮源。答案：答案：D第59頁(yè)/共63頁(yè)第六十頁(yè)，共63頁(yè)。例例2 2下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是A.A.