臨床化學(xué)中的干擾實驗核準的指導(dǎo)原則分享

1、真誠為您提供優(yōu)質(zhì)參考資料，若有不當之處，請指正。臨床化學(xué)中的干擾實驗核準的指導(dǎo)原則第二版1. 概覽本文件用于以下兩個目的：1) 通過提供科學(xué)有效的實驗設(shè)計，指定待檢測的相關(guān)干擾物質(zhì)及濃度和闡明正確的數(shù)據(jù)分析與解讀，來協(xié)助制造商以及其他實驗室檢測方法研發(fā)人員來確定檢測方法對干擾物質(zhì)的敏感程度。這樣可以評估出潛在的干擾危險物，也可以向用戶提供有意義的干擾聲明；以及2) 通過定義系統(tǒng)性研究策略，確定數(shù)據(jù)收集和分析要求以及促進實驗室用戶和制造商之間更廣泛的合作，來協(xié)助臨床實驗室研究由于干擾物質(zhì)存在而產(chǎn)生的異常結(jié)果。這樣，新的干擾物可以被鑒別、揭示并最終消除掉。本指導(dǎo)原則用于體外診斷醫(yī)療設(shè)備制造商以及臨

2、床實驗室。制造商以及其他實驗室檢測方法研發(fā)人員有責任有責任確定由于干擾物質(zhì)引起的誤差而對其檢測方法的分析性能造成的影響以及對病人的潛在傷害。制造商被要求向使用其系統(tǒng)的用戶提供關(guān)于干擾敏感度的有關(guān)信息。備注：本文件中“制造商”系指研發(fā)用于臨床實驗室的檢測方法的任何個人以及企業(yè)。臨床實驗室有責任確保其檢測方法的特異性能夠滿足其客戶的需求。實驗室同樣應(yīng)該研究異常結(jié)果，鑒別干擾物質(zhì)并向提供分析系統(tǒng)的制造商提供客觀的反饋。2. 介紹2.1 檢測方法任何檢測方法。不論是定性的還是定量的，都可能受到干擾。本文件廣泛適用于各個檢測方法以及分析儀器。有可能需要做出適當修改，以適應(yīng)不同流程的特點。附錄A中討論了兩

3、個具體的方法原則（分離技術(shù)以及免疫化學(xué)檢測方法）。2.1.1 標本類型使用本指導(dǎo)原則可以評估使用血清、血漿、全血、腦脊髓液、尿液以及其他大多數(shù)體液的檢測方法中的干擾。2.1.2 干擾物質(zhì)潛在的干擾物質(zhì)可能來源于以下內(nèi)源性以及外源性途徑：l 病理情況下產(chǎn)生的代謝物，如糖尿病、多發(fā)性骨髓瘤、瘀膽型肝炎等等；l 治療過程中引入的物質(zhì)，如藥物、腸胃外營養(yǎng)、血漿容量擴張劑、抗凝劑等等；l 病人攝入的物質(zhì)，如酒精、藥物濫用、營養(yǎng)添加物、各種食物與飲料等等；l 標本準備過程中添加的物質(zhì)，如抗凝劑、防腐劑、穩(wěn)定劑等等；l 標本處理過程中無意引入的污染物，如手霜、含粉手套、血清分離管，收集管膠塞等等；l 標本自

4、身的基質(zhì)，如不同于理想新鮮標本的理化性質(zhì)。2.2 概念與科學(xué)原則2.2.1 干擾對不精確度的影響不準確度（總分析誤差）共由三部分組成：不精密度、方法特異性偏差以及標本特異性偏差。檢測方法評價通常只評價前兩項。標本特異性偏差（即干擾），通常被視為特定樣本的獨立問題，而非過程的可量化的特征。從評估的觀點來看，干擾敏感性可引起系統(tǒng)誤差與隨機誤差，兩者都可以作為不準確性（總分析誤差）的組成部分進行分析學(xué)上的量化。l 對于給定的病人群體，標本中干擾物質(zhì)的平均濃度會引起系統(tǒng)性偏差，其會被涵蓋于偏差評估中。相對于均值的個體偏差，會在與另一更精確的檢測過程的比對中，構(gòu)成總隨機誤差的一部分。對于部分檢測而言，隨

5、機干擾效應(yīng)，會超越不精密度，成為隨機誤差的主要來源。l 對于病人個體而言，干擾物質(zhì)引起的誤差取決于其在病人標本中的濃度。干擾物濃度改變，偏差度隨之改變。偏差引起的結(jié)果變化，可能被錯誤的解讀為病人體征的變化。2.2.2 臨床相關(guān)性在臨床醫(yī)學(xué)中，干擾必須從臨床的角度評估。臨床相關(guān)性決定了一個分析效應(yīng)究竟是否應(yīng)該考慮為干擾。待測物的形式和濃度基準必須被清晰的定義。矛盾的是，某些檢測過程可能反映出待測物的真實濃度，但卻并不一定是臨床相關(guān)值。比如火焰光度法和間接電勢測量法能正確測量出血漿中鈉的含量，不論脂濃度為多少。然而，如果脂濃度較高，這些方法可能會將電解質(zhì)平衡正常的病人，檢測為低鈉血癥。在這個例子中

6、，直接電勢測量法可以準確報告正常鈉水平，因為其是對血漿水相中的鈉活性做出反應(yīng)，而鈉活性正是機體調(diào)節(jié)的。因此，從臨床的角度來看，對標本中總鈉的過高估計是合適的。在嘗試解讀干擾試驗結(jié)果之前定義臨床相關(guān)濃度是很重要的。2.2.3 預(yù)分析效應(yīng)分析前待分析物的變化或者是濃度的改變，通常被定義為預(yù)分析效應(yīng)。盡管這種效應(yīng)可能會“干擾”實驗室結(jié)果的臨床用途，其并不能算分析干擾。除非明確說明，否則檢測過程應(yīng)該同時檢測標本中所有的待分析物質(zhì)，不論其來源為何。常見的預(yù)分析效應(yīng)有：l 體內(nèi)（生理學(xué)）藥物效應(yīng)，受藥物影響的循環(huán)激素濃度；l 待分析物的化學(xué)變化，如水解、氧化、光解等等；l 待分析物的物理變化，如酶的變性；

7、l 標本的揮發(fā)或稀釋；以及l(fā) 附加待分析物的污染（比如來自靜脈注射的鹽，與凝血塊接觸時間延長導(dǎo)致的葡萄糖損失或者溶血帶來的紅細胞內(nèi)成分。2.2.4 相對干擾干擾的計算是相對于對照中的待分析物的測量而言的。在某些情況下，對照組中可能會含有一定量的內(nèi)源性干擾物質(zhì)（對照組中病人群體的物質(zhì)濃度的平均值）。常見的例子有膽紅素、血紅蛋白、蛋白質(zhì)和脂類。有些檢測方法會按照干擾物的平均濃度進行抵消或修正，從而減小針對病人群體檢測的干擾效應(yīng)。典型的方法有樣本預(yù)處理、空白化、血清基質(zhì)校正以及數(shù)學(xué)校正。當病人標本中的干擾物濃度大于或者小于病人群體平均濃度時，誤差會被引入。比如，某個被蛋白質(zhì)干擾的藥物檢測方法，其偏差

8、為0.05mol/L每1.0g/dL蛋白質(zhì)。因為血清標本中蛋白質(zhì)平均濃度為7.0g/dL，其相對于無蛋白對照組的平均偏差為0.35mol/L。如果用上述方法之一將偏差消除，針對個體標本的蛋白質(zhì)效應(yīng)將是相對于平均蛋白濃度7.0g/dL條件下的0.05mol/L每1g/dL蛋白濃度升高/降低。含7.5g/dL蛋白的標本的偏差將變?yōu)?0.025mol/L，而非+0.4mol/L。除非樣本里的蛋白含量剛好是7.0g/dL，否則每份病人標本的藥物檢測結(jié)果將呈現(xiàn)較小的正/負偏差，其取決于真實的蛋白質(zhì)濃度。以下信息對例子進行了擴展。假設(shè)假定藥物的真實濃度是25.0mol/L，檢測方法受蛋白影響的程度如上所述

9、。注意在偏差校正過的系統(tǒng)中，蛋白質(zhì)引起的誤差范圍僅有+0.20mol/L，而在偏差未校正過的系統(tǒng)中，蛋白質(zhì)引起誤差范圍為+0.15mol/L到+0.55mol/L。2.2.5 干擾機制分析過程可能會被干擾物質(zhì)通過多個途徑干擾。l 化學(xué)干擾。干擾物可能通過與試劑競爭或者阻礙指示劑的反應(yīng)來壓制反應(yīng)。其也可能通過絡(luò)合或者沉淀改變待分析物的形態(tài)。l 檢測干擾。干擾物可能有與分析物相似的，能夠被檢測或者測量到的性質(zhì)，如熒光、顏色、光散射、洗脫位點或電極響應(yīng)等。l 物理干擾。干擾物可能會改變標本基質(zhì)的物理性質(zhì)，比如粘度、表面張力、濁度或離子強度，從而引起待分析物質(zhì)濃度明顯的變化。l 酶抑制。干擾物可能會通

10、過分離激活金屬離子，與催化位點結(jié)合或者氧化必需的巰基等等來改變酶的活性（待分析物或者試劑）。在基于酶反應(yīng)等檢測方法中，干擾物也可能與酶競爭某個關(guān)鍵基質(zhì)。比如腺苷酸激酶與肌酸激酶競爭結(jié)合ADP，因此在某些檢測中會被錯誤的檢測為肌酸激酶。l 非特異性。干擾物可能會與待分析物有相同的反應(yīng)。盡管干擾物有著不同的非特異性機理，但其實踐效應(yīng)對于實驗室是一樣的。一些常見的例子：堿性苦味酸肌酸酐檢測過程酮酸的干擾；重氮膽紅素檢測中硫酸吲哚酚的干擾。l 交叉反應(yīng)性。在免疫化學(xué)檢測過程中，與某個抗原結(jié)構(gòu)相似的干擾物可能會與抗體發(fā)生“交叉反應(yīng)”。這是非特異性的一種形式。比如，咖啡因在某些茶堿檢測過程中會被檢測到。交

11、叉反應(yīng)性的程度被視為對于免疫化學(xué)檢測特異性的考核，但對于干擾敏感程度的考核并不是一個有用的指標。l 水置換。非水性物質(zhì)（蛋白、脂類）通過置換水相等離子體，影響基于活性檢測的測量體系。如果打算檢測等離子水相中的待分析物濃度時，這些效應(yīng)可以不用考慮為干擾。3 標準預(yù)防措施。因為通常不可能知道哪種分離物或者標本可能會有傳染性，所有的病人和實驗室標本都要被看做是傳染性的并依照“標準預(yù)防措施”進行處理。標準預(yù)防措施是結(jié)合了通用預(yù)防措施與人體物質(zhì)分離的主要特征的指導(dǎo)措施。標準預(yù)防措施涵蓋了所有傳染性物質(zhì)的傳播，因而比僅僅用于血液病原體傳播的通用預(yù)防措施更加廣泛。標準預(yù)防措施與通用預(yù)防措施指導(dǎo)原則均可在美國

12、疾病控制與預(yù)防中心下載與索取。如需更具體的關(guān)于防止實驗室設(shè)備與材料中所有傳染性物質(zhì)的傳播的預(yù)防措施以及關(guān)于暴露于傳染性疾病的風險管理的推薦方案，請參考CSLIM29文件最新版本Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections。4 定義準確度測量結(jié)果和測量物的真實值的吻合度。備注：參考測量物的定義。誤差/I型錯誤錯誤拒絕空白假設(shè)（物質(zhì)不發(fā)生干擾）的可能性。備注：參考置信水平的定義。對立假設(shè)在干擾試驗中，在指定的冪下檢測，物質(zhì)引起的干擾大于指定限制的情況。備注：參考：冪和誤差的定義。待分析物作為可檢測物

13、質(zhì)存在的組分。備注1：在物質(zhì)類型“24小時尿液中的蛋白質(zhì)量”中，蛋白質(zhì)是待分析物。在“血漿中葡萄糖含量”中，葡萄糖是待分析物。備注2：待分析物是對病人有意義的特定組分。分析特異性檢測過程只檢出檢測物的能力。異常結(jié)果參見差異結(jié)果的定義。誤差/II型錯誤錯誤拒絕對立假設(shè)（物質(zhì)發(fā)生干擾）的可能性。備注：參見冪的定義。偏差檢測結(jié)果預(yù)期值與可接受的參考值之間的差異。備注：在本文件中，節(jié)7中“可接受的參考值”是指同一檢測方法中在沒有干擾存在的情況下獲得的結(jié)果。在節(jié)8中是指對比性檢測方法的結(jié)果。臨床顯著性在評估檢測方法的背景下，誤差改變內(nèi)科醫(yī)生對于病人進行診斷、治療或者管理的潛在可能性的重要性。對比性檢測方

14、法在評估檢測方法時，作為確定標本中待分析物質(zhì)真實濃度的較精確的檢測方法。置信水平與置信區(qū)間關(guān)聯(lián)的可能性的數(shù)值（1-）。備注1：可能性通常以百分比表示：100（1-）%；備注2：參見誤差的定義。差異結(jié)果/異常結(jié)果/假結(jié)果與從同一標本采集到的另一結(jié)果，從另一檢測系統(tǒng)獲得的結(jié)果或者與確證的臨床診斷的臨床顯著度不一致的結(jié)果。藥物效應(yīng)常用于描述藥物對于某物質(zhì)體內(nèi)濃度的生理學(xué)影響，與之對照的是在分析過程中的體外效應(yīng)內(nèi)源性干擾物標本中生理產(chǎn)生的，能夠?qū)α硪晃镔|(zhì)檢測過程產(chǎn)生影響的物質(zhì)（如膽紅素或血紅蛋白）。外源性干擾物來源于體外的，能夠?qū)吮局辛硪淮治鑫餀z測過程產(chǎn)生干擾的物質(zhì)（如藥物或其代謝物，標本防腐劑或

15、者標本污染物）。析因?qū)嶒瀸⑺锌赡艿挠绊懸蛩亟M合考察完全的實驗設(shè)計。這些組合由兩個或多個因素組成，每個因素考察兩個或多個水平。這樣反應(yīng)性（差異效應(yīng)）以及主要效應(yīng)都可以被評估出來。不精密度特定條件下獲得的獨立的檢測結(jié)果的散布。備注：常表達為“標準差”或者“變異系數(shù)”。不準確度測量值與真實值之間的數(shù)值差異。備注1：參見準確度的定義；備注2：參見總分析誤差的定義。干擾在臨床化學(xué)中，由于另一組分的影響或者標本的性質(zhì)導(dǎo)致的待分析物檢測濃度的臨床顯著差異的原因。備注：其可能由于檢測系統(tǒng)的非特異性、指示劑反應(yīng)的阻遏、待分析物的阻遏或者一些其它標本依賴性偏差。干擾聲明描述檢測方法中某物質(zhì)可能造成影響的說明。備

16、注：常見于產(chǎn)品的“方法局限性”條目下。干擾標準有改變內(nèi)科醫(yī)生對病人進行診斷、治療或管理的潛在可能的，待分析物濃度與真實值之間的偏差的最大容許干擾度。干擾篩選在分析系統(tǒng)的評估中，用于鑒別可能存在干擾的常見物質(zhì)的一系列加入高濃度干擾物的實驗。干擾敏感度檢測方法針對來自于其它組分或標本性質(zhì)引起的干擾的誤差的敏感度。干擾基質(zhì)/干擾物本術(shù)語按照VIM的模式定義為“影響物質(zhì)”，即不是檢測物的卻能影響檢測結(jié)果的物質(zhì)?；|(zhì)物質(zhì)系統(tǒng)中，除待分析物外的所有組分?；|(zhì)效應(yīng)標本性質(zhì)對于特定檢測過程中檢測值的影響。備注：粘度、表面張力、濁度、離子強度以及pH是常見的基質(zhì)效應(yīng)產(chǎn)生因素。待測物針對檢測的特定的量值。備注1：

17、本定義涵蓋所有量值，常用的術(shù)語“待分析物”則指測量過程涉及到的具體的物質(zhì)（即，待測物描述了引發(fā)檢測結(jié)果的“物”【如，酶活性】，待分析物描述了對病人有意義的特定的組分）；備注2：參見待分析物的定義。方法特異性偏差由于檢測方法的特征與特性引起的系統(tǒng)性誤差。非特異性在檢測系統(tǒng)中，非目的待檢測物的物質(zhì)的反應(yīng)性。備注：非特異性常由抗體、酶、離子載體或者試劑結(jié)合、絡(luò)合或與非待檢測物質(zhì)的反應(yīng)引起的?？瞻准僭O(shè)在干擾試驗中，在特定的置信水平下檢測，物質(zhì)不會引起干擾的情況。單側(cè)檢驗當對立假設(shè)指出干擾效應(yīng)的趨向時（正向干擾或負向干擾）用于顯著性的統(tǒng)計學(xué)檢驗冪不精密度規(guī)定條件下的獲得的獨立實驗結(jié)果的接近度。備注：精密

18、度往往不用數(shù)值表示，但常以不精密度來定量表達一組檢測結(jié)果的標準差（SD）或變異系數(shù)（CV）。隨機樣本依賴性干擾在病人標本群中不同濃度干擾物引發(fā)的變化。備注：隨機干擾被量化為病人個體標本的偏差的SD；備注2：其是回歸分析中Sy,x的組成部分，也是總隨機誤差的一個主要構(gòu)成因素。重復(fù)性在相同實驗條件下針對相同檢測物獲得的結(jié)果的接近度。備注：有時又被稱為分析內(nèi)精密度。樣本從系統(tǒng)中分離出的一個或多個部分，以提供關(guān)于系統(tǒng)的信息。通常作為決定系統(tǒng)或者其產(chǎn)物的參考基礎(chǔ)。特異性檢測方法在存在干擾環(huán)境或者影響物質(zhì)的前提下，正確識別或者測量待測物的能力。備注1：在質(zhì)量控制的背景中，當特殊情況引起的變異真實存在的情況

19、下，特殊質(zhì)控體系發(fā)現(xiàn)其存在的可能性；1-錯誤報警可能性，即質(zhì)控體系數(shù)據(jù)點超出了容許范圍，但檢測系統(tǒng)未發(fā)現(xiàn)任何誤差的情況；備注2：在免疫學(xué)中，特異性是抗血清的質(zhì)量標準，定義了與特定抗原的反應(yīng)性。特異性的缺乏是由于交叉反應(yīng)的引入和/或干擾物質(zhì)的存在，因為交叉反應(yīng)物質(zhì)會和待分析物競爭結(jié)合抗體識別位點。標本（病人）用于檢查、研究或者分析一個或多個量值或特征來確定整體特征的體液分離物或者組織。標本基質(zhì)待分析物存在的環(huán)境；備注：臨床基質(zhì)包括血清、血漿、尿液、腦脊液以及其他體液。標本特異性偏差由于標本特征或性質(zhì)引起的測量值與真值之間的偏差，與檢測方法的特征形成對照（比如校準、試劑不穩(wěn)定）；備注：其是由單個標

20、本表現(xiàn)出的影響效應(yīng)。假結(jié)果參見異常結(jié)果的定義。統(tǒng)計顯著性基于特定的冪與置信水平的，一個事件不是偶然發(fā)生的可能性的重要度。治療濃度藥物能夠有效產(chǎn)生需要的臨床效果的濃度。總分析誤差由特定組分構(gòu)成，并被量化為置信水平90%或95%下的置信區(qū)間。備注1：與“不準確度”的概念相同；備注2：用于估計VIM定義的最大可能性誤差：測量值減去真值（或可接受的參考值）；備注3：由檢測與參考檢測方法的檢測濃度差異評估而來。例如：檢測和參考檢測方法的差異的97.2%落在了±4mmol/L；因此實現(xiàn)了95%的總分析誤差的目標。備注3：參見不準確度的定義。毒性濃度藥物或者其他物質(zhì)對病人造成傷害的濃度。真實度從數(shù)

21、量較大的一系列測試結(jié)果中獲得的平均值與可接受參考值的吻合度。備注：真實度的考察通常表達為偏差。雙側(cè)檢驗當對立假設(shè)不能指出干擾效應(yīng)的方向（正向干擾或負向干擾）時所使用的顯著性統(tǒng)計學(xué)檢驗。I型錯誤對空白假設(shè)的錯誤拒絕。備注：參見誤差的定義。II型錯誤對對立假設(shè)的錯誤拒絕。備注：參見誤差的定義。驗證通過提供客觀證據(jù)，確認到達了預(yù)期用途或應(yīng)用的要求。備注1：WHO定義驗證的定義如下：提供流程、過程、系統(tǒng)、設(shè)備或方法達到了預(yù)期要求并滿足預(yù)期結(jié)果的行為或過程。備注2：驗證的組成部分包括質(zhì)量控制、水平測試、雇員能力驗證、設(shè)備校準以及針對臨床發(fā)現(xiàn)的校正。檢定通過提供客觀證據(jù)，確認達到了特定的要求。備注：在檢測

22、系統(tǒng)應(yīng)用于病人檢測前完成的，用于決定或確定檢測性能特征的一次過程。室內(nèi)精密度參見重復(fù)性的定義。5 干擾試驗的決定標準在建立一項評估實驗之前，必須先確定可接受性標準，以確保客觀性。評估者必須決定什么程度的分析效應(yīng)會對檢測結(jié)果的臨床使用造成干擾。因為針對干擾試驗的恰當?shù)膶嶒炘O(shè)計取決于怎樣程度的偏差會被考慮為臨床顯著的。在建立可接受性標準時，必須區(qū)分臨床顯著性和統(tǒng)計顯著性。兩者在建立可用的標準時都很重要。5.1 臨床可接受性標準對于干擾引起的誤差的可容許程度顯然取決于檢測結(jié)果的醫(yī)學(xué)用途。對于一些待分析物，準確度要求（總可允許誤差）已有建議。所引文獻代表了一些例子。對于其他待分析物，準確度標準可以通過

23、下述任何一種方法來建立。可通過將準確度（總可容許誤差）分解為偏差、不精密度以及干擾部分，來建立可允許干擾的限制值?？偪稍试S干擾誤差的部分便是去除掉偏差和不精密度后，也包括待分析物的生理學(xué)變異部分（方差），殘余的誤差。5.1.1 基于生理學(xué)變異的標準一種建立準確度要求的方法是基于待分析物的生理學(xué)變異。原則上，誤差界限應(yīng)設(shè)為此種分析變異性相對于待分析物在個體和人群中的固有變異性的最小值（取決于待分析物的臨床應(yīng)用）。此方法對于生理學(xué)控制的待分析物效果較好。5.1.2 來自于臨床經(jīng)驗的標準臨床專家的共識經(jīng)常用于建立準確度要求。從他們的臨床經(jīng)驗中，從業(yè)者可參考多大程度的誤差會影響他們的診斷或者治療決定。

24、合理的準確度和干擾標準可以由相關(guān)臨床的典型例子中建立起來。5.1.3 基于分析變異的標準干擾標準同樣可以源于檢測方法的總的長期的不精密度。如果，病人樣本中干擾物水平很高，而相對于分析變異來說，其影響很低，則由于干擾物引起的總誤差的升高，不太會顯著影響臨床決定，該物質(zhì)不應(yīng)被視為干擾物。5.2 統(tǒng)計顯著性與冪在作出一種物質(zhì)是否有干擾之前，評估者必須確保結(jié)果是分析學(xué)顯著的。需要有充分的重復(fù)實驗，這樣檢測就是在充分的冪下進行，來檢測臨床顯著干擾，以及在充分的置信水平下，來識別臨床非重要偏差的存在。本指導(dǎo)原則采用的統(tǒng)計學(xué)手段稱為“假設(shè)檢測”。評估者預(yù)先確定病人檢測結(jié)果中多大的偏差會是臨床顯著的。此可允許

25、偏差的量會被作為干擾界值，或者干擾尺度。之后檢測不含干擾的空白假設(shè)（偏差未超過界限）與含干擾的對照假設(shè)（偏差超過界限）。這些統(tǒng)計學(xué)檢測基于預(yù)先設(shè)定的統(tǒng)計學(xué)冪和置信水平。參考7.1至7.1.6決定基于冪和置信水平的樣本規(guī)模。5.3 待分析物檢測濃度干擾要在待分析物的兩個醫(yī)學(xué)決定濃度下評估。若出于成本或其他實踐考慮，預(yù)實驗只能限制在一個濃度下，要留意可能會遺漏在另一個待分析物濃度下的臨床顯著干擾。常見待分析物的推薦測試濃度列于附件B中。使用了可引用的出版的關(guān)鍵或決定值。缺乏醫(yī)學(xué)共識值時，待分析物的濃度有些是假定的，但干擾聲明是重要的目標。在臨床應(yīng)用的指導(dǎo)下，絕大多數(shù)情況下，選擇了參考范圍的上限或者

26、下線以及代謝濃度。5.4 潛在干擾物質(zhì)對于復(fù)雜的檢測方法的特征，要從列出有潛在干擾可能的物質(zhì)的列表開始。l 常見的標本不正常，如溶血、黃疸和高血脂。l 常見的處方藥與非處方藥。l 不正常的生化代謝物。l 在檢驗所涉及的病人群體中，最常開處方的藥物。l 由于其化學(xué)或物理性質(zhì)，可能會對檢測造成干擾的藥物，包括代謝物。l 據(jù)報道會對相似檢測方法造成影響的物質(zhì)。參見Young等人與Trying和Roos的文字調(diào)查。l 標本添加劑，如抗凝劑（肝素、EDTA、檸檬酸鹽、草酸鹽等等）以及防腐劑（NaF、碘乙酸、HCl等等）。l 在收集與處理過程中，可能會與標本接觸的物質(zhì)，比如血清分離設(shè)備、標本收集容器和相應(yīng)

27、的膠塞、導(dǎo)管、導(dǎo)管沖洗液、皮膚消毒劑、手霜、去污劑、含粉手套等等。l 已知會影響特定檢測的膳食物質(zhì)（咖啡因、胡蘿卜素、罌粟子等等）。列表可能會涵蓋廣泛。下列物質(zhì)可認為遺漏重要干擾物的風險很小。確保當潛在干擾物被排除時，其理論根據(jù)被記錄下來。l 與列表中的物質(zhì)有必需的特征組成和結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。然而，基于抗體、酶或者其他特異性結(jié)合蛋白的親和力，所有的結(jié)構(gòu)類似物都應(yīng)該檢測一遍。l 基于同樣的科學(xué)規(guī)律，已經(jīng)被展示過，不會對檢測造成干擾的物質(zhì)。l 基于對化學(xué)性質(zhì)的專業(yè)知識，不太可能造成干擾的化合物。l 基于檢測的了解，處方劑量很小，不會引起干擾的藥物。l 由于清除或代謝過快，檢測時不會處于干擾濃度的藥物。5

28、.5 干擾試驗濃度為確定在“最壞情況”下某物質(zhì)是否會干擾，綜合的干擾篩選需要在實驗室可能考察到的病人標本中觀察到的最大濃度條件下進行。以下提供的指導(dǎo)用于協(xié)助選擇合適的檢測濃度。由于正向與負向干擾效應(yīng)可能由于不同的機制引起（比如血紅蛋白除在可見光譜中有強烈的吸收作用外，還有催化活性）每個物質(zhì)都需在兩個不同濃度下檢測，以避免在檢測濃度下相抵觸的效應(yīng)互相抵消的可能性。參見7.3節(jié)關(guān)于能夠同時檢測待分析物與干擾物多個濃度的備選實驗流程。l 藥物與代謝物對于血清、血漿以及全血樣本，至少按照報道的藥物治療劑量的最高值（急性峰值濃度）或者最高的預(yù)期值檢測三次以上。如果預(yù)期的血液中濃度未知，可假設(shè)治療劑量分散

29、于5升血液中，然后按此濃度檢測至少三次。參見附件C中對于多數(shù)常見藥物的推薦測試濃度的列表。對于尿液，確定24小時內(nèi)排出的最大量，然后按每升尿液中含有此量來檢測至少三次。如果尿排泄量未知，則按照每升尿液中含最大治療劑量來檢測至少三次。l 內(nèi)源性物質(zhì)鑒別出在適用病人群體中預(yù)期的最高濃度，然后按此濃度檢測。參見附件D中檢測部分內(nèi)源性組分的推薦濃度的列表。l 抗凝劑與防腐劑對于血清、血漿以及全血，對推薦的添加濃度檢測至少五次，以模擬“缺量”（即未足量的血液收集管）。對于尿液，對推薦用于24小時收集的尿液量的防腐劑的量檢測五次。l 膳食物質(zhì)對于血清、血漿以及全血、對最大預(yù)期濃度檢測至少三次。對于尿液，對

30、24小時內(nèi)每升尿液的排出量檢測至少五次。l 標本收集與處理設(shè)備將設(shè)備與混合標本接觸24小時以提取潛在干擾物質(zhì)。體積應(yīng)以實際應(yīng)用中的“最壞情況”為準。謹防標本揮發(fā)或者不穩(wěn)定待分析物的損失，并設(shè)置合適的對照標本，其應(yīng)與檢測標本一致，除了未與設(shè)備接觸之外，處理方法應(yīng)完全相同。6 質(zhì)量保證與安全在實施干擾試驗之前，核對以下內(nèi)容：l 設(shè)備按照制造商的說明經(jīng)過校準和維護；l 分析系統(tǒng)受控且按照預(yù)期性能工作；l 所有操作人員經(jīng)過合格的培訓(xùn)；l 嚴格按照實驗室安全流程操作。文件記錄按照上述要求執(zhí)行。6.1 培訓(xùn)與熟練執(zhí)行評估的人員必須熟悉相關(guān)設(shè)備的操作，并接受了檢測方法的培訓(xùn)。設(shè)備必須正確的維護與修理，并按照

31、制造商的說明進行。6.2 精密度檢驗精密度須與制造商性能特征一致。需要進行針對可重復(fù)性的評估，以確定節(jié)7中實驗所需要的重復(fù)次數(shù)。如果可重復(fù)性未知，需要進行最新版EP5中敘述的預(yù)實驗。6.3 真實性檢驗檢測方法的偏差需經(jīng)過合適的回收實驗或者方法比較來確定。盡管恒定的偏差不會影響干擾性研究，部分性偏差會導(dǎo)致在各種濃度下，干擾被低估或者高估。6.4 串行評估檢測結(jié)果可能會被前一樣本的串行而影響。如果串行發(fā)生，則需要設(shè)計實驗來區(qū)分串行效應(yīng)與干擾效應(yīng)。6.5 質(zhì)量控制在檢測開始前，分析系統(tǒng)要處于可穩(wěn)定運行狀態(tài)。在檢測期間，要通過質(zhì)量控制流程來監(jiān)控性能指標。按照制造商的說明執(zhí)行并參考最新版C24文件。6.

32、6 安全與廢物處理對于關(guān)于安全、正確的處理以及丟棄實驗室化學(xué)品的詳細信息，參考制造商的標簽以及物質(zhì)安全數(shù)據(jù)手冊。此信息可從供應(yīng)商處獲得。7 干擾特性評估本節(jié)提供了用于評價檢測方法對干擾物質(zhì)敏感度的實驗流程。盡管實驗室希望能夠?qū)⒋肆鞒套鳛閷π铝鞒痰膹氐椎暮细裨u價，但其主要設(shè)計用于制造商評價其檢測。有兩種基本方法可用于評估檢測方法對干擾的敏感度。每種均有優(yōu)點以及固有限制，但其提供了互相補充的信息，應(yīng)該一同使用。這兩種方法是：l 評估加入目的標本中的潛在干擾物質(zhì)的效應(yīng)（參見7.1至7.3節(jié)）；l 通過與高特異性對比檢測方法對比，來評估個體偏差、代表性病人樣本（參見8.2節(jié)）。7.1 干擾篩查向混合樣

33、本中加入潛在干擾物質(zhì)并評估與相同混合樣本的對照之間的偏差的方法稱為“配對差異檢測”。評估多種潛在干擾物質(zhì)的高濃度以模擬“最壞情況”的方法稱為“干擾篩查”。如果未觀察到臨床顯著效應(yīng)，則被該物質(zhì)引發(fā)的偏差可認為不重要，不需做進一步的檢測。顯示出臨床顯著效應(yīng)的物質(zhì)被考慮為干擾物，需要進一步評估以確定干擾物濃度以及干擾程度之間的關(guān)系。沒有任何干擾試驗策略能夠甄別出所有的干擾物。有些干擾物（比如藥物代謝物）可能在干擾篩查中未被檢出；有些物質(zhì)可能會被錯誤的劃為干擾物（比如不代表天然形態(tài)的物質(zhì)的結(jié)構(gòu)）。干擾篩查提供了標準化的評估，補足了針對真實病人標本的研究。干擾實驗存在兩點局限：l 添加到混合血清中的化合

34、物性質(zhì)可能與天然存在于體內(nèi)的化合物的性質(zhì)不同l 不同的干擾效應(yīng)可能會在檢測的干擾物以及待分析物濃度下相互抵償。基于此原因，血紅蛋白應(yīng)總是與不止一個濃度的膽紅素一起評估干擾。來自于可信的病人標本的數(shù)據(jù)可用于和來自于“異常”標本的數(shù)據(jù)結(jié)合，以幫助查明“真相”。附件B中給出了許多常見待分析物的推薦檢測濃度。指出了每種潛在干擾物質(zhì)都應(yīng)在兩個待分析物濃度下檢測。如果不可實現(xiàn)，附件B檢測的優(yōu)先濃度。仔細評估反應(yīng)的可能性，并在兩種待分析物濃度下檢測懷疑的物質(zhì)。7.1.1 實驗設(shè)計待測標本群與對照群都應(yīng)在同一次檢測中，采用合適的重復(fù)數(shù)目，用相同的方法檢測。需要足夠的重復(fù)數(shù)，來使錯誤拒絕沒有干擾的空白假設(shè)的可能

35、性（在統(tǒng)計學(xué)中，I型錯誤）或者錯誤拒絕有干擾的對立假設(shè)的可能性（II型錯誤）降到最低。標本需要被重復(fù)的數(shù)量取決于以下四個因素：l 待分析物檢測結(jié)果被認為臨床顯著的最小差異的程度；l 空白假設(shè)檢測的置信水平；l 對立假設(shè)檢測的冪；l 檢測方法的可重復(fù)性。7.1.2 實驗物品用于干擾試驗的實驗溶液的準備在附件G中提供。 基準標本組按下列方法準備基準混合樣本：1） 獲得來自健康的未服用藥物的個體的適當類型（血清、尿液等等）的新鮮標本?；旌蠘颖緫?yīng)該反映出可以吻合目的待分析物的標本基質(zhì)。2） 如果新鮮標本無法獲取，謹慎使用冷凍或者凍干的標本。經(jīng)處理的對照液體中可能含有防腐劑和穩(wěn)定劑，也包含

36、不真實的待分析物組合，可能會得出與真實人血清不同的干擾效應(yīng)。評估者有責任驗證測試物質(zhì)正確的模擬了新鮮臨床標本。3） 考慮檢測方法的樣本需求量、需要檢測的物質(zhì)的數(shù)量以及重復(fù)數(shù)要求，來計算所需基準混合樣本的體積。4） 確定基準混合樣本中待分析物的濃度，并使用合適的純品物質(zhì)來調(diào)節(jié)基準混合樣本至待分析物的醫(yī)學(xué)決定濃度。避免一起引入其他物質(zhì)。參見附件B中推薦的待分析物檢測濃度。 儲存液按照下面說明為每種潛在干擾物準備儲存液：1） 獲得潛在干擾物的合適的純品形態(tài)，或者最接近物質(zhì)循環(huán)形態(tài)的形態(tài)。如果需要藥品級的準備，記住其可能會含有賦形劑、防腐劑、殺細菌劑、殺真菌劑、抗氧化劑、染色劑、調(diào)味劑、

37、金屬氧化物、反離子和過濾物，任何一種都可能是觀察到的效應(yīng)的真實起因。2） 選擇檢測物質(zhì)能夠充分溶解的溶劑。參見化學(xué)與物理手冊或者Merck索引來獲得檢測物質(zhì)在這些溶劑中的溶解度。確定溶劑在評估中不會在檢測方法中引起干擾。下面按常用順序列出了可能的溶劑。l 試劑級純水（參見C3中的細節(jié)信息）l 稀釋的HCl或NaOHl 乙醇或甲醇l 二甲基亞砜（DMSO）l 其他有機溶劑3） 盡可能小程度的稀釋樣本基質(zhì)，最好不高于5%，可通過制備至少20倍于預(yù)期檢測濃度的濃縮儲存液來實現(xiàn)。4） 有機溶劑需要特殊考慮。易揮發(fā)溶劑要防止揮發(fā)。儲存液需要制備為最高工作濃度。許多有機溶劑在水中溶解度很低或可能通過影響試

38、劑或者反應(yīng)本身來引入假象。因氯仿在水中的低溶解度，其在血清中至少要稀釋100倍。乙醇濃度高于1%到2%會使抗體變性。詳細記錄儲存液的準備。備注：在某些情況下，干擾可能由于內(nèi)源性物質(zhì)（CO2、H+pH或者蛋白）濃度降低而升高。為評估這一效應(yīng)，基準標本組中潛在干擾物的濃度需要降低同時維持待分析物的濃度，以及對基質(zhì)的最小的擾動。對照由基準標本組制備，要考慮任何的稀釋或者物質(zhì)添加。使用的方法應(yīng)取決于待分析物和干擾物的天然屬性并且必須被評估者驗證。 對照標本組制備對照混合樣本應(yīng)與檢測混合樣本在各方面都相同，除了用相同體積的溶劑代替制備檢測混合樣本時使用的檢測干擾物。1） 如果檢測物質(zhì)出現(xiàn)在

39、對照混合血清中，使用合適的分析檢測方法來確定其濃度。2） 如果與基準標本組對照，對照混合樣本中出現(xiàn)了非預(yù)期的明顯的待分析物濃度，則考慮溶劑作為潛在的干擾物。7.1.3 重復(fù)要求滿足所需置信以及冪的重復(fù)數(shù)要求取決于檢測的統(tǒng)計學(xué)假設(shè)。l 雙側(cè)檢驗用于對立假設(shè)不能指出干擾的方向（正向或者負向）時，比如肌酸酐濃度為1.0mg/dL時±0.2mg/dL的偏差。l 單側(cè)檢驗用于對立假設(shè)包含干擾方向（正向或者負向）時，比如肌酸酐濃度為1.0mg/dL時-酮丁酸引起+0.2mg/dL的偏差。 雙側(cè)檢驗對于雙側(cè)檢驗，可合理的假設(shè)檢測誤差的正常分布，對所需重復(fù)數(shù)的較好的估計可用下列公式計算

40、：（1）其中：z1-/2是對雙側(cè)檢驗的響應(yīng)置信水平100（1-）的標準正態(tài)分布的百分比；z1-是響應(yīng)冪100（1-）的標準正態(tài)分布的百分比；s是檢測方法的可重復(fù)性標準差dmax是待分析物檢測濃度下的最大允許干擾度。 單側(cè)檢驗對于單側(cè)檢驗，將公式中的替換z1-/2為z1-。其中：z1-是對單側(cè)檢驗的響應(yīng)置信水平100（1-）的標準正態(tài)分布的百分比 z值方便起見，對于常用的置信水平和冪水平的z值如下所示表1 常用置信水平和冪的百分數(shù)比如，評估者需要檢測±1.5mg/dL作為可接受的干擾程度，置于95%置信水平（=0.05）以及95%冪（=0.05）下的效應(yīng)。要

41、求雙側(cè)檢驗?？芍貜?fù)性為1.0mg/dL。計算需要的重復(fù)數(shù)，將值代入公式。（2）因重復(fù)數(shù)必須是整數(shù)，數(shù)目需要留整，本例中為12。這是每個標本所需的重復(fù)數(shù)目。 重復(fù)數(shù)目在95%置信和冪下檢測各種干擾效應(yīng)所需的重復(fù)數(shù)目列于下面。方便起見，干擾標準表達為表2中的可重復(fù)性（分析內(nèi)）標準差的倍數(shù)（dmax/s）。表2 在95%置信和冪下檢測干擾效應(yīng)所需的重復(fù)數(shù)目 重復(fù)的效應(yīng)一個例子總結(jié)出了合適的重復(fù)數(shù)目的重要性。內(nèi)科醫(yī)生將血清中肌酸酐的微小改變解讀為潛在的腎臟排斥的指征。有時小如0.2mg/dL的改變都可能引起關(guān)注。然而實驗室人員了解多種生化代謝物和藥物都會干擾堿性苦味酸肌酸酐

42、檢測。在一種情況下，一個近期腎臟受體者顯示出了從1.0到1.2mg/dL的可重復(fù)的變化。內(nèi)科醫(yī)生想知道是否是頭孢類抗生素引起的。在1mg/dL的肌酸酐濃度下，可重復(fù)性標準差為0.075mg/dL。實驗室設(shè)定0.1mg/dL為顯著干擾。在合適的重復(fù)數(shù)目下，不精密度的影響可以減少，0.1mg/dL的可能的干擾就可以測出。首先，將不精密度表達為可重復(fù)性標準差的倍數(shù)（dmax/s）：0.1mg/dL/0.075mg/dL=1.33然后，取整為1.3，使用節(jié)中的表2來確定所需的重復(fù)數(shù)目。表中顯示在95%置信與冪下檢測此程度的效應(yīng)要求對照與檢測各做16個重復(fù)。如果可接受的干擾更大，比如0.2

43、mg/dL（dmax/s=2.7），則想要在同等置信水平下的重復(fù)數(shù)會更少。表中顯示此情況只需對照和檢測各重復(fù)4個，而非16個。7.1.4 實驗流程配對差異檢測的步驟如下：1） 確定合適的待分析物濃度2） 建立“臨床顯著”差異的標準（dmax）。3） 確定每個混合樣本所需的重復(fù)數(shù)目（n）。參見確定n的值。4） 準備臨床標本的基準標本組（參見節(jié)）。5） 準備待檢測物質(zhì)的20x儲存液（參見節(jié)）。備注：如果還有另一濃度，根據(jù)步驟6和8調(diào)整。6） 抽取目的體積的1/20的儲存液至容量瓶中。此為“檢測”標本組。例子：將0.5mL的20x儲存液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中

44、。7） 用基準標本組定容?；靹颉?） 抽取目的體積的1/20的溶劑至另一容量瓶中。此為“對照”標本組。9） 用基準標本組定容?；靹?。10） 準備n份檢測標本和n份對照標本。根據(jù)步驟3確定n的值。11） 按照交替順序檢測檢測標本（T)和對照標本（C)（比如，C1T1C2T2C3T3.CnTn）。 備注：如果系統(tǒng)被樣本串行影響，增加額外的樣本來保護對照標本免受來自檢測標本的串行，比如C1T1CxCxC2T2CxCxC3T3.CxCxCnTn，額外的對照標本（Cx）的結(jié)果舍棄。12） 記錄數(shù)據(jù)分析結(jié)果。附件E提供了記錄表。7.1.5 數(shù)據(jù)分析計算觀察到的干擾效應(yīng)的“點估計值”，dobs，作為檢測標本

45、均值和對照標本均值的差。 （3）計算cut-off值，dc，通過使用下列公式來確定接受哪組假設(shè)，n為公式（1）或者節(jié)中表2確定的真實標本量。Cut-off值，dc，對雙側(cè)檢驗可使用下式計算：（4）其中dnull是空白假設(shè)的值，通常=0。對于單側(cè)檢驗，用1-代替1-/2。干擾的95%置信區(qū)間可以根據(jù)下列公式計算。95%置信區(qū)間=（5）n個檢測標本和n個對照標本的平均差距的標準差是合理假設(shè)待分析物濃度檢測的不精密度對檢測標本和對照標本是一樣的，其中：s是檢測方法可重復(fù)性的標準差，n是每個標本的重復(fù)數(shù)目，t0.972,n-1來自于學(xué)生t表作為t-分布n-1自由度下的97.5的百分數(shù)。（

46、對于n>30，用2.0替代t0.972,n-1作為合理的估計。）7.1.6 結(jié)果解讀若點估計值dobs小于等于cut-off值dc，推斷物質(zhì)引起的偏差小于dmax；否則，接受對立假設(shè)，認為該物質(zhì)干擾。當解讀干擾試驗結(jié)果時，考慮下列警告：由于樣本誤差，真實的干擾可能與觀察到的“點估計值”有差異。然而，如果空白假設(shè)真實，接受的置信為100（1-）%；如果對立假設(shè)真實，接受的置信為100（1-）%。相應(yīng)的，拒絕的置信為100%和100%。l 檢測樣本的人為屬性可能會引入假象。真實的干擾物質(zhì)可能不是藥品本身，而是代謝物。檢測標本的基質(zhì)可能不能代表典型的待檢測物的病理學(xué)標本，可能引入基質(zhì)效應(yīng)。添加

47、的物質(zhì)可能與病理學(xué)標本中的干擾物不同，比如由于蛋白結(jié)合、金屬螯合、沉淀或者待分析物異構(gòu)體。l 任意的選擇檢測濃度可能無法顯示出干擾效應(yīng)可能只與其他化合物協(xié)同表達干擾可能存在于其他的待測物和干擾物濃度下，而非檢測的特定濃度。7.2 干擾效應(yīng)鑒定如果按照7.1節(jié)中的測試發(fā)現(xiàn)了在一個或者多個待檢測物濃度下干擾效應(yīng)的存在，則準備一個劑量響應(yīng)系列實驗來確定干擾物濃度的干擾程度。干擾物濃度的劑量響應(yīng)系列實驗可由最高干擾物濃度標本組與對照標本組的梯度混合制備。7.2.1 實驗設(shè)計劑量響應(yīng)實驗可確定干擾物濃度和干擾程度之間的關(guān)系，可用于消除檢測范圍內(nèi)的干擾物濃度的影響。一系列檢測標本，系統(tǒng)性的僅在干擾物濃度上

48、存在差異，由兩種標本組的定量混合制備。一種是檢測的最高濃度，一種是檢測的最低濃度。所有標本要一起檢測，采用隨機順序，置于可重復(fù)性條件下。有必要避免分析間變異，比如進行了校準或者試劑批號變化等，可能混淆結(jié)果的解讀。檢測多個干擾物濃度的好處是相同統(tǒng)計置信條件下檢測干擾程度的每個濃度只需較少的重復(fù)數(shù)目。這是由于從所有標本中獲得的可重復(fù)性信息匯總在了一起來確定置信區(qū)間?？傮w上將每個檢測濃度采用三個重復(fù)即充分。對于想要計算每個濃度下所需重復(fù)數(shù)目以保證95%置信和冪的人，方程列于附件F中。7.2.2 檢測用品 基準標本組按照節(jié)中所列方法準備基準標本組。 儲存液按照

49、節(jié)中所列方法準備潛在干擾物儲存液。 高值標本組準備含有5.5節(jié)中所規(guī)定的潛在干擾物的高值標本組。按照7.1.4所述，用基準標本組稀釋儲存液來獲得目標值。備注：如果低濃度的內(nèi)源物質(zhì)引起干擾，參見節(jié)中的備注。 低值標本組準備含有臨床標本群平均干擾物濃度的低值標本組。多數(shù)情況下，其可以忽略（如治療性藥物）或者較低（如血紅蛋白或者膽紅素），低值標本組可按照節(jié)中所述“對照標本組”的方法制備。 檢測標本組準備一系列的含有干擾物中值濃度的檢測標本組。本流程可用于提供不同標本組中干擾物濃度的更高的相關(guān)準確度和精密度，如Vaks

50、的文獻報道所述。按下列步驟所述，有高值與低值標本組的梯度混合而來。五個濃度已足夠確定線性劑量響應(yīng)關(guān)系了。1） 混合等體積的低值與高值標本組來制備兩個極端的中值濃度標本組。2） 混合等體積的低值與中值標本組來制備兩個極端的1/4濃度標本組。3） 混合等體積的中值與高值標本組來制備兩個極端的3/4濃度標本組。 準備規(guī)劃圖1 指出了假設(shè)干擾物的準備計劃，病人標本中的正常平均濃度為5mg/dL，而在病理性血清中可能會達到20mg/dL。因此高值標本組需要設(shè)定為40mg/dL，低值標本組的濃度應(yīng)在5mg/dL下檢測。圖1 五水平系列檢測的準備規(guī)劃7.2.3 實驗流程用于劑量響應(yīng)干擾實驗的實

51、驗步驟如下：1） 確定要檢測的最高與最低濃度。2） 確定“臨床顯著”的差異。如果“配對差異”實驗已經(jīng)完成，則此值已經(jīng)被確定（參見節(jié)7.1.4）3） 確定每個濃度檢測所需的重復(fù)數(shù)n（參見附件F）。4） 制備高值與低值標本組。5） 轉(zhuǎn)移等體積的高值與低值標本組至適當?shù)娜萜髦校苽渲兄禈吮窘M?；靹?。6） 轉(zhuǎn)移等體積的低值與中值標本組至適當?shù)娜萜髦校苽?5%標本組?；靹颉?） 轉(zhuǎn)移等體積的中值與高值標本組至適當?shù)娜萜髦?，制?5%標本組。混勻。8） 準備n份混合血清，n由步驟3確定。9） 在同一分析內(nèi)檢測五個標本組系列。第一組重復(fù)應(yīng)采用升序檢測，第二組用降序，第三組用升序，等等，以平均系統(tǒng)漂移效應(yīng)。

52、10） 另一個減小漂移效應(yīng)的方法是按照隨機順序檢測所有標本和重復(fù)。11） 計算低值標本組的平均濃度，并從所有其他結(jié)果中減去。將凈結(jié)果列表用于數(shù)據(jù)分析。12） 如果實驗室已經(jīng)有檢測干擾物的檢測方法，其對驗證檢測到的濃度有一定幫助。7.2.4 數(shù)據(jù)分析對結(jié)果繪圖，觀測到的效應(yīng)作為y軸，干擾物濃度作為x軸，檢查劑量響應(yīng)關(guān)系的形狀。 線性效應(yīng)如果數(shù)據(jù)隨機分布在直線兩側(cè)，采用線性最小二乘回歸分析。由個體觀測值（非平均值）確定斜率、截距和剩余誤差。在圖標上繪制回歸線，確定其擬合了數(shù)據(jù)且響應(yīng)是線性的。表3中總結(jié)了一個常見的干擾物濃度呈現(xiàn)線性干擾的例子。表3 線性關(guān)系的五水平劑量響應(yīng)系列檢測結(jié)果

53、總結(jié)數(shù)據(jù)繪圖并計算線性回歸公式，如圖2所示。圖2 表3描述的劑量響應(yīng)實驗結(jié)果的繪圖95%置信段可以圍繞劑量響應(yīng)線計算出來，根據(jù)其可以確定任何干擾物濃度下的95%置信區(qū)間。使用圖2數(shù)據(jù)的圖表總結(jié)如下。圖3 顯示9回歸線5%置信段的圖示。注意置信區(qū)間的大小作為干擾濃度的功能而改變，結(jié)果的最大置信處于干擾物濃度范圍的中間部分。統(tǒng)計計算器和電腦程序可用于計算回歸分析和置信區(qū)間。對于計算回歸線兩側(cè)置信區(qū)間的方法，參見如Draper等標準統(tǒng)計學(xué)教科書。 非線性效應(yīng)干擾可能不是與干擾物濃度呈現(xiàn)線性關(guān)系。如果繪圖數(shù)據(jù)呈現(xiàn)曲線，對于給定干擾物濃度的恰當?shù)墓烙嫵３Ｍㄟ^圖表確定。表4中數(shù)據(jù)可用于總結(jié)此

54、方法。表4 呈現(xiàn)非線性關(guān)系的五水平劑量響應(yīng)系列實驗結(jié)果的總結(jié)。當數(shù)據(jù)繪圖后，如圖4所示，任何干擾濃度下的干擾度可以通過圖表來估計。也可通過使用二次多項式模型的非線性回歸分析來計算。圖4 表4中劑量響應(yīng)實驗結(jié)果的繪圖為確定25mmol/L處的預(yù)期干擾，繪制一條通過數(shù)據(jù)的最好的擬合線然后從y軸讀出上對應(yīng)25mmol/L干擾濃度的干擾度。在本例中，干擾可估計為20mmol/L。置信區(qū)間可使用合適的非線性回歸分析程序來計算，此程序包含在大部分統(tǒng)計分析套裝中。7.2.5 結(jié)果解讀如果關(guān)系是線性的，則回歸斜率代表每單位干擾物引起的偏差。Y軸截距代表內(nèi)源干擾物濃度的校正。任何干擾物濃度下的干擾度可由回歸公式

55、計算，或者由圖表獲得，不論關(guān)系是線性的或是非線性的。回顧圖2中的數(shù)據(jù)作為例子，由于斜率為正，實驗顯示物質(zhì)引起正向干擾。當干擾物為25mmol/L時，其干擾程度是多大？從回歸方程，我們確定7.3 評估待分析物與干擾物組合兩個（或多個）潛在干擾物可以在一個實驗中更有效的檢測，檢測物質(zhì)濃度和待分析物濃度發(fā)生系統(tǒng)性變化。個體組成效應(yīng)通過析因?qū)嶒瀬硐?yōu)點是提高了效率和信息。一次檢測所需的實驗減少了，干擾物之間的反應(yīng)，也包括待分析物，可以被評估。潛在的缺點是樣本準備更加復(fù)雜，增加了人為誤差的可能性。析因?qū)嶒瀾?yīng)用于干擾檢測已經(jīng)被Kroll等人所報道。更多關(guān)于多因素實驗設(shè)計的細節(jié)，請參見Box，Hunter和Hunter。8 使用病人標本評估干擾7.1節(jié)中描述的干擾篩查有明顯的限制。不